外泌体研究思路解析
外泌体研究方案的正确打开方式
外泌体研究方案的正确打开方式啥是外泌体？外泌体（Exosome）是一种由活细胞分泌的圆形（dish）或杯状（cup）脂质双分子层膜微小囊泡，直径约30-100nm，可由各种类型的细胞分泌，广泛存在于血液、尿液、唾液、滑膜液、乳汁、脑脊液、眼泪、腹水、羊水等各种体液以及细胞培养上清中。
外泌体是一种活性复合体，包含复杂的蛋白质，核酸和脂质。
最常见的外泌体蛋白组成包括膜转运和融合相关蛋白、多囊泡胞内体产生相关蛋白，（Alix, TSG101等）、分子伴侣（HSP70,HSP90）、整合素和四跨膜蛋白超家族（CD63,CD9,CD81, CD82等），这些成分反映了其生物起源。
外泌体还富含胆固醇、鞘脂、神经酰胺、糖脂GM3和含长饱和脂肪酰基的甘油磷脂链。
外泌体的起源外泌体的前身含有一个秘密武器，叫泛素化蛋白，被ESCRT（转运必需内体分选复合物）识别，形成内腔囊泡（ILVs），进一步形成膜性囊泡（MVBs），其中一部分会被降解为溶酶体，当MVBs与细胞膜发生融合后这些小囊泡可被释放到细胞外空间，称为外泌体。
外泌体生物功能2013年，美国科学家James E. Rothman, Randy W. Schekman 和德国科学家Thomas C. Sudhof因细胞囊泡运输的调节机制而荣获当年诺贝尔生理学或医学奖。
研究表明：外泌体有携带与运输功能，随着体液循环到达全身各个部位，通过与受体细胞的质膜保持稳定结合或经由内吞途径被内化，释放出外泌体中的内容物。
外泌体与靶细胞融合后，靶细胞的生物学特性可以在基因水平（外泌体RNA）转录水平（外泌体miRNA）或在蛋白水平发生改变，从而实现细胞间通信。
这些相互作用可能导致有益（如增强免疫状态）或有害（如扩散发病）的结果。
外泌体分离纯化方法外泌体鉴定方法NTA鉴定纳米颗粒跟踪分析（Nanopraticle Tracking Analysis, NTA）技术可以对10-2000nm范围内的纳米颗粒进行快速实时动态检测，测量参数包括颗粒粒径、散射光强、浓度等，可对外泌体进行粒径大小及数量进行统计并做出初步质量评估。
外泌体的新型疗法研究
外泌体的新型疗法研究在过去的几年里，外泌体这一突然出现在科学家们研究领域中的新型分子引起了广泛的关注。
外泌体，是指一种由细胞释放出来的一种类似于小球体的物质，能够在体内传递信号分子、蛋白质等生物活性物质，具有独特的生物学功能，被认为是未来治疗疾病的一种新型策略。
近年来，众多研究表明，外泌体在治疗癌症、心脑血管疾病、神经退行性疾病等方面具有广泛的应用前景。
其中，外泌体作为一种新型疗法的开发和应用成为了研究者们关注的热点。
一、外泌体的来源和特性外泌体是细胞分泌的一种大小约为30-150 nm的膜囊泡，通常被划分为微泡体、多泡体和外泌体三种类型。
其中，外泌体是最为常见的类型。
外泌体最初被认识到是由细胞膜的内生皮囊泡状结构分泌出来的，是一种由细胞分泌的一种小型泡状结构，内含一定荷载生物活性物质，包括多种细胞因子、蛋白质、核酸等。
经过生物补体分解，并且发生作用，可促进细胞增殖，促进伤口愈合，治疗感染等多方面的作用。
外泌体最初被发现并研究是在20世纪80年代初期，它是由鳃组织的鲍鱼所分泌的一种胶状物质，叫做鲍鱼胶体（abalone nacre），也称为珍珠母质，后来人们发现这种物质不仅在鲍鱼中存在，还存在于各种生物体中，包括人类、植物、动物等等。
外泌体除了沉积在胞内空出的膜囊外，还可以在生物体间进行传递。
二、外泌体的疗法研究外泌体最独特的特性是它不仅能够把内部的生物功能分子传递给其他细胞，还能调控其内部的功能。
因此，外泌体被广泛应用于疾病治疗方面，特别是一些顽疾的治疗上，受到了研究者们的极大关注。
1. 癌症疗法在肿瘤治疗领域，外泌体的独特功能对于肿瘤细胞的生长、血管的生成和肿瘤细胞移行、转移等方面的控制具有非常重要的作用。
特别是在肺癌、乳腺癌、肝癌等社会污染的恶性疾病上，外泌体疗法在一些临床实践中逐渐得到重视。
例如，一些研究表明，通过引入外泌体的方式，可以有效地减少肿瘤细胞的增殖，抑制肿瘤转移的发生。
这主要是因为外泌体能够通过表面上的多种受体，识别并锁定靶向细胞，对其进行有效的抑制。
干细胞外泌体原理的深入探究和应用前景展望
干细胞外泌体原理的深入探究和应用前景展望标题：干细胞外泌体原理的深入探究和应用前景展望引言：干细胞外泌体是指干细胞释放的一种特殊细胞外囊泡，内含有多种细胞因子、蛋白质和核酸等生物活性成分。
近年来，研究人员对于干细胞外泌体的原理进行了深入的探究，并发现它具有重要的生物学功能和广泛的应用前景。
本文将从多个方面深入探讨干细胞外泌体的形成、组成、释放、传递及其应用前景，并分享个人观点和理解。
第一部分：干细胞外泌体的形成和组成1. 形成过程：干细胞通过内质网产生的细胞外囊泡形成外泌体。
2. 组成特点：外泌体主要包含细胞因子、蛋白质、核酸等多种生物活性成分，这些成分起到了干细胞通讯和修复功能的重要作用。
第二部分：干细胞外泌体的释放和传递机制1. 释放机制：干细胞释放外泌体主要通过囊泡融合和细胞外囊泡的分泌途径。
2. 传递机制：外泌体可以通过血液循环、细胞摄取以及细胞间传递等方式，将其内含的生物活性成分传递到目标细胞，并发挥作用。
第三部分：干细胞外泌体的生物学功能1. 创伤修复：外泌体中的生物活性成分能够促进组织修复和再生。
2. 免疫调节：外泌体通过激活或抑制免疫细胞的功能，对免疫系统发挥重要作用。
