外泌体及其蛋白质组学研究文献解读

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外泌体中重要蛋白质的鉴定及其在疾病诊断中的应用研究

外泌体中重要蛋白质的鉴定及其在疾病诊断中的应用研究

外泌体中重要蛋白质的鉴定及其在疾病诊断中的应用研究随着科技的日新月异,人类对于疾病的认识也越来越深入。

在疾病诊断中,生物标记物的作用是非常重要的。

而外泌体是最近引起科学家广泛研究的生物标记物载体之一。

外泌体是一种由多种细胞分泌的小囊泡,其作用是将细胞内的分子,如蛋白质和RNA通过胞外泌出到质膜外,来与其他细胞进行交流。

在最近的研究中,一些在外泌体中表达的蛋白质已经被鉴定出来并且已经应用在一些疾病的诊断中。

外泌体中“芝士”的鉴定外泌体的组成非常丰富,其中包括脂质、蛋白质和核酸等,是一种极为神秘的细胞分泌物。

其中蛋白质作为重要的生物标记物,被广泛研究和应用。

蛋白质检验技术的不断发展已经使得几百万种不同的蛋白质被发现,并且在临床诊断中被广泛应用。

但是,由于外泌体中蛋白质的多样性和低表达水平等问题,提纯和鉴定外泌体蛋白质是非常困难的。

最近,外泌体蛋白质的鉴定方法得到了快速而大幅度的改进,这主要是建立在质谱技术的基础上。

它可以帮助科学家鉴定和分析外泌体中重要蛋白质,并且可以检测这些蛋白质是否存在疾病中。

这种方法的流程大致是:先将外泌体提取并进行分离富集,再将富集的外泌体进行蛋白质组学分析,最后运用生物算法解析获得鉴定结果。

外泌体中重要蛋白质在疾病诊断中的应用外泌体中蛋白质的检测不仅仅局限于科学探究中,其在临床诊断中的应用也日益受到重视。

外泌体具有一定的检测优势,如成熟的外泌体囊泡可以稳定地保存并且能够抗血浆蛋白酶的消化。

这样的特性为该技术提供了一种新的机会,可以用于疾病诊断和治疗。

癌症是人类健康的大敌。

研究表明,外泌体在癌细胞的生长、增殖和转移过程中发挥着重要作用,同时具有潜在的治疗作用。

许多研究人员发现,在外泌体中表达着某些与肿瘤相关的蛋白质,如免疫染色激素1和转移相关蛋白等,这些特征可以用于癌症的临床诊断、预后评估和治疗监控。

最近的研究中,发现在外泌体中也有着某些传统治疗难以诊断的疾病相关蛋白质表达,例如阿尔茨海默病和帕金森病等。

外泌体蛋白组学需要的样本量

外泌体蛋白组学需要的样本量

外泌体蛋白组学需要的样本量
外泌体蛋白组学是一种研究外泌体中蛋白质组成的方法,它对于揭示外泌体的功能和生物学意义具有重要意义。

然而,进行外泌体蛋白组学研究需要一定的样本量才能得到可靠的结果。

样本量的确定需要考虑多个因素,包括研究目的、研究设计和技术平台等。

一般来说,样本量应该足够大以保证结果的可靠性和统计学意义。

此外,样本量的多少还受到实验条件的限制,比如实验设备的容量和实验时间的限制等。

对于外泌体蛋白组学研究来说,样本量的确定需要综合考虑多个因素。

首先,研究目的是确定样本量的重要参考因素之一。

如果研究目的是发现新的蛋白质标志物,那么样本量应该足够大以覆盖尽可能多的蛋白质。

如果研究目的是比较不同组之间的差异,那么样本量应该足够大以保证统计学上的显著性。

研究设计也对样本量的确定有一定影响。

如果研究设计是横断面研究,即只对一次采集的样本进行分析,那么样本量应该足够大以保证结果的可靠性。

如果研究设计是纵向研究,即对多次采集的样本进行分析,那么样本量可以相对较小。

技术平台的限制也需要考虑到样本量的确定中。

不同的技术平台对样本量的要求可能有所不同,比如质谱技术可能对样本量的要求较高,而免疫印迹技术可能对样本量的要求较低。

外泌体蛋白组学研究的样本量的确定需要综合考虑研究目的、研究设计和技术平台等多个因素。

在确定样本量时,需要保证样本量足够大以保证结果的可靠性和统计学意义,并考虑实验条件的限制。

只有这样,我们才能得到真实可靠的外泌体蛋白组学研究结果。

不同人体细胞外泌体的特点及功能化研究-病理学论文-基础医学论文-医学论文

不同人体细胞外泌体的特点及功能化研究-病理学论文-基础医学论文-医学论文

不同人体细胞外泌体的特点及功能化研究-病理学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档,下载后可直接编辑使用亦可打印——摘要:外泌体(exosomes)是一种活细胞分泌的囊性小泡,能携带脂质、蛋白质和遗传物质,在体内进行生物信息传输。

外泌体中独特的组织或细胞特异性蛋白质和遗传物质,可反映其细胞来源和细胞的生理状态,因此不同细胞来源的外泌体有不同的特点和功能。

基于其内源性、生物相容性和多功能特性,外泌体有望成为药物递送系统、免疫治疗、精准治疗的新手段。

本综述聚焦近年来报道的不同细胞分泌的外泌体的特点及功能化研究成果,对其进行归纳总结。

关键词:外泌体; 细胞来源; 药物递送载体; 疾病治疗;Abstract:Exosomes,cystic vesicles secreted by living cells,carry lipids,proteins and genetic materials,and transmits biological informations in the body. The unique tissue or cell-specific proteins and genetic materials in the exosomes generally reflect the cell origin and the physiological state of cells,so the exosomes from different cell sourcesappear to have different characteristics and functions. In view of the endogenous character,biocompatibility and functional versatility,the exosomes are expected to be a new means for the drug delivery systems,immunotherapies,and precision treatment. This review summarizes the exosomes secreted by different cells,focusing on the research achievement in their characteristics and functionalization studies in recent years.Keyword:exosomes; cell sources; drug delivery vehicles; disease treatment;外泌体(exosomes)是活细胞吞噬异源物质后以出芽方式向内凹陷形成含有多个小泡的多泡体(multivesicular body,MVB),再由多泡体与细胞膜融合而释放的小囊泡(图1)。

