毒素快速检测方法58页PPT
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霉菌和毒素的检测方法 ppt课件
选取菌落数在 10 CFU～150 CFU 的平板，根据菌落形态分别计数霉菌 和酵母数霉菌蔓延生长覆盖整个平板 的可记录为多不可计。菌落数应采用 两个平板的平均数。
2020/11/13
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2.1.4.1 结果
计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相 应稀释倍数计算。
若所有平板上菌落数均大于 150 CFU，则对稀释度最高的 平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落 数乘以最高稀释倍数计算。
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自从20 世纪 60 年代发现强致癌的黄曲霉毒素以 来,霉菌与霉菌毒素对食品的污染日益引起重视。我国 在2011 年颁布了国家标准 GB2761-2011食品中真菌毒 素限量,各级食品监督检测机构全面开展霉菌的检测工 作。
2020/11/13
62.1霉菌检测方法01 方法GB4789.15-2010 食 品微生物学检验霉 菌和酵母计数。
2020/11/13
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2.1.5 镜检
B.1 检样的制备：取定量检样,加蒸馏水稀释至折光指数为 1.3447～ 1.3460（即浓度为7.9%～8.8%），备用。 B.2 显微镜标准视野的校正：将显微镜按放大率 90～125 倍调节标 准视野，使其直径为 1.382 mm。 B.3 涂片：洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的 摊布于计测室，以备观察。 B.4 观测：将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测， 一般每一检样观察 50 个视野，同一检样应由两人进行观察。 B.5 结果与计算：在标准视野下，发现有霉菌菌丝其长度超过标准 视野（1.382mm)的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6（即测 微器的一格）时即为阳性（+），否则为阴性（-），按100个视野计， 其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数，即为霉菌的视野百分数。
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2.1.4.1 结果
计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相 应稀释倍数计算。
若所有平板上菌落数均大于 150 CFU，则对稀释度最高的 平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落 数乘以最高稀释倍数计算。
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自从20 世纪 60 年代发现强致癌的黄曲霉毒素以 来,霉菌与霉菌毒素对食品的污染日益引起重视。我国 在2011 年颁布了国家标准 GB2761-2011食品中真菌毒 素限量,各级食品监督检测机构全面开展霉菌的检测工 作。
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62.1霉菌检测方法01 方法GB4789.15-2010 食 品微生物学检验霉 菌和酵母计数。
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2.1.5 镜检
B.1 检样的制备：取定量检样,加蒸馏水稀释至折光指数为 1.3447～ 1.3460（即浓度为7.9%～8.8%），备用。 B.2 显微镜标准视野的校正：将显微镜按放大率 90～125 倍调节标 准视野，使其直径为 1.382 mm。 B.3 涂片：洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的 摊布于计测室，以备观察。 B.4 观测：将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测， 一般每一检样观察 50 个视野，同一检样应由两人进行观察。 B.5 结果与计算：在标准视野下，发现有霉菌菌丝其长度超过标准 视野（1.382mm)的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6（即测 微器的一格）时即为阳性（+），否则为阴性（-），按100个视野计， 其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数，即为霉菌的视野百分数。
