炭疽杆菌的快速检验方法概要
炭疽实验室检测技术
PCR检测引物的设计
炭疽芽孢杆菌的PCR 检测中引物的设计非常关键。 炭疽芽孢杆菌有两个毒力相关质粒pX01 和pX02。
pX01 分子量为110 MDa (185kb) ，携带cya 、 lef 和pag 基因，分别编码水肿因子( EF) 、致死 因子(L F) 和保护性抗原( PA) ； pX02 分子量为60 MDa(95kb)，携带capABC 和dep 基因，分别编码荚膜与参与其生物合成的 酶。
PCR检测引物序列
pagA F: 5' ATT TGC GGT AAC ACT TCA CT 3' pagA R: 5' AGA CCG TGA CAA TGA TGG AA 3' cap外F：5' CCT GGT TGT TCT TTT CGT TGC 3' cap外R：5' CGG ATT GTA TAT GGA GTG GG 3' cap内F：5' TTT CAC CAG CAC CCA CAT AG 3' cap内R：5' GGG ACA GGA ATG TTT GGA TC 3' rpoB 2F：5' CCA ACA GTA GAA ATG CC 3' rpoB 2R：5' AAT TTC ACC AGT TTC TGG ATC T 3'
一些进化研究学者推论,这几种细菌来源于同一个 祖先,为了适应不同的环境而产生分化,炭疽芽孢 杆菌成为温血动物的病原菌,蕈状芽孢杆菌是环境 中的正常菌,对人和动物没有致病能力;而蜡样芽 孢杆菌和苏云金芽孢杆菌处于以上两种菌之间,蜡 样芽孢杆菌是环境中的常见菌,偶尔也会使温血动 物感染;苏云金芽孢杆菌则成为昆虫的致病菌。
炭疽杆菌快速鉴定
炭疽杆菌的快速鉴定王艺钧10 生物技术3 班0326摘要杆菌( Bacillus anthraci )属于需氧杆菌属，能引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。
炭疽杆菌曾被帝国主义作为致死战剂之一。
平时，牧民、农民、皮毛和屠宰工作者易受感染。
皮肤炭疽在我国各地还有散在发生，不应放松警惕。
我们利用炭疽杆菌的特性，通过微生物学检查，观察炭疽杆菌在含血平板上幼稚菌落待征、溶血和粘性, 再进行高价效噬菌体快速裂解试验、青霉素纸片串珠试验和活性炭NaHC03平板CO2培养物的荚膜肿胀试验, 可在短时间内完成对炭疽杆菌的定性鉴定，而不需要对其深入分子水平的检测。
1．立项依据与研究内容1.1 项目的立项依据炭疽热是一种古老的人兽共患传染病。
炭疽是由炭疽杆菌引起的人兽共患急性、热性、败血性传染病。
其病理变化的特点是脾脏显著肿大，皮下及浆膜下结缔组织出血浸润，血液凝固不良，呈煤焦油样。
人感染后多表现为皮肤炭疽、肺炭疽及肠炭疽，偶有伴发败血症。
人类炭疽病是由于接触病畜的皮毛、吸入带病菌(芽孢型)尘埃，或进食未煮熟的病畜肉类而感染。
该病潜伏期约7 天，但彻底发病多达60 天，早期症状包括咳嗽，但很快会发展为严重的呼吸障碍和痉挛。
由于炭疽病起初的症状类似流感，非常容易被人忽略。
一旦发病，病人在几天内就会死亡。
因此，快速检测出炭疽杆菌和有炭疽杆菌引起的症状的辨别对临床和治疗有着重大的意义。
如今，炭疽杆菌的鉴别技术已近很成熟，如：免疫学检验技术、核酸检验技术、适配子、肽核酸、生物传感器、生物芯片、化学分析技术、核酸测序与指纹图分析技术等等[2] 。
1.2 项目的研究内容炭疽杆菌的特点革兰氏阳性细菌；长而直的大杆菌，菌体两端平直；大小为～ 1. 5um× 3～5um，致病菌中最大的；无鞭毛，不能运动。
在病人、病畜体内多散在或呈2～3个短链排列，有荚膜(红色)。
炭疽杆菌为兼性需氧菌，在12～44℃都能生长，最适生长温度为37℃。
动物炭疽病原学检测采集健康动物部位
动物炭疽病原学检测采集健康动物部位以动物炭疽病原学检测采集健康动物部位为标题，本文将详细介绍动物炭疽病的病原学检测方法以及采集健康动物部位的要点。
动物炭疽病是一种由炭疽菌（Bacillus anthracis）引起的急性传染病，主要感染哺乳动物，包括牛、羊、马等。
该病在全球范围内广泛分布，具有极高的致死率，对兽畜业和人类健康都造成严重威胁。
因此，对动物炭疽病的病原学检测非常重要。
病原学检测是通过采集健康动物的部位样本，进行实验室检测来确认是否存在炭疽菌感染。
常用的检测方法包括细菌培养、PCR（聚合酶链式反应）、免疫学方法等。
在采集健康动物部位样本时，需要注意以下要点：1. 选择适当的部位：采集部位应该选择动物体表或体内病原菌易寄生的部位，如皮肤、毛发、鼻腔、口腔、肠道、淋巴结等。
不同动物种类和病情可能需要不同的采集部位，需要根据具体情况进行判断。
2. 采集样本的方法：采集样本时应注意消毒措施，避免交叉感染。
常用的采集方法包括刷拭法、切片法、穿刺法等。
刷拭法适用于采集体表样本，如皮肤、毛发，可以使用棉签或拭子进行轻柔刷拭；切片法适用于采集组织样本，如淋巴结，需要进行切割取样；穿刺法适用于采集体内液体样本，如血液、胸腹水，需要使用注射器或针头进行穿刺采集。
3. 样本的保存和运输：采集的样本需要妥善保存和运输，避免样本污染或变质。
一般情况下，样本应尽快送达实验室进行检测。
