植物组织蛋白提取
植物膜蛋白提取方法
植物膜蛋白提取方法说实话植物膜蛋白提取这事，我一开始也是瞎摸索。
我试过超声破碎法来提取。
就像敲鸡蛋，想把里头的东西弄出来那种感觉。
把植物组织放在缓冲液里，然后用超声仪来破碎细胞。
可是我发现这种法子很容易把膜也给弄破喽，得到的膜蛋白纯度不咋高，好多其他乱七八糟的东西都混进去了。
这就好比炒菜的时候把不该放的调料都倒进去了，最后味道全乱套了。
后来呢，我又尝试了差速离心法。
这就像挑豆子，把大的小的分开那样。
先把植物组织破碎后，通过不同的离心速度把细胞器啊什么的和膜蛋白分离开。
开始的时候我老是掌握不好离心速度和时间，要么离心速度不够，那些东西分不开，要么就是离心太久了，把想要的膜蛋白都给弄丢了一部分。
经过好多次的尝试，我才慢慢摸准了一点规律。
比如说，先低速度短时间离心去掉那些大的残渣，然后再逐步提高离心速度和延长时间来纯化膜蛋白。
我有段时间还听别人说密度梯度离心法好使。
这方法有点像从水里分层捞东西。
就是用不同浓度的溶液形成一个密度梯度，然后离心，让膜蛋白在适合它密度的那个层面停下来，这样和其他物质分离开。
但是这个方法操作起来比较麻烦，各种溶液的配制就要很精确，我就老在这上面出错，溶液配不对后续根本得不到像样的结果。
还有就是用化学试剂来提取。
比如说表面活性剂。
这就跟用清洁剂去油污有点像，表面活性剂能把膜蛋白从细胞膜上给“扒拉”下来。
不过这化学试剂的种类和浓度可得选好了，选错了就像洗衣粉放太多把衣服都洗坏了似的，膜蛋白的活性啥的就全没了。
我就在选择表面活性剂的种类和浓度上栽过跟头，试了好多种，结果都不理想，不是蛋白没有提取出来就是提取出来的蛋白变性了失去活性了。
如果是新手上路的话，我觉得差速离心法可以先试试，毕竟相对来说比较直白一点，虽然可能会碰到不少问题，但是在调整离心速度和时间的过程中可以慢慢学习。
可千万别像我刚开始的时候，只知道按照书上的数值来，实际情况和书上可能有差别，要多做尝试才行。
在操作的全过程里，实验设备的清洁也很重要。
植物核蛋白提取(蛋白组实验,质谱适用)
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邮箱：bestbio@ 电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如 果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
产品说明书
植物核蛋白提取试剂盒
（蛋白质组学实验适用）
货号：BB-319906
V1.7.0
试剂盒储存条件： 2-8℃保存。
开盖后组份按要求条件保存。
试剂盒组成：
产品组成
BB-319906-1
BB-319906-2
组份编号
规格
50 assays
100 assays
试剂 A：植物核蛋白提取液 A
100ml
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邮箱：bestbio@ 电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在 1 小时内完成，而且绝少 交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法较低。酶法提取制备的蛋白，回收率稍有提高，蛋白纯 度高，保持天然活性，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的 提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒（相关产品 BB-319910）。 请根据实际需要选择试剂盒。
产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3104 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3126 BB-3105 BB-3702 BB-3181 BB-3183 BB-3187
植物组织蛋白提取方法
植物蛋白质提取方法总汇一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g 样品加入3.5ml 提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4 C或11100rpm20min4 °C4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1 、1Mtris-HCl （PH8）45ml2、甘油（Glycerol ）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone ）6g这种方法针对SDS-PAGE垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1 、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20 C的条件下过夜，然后离心（4 C 8000rpm以上1 小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的3 -巯基乙醇），摇匀后离心（4C 8000rpm 以上1 小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15C 8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在 4 C待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80 C备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的3 -巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS 溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLO检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每ImITRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4 度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95 %乙醇：（2ml每ImITRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g ，5 min ，4 度，弃上清重复0.3M 盐酸胍/95 %乙醇步2 次沉淀中加入100%乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心：7500g ，5min，4 度，弃上清吹干沉淀1 % SDS溶解沉淀离心：10000g，10min ，4 度取上清-20 度保存（或可直接用于WESTERN BLO）T存在的问题：加入1%SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