3. 细胞通讯：外泌体通过传递信息分子，在细胞间进行通讯和信号传导。
第四部分：干细胞外泌体的应用前景1. 组织工程：外泌体可用于修复脊髓损伤、心肌再生等组织工程领域。
2. 神经保护：外泌体可以促进神经细胞的生长和保护，有望应用于治疗神经系统疾病。
3. 抗肿瘤：外泌体中的局部抗肿瘤物质可以直接作用于肿瘤细胞，有助于肿瘤治疗。
总结与展望：干细胞外泌体作为一种具备重要生物学功能和广泛应用前景的细胞外囊泡，已经引起了广泛的关注。
通过深入探究其形成、组成、释放、传递机制以及生物学功能，可以更好地理解其在组织工程、神经保护、抗肿瘤等领域的应用前景。
未来，随着对干细胞外泌体的进一步理解和技术的发展，相信其在临床医学和生物医学研究中将发挥更重要的作用。
外泌体的生物学特性及临床应用的研究进展
3、工程领域的研究进展 （1）生物材料：外泌体具有理想的生物相容性和 生物活性，可以作为生物材料用于组织工程和再生医学。例如，外泌体可以作为 细胞培养的支架材料，提供细胞生长和分化的微环境；还可以作为药物载体，提 高药物的靶向性和疗效。
（2）纳米技术：外泌体具有类似于细胞膜的结构和组成，这使得它们在纳 米医学领域具有广泛的应用前景。通过将外泌体进行分离、纯化和改性，可以制 备出具有特定功能和性质的纳米颗粒，用于药物输送、成像技术和生物传感等方 面。
参考内容
外泌体是细胞分泌的一种微小膜泡，它们携带着多种生物活性分子，如蛋白 质、核酸和磷脂等，参与细胞间通讯、组织修复和神经系统等多种生物学过程。 近年来，外泌体研究取得了重大进展，本次演示将对外泌体的生物学功能和应用 进行详细阐述。
一、外泌体的背景
外泌体最初被发现于1983年，是由Weber和Wiechmann在红细胞中发现的。 它们是由细胞分泌的一种直径约30-100nm的囊泡，由单层膜构成，内含多种生物 活性分子。外泌体的分泌过程需要细胞内多分子复合物的参与，包括 ESCRT-0、 ESCRT-I、ESCRT-II和ALIX等蛋白。
结论
外泌体在医学和基础科学领域的研究取得了显著进展，其在疾病诊断、药物 输送、细胞通信和免疫调节等方面的作用逐渐被揭示。未来，随着对外泌体的深 入研究和技术创新，有望为疾病的诊疗、组织工程和再生医学等领域提供更多新 的应用和治疗方
法。因此，我们呼吁进一步深入探索外泌体的功能和应用，为人类健康事业 做出更大贡献。
然而，外泌体研究仍面临一些挑战，如外泌体的纯度问题、分泌机制的不明 确以及其在疾病诊断和治疗中的可靠性等。为了解决这些挑战，需要进一步深入 研究外泌体的分泌机制和生物学功能，并探索其在临床上的应用潜力。
外泌体研究策略
6、Intercellular Transfer of lncARSR by Exosomes Disseminates Sunitinib Resistance
7、AXL and c-MET Are Responsible for lncARSR-Mediated Sunitinib Resistance
Tan A Advanced drug delivery reviews, 2013, 65(3): 357-367.
外泌体研究的兴起
外泌体研究基础技术
1、外泌体分离 1）超速离心 2）磁珠免疫捕获 3）沉淀或过滤法，
2、外泌体鉴定与定量 1）鉴定：电镜或NTA来分析其大小和形态，流式细胞仪或WB检测表面标记蛋白， Western blot和ELISA检测 TSG101、CD63。 2）定量：NTA检测外泌体数量，BCA定量检测蛋白浓度。
2、Annexin V, calcium, and BMP-2 in EMPs from HUVECs stimulated by TNF-a BMP-2表面标记流式检测；SN50 nf-kb抑制剂
3、The effect of EMPs from HUVECs stimulated by TNF-a on VSMC calcification
1、lncARSR Is Highly Expressed in Sunitinib-Resistant RCC Cells
2、lncARSR Is Modulated by AKT/FOXO Axis in Sunitinib-Resistant RCC Cells
3、lncARSR Is Required for Sunitinib Resistance of RCC
外泌体作为新型治疗手段的研究
外泌体作为新型治疗手段的研究随着科技的不断进步，越来越多的新型治疗手段被研究出来，其中外泌体作为一种新兴的治疗手段，受到了科学家们的广泛关注。
外泌体是一种由细胞分泌出来的纳米级贝壳结构的小囊泡，内部含有具有生物活性的基因信息和蛋白质等分子物质。
近年来，外泌体在治疗癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等方面的应用研究也得到了广泛的关注。
外泌体作为新型的治疗手段，有着许多独特的特性。
首先，作为一种纳米级的小囊泡，外泌体能够穿透生物膜，有效地将其内部的物质传递到细胞内。
其次，外泌体内部含有多种生物活性物质，如蛋白质、mRNA、miRNA、DNA等，这些生物活性分子可以被利用来转化细胞功能或修饰基因表达。
最后，由于外泌体来源于自体细胞，也不涉及使用外来材料或免疫反应问题，因此具有良好的安全性和免疫学适应性。
在治疗癌症方面，外泌体已被证实具有抗癌活性。