外泌体在卵巢癌中的作用机制及应用前景

外泌体在卵巢癌中的作用机制及应用前景

外泌体在卵巢癌中的作用机制及应用前景1. 内容概览随着生物技术的不断发展,外泌体作为一种新兴的生物标志物在肿瘤研究中引起了广泛关注。

卵巢癌作为女性常见的恶性肿瘤之一,其发病机制复杂,预后较差。

近年来的研究发现,外泌体在卵巢癌的发生、发展和转移过程中发挥着重要作用。

本文将从外泌体的形成、作用机制以及在卵巢癌中的应用前景等方面进行综述,以期为临床诊断和治疗提供新的思路和方法。

1.1 研究背景卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,具有较高的致死率。

尽管近年来在诊断和治疗方面取得了显著进展,但卵巢癌的预后仍然较差。

寻找新的治疗方法和靶点对于提高患者生存率具有重要意义,外泌体作为一种新兴的生物标志物和潜在的治疗靶点受到了广泛关注。

外泌体是一种由细胞内膜结构形成的微小囊泡,含有丰富的蛋白质、核酸和其他生物活性物质。

它们可以通过细胞膜转移至细胞外液,并参与多种生物学过程,如细胞间信号传递、免疫调节和代谢调控等。

外泌体在许多疾病的发生发展过程中发挥着重要作用,包括肿瘤、心血管疾病、炎症性肠病等。

在卵巢癌中,外泌体的异常表达和功能异常已被证实与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。

外泌体中的m6AP(神经生长因子样蛋白)可以促进肿瘤细胞的侵袭和转移;同时,外泌体还可以介导肿瘤细胞与免疫细胞之间的相互作用,影响免疫应答。

研究外泌体在卵巢癌中的作用机制及其应用前景对于揭示卵巢癌的发病机制、指导临床诊断和治疗具有重要意义。

1.2 研究目的随着对卵巢癌发病机制的深入研究,外泌体作为一种新型生物标志物在卵巢癌诊断和治疗中的应用逐渐受到关注。

本研究旨在探讨外泌体在卵巢癌中的作用机制,以及其在临床诊断和治疗中的潜在应用前景。

具体目标包括:通过分析卵巢癌组织和外泌体的特征,揭示外泌体在卵巢癌发展过程中的作用机制,为深入了解卵巢癌的病理生理过程提供新的视角。

探索外泌体在卵巢癌诊断和预后评估中的价值,为其成为卵巢癌早期筛查和个体化治疗的新工具提供理论依据。

人HEK293T细胞外泌体的蛋白质组学分析

人HEK293T细胞外泌体的蛋白质组学分析

人HEK293T细胞外泌体的蛋白质组学分析殷爱红;胡家;任晓曦;杨颖【摘要】目的建立一套完整的外泌体样品提取,液质联用蛋白质组学检测方法.方法采用超速离心法提取细胞培养液外泌体,经过 FASP酶切,收集酶解肽段,通过Easy-Nano LC液相色谱仪和Triple TOF6600质谱仪(美国Sciex公司)液质联用检测外泌体全酶解产物,并通过ProteinPilot软件(Sciex)处理数据,检索Uniprot的相应数据库,从而鉴定外泌体蛋白质.结果通过超速离心法,成功提取到细胞培养液外泌体.并通过LC-MS-MS方法,软件分析和数据库检索到833个匹配蛋白.结论此方法可有效获取外泌体,并鉴定外泌体蛋白质.【期刊名称】《继续医学教育》【年(卷),期】2018(032)010【总页数】3页(P138-140)【关键词】外泌体;超速离心;FASP酶解;LC/MS/MS【作者】殷爱红;胡家;任晓曦;杨颖【作者单位】首都医科大学中心实验室,北京 100069;首都医科大学中心实验室,北京 100069;首都医科大学基础医学院,北京 100069;首都医科大学中心实验室,北京100069【正文语种】中文【中图分类】R341外泌体(exosomes)是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体)的膜性小囊泡。

其天然存在于真核生物的体液中,包括血液、尿液、唾液、母乳、脑脊液以及细胞培养液。

多数报道中的外泌体是直径在30~100 nm[1],密度在1.13~1.21 g/ml的小囊泡。

近几年,人们发现外泌体中含有细胞特异的蛋白质、脂质和核酸,它可作为信号分子传递给其他细胞,进而改变其他细胞的功能[2]。

外泌体在免疫中抗原呈递、肿瘤的生长和迁移、组织损伤的修复中起着重要作用。

不同来源细胞分泌的外泌体有不同的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。

近些年外泌体的应用越来越受到关注,有望成为一种新型给药途径及基因治疗载体。

微生物外泌体组学-概述说明以及解释

微生物外泌体组学-概述说明以及解释

微生物外泌体组学-概述说明以及解释1.引言1.1 概述微生物外泌体组学是一门新兴的研究领域,它研究的是微生物释放的外泌体所携带的生物学信息。

外泌体是一种由细胞分泌出来的小囊泡,它包含了脂质、蛋白质、核酸等多种分子,可以在细胞间传递信息,参与调控各种生物过程。

微生物外泌体组学的出现给我们揭示了微生物之间信息传递的新机制,拓展了我们对微生物行为的认识。

微生物外泌体具有多种特点,首先是其广泛存在于各种微生物中。

微生物外泌体不仅存在于细菌、真菌、病毒等单细胞微生物中,还存在于复杂的微生物群落中。

其次,微生物外泌体携带了丰富的生物学信息。

通过分析微生物外泌体所携带的脂质、蛋白质、核酸等分子成分,我们可以了解微生物的代谢状态、生长环境以及其在致病过程中的作用等。

此外,微生物外泌体还具有稳定性和选择性通讯的特点,可以在不同环境中保持其完整性,并选择性地传递信息。

在疾病中,微生物外泌体扮演着重要的作用。

一方面,微生物外泌体可以通过释放毒素、蛋白质酶等分子参与宿主免疫系统的调控和干扰,从而促进病原微生物的侵袭和病程的发展。

另一方面,微生物外泌体也可以作为传递抗药性基因、耐药基因的载体,导致多药耐药问题的加剧。

因此,深入研究微生物外泌体在疾病中的作用机制,有助于我们更好地理解疾病的发生和发展,为疾病的预防和治疗提供新的思路和策略。

微生物外泌体组学的研究方法和应用也在不断发展。

目前,通过高通量测序、质谱分析等技术手段,我们可以对微生物外泌体的组成和功能进行系统性的研究,并探索其在不同生物过程中的作用机制。

此外,微生物外泌体的特性也使其成为一种潜在的生物标志物和治疗靶点。

通过对微生物外泌体的分析,我们可以发现早期疾病的标志物,并开发相关的诊断和治疗方法。

总之,微生物外泌体组学作为一门新兴的研究领域,为我们了解微生物行为提供了新的视角。

通过深入研究微生物外泌体的定义、特点以及在疾病中的作用,进一步探索其研究方法和应用,我们可以更好地利用微生物外泌体这一重要信息源,为疾病的预防和治疗提供新的思路和策略。

