肿瘤标志物检测原理
病患血液中肿瘤标志物的检测方法
病患血液中肿瘤标志物的检测方法引言：随着肿瘤发病率的增加，早期诊断和有效治疗成为了关键。
血液中肿瘤标志物的检测方法因其便捷和非侵入性而受到广泛应用。
本文将介绍常见的肿瘤标志物检测方法，并对其优劣进行评估，以提供医学界和患者更多有关该领域的知识。
一、免疫法免疫法是目前最常用的肿瘤标志物检测方法之一。
主要原理是使用特异性抗体与肿瘤标志物结合，通过染色、放射性同位素等手段来检测。
这种方法具有灵敏度高、专一性好等优点。
1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种常见且经典的免疫学实验技术，用于定量或半定量检测肿瘤标志物。
该方法基于酶与抗原或抗体结合后产生可量化信号这个原理，具有高灵敏度和良好的线性范围。
2. 免疫荧光法免疫荧光法是通过标记荧光物质（如荧光素、硫醇染料等）的抗体与肿瘤标志物结合，然后利用激发和发射的特定波长来检测。
该方法具有高灵敏度、快速反应和低成本等优势。
二、质谱法质谱法是近年来发展起来的一种高分辨率分析技术，可用于检测肿瘤标志物。
质谱法将样品中的分子进行离子化并加以加速、分离和检测，其主要特点是快速性和高准确性。
1. 质谱-时间飞行仪（TOF-MS）TOF-MS是一种常见的质谱技术，能够快速获取样品中各种分子的离子质量信号，并通过信号强度图来识别肿瘤标志物。
TOF-MS具有极高的灵敏度和高通量的优点。
2. 液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）LC-MS/MS结合了液相色谱技术和串联质谱技术，能够实现对复杂混合样品中多个标志物的快速、准确检测。
该方法具有高灵敏度、较强的特异性和广泛的应用范围。
三、电化学法电化学法是一种基于电极反应和电信号进行分析的方法，被广泛用于肿瘤标志物检测。
这种方法具有质量小、成本低、响应时间快等优点。
1. 电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）ICP-MS是一种能够同时检测多种元素的高分辨率质谱技术，主要利用样品中元素的质荷比来识别目标物质，并通过计算结果来定量。
肿瘤标志物检测原理与方法
肿瘤标志物检测原理与方法肿瘤标志物可以按其来源分为肿瘤细胞标志物和非肿瘤细胞标志物。
肿瘤细胞标志物是指只在肿瘤细胞中表达的标志物，如癌胚抗原（CEA）、糖类抗原（CA125）、前列腺特异性抗原（PSA）等。
非肿瘤细胞标志物是指在正常细胞中也存在，但在肿瘤细胞中表达量增加的标志物，如铁蛋白、转铁蛋白、胰岛素样生长因子（IGF）等。
肿瘤标志物还可以按其化学性质分为蛋白质标志物、糖类标志物、核酸标志物等。
其中，蛋白质标志物最为常见，如CEA、PSA、甲胎蛋白（AFP）等；糖类标志物包括CA125、CA19-9等；核酸标志物如微卫星不稳定性（MSI）等。
二、肿瘤标志物检测原理肿瘤标志物检测的原理是通过检测肿瘤标志物在体液或组织中的表达量来判断肿瘤的存在、发展和治疗效果。
但需要注意的是，肿瘤标志物并非所有患者都会产生，也不是所有肿瘤都会产生相应的标志物，因此不能仅仅依靠标志物来诊断肿瘤。
肿瘤标志物的表达量受多种因素影响，如肿瘤的类型、大小、位置、分化程度、治疗方法等。
因此，同一肿瘤标志物在不同肿瘤类型和不同阶段的肿瘤中表达量可能会有所不同。
三、肿瘤标志物检测方法肿瘤标志物检测方法主要包括免疫学方法、化学发光法、荧光定量PCR法等。
1. 免疫学方法免疫学方法是最常用的肿瘤标志物检测方法之一，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）、放射免疫印迹法（RIA）、荧光免疫测定法（FIA）等。
这些方法都是基于抗体-抗原反应原理进行的。
首先，制备与目标肿瘤标志物结构相似的抗原或抗体，然后将其标记上荧光素、酶或放射性同位素等标记物，通过与样本中的肿瘤标志物结合来检测其表达量。
2. 化学发光法化学发光法是一种新型的肿瘤标志物检测方法，具有高灵敏度、高特异性、操作简便等优点。
该方法基于化学荧光素或生物素标记的抗体与肿瘤标志物结合，产生化学发光信号，通过荧光计或光电倍增管进行检测。
化学发光法适用于多种肿瘤标志物的检测，如AFP、CEA、CA125、PSA等。
肿瘤标志物临床检测的基本原则
一种含唾液酸的神经节苷脂，主要由消化 道肿瘤细胞所分泌。
为胰腺癌的TM；肠癌、胆囊癌、胃癌、肝 癌和肺癌也可增高，但以胰腺癌增高更为明显， 阳性率达80％左右。 部分胆囊炎和肝硬化患者CA19－9也可能 升高。
CA19-9和CEA联合检测可增加对胰腺癌的 敏感性和特异性，因此，可用于对胰腺癌的早 期筛查。
一、肿瘤标志物的定义
肿瘤标志物（TM）是指在恶性肿瘤发生和增
殖过程中，由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌 的或是由机体对肿瘤反应而异常产生和/或升高 的反映肿瘤存在和生长的一类物质，它包括蛋 白质、激素、酶（同工酶）、多胺及癌基因产 物等。 TM存在于肿瘤患者的血液、体液、细胞或组 织中，可用生物化学、免疫学及分子生物学等 方法测定，且对肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断、 观察疗效、监测复发以及预后评价具有一定的 价值。
12 Β2 -微球蛋白：
表达在大多数有核细胞的表面，是HLA I 类抗原分子中的一条链。
β2 -微球蛋白的检测多用于证实多种血液系 统的恶性肿瘤，如白血病、淋巴瘤以及多发性 骨髓瘤，其水平与肿瘤细胞的数量、生长速度、 预后及疾病活动性有关。
TM联合检测的常用组合(仅供参考）