对于无法立即送达实验室的情况，可以使用冷藏或冷冻的方式保存样本，确保病原菌的活性和样本的完整性。
4. 实验室检测方法：病原学检测主要包括细菌培养和分离、PCR检测和免疫学方法。
细菌培养是最常用的检测方法，通过将采集到的样本在特定培养基上进行培养，观察细菌生长情况来确认是否存在炭疽菌感染。
PCR检测是一种高效、敏感的检测方法，可以检测炭疽菌的特定基因序列，用于快速确认炭疽菌的存在。
免疫学方法包括ELISA、免疫荧光等，通过检测动物体内产生的抗体来确定是否感染炭疽菌。
炭疽杆菌基因检测方法研究进展
芽 孢和 细菌 繁殖体 的检测 方法 。现将 炭 疽杆 菌基 因检测技 术 的研 究进 展分 别 进行 介绍 。适合 于针对 环境 中炭疽 病原体 以及感染动物的检测 。
１ 基 因 检 测技 术 １ ． １ Ｐ Ｃ Ｐ ． 技 术 和探 针 技 术
体系 ．通过检测结果表 明．Ｌ Ａ ＭＰ引物
种 简便 、快速 、定量 检测 炭疽 芽孢
新 的 潜 在 炭 疽 疫 源 地 。 当炭 疽 芽 孢 被
杆菌的 Ｐ Ｃ Ｒ方法 ，可特 异且灵 敏地检摄 入动物体 内时会 导致严重的茵血症 ． 进 而会 不 同程 度 的引发炭 疽 疫情 。 因 此 ，及时 有效 的诊 断 ， 以及在 使 用有 效 消毒 药物 对周 围环境进 行 消毒后 对 疫 区土壤 、水 源的污 染状 况进 行调 查
１ ０ ０ ０ ０ 倍 ［ ７ １ 。Ｂ ｅ ｎ Ｈ ａ ｔ ａ ｎ ｏ 等将 Ｌ Ａ Ｍ Ｐ 技
术应 用于 炭疽杆 菌 的检测 ．在 一个反 应体 系 内 （ ２ ５ ｕ １ ）能够 检测 大 约 １ ０ ０ ０ 个拷 贝 。虽然存 在污 染的可 能性 ，但 其极 高 的敏感性 和特 异性显 示 了该项
提供技术依据 。
炭疽杆菌基因检测方法研究进展
关键 词 ：炭 疽杆 菌 ；检 测方 法 ；研 究
进展 ：综述
特 异性 问 。赵婷 婷等建 立 了一种 简便
一 辽宁省 重大动 物疫病 应急 中 心 １ １ ０ １ ６ ｐ 一 析试纸 条方法 ，可 以快 速可视 化检 测
炭疽是 由炭疽 杆菌 （ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ Ａ ｎ ． ｔ ｈ ｒ ａ ｘ ）感 染 引起 的一 种 人 兽 共 患 病 。 由于 炭疽芽 孢和 细菌本 身 的性 质 ．直 炭疽 芽胞杆 菌核 酸 。该 方法是 通 过序 列 比对 挑选 出炭疽 芽胞 杆菌 质粒上 的 特异性基 因 ｐ Ｘ Ｏ ２ ，设计 引物 、探针并 合成 标记 。建立 核 酸恒温扩 增反 应体 系 ，用金 标免疫层 析试 纸条 快 速检测 扩 增产 物 。用 建立 的检测方 法 检测 炭 疽 Ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｅ疫苗株 的灵 敏度为 ６ ￣ １ ０ ３ ｃ ｆ ｕ ／ ｍｌ ，且 与枯 草芽胞 杆 菌 、矮 小 芽胞 杆
炭疽芽胞杆菌的鉴定分析
炭疽芽胞杆菌的鉴定分析发表时间：2016-08-03T14:08:47.933Z 来源：《医药前沿》2016年7月第21期作者：刘丽鑫[导读] 炭疽芽胞杆菌(B.anthracis)俗称炭疽杆菌，是炭疽病的病原菌，为人、畜共患性疾病，常在牧区暴发流行。
刘丽鑫（黑龙江省农垦北安管理局中心医院黑龙江农垦 164000）【摘要】探讨炭疽芽胞杆菌的微生物学检验的方法与鉴定。
炭疽芽胞杆菌是炭疽病的病原菌，炭疽病的病原菌，为人、畜共患性疾病，快速有效的检验和鉴定炭疽牙孢杆菌是最为重要的。
采取直接涂片染色镜检，分离培养与鉴定及药物敏感试验方法进行检查。
快速的病原学诊断在控制疾病流行中有重要意义。
【关键词】炭疽牙胞杆菌；微生物学；检查方法【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）21-0397-02炭疽芽胞杆菌(B.anthracis)俗称炭疽杆菌，是炭疽病的病原菌，为人、畜共患性疾病，常在牧区暴发流行。
由于炭疽杆菌宿主广泛，传播方式多样，芽胞的抵抗力极强，故恐怖分子可利用该菌制造“生物恐怖”危害人类。
炭疽芽胞杆菌是需氧芽胞杆菌属中致病力最强的革兰阳性大杆菌。
引起人与动物炭疽病。
1.炭疽芽胞杆菌的生物学特性1.1 形态与染色本菌为致病性细菌中最大的革兰阳性杆菌。
大小为5～10μm×1～3μm，两端平切，无鞭毛。
新鲜标本直接涂片常单个存在或呈短链。
经培养后则形成长链，呈竹节状排列。
细菌在有氧条件下可形成芽胞，芽胞小于菌体、椭圆形、位于菌体中央。
有毒菌株可有明显的荚膜。
1.2 培养特性本菌为需氧或兼性厌氧，营养要求不高，最适生长温度为30～35℃。
无毒菌株在普通琼脂培养基上形成灰色、扁平、干燥、粗糙型(R)菌落，低倍镜下观察菌落边缘呈卷发状。
在血液琼脂平板上培养12～15h菌落周围不溶血，24h后有轻度溶血[1]。
在肉汤培养基中由于形成长链而呈絮状沉淀生长。
在明胶培养基中37℃培养18～24h，由于细菌沿穿刺线向四周扩散生长，使明胶表面液化成漏斗状。
炭疽病菌丝形态鉴定
炭疽病菌丝形态鉴定炭疽病是一种严重的植物病害，由炭疽病菌引起。
为了有效诊断和治疗该病，必须进行炭疽病菌丝形态鉴定。