外泌体蛋白质组学

外泌体蛋白质组学

百泰派克生物科技
外泌体蛋白质组学
外泌体蛋白质组学旨在研究外泌体的蛋白质组成,基于质谱的方法可以用于外泌体蛋白质组学的研究。

百泰派克生物科技提供基于质谱的外泌体蛋白质组分析服务。

外泌体蛋白质组学
外泌体是一种由脂质双分子层膜包裹着蛋白质和RNA等细胞分泌物的细胞外囊泡,可分泌自大多数细胞,存在于大多数体液(如血液、尿液、唾液等)和细胞培养液中。

外泌体中的蛋白质含量较多,且这些蛋白质涉及的功能范围较广。

外泌体蛋白质组学旨在利用蛋白质组学技术从整体水平上研究外泌体中的蛋白质,从而助力外泌体的功能研究和临床应用,例如筛选与鉴定生物标志物、发现药物靶点等。

外泌体蛋白质组学1。

外泌体蛋白质组分析
外泌体进行蛋白组学研究的首要步骤是分离和提取外泌体。

目前外泌体提取的常用方法包括有超速离心法、凝胶过滤法、磁珠法以及聚合物沉淀法等,它们均有不同的优缺点,研究人员可根据实际情况选择合适的方法。

在外泌体提取完成后,可通过凝胶电泳、色谱技术、质谱技术等方法测外泌体蛋白质组。

其中,液相色谱技术与质谱技术联用可对外泌体蛋白质组进行较全面的定性和定量分析。

国自然基金申请热点方向2(外泌体、组蛋白修饰、肠道菌、免疫微环境)

国自然基金申请热点方向2(外泌体、组蛋白修饰、肠道菌、免疫微环境)

国自然基金申请热点方向2(外泌体、组蛋白修饰、肠道菌、免疫微环境)目录国自然基金热点介绍A外泌体(1438项)B组蛋白修饰(660项)C肠道菌群(156项)D免疫微环境方向(125项)外泌体外泌体(Exosome码RNA观。

(1)外泌体天然运载了多种蛋白质、mRNA、各种非编码RNA、线粒体DNA 以及基因组DNA,可以分析外泌体运载的基因及信号通路,揭示疾病发病机制。

(2)外泌体作为药物输送系统,与脂质体制剂相反,属于天然存在的分泌性膜囊泡,毒性较低,能够跨越主要的生物屏障,如血脑屏障(BBB)等。

此外,外泌体固有的归巢能力暗示了它们在药物递送中的潜在效用。

已有研究将抗炎剂姜黄素、抗癌剂阿霉素和紫杉醇等装载到外泌体囊泡中用于相应疾病的治疗。

例如,一些研究表明,与其他递送系统相比,加载到外泌体中的阿霉素的治疗功效大大增强,并且对主要器官系统(尤其是心脏)的不良影响明显减少。

(3)外泌体作为免疫调节的治疗工具,例如肿瘤来源的外泌体携带抗原,并已被用作针对肿瘤的免疫反应的特异性刺激来源。

此外,通过调节DC细胞分泌的外泌体表达MHC-I,可以激活CD8+ T,治疗免疫抑制相关疾病。

而腹水来源的外泌体与树突细胞或肿瘤衍生的外泌体一样有效,可敏化树突细胞和主要的细胞毒性T淋巴细胞,从而发挥免疫调节作用。

(1)Adipose Tissue Macrophage-Derived Exosomal miRNAs Can Modulate In Vivo and In Vitro Insulin Sensitivity.Cell (IF=38.637)主要内容:脂肪组织巨噬细胞(adipose tissue macrophages,ATMs)分泌的外泌体中含有miRNA并可以转移到胰岛素的靶细胞中,从而调节靶细胞对胰岛素的敏感性以及体内的总糖代谢稳态。

从肥胖小鼠脂肪组织内分离出巨噬细胞,再收集细胞里的外泌体,用它们处理体型瘦的健康小鼠,发现接受了外源外泌体的小鼠虽然体重依然正常,但却出现肥胖诱导型胰岛素抵抗症状。

外泌体的功能及其在临床应用中的研究进展

外泌体的功能及其在临床应用中的研究进展

外泌体的功能及其在临床应用中的研究进展杨金鑫;王海军;赵永坤;裴志花;孙明洁;王开;胡桂学【摘要】外泌体(exosome)是通过细胞内多泡体与细胞膜融合产生的纳米级细胞外膜泡,广泛分布在血清、尿液、唾液和其他生物液体中.外泌体作为细胞间通信和遗传物质的重要转移载体,可通过受体介导的相互作用或通过各种生物活性分子(如细胞膜受体、蛋白质、mRNA和miRNA)的转移直接刺激靶细胞,从而发挥其生物学功能.文章主要综述了外泌体内含蛋白质和miRNA的功能及外泌体在临床中的应用.外泌体内蛋白质和miRNA的功能包括生理状态下诱导机体免疫、递呈抗原、参与细胞间信号传导;病理状态下改变肿瘤微环境、促进癌细胞增殖、侵袭、加快血管生成、促进癌症发展;以及某些病毒可将其组分包装、整合到外泌体中来实现细胞间传播,或劫持外泌体,实现免疫逃避.作者主要介绍了其作为肺癌、乳腺癌、胰腺癌及结直肠癌等多种癌症早期诊断的生物性标志物,以及作为稳定性高、转运效率高、靶向性强的药物载体在临床中的应用.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2018(045)012【总页数】6页(P3608-3613)【关键词】外泌体;蛋白质;miRNA;疾病诊断;药物载体【作者】杨金鑫;王海军;赵永坤;裴志花;孙明洁;王开;胡桂学【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院,长春130118;吉林省野生动物救护繁育中心,长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,长春130122;吉林农业大学动物科学技术学院,长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,长春130118【正文语种】中文【中图分类】Q711987年Johnstone等[1]首次在成熟的哺乳动物网织红细胞中发现一种直径约为30~100 nm的囊性小泡,称其为外泌体(exosome),其密度为1.13~1.19g/mL,具有典型的“杯状”或“盘状”形态。