1、肝癌：AFP+AFP异质体 2、食道鳞癌： CYFR21-1（细胞角蛋白19片断）
8 前列腺特异性抗原(PSA):
PSA是由前列腺上皮细胞分泌的一种糖蛋 白，具有严格的组织特异性，仅存在于正常或 肥大的前列腺癌组织中。 PSA是前列腺癌较特异的TM，阳性率达63 ％以上，用于诊断前列腺癌、鉴别转移性癌的 来源，以及判断疗效和预后。在区别良性与恶 性前列腺疾病时测定游离PSA（f-PSA）与总 PSA（tPSA)的比率更有临床价值。
SF、β２-MG、IL-2R、TNF
ca199检测原理
ca199检测原理一、引言CA199是一种常用的肿瘤标志物，可以通过检测血液中的CA199水平来判断是否存在胰腺癌等恶性肿瘤。
本文将详细介绍CA199检测原理。
二、CA199的定义及特点1. CA199是什么？CA199全称为糖类抗原19-9，是一种人体内分泌的蛋白质，属于黏液型糖蛋白。
它主要由胰腺和胆管上皮细胞合成，也可由其他组织合成。
2. CA199的特点（1）高度特异性：在胰腺癌等恶性肿瘤患者中，血清中CA199水平通常明显升高；（2）低度敏感性：在早期肿瘤阶段，血清中CA199水平可能不升高；（3）受多种因素影响：如患者年龄、性别、饮食习惯、其他疾病等均可能影响其水平。
三、CA199检测方法1. ELISA法ELISA法是最常用的CA199检测方法之一。
它基于酶标记免疫吸附技术原理，通过特异性抗体与CA199结合，然后用酶标记的二抗与第一抗体结合，最后用底物检测酶标记物的活性。
此方法简单、快速、灵敏度高。
2. 放射免疫法放射免疫法是利用放射性同位素标记CA199进行检测，其原理是将放射性同位素标记的CA199注入血液中，然后通过计数器检测其辐射强度。
此方法敏感度高但操作复杂且存在辐射危险。
3. 免疫荧光法免疫荧光法是利用荧光染料标记特异性抗体与CA199结合进行检测。
其原理是将荧光染料标记的抗体注入血液中，然后通过荧光显微镜观察细胞或组织中是否存在CA199。
此方法具有高分辨率和灵敏度。
四、CA199检测结果的解释1. CA199水平正常范围成人血清中正常CA199水平为0-37 U/ml。
2. CA199水平升高可能原因（1）胰腺癌：约80%的胰腺癌患者血清中CA199水平升高；（2）胆管癌：约50%的胆管癌患者血清中CA199水平升高；（3）其他肿瘤：如肝癌、结直肠癌等均可能导致CA199水平升高；（4）胰腺炎、胆道疾病等。
3. CA199水平降低可能原因（1）手术切除肿瘤后；（2）化疗、放疗等治疗后；（3）其他原因导致CA199合成减少或分解加快。
肿瘤标志物检测原理及常见问题分析
6400
信号值（MFI）
每个符号最多表示 33 个观测值。
8000
9600
11200
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 6.独特的抽样技术
CV%
25.0% 20.0% 15.0% 10.0%
5.0% 0.0%
0
抽样量与变异系数趋势图(理论抽样)
50
类风湿因子本质是一种免疫球蛋白，可以特异性的识别自身IgG的Fc部分， 属于一种自身抗体。主要存在形式为IgM RF（约占80%）及IgG RF。 RF产生原因有（1）人体IgG在物理因素下其抗原性发生变化持续刺激免疫 系统；（2）免疫功能紊乱；（3）遗传因素。
二、结果不一致原因分析
（2）.类风湿因子（Rheumatoid Factor,RF）干扰
三、常见问题答疑
Q5 有关于肿瘤标志物试剂盒组成问题
B液（PE标记抗体）
A液（反应缓冲液）
C液（微球混悬液）
D液 H液
96孔板 光盘
校准品
三、常见问题答疑 Q6 有关肿瘤标志物f-PSA临床意义的问题
解答：
患良性疾病 概率增加 患前列腺癌 概率增加
三、常见问题答疑 Q7 肿瘤标志物阳性意味着什么？
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-准确度、正确度、精密度
1.准确度 2.正确度 3.精密度
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-不精密度补充说明
95%置信区间
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-灵敏度和特异度（阳性符合率、阴性符合率） 试验方法和金标准比较2*2列联
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-相关性
三、常见问题答疑 Q3 有关肿瘤标志物试剂盒装量的问题
肿瘤标志物检测原理和常见问题分析讲义
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
5.反应过程简介
准备工作
恢复到室温、校准品复溶、重悬微球
第一步反应
A液 25ul+ 样本 10ul+ B液 37℃反应5min
第二步反应
+C液 25ul 37℃反应60min
终止反应
+D液 100ul 振荡混匀，读数，计算浓度
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 6.独特的抽样技术
100
150
200
250
300
抽样量
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 7.获得信号值
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 8.剂量反应曲线
样本2
样本1
Y5=b5x5+a5 Y4=b4x4+a4
Y3=b3x3+a3 Y2=b2x2+a2 Y1=b1x1+a1
