LBY-NJ4型血小板聚集仪操作手册
浊度法测量血小板聚集的变异性分析
![浊度法测量血小板聚集的变异性分析](https://img.taocdn.com/s3/m/b679896d02768e9951e73897.png)
浊度法测量血小板聚集的变异性分析摘 要:目的考察浊度法测量血小板聚集的稳定性及其变异幅度。
方法采用北京泰利康信血小板聚集仪(LBY-NJ4),用质控液检测仪器本身与常规操作引起的变异性,用同一富血小板血浆(PRP)检测不同诱导剂下的血小板聚集参数的变异性,聚集参数包括三项:最大聚集率、最大聚集速率和聚集曲线下面积。
参数的变异性用统计学的变异系数(CV)表示。
结果质控液检测结果表明,血小板最大聚集率和曲线下面积的变异系数均小于3%。
在ADP、胶原和凝血酶三种诱导剂作用下,血小板最大聚集率,聚集曲线下面积的变异系数分别小于4%和7%。
凝血酶诱导血小板聚集,其最大聚集速率的变差幅度较大。
结论仪器本身与常规操作引起的变异性很小。
对于ADP和胶原诱导的血小板聚集,三项聚集参数稳定性较好,可以用于未来的药效学实验。
对于凝血酶诱导的血小板聚集,建议使用最大聚集率和聚集曲线下面积进行药效评价。
关键词:浊度法,血小板聚集,变异系数1 引言浊度法测量血小板聚集始于上世纪60年代,在全世界临床与实验研究中广为应用,被尊为检测血小板聚集的金标准[1,2]。
光学比浊法血小板聚集检测因其操作简便,易于掌握,成为检测血小板聚集功能的常规,对于临床出血与血栓性疾病的诊断及疗效监测有指导意义。
然而,此法影响因素多,导致实验结果重复性差,组内变差较大,致使部分检验工作者对其应用价值存疑[3]。
为了研究与分析浊度法测量血小板聚集的变差来源与幅度,我们采用同一样本的富血小板血浆和不同诱导剂,对血小板聚集仪得到的聚集曲线从聚集速率、聚集峰值和聚集曲线下面积三个方面分析了实验变异性。
2 材料与方法2.1实验动物SD大鼠,雄性,10只,体重240-260g,SPF级,许可证号SC XK(京)2012-0001,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
2.2实验试剂二磷酸腺苷(ADP)(北京泰利康信科技有限公司),批号:20140808D;胶原(美国Chrono-log 公司),批号:3405;凝血酶(长春远大国奥制药有限公司),批号:20140801;0.9%氯化钠注射液(石家庄四药有限公司),批号:130731405;枸橼酸纳(国药集团化学试剂有限公司),批号:20140306;血小板聚集仪质控物及复溶液(北京泰利康信科技有限公司),批号:20140808D。
血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)使用操作说明
![血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)使用操作说明](https://img.taocdn.com/s3/m/a199200b52d380eb63946d09.png)
血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)使用操作方法1、平衡室温取出血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)、血小板抗体检测用指示红细胞(固相凝集法)、血小板抗体筛检细胞(冻干粉)放在室温中平衡至室温。
2、检测样本准备将血浆(血清)3000转离心5-10分钟。
3、配制浓缩洗涤液将浓缩洗涤液以1:24比例与蒸馏水混合(满瓶20ML浓缩洗涤液兑480ML蒸馏水)。
4、配制血小板抗体筛检细胞(冻干粉)将冻干粉依比例与生理盐水混合(冻干粉0.5ML与0.5ML生理盐水混合),混合后放置5分钟,使用前轻轻摇匀。
5、标识由包装内取出一条反应板,平衡至室温。
标记阳性对照、阴性对照、检测样本序号。
6、加血小板向反应板孔中各加入1滴(约50µl)混匀的血小板悬液,轻摇反应板约10秒钟。
7、固着将反应板用平板离心机以50g离心5分钟(专用血小板离心机用程序1)。
8、洗涤将反应板用洗涤液洗3至4次,洗涤过程中轻摇微孔板,然后再轻轻甩掉洗涤液。
最后一次洗涤后将残余液体蘸干。