本文将介绍炭疽病菌丝形态鉴定的步骤和方法。
一、炭疽病菌丝形态鉴定的步骤1. 提取炭疽病菌菌丝：将炭疽病菌提取，并在无菌条件下培养。
采用高温灭菌法或孢子悬液法可以提取炭疽病菌菌丝。
2. 选取合适的培养基：选取适当的培养基，比如Potato Dextrose Agar（PDA）或Sabouraud Dextrose Agar（SDA），以培养炭疽病菌菌丝。
3. 培养炭疽病菌菌丝：将炭疽病菌菌丝接种到培养基上，放置在恒温恒湿条件下培养一段时间。
4. 观察炭疽病菌菌丝形态：用显微镜观察和比较炭疽病菌目前已知的形态特征和特点，在标准菌株的基础上进行鉴定。
如呈现出纺锤形、直线状等特征，可以通过种子状的沙粒样形态表现，以鉴别炭疽病菌。
5. 结果判定：通过对观察到的炭疽病菌丝形态特征进行比较和鉴别，判定炭疽病菌是否存在。
二、炭疽病菌丝形态鉴定的方法1. 直接显微镜观察法：将炭疽病菌菌丝直接观察，通过比较和鉴别菌丝形态特征确定炭疽病菌是否存在。
2. 颜色法：利用荧光显微镜或黑白胶片观察炭疽病菌菌丝的颜色，根据其颜色确定是否存在炭疽病菌。
3. 免疫学法：使用抗体或其他特定的化学物质，通过染色或荧光标记的方式检测炭疽病菌是否存在。
4. 分子生物学法：利用特定的DNA序列与PCR技术，可以检测炭疽病菌是否存在。
总的来说，炭疽病菌丝形态鉴定是一种非常实用的炭疽病诊断方法。
在真菌分类学和鉴别上有很大的应用价值。
通过炭疽病菌丝形态鉴定，可以有效减轻炭疽病的损害和影响。
炭疽杆菌快速鉴定
炭疽杆菌的快速鉴定王艺钧10生物技术3班 0326摘要杆菌（Bacillus anthraci）属于需氧杆菌属，能引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。
炭疽杆菌曾被帝国主义作为致死战剂之一。
平时，牧民、农民、皮毛和屠宰工作者易受感染。
皮肤炭疽在我国各地还有散在发生，不应放松警惕。
我们利用炭疽杆菌的特性，通过微生物学检查，观察炭疽杆菌在含血平板上幼稚菌落待征、溶血和粘性,再进行高价效噬菌体快速裂解试验、青霉素纸片串珠试验和活性炭NaHC03平板CO2培养物的荚膜肿胀试验,可在短时间内完成对炭疽杆菌的定性鉴定，而不需要对其深入分子水平的检测。
1．立项依据与研究内容1.1项目的立项依据炭疽热是一种古老的人兽共患传染病。
炭疽是由炭疽杆菌引起的人兽共患急性、热性、败血性传染病。
其病理变化的特点是脾脏显著肿大，皮下及浆膜下结缔组织出血浸润，血液凝固不良，呈煤焦油样。
人感染后多表现为皮肤炭疽、肺炭疽及肠炭疽，偶有伴发败血症。
人类炭疽病是由于接触病畜的皮毛、吸入带病菌（芽孢型）尘埃，或进食未煮熟的病畜肉类而感染。
该病潜伏期约7天，但彻底发病多达60天，早期症状包括咳嗽，但很快会发展为严重的呼吸障碍和痉挛。
由于炭疽病起初的症状类似流感，非常容易被人忽略。
一旦发病，病人在几天内就会死亡。
因此，快速检测出炭疽杆菌和有炭疽杆菌引起的症状的辨别对临床和治疗有着重大的意义。
如今，炭疽杆菌的鉴别技术已近很成熟，如：免疫学检验技术、核酸检验技术、适配子、肽核酸、生物传感器、生物芯片、化学分析技术、核酸测序与指纹图分析技术等等[2]。
1.2项目的研究内容炭疽杆菌的特点革兰氏阳性细菌；长而直的大杆菌，菌体两端平直；大小为～1. 5um×3～5um，致病菌中最大的；无鞭毛，不能运动。
在病人、病畜体内多散在或呈2～3个短链排列，有荚膜（红色）。
炭疽杆菌为兼性需氧菌，在12～44℃都能生长，最适生长温度为37℃。
最适pH为～。
在活炭疽病畜体或死亡后未经解剖的尸体内，不形成芽胞。
简述炭疽的诊断要点
简述炭疽的诊断要点
炭疽是一种由炭疽杆菌引起的急性传染病，主要表现为皮肤炭疽、肠炭疽和肺炭疽等。
本文将从流行病学史、临床表现、实验室检查、病理学检查和鉴别诊断五个方面，对炭疽的诊断要点进行简述。
一、流行病学史
1. 接触史：患者近期是否与患有炭疽的动物或人有过接触或在疫情暴发区域生活或旅行过。
2. 职业史：患者是否从事与动物或动物制品相关的工作，如屠宰、皮毛加工等。
3. 疫情调查史：是否在疫情暴发期间与疫区有过接触或在疫情暴发区域生活或旅行过。
二、临床表现
1. 皮肤炭疽：病变多见于面部、颈部、手部等裸露部位，表现为水疱、溃疡、黑痂形成等。
2. 肠炭疽：表现为发热、呕吐、腹痛、腹泻等消化道症状。
3. 肺炭疽：表现为发热、咳嗽、呼吸困难等呼吸道症状，严重者可并发败血症。
三、实验室检查
1. 显微镜检查：对未破溃的皮肤病灶渗出物、溃疡底部组织、痰液等进行显微镜检查，观察有无炭疽杆菌。
2. 培养分离：将上述标本接种于适宜的培养基进行细菌培养，观察有无炭疽杆菌生长。
3. 血清学检测：检测患者血清中的炭疽杆菌抗体，有助于明确诊断。
四、病理学检查
对疑似病变组织进行病理学检查，观察组织中是否存在炭疽杆菌以及病变特点。
五、鉴别诊断
1. 皮肤炭疽应与痈、蜂窝织炎等皮肤感染相鉴别。
2. 肠炭疽应与急性胃肠炎、细菌性痢疾等消化道疾病相鉴别。
3. 肺炭疽应与肺炎、支气管炎等呼吸道疾病相鉴别。
综上所述，对于炭疽的诊断，需要从流行病学史、临床表现、实验室检查和病理学检查等多个方面进行综合分析，以明确诊断并采取及时有效的治疗措施。
炭疽实验室检测技术-杨发莲