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 核心反应原理
（3）HAAAs（HAMA）干扰 (human anti-animal antibodies,HAAAs)
肿瘤标志物检测原理和常 见问题分析
本次讲解内容
肿瘤标志物概述及试剂检测原理 结果不一致原因分析
常见问题答疑
背景
图 2009年中国部分市前十位疾病死亡专率及死亡原因构成，数据引自“中国卫生统计年鉴•2011”
背景
•目前对肿瘤最有效的措施： 早发现，早治疗
图像诊断
• •
CT 核磁共振
• 免疫学指标 化学诊断 • 血清学
4.肿瘤标志物检测试剂盒组成
① 反应缓冲液（A液）：1瓶，2.5ml/瓶。 ② PE标记混合抗体溶液（B液）：1瓶，2.5ml/瓶。 ③ 校准品：6瓶，0.2ml/瓶，分别为：CAL1-CAL6。 ④ 微球混悬液（C液）：1瓶，2.5ml/瓶。 ⑤ 终止液（D液）：1瓶，15ml/瓶。 ⑥ AFP HOOK 指示微球溶液（H液）：1瓶，250ul/瓶。（仅限含AFP指标） ⑦ 说明书：1份。 ⑧ 封板纸：2张。 ⑨ 96孔反应板：1块。 ⑩ 光盘（读数模板+计算模板）
检验科常见肿瘤标志物检测方法
检验科常见肿瘤标志物检测方法肿瘤标志物检测是一种通过测定人体内特定蛋白质、酶或其他相关物质的浓度或活性水平来筛查、诊断和监测肿瘤的方法。
在检验科中，肿瘤标志物检测方法被广泛应用于临床实践中，对于早期发现和诊断肿瘤具有重要意义。
本文将介绍检验科常见的肿瘤标志物检测方法，以提供相关医学专业人员和科研人员参考。
一、免疫测定法免疫测定法是目前应用最为广泛的肿瘤标志物检测方法之一。
它基于人体免疫系统产生对抗肿瘤细胞的抗体原理，通过测定血液或体液中特定抗原与抗体的结合程度来确定肿瘤标志物是否存在。
常用的免疫测定法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）、免疫荧光法等。
二、核酸检测法核酸检测法是一种通过检测肿瘤细胞或肿瘤相关基因的异常变化来判断肿瘤存在与否的方法。
常见的核酸检测法包括聚合酶链式反应（PCR）、荧光原位杂交（FISH）、基因芯片技术等。
相比于其他方法，核酸检测法具有更高的灵敏度和特异性，可以提供更准确的肿瘤诊断结果。
三、蛋白质质谱法蛋白质质谱法是一种通过分析体液中蛋白质的质谱图谱来鉴定和定量肿瘤标志物的方法。
该方法主要通过样本前处理、质谱分析和数据分析三个步骤进行。
蛋白质质谱法具有高通量、高灵敏度和高特异性的特点，适用于多种肿瘤标志物的检测和筛查。
四、细胞生物学方法细胞生物学方法是一种通过观察和分析肿瘤细胞的形态学特征、增殖、分化以及遗传学变化来确定肿瘤的存在和发展情况的方法。
常用的细胞生物学方法包括细胞培养、细胞遗传学分析、细胞增殖和凋亡检测等。
细胞生物学方法在肿瘤的早期筛查和疾病的进展监测中具有重要作用。
五、图像学检测法图像学检测法是一种通过医学影像学技术来观察和评估肿瘤的生物学特征和形态学变化的方法。
常见的图像学检测法包括X射线、CT扫描、MRI等。
这些技术能够提供肿瘤的位置、大小、形状等信息，辅助临床医生进行肿瘤的诊断和治疗方案选择。
六、流式细胞术流式细胞术是一种通过激光和电子学技术来检测和分析肿瘤细胞的多参数数据的方法。
ctdna检测原理
ctdna检测原理CTDNA检测原理引言：随着科技的不断进步，分子诊断技术在临床医学中的应用越来越广泛。
CTDNA（循环肿瘤DNA）作为一种新兴的肿瘤标志物，具有无创、方便、敏感等优势，被广泛应用于肿瘤的早期筛查、诊断和疗效评估。
本文将详细介绍CTDNA检测的原理。
一、CTDNA检测的基本原理CTDNA是肿瘤细胞在血液中释放的一种DNA片段，它能够携带肿瘤细胞的突变信息。
CTDNA检测的基本原理是通过提取血液中的游离DNA，利用高通量测序等技术，检测其中的突变位点，从而间接地得知肿瘤细胞的存在和突变情况。
二、CTDNA的分离与富集CTDNA在血液中的含量极低，通常只占总血浆DNA的1%以下，因此需要进行分离与富集。
目前常用的方法有尺寸选择、亲和纯化、电泳分离等。
其中，尺寸选择是最常用的方法，通过尺寸选择柱或离心管，将大分子DNA和蛋白质去除，留下较短的CTDNA片段。
三、CTDNA的突变检测CTDNA检测的核心是突变检测，即寻找CTDNA中的突变位点。
突变位点可以通过多种方法进行检测，包括高通量测序、数字PCR、ARMS-PCR等。
其中，高通量测序是最常用的方法，它可以同时检测多个位点的突变情况，具有高通量、高灵敏度和高特异性的优点。
四、CTDNA的结果分析CTDNA检测的结果通常以突变的存在与否、突变的频率等形式呈现。
根据突变的情况，可以判断肿瘤的存在、肿瘤的类型、肿瘤的突变负荷等信息。
此外，CTDNA检测还可以用于监测肿瘤治疗的疗效和预后的评估。
五、CTDNA的应用前景CTDNA检测作为一种无创、可重复、敏感度高的方法，具有广阔的应用前景。
它可以用于早期肿瘤筛查，帮助发现肿瘤患者，提高早期诊断率；可以用于肿瘤的个体化治疗，根据突变位点选择最佳的治疗方案；还可以用于肿瘤的监测和预后评估，帮助医生及时调整治疗方案。
结论：CTDNA检测作为一种新兴的肿瘤标志物检测方法，具有许多优势，如无创、方便、敏感等。
临床免疫学：肿瘤标志物的检测
实验目的
掌握ELISA定量检测方法；
熟悉检测肿瘤Βιβλιοθήκη 记物的常用方法；实验原理 (甲胎蛋白定量检测)
双抗体夹心法： 抗-AFP单克隆抗体包被反应板，加入待测标本或标