9、加样先向各孔中加入2滴(100µl)低离子强度溶液,再分别滴加1滴(50µl)阳性对照、阴性对照、检测样本。
10、孵育将反应孔用封口胶纸封好,轻摇混匀后置湿盒中37℃孵育30分钟(或气浴孵育35至40分钟)。
11、洗涤(同步骤8)反复洗涤5至6次。
12、加指示物立即向上述各孔加入1滴抗人IgG(50µl)和1滴(50µl)混匀的血小板抗体检测用指示红细胞悬液,轻轻振荡混匀。
13、离心将反应板以200g离心5分钟(专用血小板离心机用程序2)。
14、结果判定观察并记录实验结果。
阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面,而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央,弱阳性反应格局介于两者之间。
血小板操作说明
![血小板操作说明](https://img.taocdn.com/s3/m/36aa790b6c85ec3a87c2c5a7.png)
血小板聚集仪中文操作手册第一章原理和功能介绍一、综述血管损伤后,血小板黏附于血血管的损伤处,聚集、合成前列腺素,释放5-羟色氨、ADP、ATP。
前列腺素的合成与释放产物会引起更进一步的聚集。
同时血浆凝固开始、凝血酶产生、纤维蛋白形成和血小板栓子堵塞损伤的血管。
由于细胞膜糖蛋白、细胞内存储颗粒、血小板酶血浆凝血因子缺乏常引起过量出血,常见的临床表现为:鼻衄、损伤、擦伤失血过多。
另外,外科手术的患者尽管经常存在血小板功能障碍,但经常到出血不止或术后出血不止才能发现。
在1962年,Born描述了用ADP诱导的血小板聚集并/改革用比浊计测量富血小板血浆的聚集过程。
这种改变包括:预温37度,搅拌和用记录笔记录一定时间内透过光的变化。
在1977年,Feinman设计了一台仪器,同时测量血小板聚集和ATP释放。
这台仪器利用紫外光测量聚集,在聚集光路的的右侧放置敏感的光度计,通过荧光的产生测量ATP 的释放。
在1980年,Cardinal和Flower设计了电阻法测量全血中的聚集,非常小的电流通过两个电极,当电极刚与血接触时,在其表面会附着一层血小板,当聚集剂加入后,更多的血小板会聚集在其表面,引起电阻增加。
电阻法的测量又构成了一台全血荧光聚集仪。
在1984年,Wojenman和Slier设计了一种快速的方法去进行常规实验室的操作。
这种方法就是同时测量聚集和ATP的释放,用血量为5ml,30分钟内完成检测。
这种方法避免富血小板血浆的准备时间。
在1985年johnson创造了一种方法去检测洗涤血小板的钙流,这种方法有利于研究钙离子在血小板聚集中的作用。
二、血小板聚集仪的功能-----定量血小板的功能缺陷:粘附缺陷von Willebrand disease—定量或定性血浆内vWF因子的缺乏,Bernard-Soulier Syndrome-伯-苏综合症(BBS)亦称巨血小板综合症缺乏血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)聚集缺陷Afibrinogenemia-纤维蛋白原缺乏血症Glanzmann’s Thrombasthenia-苏格茨曼血小板功能不全缺乏膜糖蛋白IIb-IIIa血小板颗粒释放缺陷储存池缺陷(SPD)-致密颗粒内容物缺陷Gray platelet syndrome-α颗粒内容物缺陷(PF4、vWF、血小板反应素、促血小板生长因子PDGF)花生四稀酸代谢异常血小板膜花生四稀酸释放缺陷环氧化酶缺陷血栓素酶合成缺陷正常颗粒内容物和花生四稀酸代谢途径释放异常胞内钙流缺陷早期反应缺陷-肌球蛋白轻链磷酸化,磷脂酰肌醇代谢对特异诱导剂的受体缺陷或受体受阻(包括巨血小板综合症和血小板无力症)肾上腺素受体缺乏-脊髓增生混乱(MPD)胶原受体缺乏U46,619药物缺陷-血栓素A2类似物血小板凝集活性缺陷-血小板构成凝块的骨架三、原理血小板聚集是指血小板相互粘附的过程。
血液细胞分析仪标准操作程序1
![血液细胞分析仪标准操作程序1](https://img.taocdn.com/s3/m/f7e80075ff4733687e21af45b307e87100f6f863.png)
血液细胞分析仪标准操作程序1、电源要求1.1分析仪必须在良好接地条件下使用;1.2必须使用指定规格的熔断器和随机提供的电源线;1.3开启分析仪前确认输入电压符合分析仪要求。