分钟，弃去大部分上清液，留少量液体与沉淀物混匀， 沸水浴加热15分钟后，取适量涂布平板。 2.细菌分离培养：将上述处理过的标本冷却后， 用移液器吸取0.1ml左右于固体培养基上，用接种环涂 布均匀，在37℃孵育12-24h后，检查是否长出可疑的 炭疽芽胞杆菌菌落。 3.挑选可疑菌落：上述平板在37℃孵育12-24小时 后，检查是否长出可疑的炭疽芽胞杆菌菌落。炭疽芽 胞杆菌菌落的形态为：灰白色、不透明、中等大小， 常不规则，表面呈毛玻璃样。如图2示。
2.注意事项：ELISA实验的结果受操作影响 很大，每个步骤包括加样、温育、洗涤、显色、 酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA 的高灵敏、强特异的优点。因此，应建立实验 项目的标准操作程序(SOP)。报告方式以定量 分析结果的滴度单位表示；检测时应以接种疫 苗前或初报告病例地方的人或动物的血清作为 阴性血清，如有可能也可设阳性血清对照。阴 性血清每次都要和待测标本同时做。
cap内
1002
rpoB普2 F: CCAACAGTAGAAATGCC R:AATTTCACCAGTTTCTGGATCT
rpoB基因－染色体 197
（2）反应体系：在PCR管内依次加入以下成分，
反应体系总共25ul，
10×反应缓冲液 4×dNTP混合物（每种2.5mM） 引物（上游） 引物（下游） 待测模板 Taq DNA 聚合酶 无菌去离子水 使用2×mix的反应体系： 25µl 2×mix 12.5µl 引物（上游） 1µl 引物（下游） 1µl 待测模板 1µl 无菌去离子水 9.5µl 2.5µl 2µl 1µl 1µl 1µl 0.5µl（2-3U） 17µl
炭疽杆菌的快速鉴定
炭疽杆菌的快速鉴定王艺钧10生物技术3班 201030700326摘要炭疽杆菌（Bacillus anthraci）属于需氧芽胞杆菌属，能引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。
炭疽杆菌曾被帝国主义作为致死战剂之一。
平时，牧民、农民、皮毛和屠宰工作者易受感染。
皮肤炭疽在我国各地还有散在发生，不应放松警惕。
我们利用炭疽杆菌的特性，通过微生物学检查，观察炭疽杆菌在含血平板上幼稚菌落待征、溶血和粘性,再进行高价效噬菌体快速裂解试验、青霉素纸片串珠试验和活性炭NaHC03平板CO2培养物的荚膜肿胀试验,可在短时间内完成对炭疽杆菌的定性鉴定，而不需要对其深入分子水平的检测。
1．立项依据与研究内容1.1项目的立项依据炭疽热是一种古老的人兽共患传染病。
炭疽是由炭疽杆菌引起的人兽共患急性、热性、败血性传染病。
其病理变化的特点是脾脏显著肿大，皮下及浆膜下结缔组织出血浸润，血液凝固不良，呈煤焦油样。
人感染后多表现为皮肤炭疽、肺炭疽及肠炭疽，偶有伴发败血症。
人类炭疽病是由于接触病畜的皮毛、吸入带病菌（芽孢型）尘埃，或进食未煮熟的病畜肉类而感染。
该病潜伏期约7天，但彻底发病多达60天，早期症状包括咳嗽，但很快会发展为严重的呼吸障碍和痉挛。
由于炭疽病起初的症状类似流感，非常容易被人忽略。
一旦发病，病人在几天内就会死亡。
因此，快速检测出炭疽杆菌和有炭疽杆菌引起的症状的辨别对临床和治疗有着重大的意义。
如今，炭疽杆菌的鉴别技术已近很成熟，如：免疫学检验技术、核酸检验技术、适配子、肽核酸、生物传感器、生物芯片、化学分析技术、核酸测序与指纹图分析技术等等[2]。
1.2项目的研究内容1.2.1炭疽杆菌的特点革兰氏阳性细菌；长而直的大杆菌，菌体两端平直；大小为1.0～1. 5um×3～5um，致病菌中最大的；无鞭毛，不能运动。
在病人、病畜体内多散在或呈2～3个短链排列，有荚膜（红色）。
炭疽杆菌为兼性需氧菌，在12～44℃都能生长，最适生长温度为37℃。
炭疽实验室检测技术
检测方法的比较和选择
培养法虽然特异性较高，但耗时较长，不能满足快速诊断的需求；免疫学方法具 有较高的灵敏度，但可能出现交叉反应；分子生物学方法和生物传感器技术具有 高特异性和高灵敏度，适用于早期诊断和快速检测。
根据检测需求选择合适的检测方法，如需快速诊断可选择现代检测方法，对于大 量样本筛查可选择传统检测方法。
炭疽实验室检测技术
目录ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 引言 • 炭疽检测技术概述 • 实验室检测流程 • 实验室检测技术的挑战与展望 • 案例分析
01
引言
目的和背景
炭疽是一种由炭疽芽孢杆菌引起的动 物传染病，主要通过接触病畜或染菌 物品传播。
实验室检测技术是炭疽防治的重要手 段，旨在快速、准确地检测炭疽病原 体，为及时诊断、隔离和治疗提供依 据。
免疫学方法
利用抗原-抗体反应原理，通过检 测样品中的炭疽毒素或抗原，如 ELISA、免疫荧光等方法，具有较 高的灵敏度。
现代检测方法
分子生物学方法
基于DNA或RNA的检测技术，如 PCR、基因测序等，具有高特异性和 高灵敏度，能够快速准确地检测炭疽 病原体。
生物传感器技术
利用生物传感器将生物分子识别与信 号转换相结合，实现对炭疽病原体的 快速、实时监测。
实验室检测步骤
抗原检测