准品孵育后，洗涤后，再加入HRP标记的抗-AFP多 克隆抗体。如果标本中含有AFP，就能在固相载体 的表面形成(抗-AFP单克隆抗体)-AFP-(HRP-抗-AFP多 克隆抗体)复合物，加入底物后产生显色反应； 在一定范围内，吸光度OD值与标本中的AFP含量的 对数值成线性关系； 通过同步检测已知浓度的AFP标准品并计算标准曲 线后，将待测标本OD值代入回归方程后即可求出 待测标本中AFP含量。
值）； 9、检测结果的计算：
以标准品AFP浓度的lg值为自变量（x），其对应的吸光值（OD值）为应变量 （y），求出回归方程，将待测标本的OD值代入回归方程，求得其AFP含量。
标准品浓度 20
50
100
200
400
ng/ml
lg值
1.301
1.699
2
2.301
2.602
实验结果的判断与解释
1、阴性对照标本OD值≤0.05, 20ng/ml标准品OD值 ≥0.15;
思考题
1、什么是肿瘤标记物，常见的肿瘤标记物主要分 为哪几类？
2、加样：相应反应孔中加入标本或样品各50µl,振荡混匀，封板，置于37 ℃孵 育20分钟；
3、洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置10秒，弃去孔内液体，重 复5次，最后一次在吸水纸上拍干，
4、加酶结合物：每孔加酶结合物50µl，封板，置于37 ℃孵育20分钟； 5、洗板：重复步骤3； 6、显色：每孔加入显色剂A、B各50µl，振荡混匀，封板，置37 ℃孵育10分钟； 7、终止反应：每孔加终止液50µl，混匀； 8、读板：在450nm主波长，630nm副波长下，用酶标仪检测各孔吸光值（OD
肿瘤标志物 酶免和化学发光
肿瘤标志物酶免和化学发光
【原创实用版】
目录
1.肿瘤标志物的定义和作用
2.酶免和化学发光的定义和原理
3.酶免和化学发光在肿瘤标志物检测中的应用
4.酶免和化学发光的优缺点比较
5.我国在肿瘤标志物检测技术方面的发展
正文
肿瘤标志物是指在肿瘤的发生和发育过程中，由肿瘤细胞本身或其周围的细胞产生的一类物质。
这些物质可以反映肿瘤的存在和生长状态，因此被广泛应用于肿瘤的早期发现、诊断、治疗和预后评估。
目前，肿瘤标志物的检测方法有很多种，其中酶免和化学发光是两种常用的方法。
酶免，全称酶联免疫吸附法，是一种常用的免疫学检测方法。
它利用抗原和抗体的特异性结合，通过酶促反应的速率来定量检测样本中的肿瘤标志物。
而化学发光则是一种基于化学能的发光原理，通过检测化学反应产生的光信号来定量检测肿瘤标志物。
酶免和化学发光在肿瘤标志物检测中都有广泛的应用。
相较于传统的检测方法，它们具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。
然而，两者也存在一些差异。
酶免检测的灵敏度和特异性较高，但操作步骤较多，需要较长的检测时间。
而化学发光则操作简便，检测速度快，但设备成本较高。
在我国，肿瘤标志物检测技术也在不断发展和进步。
目前，我国已经建立了一套完整的肿瘤标志物检测体系，包括了酶免、化学发光等多种检测方法。
同时，我国也在积极推动肿瘤标志物检测技术的研究和应用，以
提高肿瘤的早期发现和诊断能力。
总的来说，酶免和化学发光都是肿瘤标志物检测中常用的方法，两者各有优缺点。
选择哪种方法，需要根据具体的检测需求和条件来决定。
肿瘤标志物 酶免和化学发光
肿瘤标志物酶免和化学发光
摘要：
1.肿瘤标志物的概念
2.酶免检测法的基本原理
3.化学发光检测法的基本原理
4.两种检测方法的优缺点比较
5.结语
正文：
肿瘤标志物是一种可以用来检测肿瘤的生物标志物，它存在于肿瘤细胞和组织中，也存在于正常细胞和组织的某些情况下。
肿瘤标志物的检测可以帮助医生诊断和监测肿瘤的生长和治疗效果。
目前，肿瘤标志物的检测方法主要有酶免检测法和化学发光检测法两种。
酶免检测法是一种基于酶联免疫吸附试验的检测方法，它通过测量肿瘤标志物与特定抗体结合后酶反应的信号来定量检测肿瘤标志物的含量。
酶免检测法的优点是操作简单、成本低、结果快速，缺点是灵敏度和特异性相对较低，容易受到其他因素的干扰。
化学发光检测法是一种基于化学发光反应的检测方法，它通过测量肿瘤标志物与特定抗体结合后产生的化学发光信号来定量检测肿瘤标志物的含量。
化学发光检测法的优点是灵敏度高、特异性强，缺点是操作复杂、成本高、结果较慢。
总的来说，酶免检测法和化学发光检测法各有优缺点，具体选择哪种方法
应根据实际需求和条件来决定。
利用ELISA技术检测肿瘤标志物蛋白质
利用ELISA技术检测肿瘤标志物蛋白质肿瘤标志物是指生物体中因发生肿瘤而产生的一种特定蛋白质，其在肿瘤的诊断、预防、治疗和预后评估中具有重要的临床意义。
ELISA （酶联免疫吸附测定）技术是一种常用的实验室检测技术，用于检测血清、尿液和其它生物样本中特定物质的存在与浓度。
本文将介绍利用ELISA技术检测肿瘤标志物蛋白质的过程和原理。
一、ELISA技术的基本原理ELISA技术是一种基于抗原-抗体相互作用的特异性检测方法。
该技术包括多个步骤，涉及到特定抗体的固相吸附、样本加入、洗涤、酶标记二抗反应、洗涤和底物发色等过程。
其基本原理如下：1.首先，在ELISA微孔板上固相吸附抗原或抗体，使其与固相吸附物上的空位结合。
2.样本加入：待测样本（如血清、尿液等）中的目标分子与固相吸附物上的抗原或抗体结合。
3.洗涤：通过洗涤步骤，去除未结合的成分。
4.酶标记二抗反应：添加酶标记的第二抗体，使其与待测蛋白结合。
5.再次洗涤，去除未结合的酶标记二抗。
6.底物发色：加入适合酶标记的底物，使其与酶发生反应，生成可观察的色素。
7.最后，在酶反应停止后，使用光谱仪测定所生成的颜色的光密度，从而确定待测物质的存在与浓度。
二、利用ELISA技术检测肿瘤标志物蛋白质的步骤ELISA技术在肿瘤标志物的检测中已被广泛应用。
以下是利用ELISA技术检测肿瘤标志物蛋白质的基本步骤：步骤一：预处理样本为了得到准确的结果，对待测样本进行预处理是必要的。