外泌体的研究进展

外泌体的研究进展

外泌体的研究进展外泌体是细胞分泌的一种重要物质,由细胞释放到细胞外环境中,参与多种生物学过程。

近年来,随着对外泌体研究的深入,越来越多的学者开始其在医学、生物和材料等领域的应用价值。

本文将对外泌体的研究现状、方法、成果和应用前景进行全面探讨。

一、外泌体的研究现状外泌体是由细胞分泌的一种小泡,直径约30-100纳米,包含多种生物活性物质,如蛋白质、核酸和脂质等。

近年来,随着对外泌体的深入研究,发现其参与了细胞间通信、物质运输等多种生物学过程。

同时,外泌体在疾病诊断、药物研发和组织工程等方面也具有广泛的应用前景。

二、外泌体的研究方法1、实验设计:外泌体的研究涉及细胞生物学、分子生物学、生物化学、医学等多个学科,因此需要进行多学科交叉的实验设计。

2、样本处理:外泌体的提取和纯化是研究外泌体的关键步骤,常用的方法包括超速离心法、免疫磁珠法、聚合物沉淀法等。

3、基因表达分析:采用基因表达谱技术对外泌体中的核酸进行分析,以揭示其基因表达特征。

4、蛋白质组学:运用蛋白质组学技术对外泌体中的蛋白质进行分析,以鉴定其蛋白质种类和功能。

三、外泌体的研究成果1、肿瘤治疗:研究发现,肿瘤细胞释放的外泌体可以传递信号给正常细胞,诱导其恶性转化。

因此,通过研究外泌体在肿瘤发生发展中的作用,有望为肿瘤治疗提供新思路。

2、药物传输:外泌体具有保护和输送物质的特性,可被用作药物载体。

通过加载抗癌药物或其他生物活性物质,外泌体可以实现药物的定向传输,提高疗效并降低副作用。

3、组织工程:外泌体具有调节细胞生长、分化和迁移的能力,因此在组织工程中具有潜在应用价值。

例如,将特定外泌体加载到生物材料中,可以促进组织再生和修复。

4、环境监测:外泌体在细胞间通信和物质运输中发挥重要作用,也参与了环境因素的响应和适应。

通过研究外泌体在环境监测中的作用,可以为环境污染的监测和治理提供新手段。

四、外泌体的应用前景1、生物治疗手段:通过调节外泌体释放的生物活性物质,有望开发新的生物治疗手段,如上文提到的肿瘤治疗和药物传输等。

新生与成年大鼠心脏成纤维细胞来源外泌体蛋白质组学差异分析

新生与成年大鼠心脏成纤维细胞来源外泌体蛋白质组学差异分析

论著新生与成年大鼠心脏成纤维细胞来源外泌体蛋白质组学差异分析高小平,倪潇,周文,李畅,李光西南医科大学心血管医学研究所,医学电生理学教育部重点实验室,医学电生理四川省重点实验室,四川省心血管疾病防治协同创新中心(泸州646000)【摘要】目的幼体心脏具有再生修复功能,通过分析新生大鼠与成年大鼠心脏成纤维细胞来源外泌体的差异蛋白,从分子水平上探讨心肌受损后可能的治疗靶点。

方法分别从新生和成年大鼠心脏成纤维细胞中分离出外泌体,并提取蛋白质进行高效液相色谱法(high per-formance liquid chromatography,HPLC)和液相色谱串联质谱法(liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分析,鉴定差异表达的蛋白质。

使用DAVID数据库对差异表达蛋白基因进行基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析。

并进一步使用STRING数据库和Cytoscape软件进行蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction,PPI)分析,以筛选出关键基因。

结果在新生大鼠中共发现241个差异表达蛋白,其中上调表达的蛋白有117个,下调表达的蛋白有124个。

GO分析显示上调表达基因主要涉及整合素介导的信号通路和对缺氧的反应,而对内肽酶活性负调控的基因下调表达。

KEGG分析结果表明上调表达基因主要富集于Hippo信号通路,而下调表达基因主要涉及细胞外基质与受体相互作用。

通过PPI分析得出有6个关键基因(Lamc1、Agrn、Itih3、Tfrc、Bgn和Atp5pd)下调,有1个关键基因(Rp17a)上调。

结论通过蛋白组学和生物信息学方法,筛选出了新生大鼠和成年大鼠心脏成纤维细胞来源外泌体的差异蛋白,以及相关的信号通路和关键基因,为心肌受损精准治疗提供了潜在的靶点。

人脐带间充质干细胞来源外泌体的提取、鉴定和蛋白组学分析

人脐带间充质干细胞来源外泌体的提取、鉴定和蛋白组学分析

人脐带间充质干细胞来源外泌体的提取、鉴定和蛋白组学分析摘要:目的:探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体进行提取鉴定和蛋白组学。

方法:培养人脐带间充质干细胞并采用超滤序贯超离法提取外泌体,通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、蛋白质定量、蛋白质印迹法及蛋白组学分析等技术鉴定。

结果①所抽取的外泌体分散度比较好,而且均匀。

②,外泌体粒径分布的高峰为(129.5+8.7) nm,它的膜表面是带有负电荷的,其浓度为8.375>109颗粒/ml,平均 zeta电位为(-28.1+3.6) mV。

③ 外泌体中存在着一类特殊的膜蛋白,即CD9,CD63等。

④蛋白质组学研究发现外泌体中的大部分蛋白都具有较高的活性,它们涉及到 RNA剪接、 mRNA加工、蛋白质折叠等生物学过程,涉及到 RNA/DNA等基因材料的合成、加工、降解等过程。

结论:经研究发现,人脐带间充质干细胞外泌体与其母系细胞存在某种“同质”、“差别”,且这些“差别”的蛋白质功能与其自身的免疫学特性都不相关,从而证实人脐带间充质干细胞外泌体具有较小的免疫学活性及较高的安全性。

