人教版高中生物选修一提分教程 专题2 微生物的培养与应用 课题1 第2课时 含答案

第2课时实验操作及实验结果

[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。2.掌握大肠杆菌的纯化方法。3.了解菌种保藏所用的方法。

知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

知识梳理

1.操作步骤

2．倒平板

(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。

(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□02火焰。

(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻盖上□03皿盖。

(4)待平板冷却凝固后，将平板□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。

1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？

提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。

2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

典题分析题型一培养基的制备过程分析

[例1]下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()

A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯

C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板

D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置

解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B 正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。

[答案] A

知识拓展

(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。

(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。

(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。

知识点二纯化大肠杆菌

知识梳理

1.菌落的概念

由一个微生物细胞繁殖而来的肉眼可见的□01子细胞群体，就是菌落。

2．纯化大肠杆菌的原理

在培养基上得到由□01一个细胞繁殖而来的肉眼可见的□02菌落，即获得较纯的菌种。

3．微生物接种常用的方法

(1)平板划线法

①概念：通过接种环在琼脂固体培养基表面□01连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

②操作步骤

③注意事项

a．第一次划线及每次划线之前都需□09灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。第一次划线前灼烧：杀死接种环上□10原有的微生物。每次划线之前灼烧的目的：杀死□11上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。划线结束灼烧的目的：杀死接种环上残存的菌种，避免细

菌污染□12环境和感染□13操作者。

b．灼烧接种环之后，要等其□14冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

c．在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的□15末端开始划

线，这样才能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

d．划线时最后一区域不要与□16第一区域相连。

e．划线用力要大小适当，防止用力过大将□17培养基划破。

(2)稀释涂布平板法

①概念：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到□18琼脂固体培养基的表面，进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的□19菌落。

②操作过程包括□20系列稀释和□21涂布平板。

③操作步骤

A．系列稀释操作步骤：

a．将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。

b．用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移

液管上的橡皮头，吹吸三次，使□22菌液与水充分混匀。

c．从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的混匀操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。

注意：移液管需要经过□23灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2 cm 处。

B．涂布平板操作步骤：

a．涂布器消毒：将□24涂布器浸在盛有□25酒精的烧杯中消毒。

b．取菌液：取少量菌液(不超过0.1 mL)，滴加到培养基表面。

c．涂布器灭菌：将沾有少量酒精的涂布器在□26火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10 s。

d．涂布平板：用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。

④注意事项：a.消毒时将涂布器末端浸在盛有□27体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中□28滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。

b．操作中一定要注意防火！不要将□29过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。

4．接种成功的标准

如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是□01符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则

说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，实验□02失败，需要分析原因，再次接种。

5．菌种的保藏

(1)目的：保持菌种的纯净，降低微生物的新陈代谢速率，延缓菌种衰老。

(2)方法