大豆蛋白提取方法
大豆蛋白提取方法
大豆蛋白是一种优质的植物蛋白质，具有丰富的营养价值和广泛的应用前景。
目前，大豆蛋白的提取方法主要包括水提法、盐酸法、异丙醇法、超声波辅助法等。
水提法是传统的大豆蛋白提取方法，其原理是将大豆粉浸泡于水中，通过搅拌和加热使蛋白质溶解于水中，随后通过离心、过滤、干燥等过程得到蛋白质粉末。
该方法简单易行，但提取率较低，且不易去除杂质。
盐酸法是一种酸解法，其原理是将大豆粉与盐酸混合，通过酸解使蛋白质溶解于水中，随后通过中和、沉淀、洗涤、干燥等工艺得到蛋白质粉末。
该方法提取率较高，但酸性条件容易破坏蛋白质结构，影响蛋白质的功能性。
异丙醇法是一种有机溶剂法，其原理是将大豆粉浸泡于异丙醇中，通过超声波和搅拌使蛋白质溶解于异丙醇中，随后通过过滤、洗涤、干燥等过程得到蛋白质粉末。
该方法提取率较高，但工艺复杂，成本较高。
超声波辅助法是一种新型的大豆蛋白提取方法，其原理是将大豆粉浸泡于水中，通过超声波的作用使蛋白质溶解于水中，随后通过离心、过滤、干燥等工艺得到蛋白质粉末。
该方法不仅提取率高，且可以获得较好的蛋白质功能性和组织结构，具有广泛的应用前景。
总之，不同的大豆蛋白提取方法各有优缺点，具体应根据产品的需要和工艺条件进行选择。
食品中植物蛋白的提取分离实验报告
食品中植物蛋白的提取分离实验报告一、实验目的熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法，了解其意义及其应用价值。
二、实验原理植物叶蛋白或称绿色蛋白浓缩物(leaf protein concentration，简称LPC)，是从新鲜植物叶片中提取的高质量浓缩蛋白质，不仅是畜禽生长发育和生产畜产品的主要营养物质，而且目前也正成为人类的保健营养理想食品之一。
天然蛋白存在于为数甚多的植物体内，对其分离应依据人们的利用目的及提取蛋白含量和品质加以考虑。
天然蛋白质一般在溶液中呈稳定的亲水胶体状态，故LPC亦称叶蛋白胶。
其特点是：(1)水化作用即蛋白质分子表面附有能有效防止蛋白质分子沉淀析出的水化膜;(2)电荷排斥作用水化膜外还有电荷层(具阴、阳离子)能有效地防止蛋白质分子的凝集。
故溶液蛋白质颗粒(溶质)呈溶解状态;(3)欲提取植物组织中的蛋白质必须利用溶解度的差异进行分离纯化(如盐析、有机溶剂分级沉淀法、疏水层析、结晶、加热、离心分离等法)，利用分子大小和形状差异进行分离纯化(分子筛层析法);还可利用电荷性质的差异分离纯化(离子交换法)。
只要创造上述影响因素，即可使蛋白质从植物叶片中分离并沉淀出来。
植物叶蛋白提取一般遵循如下基本原则：尽可能提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失;减少对蛋白质的人为修饰;破坏蛋白与其他生物大分子的相互作用，并使蛋白质处于完全变性状态。
根据该原则，植物叶蛋白制备过程中一般需要有四种试剂①离液剂：尿素和硫脲等;②表面活性剂：又称去垢剂，早期常用NP-40、Tritonx-100等非离子型去垢剂，离子型去垢剂有SDS、胆酸钠、LiDS等，还有象CHAPS(含它的蛋白溶液可以冻存)与Zwittergent等双性离子去垢剂;。
拟南芥总蛋白提取
河北经贸大学毕业论文拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析专业名称：生物技术班级：2003 02学生姓名：***指导教师：**完成时间：2007年6月河北经贸大学毕业论文摘要植物蛋白提取方法有很多种，不论使用哪一种方法，均必须在操作中保存生物大分子结构的完整性，保存活性防止变性及降解现象的发生。
因蛋白空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在，遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失，因此选择的条件应为十分温和。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术作为分离鉴定生物大分子的一种实验技术手段，已经成为分子生物学实验室中的重要技术之一。
本试验采用三种不同的方法（两种蛋白溶解法，一种蛋白沉淀法）分别提取拟南芥不同组织（拟南芥整个植株，拟南芥叶片，拟南芥愈伤组织）的蛋白，然后用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行电泳分析，通过分析凝胶电泳图谱比较分析不同提取液提取蛋白的效果优劣从而确定较好的蛋白提取法，以及拟南芥植株不同组织含有的不同蛋白。
实验结果表明提取液2提取蛋白的效果最好，电泳条带最清楚，提取液3即三氯乙酸丙酮次之，提取液1即PBS溶液最次；并且拟南芥总蛋白跑的电泳谱带最多且最清晰，叶片蛋白谱带最少且较模糊，说明植物各组织的蛋白含量与种类存在差异，这与其功能性质具有相关性，叶片电泳谱带少说明叶片蛋白只含有总蛋白的一部分，由于根部蛋白受培养基中的琼脂的影响而出现一条粗带。
另外，本实验采取了快速脱色和脱色液脱色两种不同的脱色法，结果表明快速脱色法不仅简单方便效果更好适于推广致用。
关键词SDS-PAGE电泳；拟南芥蛋白；蛋白质分析I河北经贸大学毕业论文AbstractThere are many methods of the withdrawtion of the plant proteins, no matter any method, it must preserve the biology macromolecular structure to be integrity in the operation, preserve activity to prevent the degradation and degeneration phenomenon. Space for protein structure mainly rely on hydrogen bonding, salt bonding and the Vander Waals bonding, the existence of the event acid, alkali treatment, high temperature, Mechanical dramatic role and strong radiation can lead to the loss of activity, it should choose the conditions for the very modest. SDS-PAGE as the isolation and identification of biological macromolecules in one of laboratory means, it has become one of the