2、环境要求2.1 正常工作温度范围:15C〜30℃;2.2运行温度范围:10℃〜40℃;2.3正常工作湿度范围:30%〜85%;2.4正常工作大气压力范围:70kPa-106kPa;2.5环境应尽可能无尘、无机械振动、无污染、无大噪音源和电源干扰;2.6建议在运行设备之前对实验室的电磁环境进行评估;2.7远离强电磁场干扰源;2.8不要靠近电刷型电机、闪烁荧光灯和经常开关的电接触性设备;2.9避免阳光直射或置于热源及风源前,选择一个通风良好的位置;2.10具有良好的接地环境;室内使用。
2.11不要将主机放置在斜面上。
3、故障处理若出现故障,可点击界面下方的故障信息区获取故障帮助信息,还可点击“消除故隙”按钮,一键消除所有可消除的故障。
具体参见使用说明书第11章故障处理。
4、日常维护每日:执行正常关机并进行探头液维护;异常断电导致关机的建议开机后做一次探头液维护;每月:应执行一次DlFF池探头清洁液浸泡;应使用蒸锵水清洁一次拭子底部(不能使用酒精);若分析仪长时间闲置不用(1周以上)或长途运输前,应执行“打包”操作。
(详见使用说明书第10章服务)开机前的准备检查试剂是否足量,有无浑浊变质,试剂管道有无扭结,与主机的连接是否可靠;请务必使用厂家配套试剂和校准质控品,构成完整检测系统,否则不保证结果的准确性。
检查外置计算机的网络电缆是否与主机连接就绪;检查外置计算机与外接设备的连接是否正确;检查电源连接是否正确。
2、开机和用户登录将主机左侧的“0/1”电源开关置于“I”以开启主机电源。
启动外置计算机,双击桌面上终端软件的图标,运行已安装的终端软件。
在登录对话框中输入用户名和密码后,进入主界面,仪器自动进行开机初始化。
开机初始化结束后,可进入“回顾”界面,以查看开机本底的检测结果。
血小板聚集仪中文操作手册
![血小板聚集仪中文操作手册](https://img.taocdn.com/s3/m/f9d6eb100b4e767f5acfcea7.png)
血小板聚集仪中文操作手册第一章原理和功能介绍一、综述血管损伤后,血小板黏附于血血管的损伤处,聚集、合成前列腺素,释放5-羟色氨、ADP、ATP。
前列腺素的合成与释放产物会引起更进一步的聚集。
同时血浆凝固开始、凝血酶产生、纤维蛋白形成和血小板栓子堵塞损伤的血管。
由于细胞膜糖蛋白、细胞内存储颗粒、血小板酶血浆凝血因子缺乏常引起过量出血,常见的临床表现为:鼻衄、损伤、擦伤失血过多。
另外,外科手术的患者尽管经常存在血小板功能障碍,但经常到出血不止或术后出血不止才能发现。
在1962年,Born描述了用ADP诱导的血小板聚集并改革用比浊计测量富血小板血浆的聚集过程。
这种改变包括:预温37度,搅拌和用记录笔记录一定时间内透过光的变化。
在1977年,Feinman设计了一台仪器,同时测量血小板聚集和ATP释放。
这台仪器利用紫外光测量聚集,在聚集光路的的右侧放置敏感的光度计,通过荧光的产生测量ATP的释放。
在1980年,Cardinal和Flower设计了电阻法测量全血中的聚集,非常小的电流通过两个电极,当电极刚与血接触时,在其表面会附着一层血小板,当聚集剂加入后,更多的血小板会聚集在其表面,引起电阻增加。
电阻法的测量又构成了一台全血荧光聚集仪。
在1984年,Wojenman和Slier设计了一种快速的方法去进行常规实验室的操作。
这种方法就是同时测量聚集和ATP的释放,用血量为5ml,30分钟内完成检测。
这种方法避免富血小板血浆的准备时间。
在1985年johnson创造了一种方法去检测洗涤血小板的钙流,这种方法有利于研究钙离子在血小板聚集中的作用。