常见的处理方法包括稀释、蛋白质提取和样品纯化等。
根据不同的肿瘤标志物和样本类型，选择适当的预处理方法。
步骤二：固相吸附在微孔板中用肿瘤标志物特异性抗体进行固相吸附。
将待测样本加入微孔板中，使其与抗体结合。
步骤三：洗涤将反应孔洗涤以去除未结合的成分，避免干扰信号的产生。
步骤四：酶标记二抗反应加入与待测蛋白结合的酶标记二抗，使其发生特异性反应。
步骤五：洗涤对孔进行洗涤以去除未结合的酶标记二抗。
步骤六：底物发色加入适当的底物，使其与标记的酶相互作用，产生可观察的色素。
肿瘤标志物检测原理与方法
肿瘤标志物检测原理与方法
1肿瘤标志物检测原理
肿瘤标志物检测是利用从肿瘤组织中分泌或释放的某种物质来发现早期肿瘤的测试方法，主要是一些特有的物质，比如抗原、抗体，这些物质可以在血清、尿液和体液中发现，因此可以用它们来检测出肿瘤的存在。
肿瘤标志物检测可以检测出单细胞微小的肿瘤，这是由于它具有以下几种特点：高灵敏度，可以检测出较低浓度的物质；高特异性，可以精确的发现出与恶性肿瘤的特异性关联的物质；它的检测结果可以作为早期肿瘤的筛查手段。
2肿瘤标志物检测方法
肿瘤标志物检测主要有传统的生化检测方法及免疫检测方法，包括生化检测、免疫分析、免疫学比色法、免疫滴度测定法、酶联免疫吸附测定等。
其中，生化检测方法是以肿瘤标志物浓度来判断肿瘤发生或病情发展，以及治疗效果的好坏，具有简便、快捷、结果准确等优点，利用它可以发现小于1微克/升的肿瘤标志物水平，可用于早期筛查。
免疫检测方法利用抗原或抗体结合特异性酶标志物产生的免疫反应，来衡量肿瘤标志物的浓度，具有较高的特异性、灵敏度和选择性，可用于检测比生化检测更低的肿瘤标志物水平，可用于早期筛查及肿瘤的治疗效果的评估。
以上就是肿瘤标志物检测的原理和方法，是诊断早期肿瘤的重要手段。
ca199检测原理
ca199检测原理一、概述ca199是一种常见的肿瘤标志物，广泛应用于胰腺癌和胆道癌等肿瘤的诊断和评估。
ca199的检测原理是通过检测血液中的ca199浓度来判断肿瘤的存在及其活动程度。
本文将详细介绍ca199检测的原理、方法及其临床应用。
二、ca199的生物学意义ca199是一种糖蛋白，其源于胰腺和肝胆系统的上皮细胞。
在正常情况下，ca199的浓度较低，但在胰腺癌和胆道癌等肿瘤的存在下，其浓度会明显升高。
因此，通过检测血液中的ca199浓度可以间接地评估肿瘤的存在及其活动程度。
三、ca199的检测方法ca199的检测主要通过免疫学方法实现，常见的检测方法包括放射免疫测定和酶联免疫吸附测定。
以下将详细介绍这两种方法的原理及步骤。
3.1 放射免疫测定放射免疫测定是一种常用的ca199检测方法，其原理是利用放射性同位素标记ca199抗体，与血液中的ca199结合形成抗原-抗体复合物。
通过测量放射性同位素的放射性强度，可以间接地反映血液中ca199的浓度。
步骤如下： 1. 取血样品，并离心分离血清。
2. 加入放射性同位素标记的ca199抗体。
3. 孵育一定时间，使抗体与ca199结合。
4. 分离抗原-抗体复合物。
5. 测量放射性同位素的放射性强度。
6. 根据标准曲线计算血液中的ca199浓度。
3.2 酶联免疫吸附测定酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种常用的生物化学方法，也可以用于ca199的检测。
其原理是利用酶标记的ca199抗体与血液中的ca199结合形成抗原-抗体复合物，通过添加底物使酶产生显色反应，从而间接地反映血液中ca199的浓度。
步骤如下： 1. 取血样品，并离心分离血清。
2. 加入酶标记的ca199抗体。
3. 孵育一定时间，使抗体与ca199结合。
4. 清洗掉未结合的抗体。
5. 加入底物，使酶产生显色反应。
6. 测量显色反应的光密度。
7. 根据标准曲线计算血液中的ca199浓度。
肿瘤标志物检测原理
肿瘤标志物检测原理 Prepared on 22 November 2020肿瘤标志物检测原理根据WHO资料，全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因，占总死亡人数的22%，并逐年增加。
10种常见肿瘤：胃癌、肝癌、食管癌、结直肠肛门癌、白血病、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。
肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗是患者获得长期生存的最主要途径。
以肝癌为例，肿瘤直径＜2cm，5年生存率几乎100%；直径每增加1cm，5年生存率下降20%。
肿瘤诊断三大支柱是图像诊断（包括B超、CT、核磁共振）、化学诊断（血清学和免疫学）及细胞学和组织学诊断，而后两者均以肿瘤标志为主要或辅助观察指标。
当前，肿瘤标志物的检测已从细胞水平深入到分子基因水平，在检测技术上，它将生物化学、核医学、免疫学、细胞学、病理学、分子生物学等诸多学科融合在一起，不仅使检测的项目有了大幅度的增加，而且检测的特异性和灵敏度也有很大的提高。
肿瘤标志物在肿瘤诊断，检测肿瘤复发与转移，判断疗效和预后以及人群普查等方面都有较大的实用价值，而且在肿瘤发生和发展机理研究中也具有重要作用。
肿瘤标志物除用于肿瘤诊断外，可为临床肿瘤治疗提供依据及以其为靶，进行肿瘤的靶向治疗及免疫治疗。
肿瘤标志学已成为肿瘤学中一个重要的新学科、新领域。
肿瘤标志（Tumour Markers）是1978年Herberman在美国国立癌症研究所（NCI）召开的“人类免疫及肿瘤免疫诊断”会上提出的，次年在英国第七届“肿瘤发生生物学和医学”会议被大家确认，并开始引用。