important laboratory technique in Molecular biology.This experiment uses three different methods (two methods are proteins todissolve solution, one method is protein precipitation) withdraws the tissues, protein of Arabidopsis thaliana ( all the protein of Arabidopsis thaliana, the leaf protein of Arabidopsis thaliana, the injuries tissue protein of Arabidopsis thaliana),and then the protein atlas in different tissues and organs of Arabidopsis thaliana were analyzed with SDS polyacrylamidegel, and then, through the analysis of the SDS-PAGE picture we can analysis the different extract buffer and the different protein of the different organizations.Finally, the results indicate that the best method is extract buffer 2 —the SDS-PAGE picture is the clearest, the extract buffer 3 that is the trichloroacetic acid acetone next, the last is the extract buffer 1 which is PBS. The kinds of protein in the whole Arabidopsis thaliana were most and clearest in these three tissues, the kinds of protein in the leaf were least, this phenomenon can be explained by that the protein's content and the protein's type are different, this indicates that the number of the strip belt band has the relevance with the function nature, the phenomenon that the number of the leaf protein is the least indicate that the content and type of the leaf protein are only a part of the whole protein of Arabidopsis thaliana; as aII河北经贸大学毕业论文result of that the culture medium has influence with the root protein, the picture of the whole protein has a thick belt. In addition, this experiment takes two different bleaching methods, one is rapid bleaching, the other is bleaching liquid, the result shows that the rapid bleaching method not only simple and convenient, but also have a better effect, so we can use it extensively.Keywords SDS-PAGE electrophoresis; Arabidopsis thaliana protein; The protein analysisIII河北经贸大学毕业论文目录1 引言 (1)1.1拟南芥简介 (1)1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (2)1.3拟南芥蛋白提取 (3)1.4实验研究的意义 (3)1.5展望 (4)2材料、主要试剂及主要仪器 (4)2.1实验材料 (4)2.1.1拟南芥培养 (4)2.1.2培养拟南芥愈伤组织 (4)2.2主要试剂及药品 (5)2.2.1溶液的配置 (5)2.2.2所用主要药品和试剂 (7)2.3 主要仪器 (8)3实验方法 (8)3.1样品蛋白的制备——蛋白质的提取 (8)3.1.1提取液1、2和水提取蛋白 (8)3.1.2提取液3提取蛋白 (9)3.1.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (9)4结果与分析 (10)4.1不同方法提取拟南芥不同组织蛋白的效果比较分析 (10)4.2丙酮法提取蛋白与其它提取法的比较 (11)4.3拟南芥蛋白分子量分析 (13)5讨论 (13)5.1金属离子螯合剂在蛋白提取中起重要作用 (13)5.2关于谱带倾斜现象 (13)5.3关于拟南芥各组织蛋白 (13)5.4染色、脱色 (14)6结论 (15)参考文献 (16)致谢 (18)1河北经贸大学毕业论文拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析1 引言1.1 拟南芥简介拟南芥（Arabidopsis thaliana）十字花科。
蛋白提取方法
蛋白质提取的方法总汇 2005-4-15 23:00:00 来源：生命经1、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！2、植物组织蛋白质提取方法三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！3、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心： 7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇 2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
蛋白质有哪些提取方法
蛋白质有哪些提取方法蛋白质提取方法有很多种，根据提取目的和样品特点的不同，可以选择适合的方法。
下面将介绍一些常用的蛋白质提取方法。
1. 机械破碎法：机械破碎法是最简单、最常用的蛋白质提取方法之一。