食品中有毒有害物质的快速检测方法PPT课件
射性同位素对工作人员有一定的伤害，废弃物又不易处理，这些不
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利因素限制了该法的广泛应用。
2.酶免疫技术(EIA )
❖酶免疫技术是用酶标记的已知抗原或抗体，检测 标本中的相应抗体或抗原，将抗原抗体反应的特异 性与酶催化反应的专一性相结合的免疫检测技术。
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酶联免疫吸附法
（enzyme
linked immunosorbant assay， ELISA）
❖ 加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有 色产物，产物的量与标本中受检物质的量直 接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性 或定量分析。
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ELISA原理图
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ELISA基本的实验过程
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❖ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体
❖在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体 ②酶标记的抗原或抗体 ③酶作用的底物
❖ 农药残留量是施药后的必然现象，但如果超过最大
残留量，对人畜产生不良影响或通过食物链对生态
系统中的生物造成毒害，则称为农药残留毒性（简
称残毒）。
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❖ 目前，我国农药残留较为突出的是蔬菜中的农 药残留问题。近年来蔬菜被农药污染的情况有 增无减，有机磷农药残留尤为突出。
有机磷农药多为磷酸酯类 或硫代磷酸酯： 对硫磷（1605）、内吸 磷（1059）、马拉硫磷 （4049）、乐果、敌百 虫、敌敌畏。
❖ 酶联免疫吸附法是把抗原抗体反应的特异性和酶的 高效催化作用有机结合起来的一种免疫检测技术。
❖ 将已知抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯板)上 进行酶免疫反应，检测相应的抗体或抗原。
❖ 应用：食品中毒素的测定、食品有害微生物的快速 检测、食品中农药残留的检测、食品中抗生素残留 的检测 （如氯霉素）
第三章 毒素快速检测方法
贝类毒素简介
神经性贝类毒素
危害范围较小。
活性成分为短裸甲藻毒素A，B，半短 裸甲藻毒素。
贝类毒素简介
神经性贝类毒素
中毒症状：主要为消化系统不适症状，
包括反胃、呕吐、下痢及腹痛，并伴 随着畏寒、头痛、发热等，症状至多 持续2-3天。一般并不会造成死亡， 其愈后良好。
贝类毒素简介
健忘性贝类毒素
鱼类毒素简介
胆毒鱼类
中毒原因：胆汁中含有组胺、胆盐 及氧化物。
鱼胆中毒主要是胆汁毒素严重损伤 肝、肾，造成肝脏变性坏死和肾小 管损害。脑细胞、心血管与神经系 统亦有改变。
鱼类毒素简介
肝毒鱼类
原因：维生素A中毒。 症状：初期为胃肠道症状，以后有 皮肤症状，如鳞状脱皮，自口唇周 围及鼻部开始，逐渐蔓及四肢和躯 干，重者毛发脱落。此外，还有结 膜充血、剧烈头痛等症状。
免疫亲和柱法-最新国标法
该法可以采用配套的荧光仪进行检测，也可 以和高效液相色谱法结合，解决标准物污染和操
作过程繁复等问题。
免疫亲和柱法
该种方法有着较好的权威性和通用性，且为 国外多个组织认可，被列为标准方法，如：
美国公职分析化学家协会（AOAC）
美国农业部联邦谷物检测中心（FGIS）、国际 纯粹与应用化学协会（IUPAC）、美国食品药品 行政署（US-FDA）、美国农业部（USDA） 在国内被认证的机构：中国出入境检验检疫局 （CIQ）、中华人民共和国国家标准（GB）
伏马毒素