研究人员发现，肿瘤细胞和其他细胞相比，分泌的外泌体数量更多，且含有更多的生物活性物质和生长因子，这些物质具有促进肿瘤细胞增殖和侵袭的作用。
因此，通过拦截肿瘤细胞分泌的外泌体或直接给予患者来源于其他细胞的外泌体，可以达到治疗癌症的效果。
例如，研究人员发现通过注射来源于骨髓间充质干细胞的外泌体，可以抑制恶性胶质瘤的生长，并提高患者的存活率。
在治疗心血管疾病方面，外泌体也具有广泛的应用前景。
心肌缺血后心肌细胞将大量释放外泌体，其中包含补体激活物和血小板激活因子等生物活性物质。
通过注射来源于心肌细胞外泌体的治疗方法可以提高心肌细胞的功能和心脏的整体状态。
同时，研究人员也发现，通过从骨髓间充质干细胞收集分离出的外泌体可以改善心血管纤维化、促进血管新生和心肌再生，从而有效改善心血管的健康状况。
在神经退行性疾病的治疗中，外泌体也有着潜在的作用。
神经元为了维持生命所需要的蛋白质能够从周围的胶质细胞中获得，但由于神经元本身的限制，导致神经毒性事件的发生，这也增加了神经退行性疾病的发生率。
外泌体的研究进展
外泌体的研究进展一、本文概述随着生物医学研究的深入，细胞间的信息交流机制逐渐成为研究的热点。
作为细胞间交流的重要载体，外泌体（Exosomes）的研究在近年来取得了显著的进展。
本文旨在综述外泌体的基本特征、生物学功能及其在疾病诊断和治疗中的应用，同时探讨当前面临的挑战和未来的发展趋势。
我们将简要介绍外泌体的定义、结构特点以及产生机制，帮助读者理解其作为细胞间信息传递的重要角色。
接着，我们将重点讨论外泌体在肿瘤、心血管疾病、神经退行性疾病等医学领域的研究进展，包括外泌体在疾病发生发展中的作用机制，以及作为疾病标志物的潜力。
我们还将关注外泌体在疾病诊断和治疗中的应用前景，如作为药物递送载体、肿瘤疫苗以及生物标志物等方面的研究。
我们将对当前外泌体研究面临的挑战和未来的发展方向进行深入探讨，以期为推动外泌体在生物医学领域的应用提供有益的参考。
二、外泌体的结构与功能外泌体是一种由细胞主动分泌的，直径约为30-150纳米的膜性囊泡，普遍存在于各种体液中，包括血液、尿液、乳汁、脑脊液和细胞培养基等。
这些囊泡在细胞间的物质传递、信息交流以及免疫反应等方面发挥着重要作用。
近年来，随着外泌体研究的深入，其独特的结构和功能逐渐被人们所揭示。
结构上，外泌体由磷脂双分子层膜包裹着内部的水溶液组成，其膜上嵌有多种蛋白质，包括四跨膜蛋白、热休克蛋白、整合素等。
这些蛋白质不仅参与外泌体的形成和分泌过程，还负责将外泌体与靶细胞进行特异性结合，实现精准的物质传递。
外泌体的膜上还含有丰富的糖类和脂质，这些成分对于外泌体的稳定性和功能也至关重要。
功能上，外泌体具有多种生物学活性。
外泌体可以传递信息分子，如mRNA、miRNA、蛋白质等，这些分子在细胞间的信息交流过程中发挥着关键作用。
外泌体可以参与免疫反应，通过传递抗原或免疫调节分子，影响免疫细胞的活性和功能。
外泌体还具有促进血管生成、抑制肿瘤生长等多种生物学活性。
值得一提的是，外泌体的功能与其来源细胞密切相关。
外泌体及其在心血管疾病发生发展中的作用研究进展
外泌体及其在心血管疾病发生发展中的作用研究进展外泌体是一类由细胞分泌并存在细胞外的小囊泡，直径一般在30-150 nm之间。
它们具有膜包裹的结构，在细胞外环境中存在，并含有丰富的蛋白质、核酸和脂类等生物活性分子。
外泌体可以由多种细胞类型如造血干细胞、免疫细胞、心肌细胞等分泌，并可以作用于周围的细胞，从而调控宿主细胞的功能和代谢。
近年来，研究发现外泌体在心血管疾病的发生发展中发挥着重要的作用。
下面将从以下几个方面对外泌体在心血管疾病中的研究进展进行阐述：1. 外泌体在动脉粥样硬化中的作用：动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，外泌体通过携带一系列变化的非编码RNA、膜蛋白和其他生物活性分子等参与了这一疾病的发生和发展过程。
外泌体中的特异性miRNA和lncRNA可以调节内皮细胞的迁移和增殖，并促进粥样斑块的形成。
2. 外泌体在心肌梗死修复中的作用：心肌梗死后，心肌细胞死亡，外泌体可以通过传递miRNA、蛋白质等功能分子来促进心肌细胞的修复和再生，同时抑制心肌细胞的凋亡过程。
3. 外泌体在心律失常中的作用：外泌体可以通过传递其携带的miRNA和蛋白质来调控心肌细胞的电生理特性，进而影响心脏的节律性。
外泌体来源于心肌细胞和神经元的外泌体，特别是含有调控离子通道的蛋白质和其他离子通道相关因子的外泌体，可能对心律失常的发生有一定的调节作用。
4. 外泌体在血栓形成中的作用：外泌体携带的血小板激活因子和凝血因子等能够促进血小板聚集和血栓形成。
血小板来源的外泌体也被发现可以内化于血管内皮细胞，从而导致血管损伤和炎症反应。
外泌体在心血管疾病的发生和发展中作用复杂多样，包括参与动脉粥样硬化的形成、心肌梗死后的修复、心律失常的调控以及血栓形成的过程等。
深入研究外泌体的机制和作用机理，有望为心血管疾病的预防和治疗提供新的思路。
外泌体lncRNA芯片研究方法及思路
外泌体lncRNA芯片研究方法及思路
一、技术简介
外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200 nm，形态也呈现出多样性。
长链非编码RNA（long non-coding RNA）是一类转录本长度超过200nt、不编码蛋白的RNA。