可以通过研磨、绞碎等方法将样品直接破碎，然后使用缓冲液溶解并离心，收集上清液中的蛋白质。
这种方法适用于坚硬组织的提取，如植物种子、皮肤等。
2. 超声波法：超声波法是一种通过高频震荡来破碎细胞膜的方法。
将样品与缓冲液混合后，利用超声波仪器进行处理，使细胞破裂释放出蛋白质。
这种方法操作简便、高效，适用于细胞培养物和柔软组织的提取。
3. 高压法：高压法是利用高压力破坏细胞膜，使蛋白质从细胞内部释放出来。
将样品与缓冲液混合后，置于高压容器中，施加高压力进行破碎。
这种方法适用于细胞培养物和柔软组织的提取，可以得到较高纯度的蛋白质。
4. 化学法：化学法是通过使用化学试剂使细胞破裂，溶解蛋白质。
常用的化学试剂包括乙醇、酸、酶等。
根据试剂的选择和浓度的不同，可以得到不同纯度和类型的蛋白质。
这种方法操作简单，适用于多种样品的提取。
5. 溶剂提取法：溶剂提取法是一种将样品与有机溶剂混合后，通过振荡、搅拌等方法使目标蛋白质溶于溶剂中，然后用离心将蛋白质从溶液中分离出来的方法。
常用的有机溶剂包括甲醇、醋酸乙酯等。
这种方法适用于脂质较多的样品，如种子、脂肪组织等。
6. 离心法：离心法是将样品与缓冲液混合后进行离心，利用离心过程中的离心力使细胞破裂，然后收集上清液中的蛋白质。
这种方法操作简单，适用于多种样品的提取，尤其适用于含有较多细胞碎片的样品。
7. 电泳法：电泳法是一种利用电场将蛋白质在凝胶中分离的方法。
通过混合样品与凝胶，然后施加电场，不同大小和带电性的蛋白质会在凝胶中运动，从而实现分离。
这种方法适用于复杂样品的蛋白质组分分析和纯化。
总结起来，蛋白质的提取方法多种多样，根据样品特点的不同选择合适的方法非常重要。
以上介绍的方法只是其中的一部分，还有许多其他方法，如柱层析法、磁珠法等。
不同沉淀剂对酚抽法提取植物蛋白质效果比较分析
热带作物学报2021, 42(10): 3008 3016Chinese Journal of Tropical Crops不同沉淀剂对酚抽法提取植物蛋白质效果比较分析霍玉鑫1，甘番露1，王玉晶1，张雪妍1，王旭初1,2*，谢全亮1,2*1. 海南师范大学生命科学学院/热带岛屿生态学教育部重点实验室，海南海口 571158；2. 石河子大学生命科学学院和农学院，新疆石河子 832003摘要：酚抽法已经逐渐成为植物蛋白质组研究中通用的蛋白质提取方法，但在各种改进酚抽法中，应用到的沉淀试剂各不相同，致使蛋白沉淀得率、纯度和沉淀时间也各异，本研究以热带植物橡胶树叶片、胶乳和海马齿叶片为研究材料，在过饱和硫酸铵甲醇溶液、醋酸氨甲醇溶液和丙酮溶液沉淀剂下对比蛋白提取的效果，通过单向电泳检测、胶图质量分析、质谱鉴定、蛋白沉淀时间和得率比较，发现3种沉淀剂提取的蛋白样品1-DE图谱显示的蛋白条带数量均较多，但醋酸铵沉淀法提取蛋白图谱有条纹不清晰现象。
得出结论：丙酮沉淀法对橡胶树叶片和胶乳蛋白质的提取率较高，硫酸铵沉淀法对海马齿叶片蛋白质提取率较高。
过饱和硫酸铵甲醇溶液和丙酮沉淀剂提取的蛋白质质量较高，所得蛋白图谱背景清晰，质谱鉴定蛋白质信息量大。
研究结果可优化提取高质量植物蛋白质的方法，并有望为顽拗类植物蛋白质组学研究提供参考。
关键词：蛋白提取；橡胶树；海马齿；沉淀剂；聚丙烯凝胶电泳；质谱中图分类号：TQ936 文献标识码：AComparative Analysis of the Effects of Different Precipitation Agentson Extraction of Plant Protein by Phenol ExtractAll Rights Reserved.HUO Yuxin1, GAN Panlu1, WANG Yujing1, ZHANG Xueyan1, WANG Xuchu1,2*, XIE Quanliang1,2*1. Hainan Normal University / Key Laboratory of Tropical Island Ecology, Ministry of Education, College of Life Sciences, Haikou,Hainan 571158, China; 2. College of Life Science and Agricultural, Shihezi University, Shihezi, Xinjiang 832003, ChinaAbstract: The borax/PVPP/phenol (BPP) protocol is a widespread protein extraction method in plant proteome research.However, BPP extraction of plant protein, combined with different precipitation agents, the precipitation time, yield andpurity of extracted protein is strikingly different. In this study, Sesuvium portulacastrum and Para-rubber tree leaves,and rubber latex were used as the research materials. The plant protein was extracted and analyzed with precipitatingagents of supersaturated potassium ammonium sulfate alcohol solution, ammonium acetate methanol solution and ace-tone solution. Using the methods of SDS-PAGE, gel electrophoresis image quality, mass spectrum identification, settlingduration and comparative analysis of protein yield, it was showed that the protein bands extracted by the ammoniumacetate precipitation method were not evident. Hevea leaves and latex showed a higher yield of protein in acetone solution.S. portulacastrum leaves had a higher yield of protein in supersaturated potassium ammonium sulfate alcohol solution. Theclear background of gel electrophoresis figures was found for the supersaturated potassium ammonium sulfate ethanol