关键词:人脐带间充质干细胞;外泌体;蛋白组学:免疫原性引言:间充质干细胞起源于中胚层,它是一种能够在各种组织中进行定向分裂并进行自身增生的干细胞,它可以从各种组织中被提取,比如脐带、子宫内膜息肉、月经期血液、骨髓、脂肪组织等,由于它的来源多样化,并且可以大规模地获取,所以它在实验和临床上都有着非常重要的研究价值。

本课题拟通过分离人脐带间充质干细胞源性外泌体,并通过比较两者的蛋白质组水平上的差别,验证其在体外的免疫活性,进而验证其在临床上的应用前景,并评估其在临床应用中的应用前景。

一、资料与方法1.1一般资料选取本企业2021年8月至2022年8月该时间段接受人脐带充质干细胞来源外泌体进行提取鉴定和蛋白组学分析的足月产新生儿脐带50例。

1.2方法1.2.1人脐带间充质干细胞培养及鉴定(1)人脐带充质干细胞的原代培养法:6小时之内,对所收集的脐带进行清洗,并将其两侧有瘀斑或瘀斑的部位,用 PBS对其周边及脐静脉进行彻底的清洗,并将其切割为1毫米×1毫米×1毫米的小段,并将其放置在18 wt的 DMEM全培养剂(Rh)+1 wt青链霉索 V+ DMEN (DMEM)浸润的T75玻璃瓶底部,底部向上,放置在37℃,5%体积分数的 DMEM全培养剂(DMEM)浸润的玻璃瓶中,2小时后将玻璃杯倒置,倒入5 mL DMEM全培养剂,第2日再更换玻璃杯,并用2 mL TrypL酶解,使其达到70%-80%的水平,按1:4的比例进行传代,获取生长良好3-6代细胞。

外泌体蛋白组学技术:探索细胞外囊泡中的生物信息

外泌体蛋白组学技术:探索细胞外囊泡中的生物信息

外泌体蛋白组学技术:探索细胞外囊泡中的生物信息外泌体作为一类细胞外囊泡,携带着丰富的蛋白质、核酸和脂质等生物信息,在细胞间的信息传递和调节中起着重要作用。

近年来,外泌体蛋白组学技术的发展引起了广泛关注。

本文将详细介绍外泌体蛋白组学技术,探讨其在探索细胞外囊泡中的生物信息方面的重要性,帮助读者更好地了解这一前沿领域的应用前景和潜力。

一、外泌体蛋白组学技术的原理与流程。

外泌体蛋白组学技术是一种用于分析和鉴定外泌体中蛋白质组成和功能的方法。

其流程包括外泌体的提取和纯化、蛋白质的消化和质谱分析等步骤。

通过质谱技术的应用,我们能够深入了解外泌体中蛋白质的组成和修饰,从而揭示其在细胞间通信和疾病发展中的作用机制。

以下是外泌体蛋白组学技术的原理和流程的详细介绍:图1。

1.1外泌体提取和富集:首先,从细胞培养液、体液或组织样本中提取外泌体。

常用的外泌体提取方法包括超速离心、滤膜过滤和抗体磁珠富集等。

这些方法能够去除细胞碎片、脂质小体等杂质,提纯外泌体样本。

1.2外泌体蛋白质消化:将提取的外泌体样本进行蛋白质消化,使蛋白质转化为肽段。

常用的消化酶包括胰蛋白酶和胰蛋白酶K等。

消化后的肽段是进行质谱分析的基础。

1.3质谱分析:消化后的外泌体样本通过质谱仪进行分析。

质谱分析可以分为两个主要步骤:肽段分离和肽段鉴定。

1.4肽段分离:常用的肽段分离方法包括液相色谱(LC)和电泳(如凝胶电泳)。

这些方法能够将复杂的肽段混合物分离成单个的肽段。

1.5肽段鉴定:通过质谱仪对分离的肽段进行鉴定。

质谱仪可将肽段进行碎裂,并测量碎片离子的质量/电荷比。

根据质谱图谱,可以通过数据库比对等方法确定肽段的身份。

1.6数据分析和解释:质谱分析得到的数据需要进行进一步的处理和解释。

数据分析包括谱图比对、蛋白鉴定和定量分析。

常用的分析工具和算法可帮助我们确定外泌体样本中存在的蛋白质,并进行定量比较。

二、外泌体蛋白组学技术的应用领域。

2.1 生物信息传递与调节。

外泌体及其蛋白质组学研究文献解读

外泌体及其蛋白质组学研究文献解读

外泌体及其蛋白质组学研究文献解读外泌体是什么鬼?连这都不知道,就真的out啦外泌体(Exosome),是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-200 nm。

外泌体存在于体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳等,不同组织来源的外泌体在内容物组成和功能方面存在差异,这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。

越来越多的证据表明,宿主细胞或肿瘤细胞分泌的外泌体参与了肿瘤发生、生长、侵袭和转移。

对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、疗效评价和预后分析。

外泌体都有哪些分离提取方法,喏,都给你打包整理好啦对于外泌体研究,分离和收集外泌体是非常关键的一步。

目前对于外泌体收集有:超高速离心、密度梯度离心、磁珠免疫、超滤法、聚合物沉淀等几种主要方法,各种方法均存在不同优缺点。

表1 各种分离方法优缺点比较但是嘞,大牛们的CNS文章大多用的都是超速离心的方法,不信你看:表2 CNS文章外泌体提取方法之——惊鸿一瞥怎么知道提取的外泌体合不合格?鉴定外泌体提取合格与否有三大法宝:电镜、NTA粒径、Western blot检测目前外泌体的分离提取还没有到达炉火纯青的地步,几乎没有任何一个单一实验可以确定外泌体的存在。

所以提取的外泌体需要通过三大法宝来相互佐证:形态学鉴定(电子显微镜技术)、NTA粒径分析以及Western blot检测标志蛋白(常用的有CD9、CD63、CD81、TSG101、HSP70等)。

电镜可以观察样品中是否有与外泌体相似的经典结构,有经典结构说明样品中有外泌体或者与外泌体类似的,如溶酶体、蛋白聚团、支原体等结构。

WB 检测发现样品中具有外泌体的标志物,可以一定程度上排除溶酶体、蛋白聚团、支原体等情况,但依旧不知道样品的整体情况。

因为电镜和WB的连用只能证明样品中有外泌体,但是有多少、纯度等就不得而知了。

所以这个时候需要再来一个NTA实验,NTA粒径分析可以反应外泌体样品中粒子的群体特征,以达到跟电镜和WB相辅相成的作用。

外泌体在肾脏疾病中的研究进展

外泌体在肾脏疾病中的研究进展

•综述与讲座•外泌体在肾脏疾病中的研究进展何星,王富博,叶华茂[关键词]外泌体;肾脏疾病;分子机制;诊断;治疗[中图分类号]R34[文献标志码]B[DOI]10.3969/j.issn.1009-0754.2021.02.041外泌体是一种大小为40-160nm的细胞外囊泡,包含有多种诸如核酸、蛋白质、脂类、氨基酸、小分子代谢物等内容物,这些内容物可以反映其细胞来源。