利用免疫学方法检测样本中是否存在 炭疽毒素或其组分，如酶联免疫吸附 试验（ELISA）、免疫荧光技术等。
核酸检测
细菌分离培养
将样本接种于选择性培养基上，在适 当的温度和环境下培养，观察是否有 炭疽杆菌的生长。
通过聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增炭疽相关基因片段，进行基因诊断。
技术突破
某研究机构开发出新型炭 疽检测技术，提高了灵敏 度和特异性。
MM FS CNJ 出口畜产品中炭疽杆菌检验方法
MM_FS_CNJ_0347出口畜产品炭疽杆菌MM_FS_CNJ_0347出口畜产品中炭疽杆菌检验方法1.适用范围本方法适用于出口鬃、毛、绒、野生动物毛皮、生骨粒及其他畜产品中炭疽杆菌的检验。
2.主要试剂和仪器2.1.主要试剂（包括培养基）溶菌酶多粘菌素琼脂：见A1；戊烷脒多粘菌素琼脂：见A2；营养肉汤：见A3；营养琼脂：见A4；洗样液：见A5；生理盐水：见A6；缓冲生理盐水：见A7；固定液：见A8；炭疽杆菌噬菌体：见A9；革兰氏染色液：见A10；大豆凝集素稀释液：见A11。
2.2.仪器离心机：带容量在500mL以上的离心管；恒温培养箱：36±1℃；恒温水浴：30～65℃；生物学显微镜；三角烧瓶：容量250mL、500mL和1000mL，带胶塞；平皿：直径90mm，或100mm；试管：10mm×120mm和20mm×140mm；吸管：1mL和10mL，带0.01mL和0.1mL刻度；L形玻璃棒；注射器：1mL带5号针头；棉拭子：长180mm的竹签或铁丝，一端裹20～30mm长的棉球，用水浸湿，另一端裹在试管的棉塞内，插入试管高压灭菌；棉布袋：70mm×130mm，带缩口绳；养鼠罐。
3.抽样3.1.鬃、毛、绒、生骨粒3.1.1.抽样数量按生产日期或原料来源划分批次。
每批按30％开包（箱）抽样或在扎包（装箱）时由每包（箱）各取一份样品。
3.1.2.抽样方法用火焰灭菌的镊子或戴经消毒的乳胶手套从每包（箱）的不同部位共抽样3～5g，装入灭菌棉布袋内，将袋口扎紧，作上批次标记。
3.1.3.送样.将样品装入塑料袋或铁桶内，密封后送样。
3.2.动物毛皮3.2.1.抽样比例.逐张取样。
3.2.2.抽样方法.用灭菌棉拭子涂擦样皮的真皮面。
将棉拭子插入试管，塞紧棉塞。
3.2.3.送样.将试管逐支用纸包裹，装入铁桶内，再用棉花或软纸填充空隙，密封后送样。
4.样品处理4.1.鬃、毛、绒、生骨粒4.1.1.根据样品多少将适当数量的同批样品（最多不超过10份）合编为一个检验样品单位，作好记录。
实时荧光定量PCR法检测炭疽杆菌_陈苏红
实时荧光定量PC R法检测炭疽杆菌100850 北京 军事医学科学院放射医学研究所 陈苏红 张敏丽 牟 航 管 伟 李 鲁 王升启 摘 要 为建立一种简便而特异的炭疽杆菌检测方法用作临床诊断工具,以pXO1质粒上的pag基因及pXO2质粒上的cap基因为靶合成特异引物,用DNA嵌入荧光染料SYBR Green I进行定量PCR扩增,在PCR后进行熔解曲线分析以确定得到的产物是否为目的产物。
定量PCR条件优化结果为:引物浓度0.8μmol/L、Mg2+5.0mmol/L。
该法检测炭疽的灵敏度达103拷贝,并能区分炭疽杆菌与其他蜡样杆菌。
表明实时荧光定量PCR技术能够快速准确、特异地对炭疽进行定量分析。
关键词 炭疽杆菌;聚合酶链反应,定量;实时检测中国图书资料分类号 R378.72Q UA NTIT A T IV E D ETEC TI ON OF BACILLU S ANTHRACIS BY S YB R GR EEN I REA L-TIM E P OLY ME RA SE C HA IN R EAC TIONChen Suhong,Zhang Minli,Mou Hang et al.Institute of Radiation Medic ine,Academy of Military Medic al Sc ienc es, Beijing100850,ChinaA bstract Anthrax is a fatal infectious disease of human and l ivestock and is caus ed by Bacillus anthracis.To establish a simple and sp ecific as-say for the clinical d iagnos is of B.Anthracis infection,two oligonucleotide primers s pecific for the cap region of plasmid pXO2and two specific for the pag region of p lasmid pXO1were des igned and synthesised for polymeras e chain reaction(PCR).T he fluorescence d ye SYBR G reen I incorporated in-to the double strands was used to q uantitate,and the s pecificity of PCR