so-lution and acetone solution. The comprehensive protein sequence information identified by mass spectrometry had a higherquality of precipitated protein. The research results can optimize the method of extracting high-quality plant protein, and itwill be expected to provide references for recalcitrant plant taxa proteomics research in the future.Keywords: protein extraction; Hevea brasiliensis; Sesuvium portulacastrum; precipitant; polypropylene gel electropho-resis; mass spectrometryDOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.10.035收稿日期 2020-12-15；修回日期 2021-03-08基金项目 国家自然科学基金项目（No. 32060072，No. 31860224）；中国博士后科学基金面上项目（No. 2021M693872）。
拟南芥总蛋白提取
河北经贸大学毕业论文拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析专业名称：生物技术班级：2003 02学生姓名：***指导教师：**完成时间：2007年6月河北经贸大学毕业论文摘要植物蛋白提取方法有很多种，不论使用哪一种方法，均必须在操作中保存生物大分子结构的完整性，保存活性防止变性及降解现象的发生。
因蛋白空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在，遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失，因此选择的条件应为十分温和。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术作为分离鉴定生物大分子的一种实验技术手段，已经成为分子生物学实验室中的重要技术之一。
本试验采用三种不同的方法（两种蛋白溶解法，一种蛋白沉淀法）分别提取拟南芥不同组织（拟南芥整个植株，拟南芥叶片，拟南芥愈伤组织）的蛋白，然后用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行电泳分析，通过分析凝胶电泳图谱比较分析不同提取液提取蛋白的效果优劣从而确定较好的蛋白提取法，以及拟南芥植株不同组织含有的不同蛋白。
实验结果表明提取液2提取蛋白的效果最好，电泳条带最清楚，提取液3即三氯乙酸丙酮次之，提取液1即PBS溶液最次；并且拟南芥总蛋白跑的电泳谱带最多且最清晰，叶片蛋白谱带最少且较模糊，说明植物各组织的蛋白含量与种类存在差异，这与其功能性质具有相关性，叶片电泳谱带少说明叶片蛋白只含有总蛋白的一部分，由于根部蛋白受培养基中的琼脂的影响而出现一条粗带。
另外，本实验采取了快速脱色和脱色液脱色两种不同的脱色法，结果表明快速脱色法不仅简单方便效果更好适于推广致用。
关键词SDS-PAGE电泳；拟南芥蛋白；蛋白质分析I河北经贸大学毕业论文AbstractThere are many methods of the withdrawtion of the plant proteins, no matter any method, it must preserve the biology macromolecular structure to be integrity in the operation, preserve activity to prevent the degradation and degeneration phenomenon. Space for protein structure mainly rely on hydrogen bonding, salt bonding and the Vander Waals bonding, the existence of the event acid, alkali treatment, high temperature, Mechanical dramatic role and strong radiation can lead to the loss of activity, it should choose the conditions for the very modest. SDS-PAGE as the isolation and identification of biological macromolecules in one of laboratory means, it has become one of the important laboratory technique in Molecular biology.This experiment uses three different methods (two methods are proteins todissolve solution, one method is protein precipitation) withdraws the tissues, protein of Arabidopsis thaliana ( all the protein of Arabidopsis thaliana, the leaf protein of Arabidopsis thaliana, the injuries tissue protein of Arabidopsis thaliana),and then the protein atlas in different tissues and organs of Arabidopsis thaliana were analyzed with SDS polyacrylamidegel, and then, through the analysis of the SDS-PAGE picture we can analysis the different extract buffer and the different protein of the different organizations.Finally, the results indicate that the best method is extract buffer 2 —the SDS-PAGE picture is the clearest, the extract buffer 3 that is the trichloroacetic