此外,外泌体还可以将内容物转运到靶细胞,成为细胞与细胞之间信息传递的重要媒介。

外泌体在体液中广泛存在。

有研究通过分析肾单位不同节段的外泌体成分及其与肾脏生理和病理生理的相关性,验证了与肾脏疾病相关的来自血清、肾小管细胞、肾实质细胞、肾小球内皮细胞、间充质干细胞、泌尿系统干细胞、癌细胞和巨噬细胞的外泌体的来源与作用[1-2],说明外泌体广泛参与了多种肾脏疾病的发生与发展。

本文就外泌体在肾脏生理学和肾脏疾病的分子机制、诊断和治疗中的作用等方面进行综述。

1外泌体在肾脏生理学中的作用肾脏是维持内环境稳态的重要器官之一。

外泌体在肾单位细胞间通讯中发挥着重要作用[2]。

蛋白质组学研究表明,肾单位中的外泌体主要来自位于近曲小管、髓攀升支粗段、远曲小管和集合管的肾小球足细胞和肾小管细胞。

不仅如此,尿液外泌体中富含的多种蛋白质和转运蛋白均来自于肾单位中的细胞。

例如,来自肾小球足细胞的足糖萼蛋白、来自近曲小管的水通道蛋白(aquaporin,AQP)-1、来自髓袢升支粗段的2型Na*-K+-2Cl-同向转运体、来自远曲小管的Na*-Cl-同向转运体以及来自集合管的AQP-2蛋白[3]。

这些研究表明,肾单位中的外泌体来源于肾单位中的不同细胞,而且包含有这些细胞中的重要信息分子。

研究发现,集合管细胞在血管加压素类似物作用下,其外泌体中AQP-2表达升高,从而诱导邻近细胞上调AQP-2的表达以增强水的重吸收⑷。

Gildea等⑸研究发现,肾小球足细胞的外泌体可沿近曲小管将信息传递至远曲小管上皮细胞。

解析肺癌外泌体组的代谢组学及蛋白质组学

解析肺癌外泌体组的代谢组学及蛋白质组学

解析肺癌外泌体组的代谢组学及蛋白质组学肺癌是目前严重威胁人类健康的一种疾病。

随着科技的发展,人们对肺癌研究的深入,越来越多的新技术被应用于对肺癌病理、病理机制、疾病进程等方面的研究中。

其中,外泌体组学及蛋白质组学作为一种新兴的技术手段,正在受到广泛的重视和研究。

本文将对肺癌外泌体组的代谢组学及蛋白质组学展开解析,以期对肺癌的治疗和预测起到积极作用。

一、外泌体在肺癌中的作用外泌体指的是细胞在分泌时通过外显化方式释放到胞外的膜囊结构。

研究表明,外泌体在肺癌的诊断和治疗中发挥着重要的作用。

1、外泌体在肺癌中的原理外泌体是由肺癌细胞主动分泌和重建的一种细胞外囊泡。

它们经公路系统流到各种组织细胞,通过包裹的方式运输分子信号,影响目标细胞生长、转化、浸润以及微环境改变,从而实现肺癌细胞增殖及转移。

2、外泌体的研究方法通常,外泌体的检测方法主要分为:离心浓缩法、超滤法、尺寸排除柱等。

3、外泌体组在肺癌中的作用外泌体组在肺癌中的作用是非常重要的。

外泌体的蛋白质、核酸及脂质组成,能够直接或间接增强肺癌细胞的增殖、转移、药物耐受性、浸润以及免疫逃逸等生物活性。

二、肺癌外泌体代谢组学的研究代谢组学是研究代谢物在细胞或组织中的变化、代谢通路的结构和相互作用关系和在生态系统中的参与等方面的科技。

人体肺癌的代谢组学分析可揭示肺癌代谢特征及其调控机制,从而为肺癌的精准诊断和标志物筛选奠定基础。

1、肺癌外泌体代谢物的研究研究发现,肺癌细胞外泌体中的代谢物与正常胶质细胞外泌体存在明显差异,肺癌外泌体组中不仅能检测到代谢产物,还能发现其参与的代谢途径和代谢酶,该技术可以提供一种与传统诊断方法不同的新的肺癌筛选方法。

2、代谢组技术的研究方法代谢组技术研究主要涉及细胞与动物的体外或体内实验两个方向。

其中细胞外泌物在肺癌细胞外泌体药物耐受性、转移及免疫逃逸中发挥着重要的作用。

三、肺癌外泌体蛋白质组学的研究1、肺癌外泌体蛋白质组学的研究方法蛋白质组学是一种研究细胞或组织中蛋白质种类、结构、功能及相互作用等的现代科技。

外泌体在疾病诊治作用中的研究进展

外泌体在疾病诊治作用中的研究进展

外泌体在疾病诊治作用中的研究进展梁玲;李胜活;陈子梦【摘要】外泌体(Exosomes)是囊泡转运的主要组成部分之一,囊泡转运对于细胞发挥多种功能活动起重要作用。

释放至细胞外面的 Exosomes 参与一系列生物过程,如免疫应答、凋亡、血管生成、炎症反应、凝结过程、肿瘤转移、动脉硬化、抗原提呈和治疗受损器官等。

诸多研究表明,不同细胞来源的 Exosomes,通常含有相同的一套蛋白质来调节膜骨架的动态性及膜融合;另外,Exosomes 中还包含核酸物质,统称为 eRNA,Exosomes 的生物学功能通过其携带蛋白质和 miRNA 等到达受体细胞而发挥调控作用。

Exosomes 可由树突状细胞、血小板、肥大细胞、内皮细胞间充质干细胞和肿瘤细胞等不同细胞类型分泌,并可在多数体液如外周血、尿液、唾液、羊水、乳汁、脑脊液、支气管肺泡灌洗液等体液中检测到。