product was confirmed by the melting curve.The results showed that 0.8μmol/L primers and3.0mmol/L M g2+were optimal for this quantitative PCR as say.The sensitivity of this assay was103copies per millitier B. anthra cis could be specifical ly distinguished from other B.c ereus group of bacteria.with this as say.SYBR Green I real-time PCR appeared to be a rapid,accurate and specific methad for quantitative analysis of B.anthra cis. Key words Bacillu s anthracis;pol ymerase chain reaction,q uantitative;real-time detection 炭疽杆菌是炭疽的病原体,可引起人类的皮肤感染、肺感染及败血症[1,2]。
炭疽杆菌快速检测试剂盒(胶体金法)
炭疽杆菌快速检测试剂（胶体金法）炭疽杆菌概述：炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）简称炭疽杆菌，炭疽病是由此菌引起一种人畜共患的急性传染病。
人因吸入带大量炭疽芽胞的尘埃或皮肤直接触带有炭疽杆菌的病畜和食用病畜的肉类而发生感染。
炭疽病最常见的是皮肤炭疽，其次是肺炭疽、肠炭疽、脑膜型炭疽和败血型炭疽。
其临床症状一般表现为发病1～2日后出现发热、头痛、局部淋巴结肿大及脾肿大，严重者会引起很多致命性的并发症，若不及时诊断与抢救，病人常在急性症状出现后24～48小时内死亡。
因此，对炭疽杆菌快速诊断极端重要！产品简介：炭疽杆菌快速检测试剂盒用于检测感染炭疽杆菌后的人或哺乳动物血清中出现的抗炭疽杆菌荚膜抗体，而免疫接种所用的炭疽菌苗不带有荚膜，因此检测血清中抗炭疽杆菌荚膜抗体可用于炭疽感染的诊断。
检测原理：本试剂将炭疽杆菌荚膜抗原包被在硝酸纤维素膜上，用于捕捉标本中的炭疽杆菌荚膜抗体，用标记了SPA（金黄色葡萄球菌蛋白A）的免疫胶体金探针进行检测，可用于人或动物炭疽杆菌感染检测。
有明显接触病死牲畜史、或有加工皮毛职业史、或有使用新添置的皮毛制品史并疑是炭疽的患者，可用本试剂检测。
疑是炭疽杆菌感染的哺乳动物，也可用本试剂检测。
试剂盒组成：1、炭疽杆菌快速检测板2、样本稀释液3、说明书4、干燥剂包装规格：10T/盒，单人份独立包装。
储存条件：原包装试剂盒于4-25℃避光保存，不得冻存。
有效日期：24个月生产企业：广州市标健生物科技有限公司检测方法：1、待检人或动物血清标本20μl，加生理盐水400μl（即按1:20稀释），作为检测液备用。
2、撕开外包装，吸取样品检测液，滴加3~4滴于试剂圆孔中，5分钟后开始观察结果，15分钟终止观察。
结果判读：阳性结果：试剂显示窗口“C”（对照）和“T”（检测）处出现2条红色沉淀线为阳性，即有炭疽菌感染。
阴性结果：试剂显示窗口“C”处出现1条红色沉淀线为阴性，即无炭疽菌感染。
炭疽杆菌串珠试验方法
炭疽杆菌串珠试验方法
嘿，你知道炭疽杆菌串珠试验方法吗？这可是个超级重要的检测手段呢！
那咱就来说说这个炭疽杆菌串珠试验方法的具体步骤和要注意的事儿吧。
首先得准备好新鲜的炭疽杆菌肉汤培养物，然后取一环培养物均匀地涂在载玻片上，就跟涂颜料似的，但可别涂得乱七八糟哦！接着让涂片自然干燥，再用甲醇固定一下。
接下来就该染色啦，用石炭酸复红染色液染色几分钟，之后用水冲洗干净。
再用吕氏美蓝液复染个半分钟左右，洗干净后晾干或者用滤纸吸干水分。
在操作过程中可千万要小心仔细，别把涂片弄破啦，也别让试剂污染了其他地方。
要说这个过程的安全性和稳定性，那可是有保障的呀！只要严格按照操作流程来，一般不会出啥问题。
当然啦，做实验的时候还是得打起十二分精神，毕竟这可关系到检测结果的准确性呢。
炭疽杆菌串珠试验方法的应用场景那可多了去啦！它在医学、生物学等领域都有着重要的作用呢。
它的优势就在于能够快速、准确地检测出炭疽杆菌，这就像是侦探在寻找线索一样，一下子就能找到关键所在！而且这个方法相对来说比较简单，容易操作，不需要太复杂的设备和技术。
我给你讲个实际案例吧，之前有个地方发生了一起疑似炭疽杆菌感染的事件，就是通过炭疽杆菌串珠试验方法很快确定了是不是炭疽杆菌。
结果一出来，就能迅速采取相应的措施，避免了更大范围的传播，你说厉害不厉害？
所以呀，炭疽杆菌串珠试验方法真的是非常重要且实用的呀！它就像是我们的秘密武器，能帮我们快速准确地找到那些隐藏的“敌人”，为我们的健康和安全保驾护航！。
炭疽实验室诊断操作方法
炭疽实验室诊断操作方法
炭疽是一种高度感染性的病原菌，需要在实验室进行诊断。
以下是炭疽实验室诊断的操作方法：
1. 预处理样本：将疑似感染的样本进行预处理，可以使用一些方法，如离心、过滤或胶凝体沉淀。