acid acetone next, the last is the extract buffer 1 which is PBS. The kinds of protein in the whole Arabidopsis thaliana were most and clearest in these three tissues, the kinds of protein in the leaf were least, this phenomenon can be explained by that the protein's content and the protein's type are different, this indicates that the number of the strip belt band has the relevance with the function nature, the phenomenon that the number of the leaf protein is the least indicate that the content and type of the leaf protein are only a part of the whole protein of Arabidopsis thaliana; as aII河北经贸大学毕业论文result of that the culture medium has influence with the root protein, the picture of the whole protein has a thick belt. In addition, this experiment takes two different bleaching methods, one is rapid bleaching, the other is bleaching liquid, the result shows that the rapid bleaching method not only simple and convenient, but also have a better effect, so we can use it extensively.Keywords SDS-PAGE electrophoresis; Arabidopsis thaliana protein; The protein analysisIII河北经贸大学毕业论文目录1 引言 (1)1.1拟南芥简介 (1)1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (2)1.3拟南芥蛋白提取 (3)1.4实验研究的意义 (3)1.5展望 (4)2材料、主要试剂及主要仪器 (4)2.1实验材料 (4)2.1.1拟南芥培养 (4)2.1.2培养拟南芥愈伤组织 (4)2.2主要试剂及药品 (5)2.2.1溶液的配置 (5)2.2.2所用主要药品和试剂 (7)2.3 主要仪器 (8)3实验方法 (8)3.1样品蛋白的制备——蛋白质的提取 (8)3.1.1提取液1、2和水提取蛋白 (8)3.1.2提取液3提取蛋白 (9)3.1.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (9)4结果与分析 (10)4.1不同方法提取拟南芥不同组织蛋白的效果比较分析 (10)4.2丙酮法提取蛋白与其它提取法的比较 (11)4.3拟南芥蛋白分子量分析 (13)5讨论 (13)5.1金属离子螯合剂在蛋白提取中起重要作用 (13)5.2关于谱带倾斜现象 (13)5.3关于拟南芥各组织蛋白 (13)5.4染色、脱色 (14)6结论 (15)参考文献 (16)致谢 (18)1河北经贸大学毕业论文拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析1 引言1.1 拟南芥简介拟南芥（Arabidopsis thaliana）十字花科。
植物蛋白提取试剂盒说明书-索莱宝
第1页，共1页植物蛋白提取试剂盒
货号：BC3720
规格：50T /100T
有效期：至少1年。
产品内容：名称
50T 100T Storage 裂解液
50ml 100ml 2-8℃蛋白酶抑制剂（100×）
0.5ml 1ml -20o C
PMSF （100×）0.5ml 1ml 产品说明：
本试剂盒用于植物组织中提取总蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂，作用温和，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶的研究。
本品仅用于科研。
操作步骤：
1、植物组织蛋白的提取
1)取100-200mg 的植物组织放入液氮中（最好过夜），在液氮环境中将植物组织碾碎（越碎越好）；
2)加入1ml 的裂解液（加入10µL 蛋白酶抑制剂和10µL PMSF ），4o C 裂解
20min ，期间每隔5min 震荡1次；3)4o C ，14000转离心30min ；4)吸取上清至新的管中；2、进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
（提取好的蛋白建议保存于-80o C ，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。
)注意事项：1.实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境；2.PSMF （有毒）现用现加，因为PMSF 在水溶液中会快速降解；Solarbio。
植物蛋白提取实验的意义
植物蛋白提取实验的意义
植物蛋白提取实验的意义
植物蛋白提取实验是一种使用植物组织的方法，用于从植物细胞中提取植物蛋白质。
它是植物蛋白质组学方法的重要组成部分，可以用于提取多种植物的蛋白质。
蛋白质提取实验不仅可以识别植物蛋白质的种类，而且还可以分析植物蛋白质的性质。
这在了解植物蛋白质生理活性和其他生物学功能方面具有重要意义。
植物蛋白提取实验具有多种功能。
例如，它可以用于发现新的植物蛋白质，以及研究其在植物体内的功能。
它还可以用于研究植物蛋白质的结构、生物化学属性和功能。
另外，它还可以用于测定植物蛋白质的表达水平，从而了解植物代谢的情况。
植物蛋白提取实验还可以用于开发新型植物蛋白质分离技术，以及研究植物的发育过程和环境因子的影响。
总之，植物蛋白提取实验具有重要的研究价值，可以为植物蛋白质的结构、功能和表达水平提供有益的信息，有助于研究和发展植物细胞和植物基因组学。
- 1 -。
实验五：植物组织蛋白质提取与含量测定
1.4
1.0 5 Y
1.9
1.0 5 Z
四、实验步骤
三、样品蛋白质含量测定
2. 蛋白质含量测定：
两个原则来选择合适稀释倍数： 样品A595不能超过标准蛋白的最大A595值；
去除最小吸光度，选择中间吸光度。