伏马毒素的存在极其广泛。主要污染玉米及 其制品，偶尔在高粱、大米和豌豆中发现。 伏马毒素与疯牛病病毒、二恶英、O-157大 肠杆菌和氯丙酮五种污染物被当今世界认为 是危及人类食品安全的五大热点。
细菌内毒素检查法ppt课件
1、鲎试剂质量及灵敏度标示值得的影响 鲎试剂的质量：抗干扰才干，稳定性； 鲎试剂灵敏度标示值的准确性 。
1〕、鲎试剂灵敏度的误差
能否用细菌内毒素国家规范品标定？
标示值能否准确？
不同厂家的鲎试剂虽然标示值〔λ〕一样，但 依然存在较大的误差。比如，标示值为0.5EU/ml 的鲎试剂，有的真实灵敏度能够是0.65EU/ml； 而另一个厂家的鲎试剂能够是0.30EU/ml时，按 0.5-2λ误差规范都是合格产品，但对同一检品 在一样的稀释倍数下，这两个厂家的鲎试剂产品 对内毒素的检出程度却不同。
复溶0.5ml鲎试剂时，在旋涡混合器上点击 1-3秒，促进鲎试剂的溶解。
➢由于凝集反响是不可逆的，所以在反响 过程中及察看结果时应留意不要使试管 遭到振动，以免使凝胶破碎产生假阴性 结果。
➢进展干扰实验时，规范对照系列和含内 毒素的供试品溶液系列应同时进展，并 运用同一支细菌内毒素规范品。
➢在进展鲎试剂灵敏度复核、干扰实验和 供试品细菌内毒素检查时，各个实验中 要求的对照应同时进展，并在实验有效 的情况才干进展计算和判别。
三、售后技术效力专业，技术优势明显 细菌内毒素检查法在我国已开展了十多年，
经过许许多多专家学者的努力，目前该行业 曾经获得了非常重要的成果，但是该领域依 然有许多我们无法处理问题的存在，它并不 想我们想象的那么简单，这些问题的存在严 重妨碍了该行业的进一步开展，我们将与客 户的交流以及客户咨询的相关问题，进展一 次归纳总结。经过任务中出现的问题有必要 对以下情况进展交流，以加强对细菌内毒素 检查法的正确了解，同时纠正一些错误的观 念。
3、实验器皿的影响 器皿的计量管理〔校正〕 器皿的选择规范 器皿的正确处置
1〕、器皿的选择规范
鲎实验对器皿的要求：刻度准确；内 外表光滑；易于清理。细菌内毒素检查实 验不宜选用注射器，最好运用经过校正的 刻度玻璃吸管或吸嘴。注射器刻度不准确， 内壁磨沙面吸附内毒素，而且要特别留意 注射器针头引入的铁离子对实验结果的干 扰，故不宜选用注射器。
细菌内毒素检查- PPT课件
当进行新药的内毒素检查试验前，或无内毒素检 查项的品种建立内毒素检查法时，须进行干扰试 验。 当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验 环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时， 须进行干扰试验。
干扰实验
进行干扰试验一般步骤
供试品限值确定 根据鲎试剂的灵敏度确定MVD范围（供试品溶液浓度范围） 预试验（初筛试验）确定样品最大不干扰浓度 正式干扰试验
干扰实验
当Es 在0.5λ～2λ（包括0.λ和2λ）及Et 在0.5Es～2Es（包 括0.5Es和2Es）时，则认为供试品在该浓度下无干扰作用， 可在该浓度下对此供试品进行细菌内毒素检查。 当Et不在0.5Es～2Es（包括0.5Es和2Es）时，则认为供 试品在该浓度下干扰实验。应使用适宜方法排除干扰，如 可将供试品进行更大倍数稀释（不超过MVD ）。
干扰实验
4、当阴性对照为阴性，阳性对照为阳性时，实验有效。 当系列浓度中出现供试品溶液2管为阴性，供试品阳性对 照2管为阳性时，认为供试品在该浓度下不干扰实验，此 稀释倍数即为最小不干扰稀释倍数。即可选择该稀释倍数 进行正式干扰实验。 5、当系列浓度中所有浓度的供试品管都不为阴性，或供 试品阳性对照不为阳性时，说明供试品对内毒素与鲎试剂 的反应存在干扰，则应对供试品进行更大稀释倍数（不得 超过MVD=CL/λ0.03 ），或通过其他适宜的方法（如过滤、 中和、透析或加热处理等）排除干扰。 6、当供试品的内毒素限值单位为EU/mg或EU/U活性单位 时，应将最小不干扰稀释倍数换算成最大不干扰浓度（即 稀释倍数下溶液的浓度），以mg/ml或活性单位/ml表示。
实验原理
利用鲎试剂与微量内毒素产 生凝集反应的现象，以判断 供试品中细菌内毒素的限量 是否符合规定的一种方法。
《细菌内毒素检查法》课件
《细菌内毒素检查法》 PPT课件
本课程将介绍细菌内毒素检查法的原理、种类、检测方法、应用领域、优势 和局限性以及实施过程，以及其在研究领域中的发展趋势。
细菌内毒素的危害
1 健康危害
因某些细菌种群大量滋生 释放内毒素而导致食物中 毒、中毒性休克等健康问 题。
2 环境危害
有些细菌内毒素难以处理 且对环境造成危害，例如 鱼类致病性细菌产生的内 毒素对水质造成危害。
3 经济危害
某些细菌内毒素对食品安 全造成威胁，导致企业经 济损失。
检测方法
酶联免疫吸附法