诸多研究表明 Exosomes 携带的 mRNA、miRNA 和蛋白质在疾病发生发展过程中会发生明显变化,可作为疾病诊断的理想标记物。

在 Exosomes 治疗疾病研究方面,目前比较关注的是骨髓间充质干细胞和树突状细胞来源Exosomes 的治疗作用。

【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2016(056)025【总页数】4页(P107-110)【关键词】外泌体;肿瘤免疫;肿瘤血管新生;诊断;治疗【作者】梁玲;李胜活;陈子梦【作者单位】广州医科大学附属第四附医院,广州 510000;广州医科大学附属第四附医院,广州 510000;广州医科大学附属第四附医院,广州 510000【正文语种】中文【中图分类】R730外泌体(Exosomes)是由多种细胞分泌的40~100 nm的膜性小囊泡,由细胞内多泡体(MVE)出芽形成,再与细胞膜融合后释放至细胞外基质中。

细胞间的通讯可通过Exosomes携带mRNA、microRNA (miRNA)和蛋白质等到达受体细胞发挥调控作用。

外泌体蛋白组学

外泌体蛋白组学

百泰派克生物科技
外泌体蛋白组学
外泌体是一种由溶酶体内陷形成的多囊泡体,直径大约在30~150nm之间,内含物主要包括各种蛋白质、脂类和核糖核酸等混合物,它们通过外泌体囊泡膜与细胞膜融合后释放到胞外基质,如血液、尿液、唾液和脑脊液等。

相比其他内容物,蛋白质在含量和生物学功能上都更有优势和研究的意义。

外泌体蛋白质组学研究,就是对来自不同外泌体中的蛋白质进行整体水平上的研究,有利于揭示外泌体的功能、筛选药物靶标以及寻找生物标志物等,在临床应用上具有重要意义。

越来越多的研究表明,一些宿主或肿瘤细胞分泌的外泌体与肿瘤的发生、生长以及转移等过程密切相关。

因此,外泌体蛋白质组学研究在疾病的临床诊断、疗效评价和预后追踪等方面具有重要作用。

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台结合Nano-LC,
提供外泌体蛋白质组学服务技术包裹,可鉴定并定量外泌体中的蛋白质,结合生物信息学技术对蛋白质组学数据的解析,可以实现生物标志物的检测,欢迎免费咨询。

外泌体蛋白质组学如何鉴定差异表达的外泌体蛋白?

外泌体蛋白质组学如何鉴定差异表达的外泌体蛋白?

外泌体蛋白质组学如何鉴定差异表达的外泌体蛋白?1. 引言。

外泌体是细胞分泌的一类小型膜囊泡,含有丰富的蛋白质、核酸和生物活性分子。

近年来,外泌体蛋白质组学的研究得到了广泛关注。

通过分析外泌体中的蛋白质组成,我们可以了解细胞间的信息传递和调控机制,发现潜在的生物标志物,并且为疾病诊断和治疗提供新的途径。

2. 外泌体蛋白质组学的原理。

外泌体蛋白质组学的主要原理是通过质谱等技术手段,对外泌体中的蛋白质进行高通量分析和鉴定。

外泌体可以从细胞培养液、体液等样本中分离得到。

通过蛋白质组学技术的应用,可以鉴定和定量外泌体中不同类型的蛋白质,并进一步分析其差异表达特征。

3. 外泌体蛋白质组学的鉴定方法。

3.1质谱技术:质谱技术是外泌体蛋白质组学中常用的鉴定方法。

其中,液相色谱质谱联用(LC-MS)技术是最常用的分析手段。

通过质谱仪分析外泌体样品中的蛋白质,可以鉴定不同类型的蛋白质,并进行定量分析。

3.2免疫印迹法:免疫印迹法可以用来鉴定特定的外泌体蛋白质。

通过使用特异性抗体,可以检测外泌体样品中目标蛋白质的存在与否,进而对差异表达的蛋白进行筛选和验证。

3.3蛋白芯片技术:蛋白芯片技术是一种高通量的蛋白质组学方法。

通过将大量不同蛋白质捕获在芯片上,并与外泌体样品进行相互作用,可以鉴定大量差异表达的外泌体蛋白质。

4. 外泌体蛋白质组学的应用。

外泌体蛋白质组学在生物学和医学研究中具有广泛的应用。

研究表明,外泌体中的蛋白质可以作为潜在的生物标志物,用于疾病的早期诊断和治疗监测。

此外,外泌体蛋白质组学还可以帮助我们理解细胞之间的信息传递和调控机制,为疾病的发病机制研究提供新的思路。

5. 外泌体蛋白质组学的未来展望。

随着技术的不断进步,外泌体蛋白质组学将更加高效和精确。

未来,我们可以期待通过外泌体蛋白质组学的深入研究,发现更多的生物标志物,为疾病的早期诊断和精准治疗提供更多的选择。

6. 结论。

外泌体蛋白质组学作为生物制品蛋白组学领域的新兴分支,为我们深入了解外泌体的生物学功能和临床应用前景提供了有力支持。

SciAdv丨LAMP2A介导了蛋白质向外泌体的分选和包装

SciAdv丨LAMP2A介导了蛋白质向外泌体的分选和包装

SciAdv丨LAMP2A介导了蛋白质向外泌体的分选和包装外泌体是内体来源的细胞外囊泡,可以在不同细胞、组织或器官之间转移脂质、RNA 和蛋白质。

来自葡萄牙里斯本大学的研究人员发现,含有KFERQ五肽序列的蛋白质可以通过依赖于膜蛋白LAMP2A 的过程中被包装到外泌体中,这是一种独立于ESCRT的新机制,也为外泌体工程开辟了新的应用途径。

该研究发表于ScienceAdvances杂志上。

外泌体是直径为40至160 nm的纳米级囊泡,由大多数细胞类型分泌到细胞外空间。

含有脂质、代谢物、蛋白质和RNA的外泌体可以在免疫功能、病毒感染、代谢调节、肿瘤转移和神经退行性变等多种生物过程中将细胞信息从一个细胞转移到另一个细胞。

此外,循环外泌体具有多种潜在用途,例如液体活检中的疾病生物标志物,并且人们正在努力建立工程化外泌体为疫苗和基因治疗等多种治疗方法或靶向蛋白质。

外泌体由内体限制膜的向内出芽形成,产生含有腔内囊泡 (ILV) 的载有囊泡的内体,称为多泡体 (MVB)。

这些MVB的一部分与质膜的融合,使ILV形成外泌体释放到细胞外空间。

从起源细胞分泌后,外泌体可以与其他细胞对接和融合,或被其他细胞内化以递送其货物。

ILV生物发生被认为主要由ESCRT(运输所需的内体分选复合物)机制介导。

然而,研究发现ESCRT 缺失的细胞仍然可以产生ILV。

据报道,替代机制有助于ILV形成和货物分类,例如鞘脂神经酰胺、四跨膜蛋白CD63、Toll样受体运输伴侣UNC93B1 或syndecan-syntenin-Alix 途径。