将待测液最佳A595值(Y)代入标准曲线所得方程式中求出待测液中蛋白含量（X）
3. 蛋白质含量计算：
添加
• 按下页表所示依次加入各种试剂；
• 震荡，混匀； • 室温下静置5 min;
混匀
静置
测定 绘制
• λ =595 nm处测各管吸光度； • 绘制标准曲线，X=标准BSA含量，Y=吸光度，
四、实验步骤
一、标准曲线制作 管号 BSA(mL) 0.9%NaCl(mL) 0 0 1.0 1 0.2 0.8 2 0.4 0.6 3 0.6 0.4 4 0.8 0.2 5 1.0 1.0
定容
• 上清定容，用0.9% NaCl定容至10 mL(样品液)，
四、实验步骤
三、样品蛋白质含量测定
1. 样品液的稀释：
管号
稀释倍数（n） 样品液
1
5 0.2
2
10 0.1
3
15 0.1
4
20 0.1
0.9% NaCl
待测液 G-250(mL) A595
0.8
1.0 5 W
0.9
1.0 5 X
G-250(mL)
蛋白含量（ug）
5
0
5
20
5
40
5
60
5
80
5
100
5
X
振荡混匀，静置5 min，以0号管为空白对照 A595
生工生物工程(上海) 植物蛋白抽提试剂盒 产品说明书
产品说明书 / Specification Sheet植物蛋白抽提试剂盒产品编号：BSP053产品简介：本试剂盒在利用液氮充分磨碎植物组织的同时，采用特殊的试剂对植物细胞释放出来的蛋白进行沉淀，并使用广谱蛋白酶抑制剂抑制蛋白酶活性，最大程度地保持所抽提蛋白质的完整性。
而且最终的蛋白抽提物呈干粉状，有利于蛋白质的长期稳定保存。
提取的蛋白，包括膜蛋白，核蛋白，胞质蛋白以及在植物组织中含有的稀有蛋白在内的全蛋白。
分离得到的蛋白组分可应用于SDS-PAGE、Western blot等。
每次可以提取100mg植物组织，本试剂盒可以使用50次。
产品特点：1．提取的蛋白质是包括稀有蛋白在内植物细胞的全蛋白质。
2．可以进行50x100mg植物组织。
3．经过适当处理后，可以用于2D电泳，等电点聚焦等实验。
4．对植物细胞的裂解效果和植物细胞的非蛋白质成分去除效果高。
5．不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
运输和保存条件：常温下运输，收到后将Solution C和Solution D在-20度的条件下保存，Solution A和B 在2-8度的条件下保存，保质期一年。
组成：本试剂盒由Solution A和Solution B构成，可以使用50次。
1、BSP053-1 Solution A 50 ml2、BSP053-2 Solution B 100ml3、BSP053-3 Solution C 120ul4、BSP053-4 Solution D 1ml使用方法：1、实验前，将研钵和研槌置于-20℃冰箱中预冷；将植物组织置于-80℃冰箱中冷冻保存以备后用。
2、当植物组织仍处于冷冻状态时，用剪刀将植物组织剪碎。
3、将剪碎的植物组织置于预冷的研钵中，加入液氮保持植物组织处于冷冻状态，用研槌尽快地将植物组织研磨成粉末状。
4、取大约100mg的组织粉末，加入1ml Solution A和0.7ul Solution C的，将粉末悬浮后，置于-20℃冰箱中，静置45min。
植物蛋白提取
植物全蛋白提取方法：TCA丙酮沉淀法、Tris-HCl法、Trizol沉淀法提取法。
1TCA丙酮沉淀法基于蛋白在酸或疏水条件下变性使蛋白浓缩并去除污染物原理的TCA丙酮沉淀法，最早用于小麦蛋白的提取，是目前提取植物蛋白的常用方法之一。
具有降低次生代物质的干扰、减少蛋白降解等优点。
TCA能有效地抑制蛋白酶对蛋白质的水解作用，保证在制样过程中蛋白质不被降解；丙酮溶液能除去样品中的酚类及色素等干扰物质，同时实验过程中采用的高速离心办法能较好地去除多糖的影响。
然而该方法的一个最大缺点是蛋白质很难重新溶解，而且样品中的非蛋白成分很难除去，可能会丢失膜蛋白和疏水性蛋白，导致2-DE图谱上有明显的横纵条纹。
在研磨样品时加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP )或交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP )用来吸附样品中富含的酚、醌类物质。
它们能通过疏水键与酚类形成复合物，离心可以去除该复合物。
然而，TCA丙酮沉淀法中与蛋白共沉淀的污染物在随后的有机溶剂清洗步骤常难以去除，可以通过振荡和延长蛋白沉淀在裂解缓冲液中温育时间的方法来增加蛋白的溶解能力。
在提取的过程中同时加入了TCA、B-巯基乙醇及DTT 3种药剂可以更好的抑制蛋白质的水解及去除干扰物质。
TCA丙酮提取法耗时少且容易操作，一般作为植物蛋白提取的初始方案，该方法常用于幼嫩组织中蛋白的提取，对更为复杂的植物组织该方法并非最佳选择。
但该方法还是在植物蛋白的提取中占有重要位置，很多木本植物的样品应用该方法效果很好，如鹅掌楸叶片、巴东木莲的雌蕊柱头、槟榔叶片、银杏叶片及枝条、茶树叶片及芽、红豆杉的愈伤组织、石斛叶片等。
草本植物中的大豆叶片、生菜叶片、黄瓜叶片、番茄子叶、龙胆花芽、灰木相思叶片等应用该方法都获得了较清晰的2-DE图谱。
TCA protein precipitation protocolStock Solutions: 100% (w/v) Trichloroacetic acid (TCA) recipe: dissolve 500g TCA (as shipped) into 350 ml dH2O, store at RT. Precipitation Protocol:1.Add 1 volume of TCA stock to 4 volumes of protein sample.1. e. in 1.5ml tube with maximum vol., add 250讥TCA to 1.0ml sample.2.Incubate 10 min at 4°C.3.Spin tube in microcentrifuge at 14K rpm, 5 min.4.Remove supernatant, leaving protein pellet intact. Pellet should be formed from whitish,fluffy ppt.5.Wash pellet with 200^l cold acetone.6.Spin tune in microfuge at 14K rpm, 5min.7.Repeat steps 4-6 for a total of 2 acetone washes.8.Dry pellet by placing tube in 95°C heat block for 5-10 min to drive off acetone.9.For SDS-PAGE, add 2X or 4X sample buffer (with or without bME) and boil smaple for10 min in 95°C herat block before loading smaple onto polyacrylamide gel.2Trizol沉淀法与TCA丙酮沉淀法相比，Trizol沉淀蛋白质的方法可有效地除去色素、酚类等干扰电泳的化学物质，特别是对植物样品中高丰度蛋白Rubisco1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/ 加氧酶(Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase，通常简写为RuBisCO)。