2. 培养炭疽菌：将处理后的样本接种在培养基上进行培养，最常用的是土芽孢培养基或牛血琼脂糖培养基。
3. 观察菌落：在培养的过程中观察菌落形态和颜色，显微镜下观察菌落形态。
4. 鉴定菌株：进行鉴定菌株的操作，可以使用荧光抗体和PCR等方法进行鉴定。
5. 确认炭疽：进行鉴定后，需要进行进一步的确认，可以使用如生化试验、血清学试验等方法进行判断，确认炭疽的存在。
总之，在实验室诊断炭疽病时需要进行多方面的检测和确认，通过这些步骤可以确保炭疽的诊断准确性。
此外，炭疽病的诊断和防治治疗都需要严格按照规范操作。
快速检测炭疽杆菌的实时荧光定量PCR方法的建立及评价
快速检测炭疽杆菌的实时荧光定量PCR方法的建立及评价杜清春;董珊珊;丁奕博;张艳;李伟;王鹏【摘要】为建立一种能快速鉴定炭疽杆菌的检测技术,本研究根据炭疽杆菌染色体上的TJHP和BA53452个靶点,分别设计4对引物和2个探针,对10份已知浓度的炭疽杆菌DNA和阴性对照菌株DNA进行检测,将浓度最大的炭疽杆菌DNA进行10倍倍比稀释,用于检测4对引物及其探针的灵敏度,并选出2个针对TJHP和BA5345靶点的特异性强及灵敏度高的引物和探针进行重复性实验.结果显示,4对引物及其探针特异性较强,FP2/RP2和FP4/RP42对引物的灵敏度为4.513×10-5 ng/μL;该荧光定量PCR方法重复性好(t=1.178,P=0.332).FP2/RP2和FP4/RP42对引物及其探针可用于炭疽杆菌感染初期的快速筛查以及临床辅助诊断.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2019(027)004【总页数】7页(P43-49)【关键词】炭疽杆菌;实时荧光定量PCR;TJHP;BA5345【作者】杜清春;董珊珊;丁奕博;张艳;李伟;王鹏【作者单位】大理大学公共卫生学院,大理 671000;云南省地方病防治所云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室,大理 671000;云南省地方病防治所云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室,大理 671000;大理大学公共卫生学院,大理671000;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京 102206;云南省地方病防治所云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室,大理 671000【正文语种】中文【中图分类】S852.616炭疽是由炭疽杆菌（Bacillus anthracis，B.anthracis）感染而引起的自然疫源性和人兽共患传染病，炭疽杆菌为革兰阳性杆菌[1-2]。
在空气中容易形成芽孢[2-3]，即使在恶劣的环境中依然可以存活数十年甚至更久[4-6]，在条件适宜时重新萌发生长，因此常被用作生物战剂[1-2]。
PCR方法快速检测炭疽芽孢杆菌
PCR方法快速检测炭疽芽孢杆菌
魏建春;海荣;张志凯;俞东征
【期刊名称】《中国媒介生物学及控制杂志》
【年(卷),期】2002(13)2
【摘要】目的 :快速检测炭疽芽孢杆菌。
方法 :质粒提取及PCR扩增。
结果 :用两对引物扩增 ,阳性样本可分别扩出两条 877bp和 10 89bp左右的条带 ,阴性样本未扩增出。
结论 :所采用的方法可快速检测出环境中的炭疽芽孢杆菌 ,并可对其致病性进行评价。
【总页数】2页(P105-106)
【关键词】PCR方法;快速检测;炭疽芽孢杆菌;聚合酶链式反应
【作者】魏建春;海荣;张志凯;俞东征
【作者单位】中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所鼠疫室
【正文语种】中文
【中图分类】R378.72;R446.5
【相关文献】
1.荧光定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究 [J], 张玲;翟俊辉;周冬生;郭兆彪;王津;杨瑞馥
2.定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究 [J], 曲识;史清海;何宁;陈永胜;周蕾;郭兆彪;周冬生;翟俊辉;杨瑞馥
3.现场PCR诊断箱POCKIT试剂联合应用技术快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究
[J], 尹世辉;唐磊;孙建飞;代伟萍;袁爽;邢智锋;李杉杉
4.现场PCR诊断箱POCKIT试剂联合应用技术快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究[J], 尹世辉;唐磊;孙建飞;代伟萍;袁爽;邢智锋;李杉杉
5.巢式PCR快速检测炭疽芽孢杆菌 [J], 俞慕华;段永翔;黄锐敏;温群文;陈辉;陈昭斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
炭疽杆菌监测方案
炭疽杆菌监测方案1. 简介炭疽病是一种常见的植物病害，由炭疽菌引起。
这种病害主要影响豆类、蔬菜、水果和谷物作物，给农业生产带来了严重的损失。