二、血小板聚集仪的功能-----定量血小板的功能缺陷:粘附缺陷von Willebrand disease—定量或定性血浆内vWF因子的缺乏,Bernard-Soulier Syndrome-伯-苏综合症(BBS)亦称巨血小板综合症缺乏血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)聚集缺陷Afibrinogenemia-纤维蛋白原缺乏血症Glanzmann’s Thrombasthenia-苏格茨曼血小板功能不全缺乏膜糖蛋白IIb-IIIa血小板颗粒释放缺陷储存池缺陷(SPD)-致密颗粒内容物缺陷Gray platelet syndrome-α颗粒内容物缺陷(PF4、vWF、血小板反应素、促血小板生长因子PDGF)花生四稀酸代谢异常血小板膜花生四稀酸释放缺陷环氧化酶缺陷血栓素酶合成缺陷正常颗粒内容物和花生四稀酸代谢途径释放异常胞内钙流缺陷早期反应缺陷-肌球蛋白轻链磷酸化,磷脂酰肌醇代谢对特异诱导剂的受体缺陷或受体受阻(包括巨血小板综合症和血小板无力症)肾上腺素受体缺乏-脊髓增生混乱(MPD)胶原受体缺乏U46,619药物缺陷-血栓素A2类似物血小板凝集活性缺陷-血小板构成凝块的骨架三、原理血小板聚集是指血小板相互粘附的过程。
血凝分析仪项目标准操作程序
![血凝分析仪项目标准操作程序](https://img.taocdn.com/s3/m/f0535041312b3169a451a4a6.png)
SOP_09-17 血凝分析仪项目标准操作程序一、目的:统一项目操作规程,严格检验质量标准,为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围:血栓/止血检验项目三、操作人员:检验科授权工作人员四、操作步骤:凝血酶原时间PT测定1、检测原理:待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶,使凝血酶原转变为凝血酶,后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白,测定凝固所需的时间,即为待测血浆凝血酶原时间PT。
是外源性凝血系统较理想和常用的筛选试验。
2、试剂盒组成PT凝血活酶:10支本批试剂国际敏感指数ISI值:1.20标本来源与保存静脉采血,置于含有1/10体积0.109mol/L枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料试管或硅化玻璃管中,3000rpm离心10分钟,收集上层液(血浆,黄色)。
2-8℃保存,不宜超过12小时。
3、方法3.1取PT凝血活酶冻干品一支,加入2.2ml蒸馏水轻摇溶解。
3.2取待测血浆(参比血浆)0.1ml,37℃孵育2分钟,加入37℃预温凝血酶溶液0.2ml(上机加0.1ml),混匀,立即启动秒表,记录凝固时间,即为PT值。
4、数据处理凝血酶原时间比值(PTR)=待测血浆PT/参比血浆PT国际标准化比值(INR)=PTR ISI正常值1.以时间表示:11-15秒2.以PTR表示:0.95-1.243.以INR表示:0.94-1.295、注意事项1)采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器,贮血升微使用塑料试管或硅化玻璃管。
不宜使用普通玻璃管,避免凝血因子活化。
2)血时止血带不可束缚过紧,并不应超过5分钟,否则导致凝血及纤溶因子活化。
3)浆制备必须及时,血浆分离应尽量去除血小板。
血浆分离后应尽快测定。
4)血浆预温不宜超过10分钟。
5)凝血活酶预温不可超过30分钟。
6)用浊度法测定终点的自动化凝血仪,溶血和较明显的黄疸及脂血会影响测定结果,此时宜用手工法或电子机械式凝血仪测定。
7)红细胞比容超过55%时,应调整抗凝剂用量。
第二篇-血小板聚集功能测定
![第二篇-血小板聚集功能测定](https://img.taocdn.com/s3/m/66b4c6bccfc789eb162dc84e.png)
操作步骤
1.样品制备
(1)抗凝剂采用3.28%的枸橼 酸钠,抽血量与抗凝剂应为9:1。
(2)PRP(富血小板血浆)制 备:抗凝血500转/分,5min。
(3)PPP(贫血小板血浆)制备: 将抗凝管第二次离心,3000转 /min,10min。
2.测试步骤:
(1)加PPP 200 ul于测试杯中, 放预热孔中预热备用。
(2)加PRP 200 ul于另一测试 杯中(杯内预先放入搅拌珠一 粒),放预热孔中预热备用。
(3)用微量进样器吸取11ul ADP聚集剂备用。
(4)将盛有PPP血浆的测试杯插 3a测试孔中。
(5)按“PAG”键,然后按“PPP” 键,5a显示屏显示“0”,表明已 调好基准点。
(6)将PPP测试杯取出,将PRP 测试杯插到底,按“PRP”键,5a 显示屏显示某数值(即为对应血 小板数)。