动植物总蛋白微量提取试剂盒说明书
动植物总蛋白微量提取试剂盒说明书产品编号：BTN90707规格：50T产品及特点：本产品用于快速提取动植物总蛋白，用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析以及蛋白活性测定等。
本产品的其主要特点是：1.提取过程十分简便，匀浆离心即可，整个过程只需要十几分钟。
2.采用独特的温和裂解成分，蛋白保持天然活性。
3.适用于各种动植物组织材料，包括新鲜或冰冻的材料。
4.得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、Western印迹分析以及蛋白活性测定等下游实验。
5.一次可以处理100mg左右的样品，足够进行几十次SDS-PAGE mini胶电泳检测。
规格及成分：成分规格溶液A50ml5×SDS-PAGE上样液1ml说明书1份保存条件：常温运输，4℃保存，5×SDS-PAGE上样液短期4℃保存，长期可放-20℃保存，有效期一年。
使用方法：使用前，最好请在溶液A中加入自备的1M DTT溶液50μL。
一：匀浆法注意：对致密的实体组织（如肌肉），最好用Polytron式匀浆机匀浆处理。
1.称取动物或植物组织样品100mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到10-15mL的塑料离心管中。
2.加入1ml溶液A，在冰上用Polytron式匀浆机匀浆，直到没有肉眼可见的组织块。
为了避免产热，可以分多次匀浆，其间放冰上让匀浆液冷却。
3.将匀浆液全部转移到1.5mL的塑料离心管中。
4.4℃12,000g离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
5.将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。
如果要测定蛋白浓度，请使用BCA方法，不要使用Bradford方法（如果要使用，也需要把样品稀释10倍后再测定，否则溶液A中的成分会影响浓度侧定）。
如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分到离心管中，加入5×SDS-PAGE上样缓冲液（终浓度为1×），在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。
中药提取蛋白的原理是什么
中药提取蛋白的原理是什么中药提取蛋白是指通过一系列的生物化学方法，将中药中的蛋白质分离、纯化并获取其功能活性成分，以达到药理治疗的目的。
中药蛋白提取的原理是基于生物大分子的生物化学特性和中药生物活性成分间的相互作用。
通常来讲，中药蛋白提取含有以下三个阶段：一、细胞破解和蛋白解离阶段中药中的蛋白质分布在细胞内或细胞外基质中，如果是肉眼可见的组织如植物或动物的根、茎、叶、花、肌肉等，就必须选择合适的方法对其进行细胞破解和蛋白解离。
这些方法包括：离心分离、高压破碎、微波破壁、超声波破碎、冷冻的快速破碎等。
对于肉眼不可见的细胞如真菌、细菌、酵母等，又需要采用其它的手段进行细胞破碎与蛋白解离。
比如常用的超声波破碎加化学方式，可以使用缓冲液、皂素、酵素等辅助溶解。
而对于含有高酚（如没药、丹参、鸡血藤）和黏性多糖（如天麻、丝瓜、灵芝、蝉蜕）物质的中药，还需要加入酸或碱来降低pH值，利用离子对的凝集作用来破坏细胞壁和在细胞膜上的蛋白质结构。
二、分离纯化阶段将提取液中的蛋白质，通过一些分子间的相互作用，如静电作用、疏水作用、亲和作用、分子筛分离及凝胶色谱等手段进行分离纯化。
在这个阶段中，需要根据不同的分离方法来选择不同的分离试剂，以达到更好的分离效果。
其中比较常用的分离方法包括酸碱分离法、高速离心法、层流电泳分离法、亲和层析法、凝胶色谱和高效液相色谱等。
酸碱分离法：有些中药中的蛋白质容易受到酸碱作用而病毒失去其生物活性，这种方法可以方便地得到纯度较高的病毒。
高速离心法：高速离心应用于获得蛋白质的总提取物，以去除不适合筛分或过滤的物质。
层流电泳分离法：通过电场的作用，大分子向电极移动较缓慢，小分子移动较快，在电泳溶液中，若分离样品的大小，电荷，形状不同，则可以得到不同的生物分子，如蛋白质、DNA、RNA等。
亲和层析法：亲和层析法利用化学活性色谱柱的生物特性基于静电作用或其他非共价组分间的部分相互作用，在活性色谱柱中保留细胞外蛋白质，以达到分离目的。
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蛋白提取方法：
1、液氮研磨成粉
2、转移粉末（0.1-0.3g）到2ml离心管中，加10%TCA/丙酮至满管，涡旋混匀；4°；16000g；离心3min；弃上清。
3、用含0.1M醋酸铵的甲醇加满离心管，混匀；4°；16000g离心3min；弃上清。
4、用丙酮加满离心管，涡旋混匀；4°；16000g离心3min；弃上清。
5、室温晾干，去除残余丙酮。
6、按0.4-0.8ml/0.1g比例的起始材料加SDS extraction buffer混匀
30min；4°；16000g离心3min；保留上清。
加与上清等体积的苯酚（ph8.0）彻底混匀30min；4°；16000g离心3min；转移酚相，加与酚相等体积的水，水洗一次，保留酚相至一新的离心管中，加0.1M乙酸铵的甲醇至满管；-20°过夜；4°16000g 离心5min；小心地移除上清，可见沉淀。
7、用甲醇清洗沉淀一次，丙酮清洗至沉淀为白色（5-6次）每次混匀都要涡旋混匀如上离心。
将蛋白空气晾干（不要太干，丙酮挥发完即可否则蛋白干粉不好溶）。
溶液配比：
1、TCA/丙酮（10%TCA；0.07%巯基乙醇）：
10g TCA（三氯乙酸）70ul巯基乙醇丙酮定容至100ml
2、丙酮（含0.07%巯基乙醇）：140ul巯基乙醇加入200ml丙酮中。
3、SDS extraction buffer：30%蔗糖；2%SDS；0.1M Tris-HCl(Ph8.0)
5%巯基乙醇；
即：30g蔗糖；2g SDS；5ml巯基乙醇；用[0.1M Tris-HCl(ph8.0)]定容至100ml。
4、0.1M Tris-HCl(ph8.0)：Tris:1.21g溶于80ml的超纯水，浓HCl调
ph8.0，定容至100ml。
5、0.1M乙酸铵/甲醇：乙酸铵1.54g；甲醇定容至200ml。
6、甲醇
7、Tris饱和的苯酚（ph8.0）。