为了及时发现和有效控制炭疽病的流行，制定一个可行的炭疽杆菌监测方案至关重要。
本文档将介绍一个基于标准化检测方法的炭疽杆菌监测方案，以帮助农作物种植者和相关专业人士提前发现炭疽病的风险，采取相应的防治措施。
2. 监测设备和工具准备在进行炭疽杆菌监测之前，需要准备以下设备和工具：•收集袋：用于采集植物样本的袋子，保证收集样本的卫生和完整性；•剪刀：用于采集植物样本的剪刀，保证样本不受损；•清洁的工具：用于清洁剪刀和其他可能接触到植物样本的工具，防止样本的污染和交叉感染；•样本标签：用于标记采集的植物样本，方便后续的标本处理和数据整理。
3. 采样方法采集植物样本是炭疽杆菌监测的第一步，需要遵循以下步骤：1.选择有疑似炭疽病症状的植株进行采样。
2.使用清洁的剪刀，剪下植物受影响的部位，包括叶片、果实或茎部等。
3.将采集的植物样本放入收集袋中，确保袋子密封，并尽量避免植物样本的受损。
4.在样本标签上记录下采样日期、采样地点以及植物种类等相关信息。
4. 样本处理和处理方法采集到植物样本后，需要进行样本处理，以分离和纯化炭疽杆菌。
以下是样本处理的基本方法：1.将采集到的植物样本转移到实验室，确保实验室环境整洁。
2.使用清洁的剪刀和外科刀，将植物样本切割成小块。
3.将植物样本块放入含有适当营养培养基的培养皿中。
4.将培养皿密封，放置在适当的温度和湿度条件下孵育。
5.观察培养皿中是否出现炭疽杆菌的生长。
炭疽杆菌的生长可通过显微镜观察到典型的菌丝和孢子形态。
6.将炭疽杆菌分离出来，进行纯化和鉴定。
5. 数据记录和分析在进行炭疽杆菌监测时，需要记录相关数据，并进行分析以评估疾病的风险和传播情况。
以下是常见的数据记录和分析方法：1.记录采样日期、采样地点和植物种类等基本信息。
2.统计每个采样点的植物样本中炭疽杆菌的阳性率。
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炭疽杆菌的快速检验方法
核心提示：本标准适用于进行动物皮张、原毛炭疽杆菌的检验。
1设备和材料1.1天平。
1.2温箱36℃±1℃。
1.3震荡器。
1.4显微镜。
1.5灭菌三角烧瓶。
1.6离心机。
1.7离心管1.8平皿。
1.9接种棒、镍铬丝...
本标准适用于进行动物皮张、原毛炭疽杆菌的检验。
1设备和材料
1.1天平。
1.2温箱36℃±1℃。
1.3震荡器。
1.4显微镜。
1.5灭菌三角烧瓶。
1.6离心机。
1.7离心管
1.8平皿。
1.9接种棒、镍铬丝。
1.10L-型玻棒。
2培养基和试剂
2.1 5%绵羊血琼脂平板培养基。
2.2营养琼脂平板培养基。
2.3活性炭NaHCO
琼脂平板培养基。
3
溶液(现用现配为宜)。
2.3.1 7%NaCO
3
2.3.2 10%活性炭末悬液,炭末越细越好,配好后0.105Mpa(121℃)灭菌
20min备用。
临用前隔水煮沸数分钟。
2.3.3取172ml普通营养琼脂培养基,稍冷后加入10%活性炭末悬液(摇
溶液20ml,最终浓度为0.7%,混匀倾注匀)8ml,最终浓度为0.4%再加入7%NaCO
3
平板。
3操作步骤
3.1样品的处理
先将皮毛剪碎,称取3g左右放入灭菌三角瓶中,加入适量的0.5%洗涤液以充分浸泡为宜(用5%漂白粉溶液洗涤也可),人工或机械振荡10-15min后静止10min,取悬液10ml加入离心管中,2000rpm离心10min,弃上液,再加入3-5ml灭菌蒸馏水,于65℃水浴30min。
3.2分离培养
取水浴后混悬液0.05ml接种于血平板中,用L型玻棒涂匀(L型玻棒需酒精火焰灭菌),37℃培养18-24h。
3.3签定
3.3.1菌落特征
典型菌落:菌落呈扁平,不透明,表面干燥,粗糙,有微细结构,边缘不整齐,似狮子头状(卷发状),常带有逗号状小尾突起的粗糙型(R)较大菌落,菌落直径为
2-3mm,呈灰白色,在血平板上溶血。
拉丝现象:用接种针挑起幼龄菌落时,有粘性呈“拉丝状”而其他需氧芽胞杆菌少见。
3.3.2细菌形态
炭疽杆菌为革兰氏染色阳性,呈链状或散在的大杆菌,在液体培养基中形成10-20个菌体相连的长链,呈竹节状,散在的菌体两端呈直截状似砖头,若在培养基中时间较长,有时也能形成芽胞。
3.3.3噬菌体裂解试验
挑取可疑菌落的三分之一,点种在普通琼脂平板上,用灭菌的L型玻棒涂匀,用铂金耳挑取一满环炭疽W噬菌体点种在中间,37℃培养3-5h,观察结果,以出现清亮噬菌体斑为裂解阳性。
3.3.4串珠试验
挑取可疑菌落的三分之一,按上述方法将细菌均匀涂布,用灭菌的眼科镊子夹取一片青霉素干纸片轻压在涂布区域中心,37℃培养1.5-3h,观察菌体变圆呈念珠状为阳性。
3.3.5荚膜肿胀试验
用上述菌落的三分之一接种于活性炭NaHCO
3琼脂平板上,放在CO
2
培养袋或
CO
2培养箱(CO
2
浓度为20%-40%)中,37℃培养5h,取少许培养物涂片做荚膜染色,
镜下观察菌体,菌体周围有边界清晰的荚膜者为阳性。
4结果判定具有典型菌落和菌体特征，且炭疽W噬菌体裂解试验、串珠试验均为阳性的芽胞杆菌为炭疽杆菌，在此基础上荚膜肿胀试验为阳性的细菌，为溶毒炭疽杆菌。
附A:芽胞杆菌属生化特性鉴定表
(Lonneite,临床微尘物手册,1986)。