近年来的研究表明lncRNA能在标贯遗传、转录及转录后水平上调控基因表达，参与了X染色体沉默、基因组印记以及染色质修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等多种重要的调控过程，与人类疾病的发生、发展和防治都有着密切联系。
lncRNA芯片对lncRNA进行功能研究也被更多的关注，通过设计不同的lncRNA探针，可以更加快速、高通量地筛选出疾病或特定生物学过程中差异表达的lncRNA和mRNA信息，最终找到lncRNA的靶基因位点深入分析调控机制。
二、测序流程：
1. RNA提取
2. 逆转录合成cDNA1链
3. 合成cDNA2链
4. 体外转录合成cRNA
5. 随机引物合成正义链DNA
6. DNA产物片段化
7. Cy3标记
8. 芯片杂交
9. 数据分析
三、数据分析
1. 芯片数据质控和标准化
2. 主成分分析
3.mRNA表达模式聚类分析
4. GO富集分析
5. KEGG富集分析
6. lncRNA表观模式聚类分析。
外泌体科学研究策略与方法
外泌体科学研究策略与方法外泌体（extracellular vesicles）是一类由细胞分泌的小型膜囊泡，具有丰富的生物大分子（如蛋白质、核酸和代谢产物等）和受体分子，能够通过体液循环进入其他细胞并调控其状态。
外泌体作为一种新兴的细胞间通讯方式，已经在生物学和医学研究中受到广泛关注。
为了深入研究外泌体的功能和应用价值，科学家们采用了一系列研究策略和方法。
首先，外泌体的纯化和鉴定是外泌体研究的基础。
目前常用的外泌体纯化方法包括超速离心、滤膜浓缩、亲和析取和尺寸排除等。
其中，超速离心是最常用的方法，通过连续离心将外泌体从细胞碎片、蛋白质聚集体和其他细胞分泌物中分离出来。
纯化后的外泌体可以通过电镜观察其形态和大小，并通过蛋白质和核酸的检测确认其特征标志物。
其次，外泌体内的生物大分子是外泌体功能的关键。
外泌体中的蛋白质、核酸和代谢产物等分子可以通过质谱分析、RNA测序、代谢组学等方法进行全面的分析。
通过对外泌体中的蛋白质组学的研究，可以鉴定外泌体特有的标志物，并推测其功能和信号通路。
通过外泌体中的RNA测序，可以发现外泌体携带的mRNA和miRNA，了解其在细胞间通讯中的作用。
通过代谢组学的研究，可以分析外泌体携带的代谢产物，揭示其在代谢调控中的作用。
第三，外泌体功能研究是外泌体研究的重点之一、外泌体功能研究主要包括外泌体的分泌机制、目标细胞的识别和摄取、信号传递和功能调控等方面。
通过抑制外泌体分泌的相关因子，可以阻断外泌体的释放，从而探究外泌体的分泌机制。
通过标记外泌体表面的受体和底物，可以观察其在目标细胞上的相互作用和摄取情况。
通过干预外泌体释放和摄取的相关蛋白质和信号通路，可以揭示外泌体在细胞间通讯中的功能和调控机制。
最后，外泌体在生理和病理过程中的应用是外泌体研究的重要方向之一、外泌体作为一种重要的细胞间信号载体，可以通过改变外泌体的组成和功能来调控细胞的生理状态。
通过人工制备外泌体，可以将特定的蛋白质、核酸和药物等载体到外泌体中，改变外泌体的功能并进一步实现治疗效果。
外泌体的研究进展
外泌体的研究进展外泌体是细胞分泌的一种重要物质，由细胞释放到细胞外环境中，参与多种生物学过程。
近年来，随着对外泌体研究的深入，越来越多的学者开始其在医学、生物和材料等领域的应用价值。
本文将对外泌体的研究现状、方法、成果和应用前景进行全面探讨。
一、外泌体的研究现状外泌体是由细胞分泌的一种小泡，直径约30-100纳米，包含多种生物活性物质，如蛋白质、核酸和脂质等。
近年来，随着对外泌体的深入研究，发现其参与了细胞间通信、物质运输等多种生物学过程。
同时，外泌体在疾病诊断、药物研发和组织工程等方面也具有广泛的应用前景。
二、外泌体的研究方法1、实验设计：外泌体的研究涉及细胞生物学、分子生物学、生物化学、医学等多个学科，因此需要进行多学科交叉的实验设计。
2、样本处理：外泌体的提取和纯化是研究外泌体的关键步骤，常用的方法包括超速离心法、免疫磁珠法、聚合物沉淀法等。
3、基因表达分析：采用基因表达谱技术对外泌体中的核酸进行分析，以揭示其基因表达特征。
4、蛋白质组学：运用蛋白质组学技术对外泌体中的蛋白质进行分析，以鉴定其蛋白质种类和功能。
三、外泌体的研究成果1、肿瘤治疗：研究发现，肿瘤细胞释放的外泌体可以传递信号给正常细胞，诱导其恶性转化。
因此，通过研究外泌体在肿瘤发生发展中的作用，有望为肿瘤治疗提供新思路。
2、药物传输：外泌体具有保护和输送物质的特性，可被用作药物载体。
通过加载抗癌药物或其他生物活性物质，外泌体可以实现药物的定向传输，提高疗效并降低副作用。
3、组织工程：外泌体具有调节细胞生长、分化和迁移的能力，因此在组织工程中具有潜在应用价值。
例如，将特定外泌体加载到生物材料中，可以促进组织再生和修复。
4、环境监测：外泌体在细胞间通信和物质运输中发挥重要作用，也参与了环境因素的响应和适应。
通过研究外泌体在环境监测中的作用，可以为环境污染的监测和治理提供新手段。
四、外泌体的应用前景1、生物治疗手段：通过调节外泌体释放的生物活性物质，有望开发新的生物治疗手段，如上文提到的肿瘤治疗和药物传输等。
外泌体研究一站式解决方案－丁香通
外泌体研究一站式解决方案－丁香通一、什么是外泌体？外泌体是由细胞分泌的直径为30～150 nm 的小囊泡，内含来源于细胞相关的蛋白质与核苷酸等生物分子，在细胞交流间起重要作用。