肿瘤标志物是指由肿瘤细胞由肿瘤组织和细胞产生的与肿瘤的形成、发生相关的物质，这些物质存在于肿瘤细胞的胞核、胞质、胞膜上或体液中，进入到血液或其他体液或组织中，或是宿主对体内新生物反应而产生并进入到血液或体液或组织中而含量明显高于正常参考值的一类生物活性物质。
不存在于正常成人组织而见于胚胎组织,或在肿瘤组织中含量超过正常含量。
ca199检测原理简析
ca199检测原理简析ca199检测原理简析1. 概述在医学领域，血液肿瘤标志物的检测可以为诊断和治疗提供重要的参考依据。
CA199作为一种常用的肿瘤标志物，可用于早期发现、诊断和监测某些消化系统恶性肿瘤，如胰腺癌、胆管肿瘤等。
本文将深入探讨CA199检测的原理，并分享对该标志物的观点和理解。
2. CA199检测原理CA199（Carbohydrate Antigen 19-9，糖类抗原19-9）是一种表面糖蛋白，它在正常人的体内只存在于少量的胰腺、肝、胆囊和消化道等组织中，但在某些癌症发生时会显著升高。
通过测定血液中CA199的浓度，可以帮助医生判断是否存在肿瘤。
CA199的检测主要依赖于免疫化学技术，常用的方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）和放射免疫测定法（RIA）。
这些方法通过与血液中的CA199结合，将其与检测试剂发生特异性反应，并利用测定系统测量其信号强度，从而得出CA199的浓度。
3. CA199的临床应用CA199的临床应用主要集中在胰腺癌和胆管癌等消化系统恶性肿瘤的诊断和监测上。
一般来说，CA199的升高可能提示这些肿瘤的存在，但并不是所有肿瘤都能导致CA199的显著升高，因此CA199检测结果仅作为辅助诊断指标使用。
对于胰腺癌的早期诊断，CA199检测的敏感性和特异性并不高。
它通常与其他临床检查方法（如影像学检查和组织活检等）结合使用，以提高早期诊断的准确性。
4. 对CA199的观点和理解尽管CA199在胰腺癌和胆管癌的诊断和监测中具有一定的临床应用价值，但它并非一个完美的肿瘤标志物。
CA199的升高可能受到多种因素的干扰，包括其他疾病（如炎症性肠病、肝炎和胰腺炎等）、良性肿瘤以及非肿瘤性疾病等。
CA199的浓度不能直接反映肿瘤的分期和预后情况，因此在临床应用中需要综合其他指标进行综合评估。
5. 总结与回顾本文深入分析了CA199的检测原理和临床应用，并分享了对该肿瘤标志物的观点和理解。
肿瘤标志物的诊断原理
肿瘤标志物的诊断原理
肿瘤标志物的诊断原理是利用肿瘤细胞或肿瘤相关物质在体内制造的特定分子，通过血液或组织样本中的检测，来判断是否有肿瘤发生或肿瘤的恶变程度。
肿瘤标志物通过多种方法进行检测，包括血清学、免疫学、分子生物学等。
常见的肿瘤标志物有癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）、鳞状细胞癌相关抗原（SCCA）、前列腺特异抗原（PSA）等。
诊断过程中，首先采集患者的血液或组织样本。
然后，通过化学物质处理样本，提取其中的肿瘤标志物。
接下来，利用免疫学技术，比如酶联免疫吸附试验（ELISA）等，将肿瘤标志物与特异性抗体结合，并产生可测量的信号。
最后，通过测量信号的强度，分析标志物的浓度或活性，来判断是否存在肿瘤及其严重程度。
然而，需要注意的是，肿瘤标志物的诊断并非是绝对可靠的，因为标志物的水平受多种因素的影响，如感染、炎症、肝病等也可能导致标志物升高。
因此，肿瘤标志物通常需要与其他临床检查方法结合来进行综合判断。
糖类抗原724原理
糖类抗原724原理
糖类抗原724（Cancer Antigen 724）是一种肿瘤标志物，常用于肿瘤的诊断和监测。
糖类抗原724是一种糖蛋白，存在于多种肿瘤细胞的表面。
糖类抗原724的检测原理主要是使用特异性的抗体与其结合，一般使用免疫学方法进行检测。
这些抗体通常是经过人工合成或从动物体内获得的。
具体的检测过程包括以下几个步骤：
1. 收集样本：一般采集血液或体液样本，如血清或尿液。
2. 样本预处理：将样本离心，获得纯净的血清或尿液。
3. 免疫反应：将样本与糖类抗原724的抗体混合，允许它们相互结合。
这可能涉及到一系列的试剂和反应条件，以确保高效的结合。
4. 洗涤：通过洗涤步骤，去除未结合的物质，以减少假阳性结果的可能性。
5. 检测和测量：根据所使用的特定检测方法，可以使用荧光素或酶等反应物来标记与724抗原结合的抗体。
然后可以使用特定的仪器或平台，如酶标仪或荧光测定仪，对标记物进行测量和定量。
6. 结果解读：根据标准曲线或其他参考值，解读测量结果，从而确定样本中糖类抗原724的含量。
需要注意的是，糖类抗原724虽然与多种肿瘤的存在有关，但也可能存在一定的假阳性和假阴性结果。
因此，糖类抗原724
的检测结果通常需要和其他临床指标以及临床病史等综合考虑，以综合判断肿瘤的存在和病情的发展。
肿瘤标志物成像原理
肿瘤标志物成像原理
肿瘤标志物成像的原理主要利用放射性同位素或荧光染料等物质的特殊性质来实现对肿瘤的显影。
放射性同位素显像中，检查过程中患者会被注射一种放射性药物，这种药物会被肿瘤组织吸收，放射性废物将在体外排泄，从而较为精确地描绘出肿瘤组织的位置和大小，有助于医生判断病情和治疗方案。
荧光染料显像则是将荧光染料通过注射、吞服或者涂敷等方式，让其被肿瘤组织吸收，不同颜色的光线被反射回来，在显微镜下可以看到肿瘤组织和正常组织的明显区别，更加清晰地显示出肿瘤组织。
另外，还有一种是将放射性同位素或荧光标记的特异性配体与肿瘤细胞表面的受体结合，通过成像设备观察和记录受体结合的分布情况，从而实现肿瘤的检测和定位。
肿瘤受体是指存在于肿瘤细胞表面的特异性受体分子，它们与一些特定的配体结合，进而影响肿瘤细胞的生长、分化和转移等过程。