基于免疫抗原抗体对，可检测 极低浓度内毒素。
化学检测法
基于内毒素的化学性质，但存 在交叉反应等缺点。
电子显微镜法
可直接观察细胞内毒素的形态 和分布，但检测精度较低。
生物学检测法
基于细胞生物活性特性，能够 反映细胞内毒素的毒性，但耗 时、费力。
应用领域
食品安全
应用于食品卫生监测和食品 安全评价，确保食品安全。
环境监测
帮助研究水质、土壤污染、 制药废水等环境问题的解决。
医疗诊断
辅助疾病的早期诊断和治疗， 特别是针对慢性病。
优势和局限性
优势
• 检测灵敏度高 • 检测方法多样化 • 结果直观、准确
局限性
• 样品处理条件严格 • 存在交叉反应 • 检测过程较复杂
新材料技术
开发出更为灵敏、可靠、高通量、 低成本的检测材料。
实施过程
1
样品处理
对待检样品进行预处理，获取检测样品。
2
检测方法选择
根据不同检测目的，综合选择检测方法。
3
试剂准备
选择合适的试剂，按照比例配制好所需试剂。
4仪器操作使用合源自的仪器，操作细菌内毒素检测。发展趋势
本课程将介绍细菌内毒素检查法的原理、种类、检测方法、应用领域、优势 和局限性以及实施过程，以及其在研究领域中的发展趋势。
细菌内毒素的危害
1 健康危害
因某些细菌种群大量滋生 释放内毒素而导致食物中 毒、中毒性休克等健康问 题。
2 环境危害
有些细菌内毒素难以处理 且对环境造成危害，例如 鱼类致病性细菌产生的内 毒素对水质造成危害。
3 经济危害
某些细菌内毒素对食品安 全造成威胁，导致企业经 济损失。
检测方法
酶联免疫吸附法
基于免疫抗原抗体对，可检测 极低浓度内毒素。
化学检测法
基于内毒素的化学性质，但存 在交叉反应等缺点。
电子显微镜法
可直接观察细胞内毒素的形态 和分布，但检测精度较低。
生物学检测法
基于细胞生物活性特性，能够 反映细胞内毒素的毒性，但耗 时、费力。
应用领域
食品安全
应用于食品卫生监测和食品 安全评价，确保食品安全。
环境监测
帮助研究水质、土壤污染、 制药废水等环境问题的解决。
医疗诊断
辅助疾病的早期诊断和治疗， 特别是针对慢性病。
优势和局限性
优势
• 检测灵敏度高 • 检测方法多样化 • 结果直观、准确
局限性
• 样品处理条件严格 • 存在交叉反应 • 检测过程较复杂
新材料技术
开发出更为灵敏、可靠、高通量、 低成本的检测材料。
实施过程
1
样品处理
对待检样品进行预处理，获取检测样品。
2
检测方法选择
根据不同检测目的，综合选择检测方法。
3
试剂准备
选择合适的试剂，按照比例配制好所需试剂。
4仪器操作使用合源自的仪器，操作细菌内毒素检测。发展趋势
黄曲霉毒素检测标准文档ppt
坏的很少；即使是 200℃高温加热，也不能 这些方法专一性差, 灵敏度低, 一般只作为化学分析法的佐证。
黄曲霉菌产毒要求的温度为12℃~42℃，最适温度为25.
完全正确破坏。一般黄曲霉毒素的裂解温度 同时在国内被认证的机构： 中国出入境检验检疫局（CIQ）、中华人民共和国国家标准（GB）
1、防霉：最好的预防方法是防止粮食等食物的霉变。 最新国标方法“免疫亲和柱法”较好的解决了上面的不足，该种方法可以采用配套的荧光仪进行检测，也可以和高效液相色谱法结合
为280℃，黄曲霉毒素 B1 的裂解温度为 ，解决标准物污染和操作过程繁复等问题。
一次摄入后约1周将大部分排出。
268℃。 样品用甲醇和水混合液进行萃取,随后进行衍生化处理,处理后溶解于流动相,进行液相色谱测定。
黄曲霉毒素M1是动物摄入黄曲霉毒素B1后在体内经羟基化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳 、肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。 黄曲霉菌产毒要求的温度为12℃~42℃，最适温度为25. 其原理是:样品经提取、浓缩、薄层分离后,在365 nm波长的紫外光照射下,黄曲霉毒素B1、B2产生紫色荧光,G1、G2产生绿色荧光,然 后根据其在薄层板上显示的荧光的最低检出量来定量。 黄曲霉毒素M1是动物摄入黄曲霉毒素B1后在体内经羟基化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳 、肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。
为了开发一种简单、快速、灵敏、准确的分析方法, VICAM(维康)公司与哈佛大学、麻省理工学院、约翰－霍普金斯大学、AOAC、
料，中药等产品中；黄曲霉毒素M1是动物摄入 FDA、FGIS、 农业部等著名大学和政府机构通力合作，发明研制了一系列以单克隆免疫亲和柱为分离手段，用荧光计、紫外灯作为
黄曲霉菌产毒要求的温度为12℃~42℃，最适温度为25.