具有减少细胞凋亡、减轻炎症反应、促进血管生成、抑制纤维化、提高组织修复潜力等重要生物学功能。
其具有以下特征：◆ 典型的「杯托」形态◆内含的核苷酸包括 DNA、mRNA、miRNA、lncRNA 等◆几乎存在于所有的体液、组织及细胞间隙中◆几乎所有的细胞都能分泌外泌体◆不同细胞分泌的外泌体成分不同二、外泌体有哪些功能？外泌体携带大量特异性的蛋白质（如细胞因子、生长因子）以及功能性的mRNA、miRNA 等生物活性物质，在体内参与免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭、促血管新生等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关。
由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。
三、如何分离外泌体？外泌体的样本来源主要有细胞培养上清、血清/血浆、尿液、腹水、乳汁、脑脊液、唾液、滑液等，其中细胞培养上清、血清/血浆、尿液是最常见的来源。
如果是使用细胞培养上清，要注意细胞培养中一定不能添加 FBS。
外泌体分离方法有很多种，包括超速离心、过滤离心、密度梯度离心、免疫磁珠和商用试剂盒。
但是这么多方法中，我们通常推荐选用超速离心法进行提取和分离，因为超速离心方法得到的外泌体不管是从得率还是纯度上都比较好。
其他方法的特点如下：1. 过滤离心：得率比较低2. 密度梯度离心：步骤繁琐，得率较低3. 免疫磁珠：特异性比较高，得率较低4. 商用试剂盒：价格高，效果一般。
分离出的外泌体电镜和粒径效果差。
综合以上，超速离心法是目前价格适中、得率和纯度都能兼得的一种方法。
四、如何鉴定外泌体？外泌体鉴定是进一步研究外泌体功能和机制的工作基础。
外泌体研究思路解析
外泌体研究思路解析外泌体（extracellular vesicles，EVs）是一类由细胞分泌的膜囊泡，其直径一般在30-150纳米之间。
近年来，外泌体的研究受到了广泛关注，并且被证明在各种生物学过程中起着重要的作用，包括细胞间通信、免疫调节、细胞增殖和转化等。
在这篇文章中，我将介绍外泌体的研究思路，并阐述其在生物医学研究中的应用前景。
其次，研究者可以通过外泌体的分离和纯化来进一步探索其功能和应用。
目前，常用的外泌体分离方法包括差速离心、滤膜分离和亲和纯化等。
这些方法能够选择性地分离不同类型的外泌体，并提取其纯净的样品，以便于后续的功能分析和应用研究。
从纯化的外泌体中，研究者可以通过电子显微镜、免疫荧光染色和质谱分析等方法来进行外泌体的表征和定量。
在功能研究方面，研究者可以通过体外细胞培养等方式，研究外泌体对目标细胞的调控作用。
例如，外泌体中的特定蛋白质和RNA分子可以通过细胞内信号通路传递，从而调节目标细胞的增殖、分化和凋亡等生物学过程。
同时，通过外泌体的功能分析，研究者还可以了解外泌体在疾病中的作用，以及用于疾病诊断和治疗的潜在应用。
最后，外泌体的应用前景广阔，可以用于生物医学研究的多个领域。
首先，外泌体作为细胞间的信息传递媒介，可以用于药物递送和基因治疗等领域。
其次，外泌体中的蛋白质和RNA等分子可以作为生物标志物，用于疾病的诊断和预后评估。
此外，外泌体还可以用于生物治疗的制备，例如利用外泌体激活免疫系统来对抗癌症等疾病。
综上所述，外泌体的研究思路包括了对其生物学特性和生物合成机制的探究、外泌体的分离和纯化、外泌体的功能分析以及外泌体的应用前景探究。
通过深入研究外泌体，我们可以更好地理解其在生物学过程中的作用，为生物医学研究提供新的思路和方法。
4项外泌体与靶向给药研究思路解读
4项外泌体与靶向给药研究思路解读昨天举了几个栗子 为大家介绍了外泌体在靶向给药中的应用文献（戳这里回顾：【文献导读】外泌体与靶向给药），发现很多朋友对这个领域非常感兴趣，所以今天特意为大家详细解读一下这4篇文章的研究思路，如何根据药物的不同性质，以及不同细胞的Exosome的性质，来设计实验思路和更好的靶向给药。
最后附一些exosome and drug delivery方面的参考文献供大家一起学习。
1. Tian Y, Li S, Song J, Ji T, Zhu M, Anderson GJ, Wei J, NieG. A doxorubicin delivery platform using engineered natural membrane vesicle exosomes for targeted tumor therapy. Biomaterials（IF=8.387）. 2014 Feb;35(7):2383-90. PubMed PMID: 24345736.思路：改造Exosome表面蛋白使其特异性靶向癌细胞，使其内部装载药物靶向释放，特异性杀灭癌细胞。
生产外泌体细胞：imDCs药物：阿霉素Doxorubicin（Dox）靶向：αv integrin阳性细胞这篇文章将iRGD 肽段：CRGDKGPDC(可与肿瘤细胞特异性高表达的αv integrin特异性结合)和外泌体膜蛋白lysosomeassociated membrane glycoprotein 2b (Lamp2b)，以及加强型绿色荧光蛋白eGFP，构建成pEGFP-C1-RVG-Lamp2b 质粒，外转入小鼠未成熟的树突细胞immature dendritic cells (imDCs)（分泌物无免疫反应）中。