这些技术都是通过对肿瘤组织的特殊性质进行标记和显影，帮助医生更加准确地诊断肿瘤的位置、大小和形态，为肿瘤的治疗和预后评估提供重要依据。
肿瘤标志物 酶免和化学发光
肿瘤标志物酶免和化学发光肿瘤标志物是指在肿瘤细胞产生、释放或者因肿瘤存在而发生改变的一些特定分子。
通过检测体内的肿瘤标志物，可以在肿瘤的早期诊断、治疗监测和预后评估中起到重要的作用。
而酶免和化学发光是常用的检测方法之一。
本文将对这两种方法进行详细介绍，并给出一些检测指导意见。
首先，我们来了解一下酶免的原理。
酶免是指利用特异性抗体与目标物质结合，再通过酶的催化作用产生显色反应，从而间接检测目标物质的一种方法。
常用的酶免方法有ELISA（酶联免疫吸附测定法）和LEIA（酶标免疫分析法）等。
在肿瘤标志物检测中，可以将特异性抗体与肿瘤标志物结合，随后加入底物与酶结合，形成底物酶反应产物，通过颜色的变化来检测肿瘤标志物的含量。
酶免方法具有灵敏度高、专一性强的优点，对于一些低浓度标志物的检测尤为适用。
但是，酶免方法需要设备和试剂的支持，操作较为复杂，且结果需要通过仪器来测定。
其次，我们来了解一下化学发光的原理。
化学发光法是利用化学反应产生的光来检测物质浓度的一种方法。
在肿瘤标志物检测中，可以利用化学底物与酶的催化反应产生光，通过测量光的强度来检测肿瘤标志物的含量。
与酶免相比，化学发光方法的优点在于操作简单，结果可以直接通过肉眼观察或者专用仪器测定，同时灵敏度也较高。
然而，化学发光方法的劣势在于试剂的价格相对较高，并且化学发光反应的时间比酶免方法要长一些。
针对肿瘤标志物检测，我们有几点指导意见。
首先，酶免和化学发光是常见且可靠的检测方法，但在选择具体的方法时要根据实际情况来确定。
比如，对于低浓度标志物的检测，可以选择酶免方法；而对于需要快速检测的情况，化学发光方法更为适用。
其次，标本的采集与保存也十分重要。
对于血液标本，应该采用抗凝剂进行处理，并在适当的温度下保存，以免造成标本变质。
最后，如果需要定量检测肿瘤标志物的含量，应该根据实验的需要选择合适的质控品和标准曲线进行测定，以确保结果的准确性。
综上所述，肿瘤标志物的检测对于肿瘤的早期诊断和治疗监测具有重要意义。
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肿瘤标志物检测原理
根据WHO资料，全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因，占总死亡人数的22%，并逐年增加。
10种常见肿瘤：胃癌、肝癌、食管癌、结直肠肛门癌、白血病、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。
肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗是患者获得长期生存的最主要途径。
以肝癌为例，肿瘤直径＜2cm，5年生存率几乎100%；直径每增加1cm，5年生存率下降20%。
肿瘤诊断三大支柱是图像诊断（包括B超、CT、核磁共振）、化学诊断（血清学和免疫学）及细胞学和组织学诊断，而后两者均以肿瘤标志为主要或辅助观察指标。
当前，肿瘤标志物的检测已从细胞水平深入到分子基因水平，在检测技术上，它将生物化学、核医学、免疫学、细胞学、病理学、分子生物学等诸多学科融合在一起，不仅使检测的项目有了大幅度的增加，而且检测的特异性和灵敏度也有很大的提高。
肿瘤标志物在肿瘤诊断，检测肿瘤复发与转移，判断疗效和预后以及人群普查等方面都有较大的实用价值，而且在肿瘤发生和发展机理研究中也具有重要作用。
肿瘤标志物除用于肿瘤诊断外，可为临床肿瘤治疗提供依据及以其为靶，进行肿瘤的靶向治疗及免疫治疗。
肿瘤标志学已成为肿瘤学中一个重要的新学科、新领域。
肿瘤标志（Tumour Markers）是1978年Herberman在美国国立癌症研究所（NCI）召开的“人类免疫及肿瘤免疫诊断”会上提出的，次年在英国第七届“肿瘤发生生物学和医学”会议被大家确认，并开始引用。
肿瘤标志物是指由肿瘤细胞由肿瘤组织和细胞产生的与肿瘤的形成、发生相关的物质，这些物质存在于肿瘤细胞的胞核、胞质、胞膜上或体液中，进入到血液或其他体液或组织中，或是宿主对体内新生物反应而产生并进入到血液或体液或组织中而含量明显高于正常参考值的一类生物活性物质。
不存在于正常成人组织而见于胚胎组织,或在肿瘤组织中含量超过正常含量。
肿瘤标志物分类
目前肿瘤标志物尚无统一的分类和命名，临床常用的肿瘤标志物大多是根据其生物化学和免疫学特性可分为：
（1）肿瘤抗原
肿瘤胚胎性抗原：甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)。
白血病系列分化抗原：CD系列。
肿瘤增殖抗原：增殖细胞核抗原/周期素（PCNA/Cyclin）、DNA多聚酶（DNA-pol）、Ki-67核抗原、Ki-S1核抗原。
（2）糖类抗原CA19-9、CA125、CA50、CA724、CA15-3、CA242、SCC。
（3）酶和同工酶乳酸脱氢酶(LDH)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、前列腺酸性磷酸酶(PSA)、胃蛋白酶原I、II(PG I、II)。
（4）激素和异位激素雌激素受体（ER）、孕激素受体(PR)、绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、降钙素。
（5）蛋白类角蛋白(Keratin上皮来源肿瘤)：角蛋白19片段（Cyfra21-1）、组织多肽抗原（TPA）、组织多肽特异性抗原(TPS)、膀胱癌抗原(UBC)。
