炭疽杆菌的快速检验方法概要

炭疽杆菌的快速检验方法

核心提示：本标准适用于进行动物皮张、原毛炭疽杆菌的检验。1设备和材料1.1天平。1.2温箱36℃±1℃。1.3震荡器。1.4显微镜。1.5灭菌三角烧瓶。1.6离心机。1.7离心管1.8平皿。1.9接种棒、镍铬丝...

本标准适用于进行动物皮张、原毛炭疽杆菌的检验。

1设备和材料

1.1天平。

1.2温箱36℃±1℃。

1.3震荡器。

1.4显微镜。

1.5灭菌三角烧瓶。

1.6离心机。

1.7离心管

1.8平皿。

1.9接种棒、镍铬丝。

1.10L-型玻棒。

2培养基和试剂

2.1 5%绵羊血琼脂平板培养基。

2.2营养琼脂平板培养基。

2.3活性炭NaHCO

琼脂平板培养基。

3

溶液(现用现配为宜)。

2.3.1 7%NaCO

3

2.3.2 10%活性炭末悬液,炭末越细越好,配好后0.105Mpa(121℃)灭菌

20min备用。临用前隔水煮沸数分钟。

2.3.3取172ml普通营养琼脂培养基,稍冷后加入10%活性炭末悬液(摇

溶液20ml,最终浓度为0.7%,混匀倾注匀)8ml,最终浓度为0.4%再加入7%NaCO

3

平板。

3操作步骤

3.1样品的处理

先将皮毛剪碎,称取3g左右放入灭菌三角瓶中,加入适量的0.5%洗涤液以充分浸泡为宜(用5%漂白粉溶液洗涤也可),人工或机械振荡10-15min后静止10min,取悬液10ml加入离心管中,2000rpm离心10min,弃上液,再加入3-5ml灭菌蒸馏水,于65℃水浴30min。

3.2分离培养

取水浴后混悬液0.05ml接种于血平板中,用L型玻棒涂匀(L型玻棒需酒精火焰灭菌),37℃培养18-24h。

3.3签定

3.3.1菌落特征

典型菌落:菌落呈扁平,不透明,表面干燥,粗糙,有微细结构,边缘不整齐,似狮子头状(卷发状),常带有逗号状小尾突起的粗糙型(R)较大菌落,菌落直径为

2-3mm,呈灰白色,在血平板上溶血。

拉丝现象:用接种针挑起幼龄菌落时,有粘性呈“拉丝状”而其他需氧芽胞杆菌少见。

3.3.2细菌形态

炭疽杆菌为革兰氏染色阳性,呈链状或散在的大杆菌,在液体培养基中形成10-20个菌体相连的长链,呈竹节状,散在的菌体两端呈直截状似砖头,若在培养基中时间较长,有时也能形成芽胞。

3.3.3噬菌体裂解试验

挑取可疑菌落的三分之一,点种在普通琼脂平板上,用灭菌的L型玻棒涂匀,用铂金耳挑取一满环炭疽W噬菌体点种在中间,37℃培养3-5h,观察结果,以出现清亮噬菌体斑为裂解阳性。

3.3.4串珠试验

挑取可疑菌落的三分之一,按上述方法将细菌均匀涂布,用灭菌的眼科镊子夹取一片青霉素干纸片轻压在涂布区域中心,37℃培养1.5-3h,观察菌体变圆呈念珠状为阳性。

3.3.5荚膜肿胀试验

用上述菌落的三分之一接种于活性炭NaHCO

3琼脂平板上,放在CO

2

培养袋或

CO

2培养箱(CO

2

浓度为20%-40%)中,37℃培养5h,取少许培养物涂片做荚膜染色,

镜下观察菌体,菌体周围有边界清晰的荚膜者为阳性。

4结果判定具有典型菌落和菌体特征，且炭疽W噬菌体裂解试验、串珠试验均为阳性的芽胞杆菌为炭疽杆菌，在此基础上荚膜肿胀试验为阳性的细菌，为溶毒炭疽杆菌。

附A:芽胞杆菌属生化特性鉴定表

(Lonneite,临床微尘物手册,1986)