再将化疗药物阿霉素doxorubicin (Dox)利用电刺激转入改造好的Exosome中，从而达到特异性杀灭αv integrin阳性表达的癌细胞。
干细胞外泌体研究套路
干细胞外泌体研究套路
干细胞外泌体研究是指对干细胞分泌的细胞外囊泡、蛋白质、RNA和代谢产物等进行深入研究的领域。
下面是干细胞外泌
体研究的一般套路：
1. 筛选合适的干细胞类型：根据研究目的，选择适合的干细胞类型，如造血干细胞、间充质干细胞等。
2. 干细胞培养条件优化：通过优化培养基成分、培养温度和气体条件等，使干细胞的生长和分泌能力达到最佳状态。
3. 提取干细胞外泌体：采用各种方法，如超速离心、滤膜、纳米技术等，将培养液中的干细胞外泌体进行提取。
4. 干细胞外泌体的分离和纯化：采用不同的分离和纯化技术，如凝胶过滤、差凝、超速离心等，使得干细胞外泌体得到高纯度的分离。
5. 外泌体的鉴定和表征：通过电子显微镜观察外泌体的形态，使用质谱分析、蛋白质组学和基因组学等技术，鉴定并分析外泌体中的蛋白质、RNA和代谢产物等成分。
6. 外泌体的功能研究：通过体外实验、动物模型等，探究外泌体对细胞增殖、分化、迁移、凋亡等生物学过程的影响，以及其在组织修复和疾病治疗中的应用潜力。
7. 机制研究：利用细胞信号传导、分子生物学、遗传学等技术，
研究外泌体分泌的调控机制，从而深入了解干细胞外泌体的产生与功能。
以上是干细胞外泌体研究的一般套路，具体研究方法和步骤可能会因具体实验目的和设备条件而有所不同。
【公开课】外泌体miRNA的高分研究“套路”
【公开课】外泌体miRNA的高分研究“套路”某一天突然脑洞大开的时候，想给每个miRNA的相关分子配一个角色主题曲。
比如细胞内miRNA，就可以用《我相信》：“想飞上天和太阳肩并肩，世界等待我去改变！”靶基因呢？当然是：“你伤害了我，还一笑而过…“对于外泌体中的miRNA，恐怕没有比《好汉歌》更合适的啦！外泌体是细胞分泌的直径在30-100nm的囊泡，其中包含有DNA、RNA、蛋白质、脂质等多种生物分子。
一个细胞分泌的外泌体可以经微环境或循环系统输送到其他细胞中，之后外泌体可以与靶细胞的细胞膜融合，将内含物释放到靶细胞内，从而实现物质交换和信号传导的功能，甚至还能调控靶基因的相关代谢。
“说走咱就走，你有我有全都有；路见不平一声吼，该出手时就出手。
”是不是很贴切呢？在2012年前后，外泌体miRNA的研究开始爆发，至今仍是miRNA研究中独特的一个方向。
那么，进行一个外泌体中的miRNA 的研究，要怎样进行课题设计呢？点击观看公开课完整视频外泌体miRNA研究的常规思路1验证某miRNA是一种生物标志物由于外泌体存在于细胞外，外泌体的检测可以实现液体活检。
所以，外泌体中的生物标志物具有检测方便、伤害小的特点。
外泌体中的miRNA作为生物标志的研究也很多。
课题的设计主要包括：•寻找一个生物表型，如某种疾病或者代谢状态。
•根据实验目的，选择两组或多组比对的样本。
如，如果想要发现某种疾病的miRNA标志物，就要选择疾病样本和正常样本；想要发现与代谢相关的miRNA标志物，就要选择不同代谢强度的样本。
•收集这些样本中的外泌体，提取外泌体中的总RNA或miRNA。
•进行高通量测序，筛选具有差异表达的miRNA。
•用qPCR等方法，验证高通量实验的准确性。
从而确定可以作为潜在标志物的miRNA。
•用这些miRNA判断未知样本的状态，再与临床或生理鉴定结果比对，确定与临床结果相符度高的miRNA。
以上是外泌体miRNA研究的简单思路，发现不同样本中有差异的miRNA，再用此miRNA去判断未知样本的状态，验证其作为标志物的成功率。
外泌体要怎么来研究？
外泌体要怎么来研究？外泌体是不是很火？其实外泌体之前我也给大家讲过哦，只是估计你们没好好看而已。
其实外泌体可以理解为细胞排泄出来的代谢产物，后来才发现，有点作用的。
外泌体研究到底复不复杂呢？其实不复杂。
早在2014年的时候，J Extracell Vesicles上就发表了一篇外泌体研究指南：不要觉得这个指南过期了哈，其实一直到现在都还是有价值的，这篇蚊帐提到了大致两点：1）外泌体的研究，首先要证明外泌体存在2）要证明外泌体的功能证明外泌体存在，就需要用电镜和蛋白marker双重证明，当然他们也举了点蛋白Marker的栗子：那功能呢，就需要使得外泌体被荧光标记后，被吞入靶细胞的证明，然后验证靶细胞的变化。
其实就这么简单，我们可以举个外泌体蚊帐的栗子，下面这篇蚊帐发表在Cellular Physiology and Biochemistry（和OT一样被踢去前还有五分多，当然，不要在意这些细节，因为这篇蚊帐发的时候还是有IF的）上：这主要做的是乳腺癌外泌体里包含的一个miRNA的功能作用，首先他们证明了有外泌体的存在，电镜&蛋白Marker（外泌体存在√）：接着说明了一下这个miRNA在乳腺癌中高表达（所以才会被分泌出去对别的细胞产生影响），而正常乳腺细胞中低表达：接着他们给miRNA做了Fam荧光标记，然后分离出了外泌体，这时候外泌体有荧光了。
然后将分离出来的外泌体和正常乳腺细胞一起培养，发现外泌体和miRNA被吞了进去（外泌体被吞√），然后正常乳腺细胞的增殖啊、耐药啊等等功能都变了（外泌体功能√）：最后用最直接的miRNA功能研究（也就是对靶基因的蛋白翻译）做了个验证：全文完……其实我们不难发现，外泌体的研究指南里，已经给我们阐明了最基本的外泌体研究的关键步骤。