完全正确破坏。一般黄曲霉毒素的裂解温度 同时在国内被认证的机构： 中国出入境检验检疫局（CIQ）、中华人民共和国国家标准（GB）
1、防霉：最好的预防方法是防止粮食等食物的霉变。 最新国标方法“免疫亲和柱法”较好的解决了上面的不足，该种方法可以采用配套的荧光仪进行检测，也可以和高效液相色谱法结合
为280℃，黄曲霉毒素 B1 的裂解温度为 ，解决标准物污染和操作过程繁复等问题。
一次摄入后约1周将大部分排出。
268℃。 样品用甲醇和水混合液进行萃取,随后进行衍生化处理,处理后溶解于流动相,进行液相色谱测定。
黄曲霉毒素M1是动物摄入黄曲霉毒素B1后在体内经羟基化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳 、肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。 黄曲霉菌产毒要求的温度为12℃~42℃，最适温度为25. 其原理是:样品经提取、浓缩、薄层分离后,在365 nm波长的紫外光照射下,黄曲霉毒素B1、B2产生紫色荧光,G1、G2产生绿色荧光,然 后根据其在薄层板上显示的荧光的最低检出量来定量。 黄曲霉毒素M1是动物摄入黄曲霉毒素B1后在体内经羟基化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳 、肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。
为了开发一种简单、快速、灵敏、准确的分析方法, VICAM(维康)公司与哈佛大学、麻省理工学院、约翰－霍普金斯大学、AOAC、
料，中药等产品中；黄曲霉毒素M1是动物摄入 FDA、FGIS、 农业部等著名大学和政府机构通力合作，发明研制了一系列以单克隆免疫亲和柱为分离手段，用荧光计、紫外灯作为
毒素快速检测方法
胆毒鱼类
鱼类毒素简介
中毒原因：胆汁中含有组胺、胆盐 及氧化物。
鱼胆中毒主要是胆汁毒素严重损伤 肝、肾，造成肝脏变性坏死和肾小 管损害。脑细胞、心血管与神经系 统亦有改变。
肝毒鱼类
鱼类毒素简介
原因：维生素A中毒。
症状：初期为胃肠道症状，以后有 皮肤症状，如鳞状脱皮，自口唇周 围及鼻部开始，逐渐蔓及四肢和躯 干，重者毛发脱落。此外，还有结 膜充血、剧烈头痛等症状。
（此时味最美）
河豚毒素的毒性
（1）机制：抑制神经细胞膜的Na+离子 通道，阻断神经冲动的传导，使肌肉麻痹。
（2）潜伏期：10min~3h，一般为 30~60min。
唇、舌、手指逐渐变得麻痹，进而加重， 恶心、呕吐；随后说话困难，运动失调， 血压、体温下降；最后呼吸衰竭而死。
二.河豚毒素的毒性
广泛分布于热带、亚热带海区 2.外形：
身体浑圆，头胸部大，腹尾部小，背上有鲜艳的斑纹 或色彩，体表无鳞，口腔内有明显的2对门牙。
河豚鱼
身体浑圆，头胸 部大，腹尾部小
河豚毒素的分布
（1）毒素浓度由高到低依次为： 卵巢、鱼卵、肝脏、肾脏、眼睛、皮肤、
血液，肌肉中含量低。
（2）河豚毒素含量依季节而变： 春夏季：毒性最强 冬季：卵巢、鱼卵中毒素浓度最高
第二节 真菌毒素及其检测方法
真菌毒素概述
由真菌产生的具有毒性的次生代谢产物，广泛污染农 作物、食品及饲料等植物性产品。
已发现300种真菌毒素，具有代表性的有黄曲霉毒素， 赫曲霉毒素A，玉米赤霉烯酮、麦角生物碱等。
真菌毒素中毒症及其特点
定义
人、畜禽食用被真菌毒素污染的食品或饲料 后发生的中毒现象，称真菌毒素中毒症，包括肝 脏毒性、肾脏毒性、神经毒性等。