值得注意的是,有充分的证据表明,外泌体的货物库不一定反映原始细胞的胞质内容物,表明其中存在主动的可溶性货物选择或分类机制。

然而,控制可溶性细胞质成分选择和分选成外泌体的机制仍然很大程度上未知。

在这项研究中,研究人员发现含有与KFERQ基序相关的氨基酸序列的蛋白质被包装到外泌体的亚群中。

研究人员确定以下几种蛋白是该机制的基本组成部分:溶酶体相关膜蛋白2的同工型A (LAMP2A),此前被认为是一种将含有KFERQ的底物靶向溶酶体的蛋白质;以及分子伴侣热休克蛋白HSC70。

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外泌体及其蛋白质组学研究文献解读
外泌体是什么鬼?连这都不知道,就真的out啦
外泌体(Exosome),是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-200 nm。

外泌体存在于体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳等,不同组织来源的外泌体在内容物组成和功能方面存在差异,这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。

越来越多的证据表明,宿主细胞或肿瘤细胞分泌的外泌体参与了肿瘤发生、生长、侵袭和转移。

对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、疗效评价和预后分析。

外泌体都有哪些分离提取方法,喏,都给你打包整理好啦
对于外泌体研究,分离和收集外泌体是非常关键的一步。

目前对于外泌体收集有:超高速离心、密度梯度离心、磁珠免疫、超滤法、聚合物沉淀等几种主要方法,各种方法均存在不同优缺点。

表1 各种分离方法优缺点比较
但是嘞,大牛们的CNS文章大多用的都是超速离心的方法,不信你看:表2 CNS文章外泌体提取方法之——惊鸿一瞥
怎么知道提取的外泌体合不合格?
鉴定外泌体提取合格与否有三大法宝:电镜、NTA粒径、Western blot检测
目前外泌体的分离提取还没有到达炉火纯青的地步,几乎没有任何一个单一实验可以确定外泌体的存在。

所以提取的外泌体需要通过三大法宝来相互佐证:形态学鉴定
(电子显微镜技术)、NTA粒径分析以及Western blot检测标志蛋白(常用的有CD9、CD63、CD81、TSG101、HSP70等)。

电镜可以观察样品中是否有与外泌体相似的经典结构,有经典结构说明样品中有外泌体或者与外泌体类似的,如溶酶体、蛋白聚团、支原体等结构。

WB 检测发现样品中具有外泌体的标志物,可以一定程度上排除溶酶体、蛋白聚团、支原体等情况,但依旧不知道样品的整体情况。

因为电镜和WB的连用只能证明样品中有外泌体,但是有多少、纯度等就不得而知了。

所以这个时候需要再来一个NTA实验,NTA粒径分析可以反应外泌体样品中粒子的群体特征,以达到跟电镜和WB相辅相成的作用。

图1 Characterization of C666‐1, NP69 and NP460 exosomes.
(引自Chan, Yuk‐Kit, Zhang H, Liu P, et al. Proteomic analysis of exosomes from nasopharyngeal carcinoma cell identifies intercellular transfer of angiogenic proteins[J]. International Journal of Cancer, 2015, 137(8):1830-1841.)
外泌体蛋白质组学研究,有啥好期待的嘞:
外泌体可通过传递信息影响靶细胞的功能,激活细胞信号通路,在免疫、凝血、肿瘤等生理病理过程中发挥作用。

而其中蛋白质的差异表达是区分不同来源外泌体的重要特点,是研究外泌体起源的重要途径。

蛋白质组学已经逐渐成为研究各种亚细胞组分蛋白质组的重要工具。

针对外泌体进行蛋白质组学研究,可以揭示疾病发病机制、寻找疾病诊断和预后的生物标志物、筛选疾病治疗靶点等。

废话少说,我们来看看人家具体是怎么运用的吧:
研究目的
鼻咽癌(NPC)是鼻咽上皮常见的恶性肿瘤,在东南亚地区高发,在我国的广东,广西两省尤为普遍。

NPC具有高转移率,> 60%的鼻咽癌患者出现颈部淋巴结浸润,5%〜8%的患者出现远端转移。

但是NPC转移的机制仍有待阐明。

本研究的目的是为了阐明NPC来源的外泌体在肿瘤血管生成中的作用。

实验流程
鼻咽癌细胞:NPC C666-1永生化鼻咽上皮细胞:NP69永生化鼻咽上皮细胞:NP460
细胞上清外泌体提取:超速离心法
外泌体鉴定:电镜、粒径、WB
外泌体蛋白提取、酶解
iTRAQ标记:115—C666‐1、116—NP69、117—NP460
肽段等量混合、SCX分离
LC-MS/MS
差异蛋白筛选及生物信息学分析
WB验证差异蛋白ICAM-1、 CD44v5 和TSP-1
发现血管生成蛋白在鼻咽癌细胞分泌的外泌体诱导的肿瘤血管生成过程中具有关键作用,
可作为潜在的治疗靶标
实验小结
作者利用超速离心法从NPC细胞系C666-1和非肿瘤性NP细胞系(NP69和NP460)
培养基中分离外泌体并采用了不同的验证方法来确保外泌体的质量。

结果表明,在C666-1
外泌体的诱导下,受体内皮细胞在体外显著表达血管生成表型。

结合iTRAQ定量蛋白质组
学方法以及共聚焦显微镜和Western blot等分析,作者证实了外泌体将血管生成蛋白从NPC
转移到受体内皮细胞。

表明NPC分泌的外泌体可以在体外诱导血管生成,血管生成蛋白在
鼻咽癌细胞分泌的外泌体诱导肿瘤血管生成过程中具有关键作用,可作为潜在的治疗靶标。

外泌体在免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要
的作用。

同时,不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物
标志物。

金开瑞可提供外泌体研究整体方案设计、外泌体提取/粒径测量/电镜检测、外泌体
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