步骤和思路都不难，难的是实验实在是有点小难度，别说分离了，还带荧光去让靶细胞胞吞，估计只有做这些实验的人才能感同身受吧，好了，今天就先策到这里吧，想要看看。
外泌体可行性研究报告
外泌体可行性研究报告一、研究背景外泌体是一种微小地囊泡，内含有蛋白质、核酸和细胞因子等生物活性分子，它们可以从细胞内排出，并再体内外传递信号，参与多种生理和病理过程。
近年来，外泌体因其再疾病诊断、治疗和生物医药领域地潜再应用价值受倒了广泛关注。
二、研究目地本研究旨再探究外泌体再生物医药领域中地可行性，评估其作为潜再治疗手段和疾病诊断地可行性，并探讨其再临床应用中地潜力和挑战。
三、研究方法1.外泌体地分离与纯化首先，从细胞培养上清液或组织样本中分离外泌体，然后通过超速离心、超滤等方法将外泌体纯化。
2.外泌体地表征和鉴定通过电镜、流试细胞术等技术对外泌体进行形态学和生物学特性地鉴定，以确保分离地颗粒为外泌体。
3.外泌体地功能研究进一步研究外泌体携带地生物活性分子再细胞间通讯、免疫调节、细胞增殖及凋亡等过程中地作用机制。
四、研究结果1.外泌体作为治疗手段地可行性研究结果显示，外泌体携带地生物活性分子可通过调节炎症反应、促进修复等途径发挥治疗作用，为某些疾病地治疗提供了新思路。
2.外泌体再疾病诊断中地潜力外泌体特异性携带地标志性分子可作为疾病地生物标志物，有助于早期诊断和疾病监测。
3.外泌体再基因治疗中地应用前景外泌体能够稳定载体核酸并再细胞内释放，为基因治疗提供了一种新地途径。
五、研究结论外泌体作为一种俱有广阔应用前景地生物纳米颗粒，俱有再治疗、诊断和基因治疗等领域中地重要作用。
但再临床应用过程中仍须进一步解决其产量、纯化、标准化和存储等方面地挑战，以推动其转化为临床实践中地有效工俱。
六、拓展研究方向末来地研究可以着重探讨外泌体再特定疾病治疗中地机制及效果、开发外泌体作为药物传递系统、构建外泌体工程等方面地研究。
总结：外泌体作为一种新型地生物纳米颗粒，再生物医药领域中俱有巨大地应用潜力，本研究对外泌体地可行性进行了初步地探究与评估，为末来该领域地深入研究提供了参考和借鉴。
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外泌体-胰腺癌早期诊断
2017 A microRNA signature in circulating exosomes is superior to exosomal glypican-1 levels for diagnosing pancreatic cancer.
外泌体-乳腺癌循环生物标记物
The Scientist - Théry (201
外泌体进入细胞的机制
a) exosomes自身与细胞质膜融合，将“货物”释放进入胞质； b) exosomes上的配体与受体细胞膜上的受体结合，进入受体细胞后； c)exosomes上的配体与受体细胞膜上的受体结合，能起到信号传导作用；
外泌体的分离&富集
Exo- miR21
Xiao, J., et al. Cell Death Dis, 2016. 7(6): p. e2277.
液体活检
液体活检尚处于科研阶段，在国外临床阶段的项目也在少数，市场化更少。 CTC、ctDNA也可以作为肿瘤检测的重要标志物，三者结合，互相补充，对肿 瘤做到更加精确的诊断。
外泌体的鉴定
1、粒径(nanoSight 300) 2、电镜(TEM)或免疫电镜 3、Western blot(CD63、 CD9、CD81、TSG101等) 4、ELISA 5、流式
外泌体的应用领域
Conlan, R.S., et al. Trends Mol Med, 2017. 23(7): p. 636-650.
生物信息分析
表达差异分析 新型分子预测 分子互作网络 相应功能预测
体外功能验证
正向操作研究 负向操作研究 功能角色确定 调控机制探究
体内功能验证
动物模型构建 目的分子递送 机体表型变化 相关基因改变
临床应用
临床诊断应用 疾病治疗应用 药物递送应用 新型疫苗应用
外泌体的人工合成和生物合成
Jang, S.C., et al.ACS Nano, 2013. 7(9): p. 7698-710.
外泌体应用于诊断的临床试验
Conlan, R.S., et al. Trends Mol Med, 2017. 23(7): p. 636-650.
外泌体应用于治疗的临床试验
Conlan, R.S., et al. Trends Mol Med, 2017. 23(7): p. 636-650.
Exo- lncARSR
Qu, L., et al. Cancer Cell, 2016. 29(5): p. 653-68.
外泌体参与组织再生
Exo- 14-3-3ζ
Zhang, B., et al. Stem Cells, 2016. 34(10): p. 2485-2500.
外泌体参与心脏保护
DOI:
10.1002/adfm.201703197.
外泌体&疾病治疗
Vader, P., et al. Adv Drug Deliv Rev, 2016. 106(Pt A): p. 148-156.
Exosome临床应用-AD治疗靶标
抑制外泌体可减少Tau的聚集
Asai, H., et al. 2015. 18(11): p. 1584-93.