核基质蛋白22(NMP22) 、DR70（是一种环形结构大分子蛋白质）。
β2-微球蛋白。
本周氏蛋白。
（6）肿瘤相关病毒EBV与鼻咽癌有关，HPV与宫颈癌有关，HBV与肝癌有关，Ｔ细胞白血病-淋巴瘤病毒(HTLV-1)与成人白血病有关等。
（7）癌基因、抑癌基因及其产物由于一些肿瘤中都有癌基因、抑癌基因及其产物异常表达，因而是较佳的广谱肿瘤分子标志。
1）癌基因与相关肿瘤
ras家族（P21）乳腺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、肾癌、膀胱癌、肺癌、白血病等
C-erbB2（HER-2/ neu）乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌等
C-myc 肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、睾丸癌等
C-met 肝癌、胃肠癌、甲状腺癌、肾癌、脑瘤等
mdm-2 软组织肉瘤
bcr-abl融合基因慢性髓细胞性白血病（CML）
Ph1 t(9,22)易位白血病
EGF 对肿瘤有促进生长作用
EGFR 乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、食管癌、肝癌等
TGF-a 乳腺癌、肝癌等
2）抗癌基因与相关肿瘤
Rb 视网膜母细胞瘤、骨肉瘤、乳腺癌、小细胞肺癌等
P53 肺癌、消化道癌、乳腺癌、骨肉瘤、淋巴瘤、白血病等
APC 家族性结肠腺瘤病、大肠癌、胃癌、肺癌等
FAP 家族性结肠腺瘤病、大肠癌
DCC 大肠癌、胃癌
NF1 神经纤维瘤、嗜铬细胞瘤、神经母细胞瘤
WT1 Wilms肾瘤
MTS1(P16基因)肺癌、食管癌、肝癌、大肠癌、白血病等
FHIT 食管癌、胃癌、结肠癌、肺癌、肝癌、头颈癌、乳腺癌、胰腺癌等3）转移相关基因
nm23 转移抑制基因，与肿瘤转移和预后呈负相关。
CD44 表达增加，促进转移。
组织蛋白酶D(chth-D) 在癌浸润和转移中起着关键作用
4）凋亡相关基因
bcl-2 抑制细胞凋亡。
可作为抗癌药物敏感性及预后指标。
Fas 属于TNF家族，该基因转染肿瘤细胞后促进细胞凋亡。
5）多药耐药性(MDR)基因
P-糖蛋白（P-gp）
多药耐药相关蛋白(MRP)
肺耐药蛋白(LRP)
谷胱甘肽转移酶（GST-π）
肿瘤标志物检测方法
同一个标志物可用不同方法进行检测，如可以从血清学水平、免疫组化检测CEA或P-gp等，也可以用FCM或RT-PCR来检测。
血清学水平：除传统的放射免疫分析（RIA）和酶联免疫分析（ELISA）外，目前在国内主要有三类全自动免疫化学分析系统（化学发光免疫分析系统；荧光免疫分析系统和电化学发光免疫分析系统）广泛的应用于临床，对血清肿瘤标记物检测具有快速、准确、半定量。
可检测AFP、CEA、CA19-9、CA72-4、CA125、CA15-3、NSE、Cyfra21-1、PSA、f- PSA等。
组织学水平：免疫组化和原位分子杂交组化技术是近年发展起来的一门新兴边缘学科。
它将免疫学技术和分子生物学技术同组织病理学制片方法巧妙结合在一起，在组织细胞原位显示某些化学成分和特定基因片段。
常规标本中约5%～15%疑难病例或恶性肿瘤需采用免疫组化进行鉴别诊断和预后分析。
Porter D利用mRNA原位杂交检测细胞水平基因表达，在组织芯片上免疫组织化学检测乳房导管原位癌和浸润癌病理学特征和临床意义。
图像分析技术可以定量测定组织切片上肿瘤细胞DNA含量和形态学分析，对判断肿瘤恶性度及预后具有重要临床价值。
细胞学水平：流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）。
是利用FCM对细胞和细胞器的结构和某些功能进行定量检测，并利用细胞表面特异性标志对特定细胞亚群进行分析和分选的先进技术方法。
检测白血病和淋巴瘤标记物(CD系列)利于诊断和鉴别诊断；用FCM检测恶性肿瘤细胞的P-gp可为临床选择化疗药物提供依据；我们用FCM检测消化道肿瘤外周血CD44水平。
电镜：电镜酶细胞化学技术、免疫电镜技术、原位杂交电镜技术。
分子学水平：聚合酶链反应法（PCR）是一种极为简单、敏感、高效、特异和快速的能在体外进行扩增DNA 的技术。
目前，国内外用RT-PCR方法检测外周血中的肿瘤细胞的主要标记基因有细胞角蛋白19(CK19 mRNA)和20(CK20mRNA)用于上皮性恶性肿瘤；癌胚抗原(CEAmRNA)用于结直肠癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌等CEA分泌性肿瘤；甲胎蛋白( AFPmRNA)用于肝细胞癌微转移的检测。
生物芯片分析系统：①基因芯片。
我们做了卵巢癌和食管癌]基因表达谱的研究工作。
Zhu G报道用显微切割和芯片技术结合分析乳房癌不同部位肿瘤细胞之间基因表达差异。
②组织芯片。
组织芯片可以帮助节省试剂、人力和费用。
过去分析一个肿瘤的试剂量现在可以分析高达数百个甚至1000个肿瘤,而且是在同一张切片上同时进行。
③蛋白芯片。
为多标志联合检测提供了理想的工具，英国RANDOX公司已经在全球同时推出的包含8种肿瘤标志的蛋白芯片。
这第一段似乎是着重描摹春的美丽，可起首有“多事的东风”一句，暗示着有人恼春，于是有个人物忽悠地闪了一下，桃红“醉依在封姨的臂弯里”，一下子就不见了。
但“多事”里隐蕴着的愠意，因封姨的出现有了着落。
春天写足了，那位对春天怀着恨意的人物便在作者的笔下十分不情愿地亮相了。
“只有一个孤独的影子，她，倚在栏杆上，”这就是封姨了，她“才从青春之梦醒过来”，茫然不解这眼前发生的一切。
作者笔下的她原来是一个芳华已失的女人！眼前的春天只是她过去的影子。