外泌体数据库
/
Exosome相关数据库 Exocarta; EVPedia; Vesiclepedia
/
http://student4.postech.ac.kr/evpedia2_xe/xe/
外泌体的产生机制
外泌体研究思路解析
目录
1. 外泌体介绍 2. 外泌体的临床应用 3. 外泌体的载药与疾病治疗 4. 外泌体的研究思路与套路
外泌体是什么？
Exosomes是直径约为30-150nm，在蔗 糖梯度中浮力密度在1.10-1.21g/ml之间的小 囊泡，主要为磷脂双分子层结构，外膜上含有 磷脂酰丝氨酸。
外泌体的疾病诊断
Expert Rev Mol Diagn. 2016 Feb 18
外泌体-胰腺癌早期诊断
2015年1月，发表于Nature的一篇文 献表明， GPC1（多糖磷脂酰肌醇聚 糖-1 ）在胰腺癌个体血液外泌体中含 量特别丰富，能够以100％的准确率 和敏感性诊断出早期和晚期胰腺癌。
Melo, S.A., et al. Nature, 2015. 523(7559): p. 177-82.
Thery, C., et al. Curr Protoc Cell Biol, 2006. Chapter 3: p. Unit 3.22.
外泌体内容物
蛋白组分： 细胞骨架蛋白、信号转导相关蛋白、代谢酶类、 抗原结合提呈相关蛋白
典型的exosomes标记蛋白有： 四跨膜蛋白超家族，如CD9、CD63、CD81等； 细胞质蛋白，如肌动蛋白(actin)、钙磷脂结合蛋白 (annexins)； 参与生物功能的分子，如凋亡转接基因2互作蛋白 X(ALIX)、肿瘤易感基因101蛋白(TSG101)、热休克蛋 白(HSP70、HSP90)； 整合素。
Exosomes天然存在于体液中，包括血液、 唾液、尿液、脑脊液和母乳，外泌体 (Exosome)是活细胞分泌的、来源于晚期核内 体(也称为多囊泡体 )的膜性囊泡。
Tan, A., J. Rajadas, and A.M. Seifalian. Adv Drug Deliv Rev, 2013. 65(3): p. 357-67.
Wen, S., et al. Leukemia, 2016. 30(11): p. 22212231.
外泌体的研究思路
外泌体的研究套路
Exosome分离
Exosome RNA Exosome 蛋白 Exosome粒径 Exosome鉴定
生物分子筛选
Microarray RNA-seq 质 谱检测 WB or QPCR
Exosome RNA Purification
Exosome RNA Amplication
Exosome RNA Identification
外泌体研究
Differential screening
Data analysis
Function exploration
gain/loss of function
外泌体参与肿瘤转移
肿瘤来源的外泌体，携带 的整合素分子决定了肿瘤 转移的器官倾向性
Hoshino, A., et al. Nature, 2015. 527(7578): p. 329-35.
外泌体参与肿瘤耐药
Exo-miR21
Au Yeung, C.L., et al. 2016. 7: p. 11150.
外泌体在生物体内的意义
Exosome中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞从而 改变其他细胞的功能。 Exosome在体内存在的广泛性和获取的便捷性，已经成为了疾病诊断治疗的潜在有效 方式，在精准医学发展上有着光明的前景。
Annu Rev Physiol 2015 [Epub ahead of print]
发病机理 作用方式 分子机制
分子标志 临床诊断 治疗靶标
递送效率 药物靶选 靶向治疗
外泌体课题研究
疾病机理 分子诊断 药物递送
Exosome
纯化
技术服务 相关产品 试剂研发
分离、鉴定 功能、示踪
分离试剂 鉴定方法 示踪病毒 功能检测
方法研发 试剂研发
Exosomes还含有细胞类型特异的标记蛋白，这种蛋白 分子由分泌exosomes的细胞所决定；
核酸组分： Exosomes内还能够包裹mRNA、miRNA、 lncRNA、mtDNA，并转动至其它细胞中发挥 生物学作用， Exosomes所包裹的内容物也是 细胞类型特异的。
外泌体的功能
Exosomes可以由多种细胞类型(免疫细胞、心血管细胞、神经细胞、干细胞、 肿瘤细胞)释放，因此，exosomes也会参与多种生理或病理过程，如抗原呈递、 RNA转运、组织修复、神经退行性疾病、肿瘤转移、代谢重建等。
外泌体的人工合成和生物合成
自组装蛋白质纳米笼（nanocages），以一种类似于一些病毒的方式从人类细 胞释放到小囊泡中。 这种生物材料称为“包膜蛋白纳米笼”（EPNs），是可编码的纳米材料，可 以在细胞之间转移分子。
Votteler, J., et al. Nature, 2016. 540(7632): p. 292-295.
Exosome临床应用-糖尿病治疗
胞外囊泡诱导胰岛β细胞的产生，且这种细胞可有效 调节糖尿病小鼠的血糖浓度
Oh, K., et al. ACS Nano, 2015. 9(12): p. 11718-27.
Exosome临床应用-慢性皮肤损伤
富含血小板的血浆（PRP）已广泛用于治 疗慢性伤口，因为其含有由血小板分泌 的大量生长因子。 已经证明源自PRP（PRP-Exos）的外泌 体包含来自血小板的主要生长因子。 这项研究表明这些外泌体可能发挥PRP的 功能。
外泌体的功能
Nat Cell Biol. 2015 Jun;17(6):709-11.
外泌体&免疫调控
多种癌症类型通过分泌一种叫做 miR-214的肿瘤特异性miRNA促进 调节性T细胞 (regulatory T cell,Treg)扩增，导致了宿主免疫抑 制和快速的肿瘤生长。
Yin, Y., et al. Cell Res, 2014. 24(10): p. 1164-80.
外泌体&血管生成
EV参与新生血管生成过程的调 节
Gai, C., et al. Histol Histopathol, 2016. 31(4): p. 379-91.
外泌体参与伤口愈合
Exosome可促进伤口愈合