Байду номын сангаас
(7)将预先吸好试剂的微量进 样器沿管角插到底,迅速注入试 剂,即刻按“TEST”键,仪器自 动完成测试,完毕后5a显示屏显 示当时的血小板聚集率。
临床粘度计、血小板聚集仪、血沉仪的保养与维护
![临床粘度计、血小板聚集仪、血沉仪的保养与维护](https://img.taocdn.com/s3/m/2308a2f1afaad1f34693daef5ef7ba0d4a736daa.png)
临床粘度计、血小板聚集仪、血沉仪的保养与维护
一、黏度计的调校与维护
1、毛细管黏度计的调校与维护
(1)仪器调校:用重蒸馏水在37℃时测得时间比D=(t- t。
)/ t,要求D≤1%。
2、旋转式黏度计的调校与维护
(1)仪器调校:用国家计量单位所标定的标准牛顿油,按仪器说明进行标定。
日常工作中也可以用重蒸馏水检测仪器,看水的黏度是否为0.69mPa.s(37℃)
(2)仪器维护:电压稳定、机芯防尘、及时清洗测试头和剪血板及剪血锥。
二、血小板聚集仪维护和保养
(1)不论试验或清洗都不可用硬物碰电极,以免损伤电极。
(2)清洗时根据其聚集程度,可先用10%的次氯酸钠清洗,再用蒸馏水清洗,最后用生理盐水清洗,清洗完毕用无尘吸水纸吸干,插入干净的反应杯中放回检测位以免碰坏。
三、血沉自动分析仪的使用和维护
1、仪器的安装
(1)应安装在清洁、通风处(室内温度应在15℃-32℃,相对湿度应≤85%),避免潮湿。
(2)应安装在稳定的水平实验台上(最好是水泥台)。
禁止安装在高温、阳光直接照射处;应远离高频、电磁波干扰源。
2、仪器的维护保养
(1)使用过程中,要避免强光的照射,否则会引起检测器疲劳,计算机采不到数据;
(2)使用前要按程序清洗仪器,同时要定期彻底清洗并进行定期校检;
(3)仪器要保持水平状态。
3、仪器操作。
血小板聚集仪中文操作手册
![血小板聚集仪中文操作手册](https://img.taocdn.com/s3/m/f9d6eb100b4e767f5acfcea7.png)
血小板聚集仪中文操作手册第一章原理和功能介绍一、综述血管损伤后,血小板黏附于血血管的损伤处,聚集、合成前列腺素,释放5-羟色氨、ADP、ATP。
前列腺素的合成与释放产物会引起更进一步的聚集。
同时血浆凝固开始、凝血酶产生、纤维蛋白形成和血小板栓子堵塞损伤的血管。
由于细胞膜糖蛋白、细胞内存储颗粒、血小板酶血浆凝血因子缺乏常引起过量出血,常见的临床表现为:鼻衄、损伤、擦伤失血过多。
另外,外科手术的患者尽管经常存在血小板功能障碍,但经常到出血不止或术后出血不止才能发现。
在1962年,Born描述了用ADP诱导的血小板聚集并改革用比浊计测量富血小板血浆的聚集过程。
这种改变包括:预温37度,搅拌和用记录笔记录一定时间内透过光的变化。
在1977年,Feinman设计了一台仪器,同时测量血小板聚集和ATP释放。
这台仪器利用紫外光测量聚集,在聚集光路的的右侧放置敏感的光度计,通过荧光的产生测量ATP的释放。
在1980年,Cardinal和Flower设计了电阻法测量全血中的聚集,非常小的电流通过两个电极,当电极刚与血接触时,在其表面会附着一层血小板,当聚集剂加入后,更多的血小板会聚集在其表面,引起电阻增加。
电阻法的测量又构成了一台全血荧光聚集仪。
在1984年,Wojenman和Slier设计了一种快速的方法去进行常规实验室的操作。
这种方法就是同时测量聚集和ATP的释放,用血量为5ml,30分钟内完成检测。
这种方法避免富血小板血浆的准备时间。
在1985年johnson创造了一种方法去检测洗涤血小板的钙流,这种方法有利于研究钙离子在血小板聚集中的作用。
二、血小板聚集仪的功能-----定量血小板的功能缺陷:粘附缺陷von Willebrand disease—定量或定性血浆内vWF因子的缺乏,Bernard-Soulier Syndrome-伯-苏综合症(BBS)亦称巨血小板综合症缺乏血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)聚集缺陷Afibrinogenemia-纤维蛋白原缺乏血症Glanzmann’s Thrombasthenia-苏格茨曼血小板功能不全缺乏膜糖蛋白IIb-IIIa血小板颗粒释放缺陷储存池缺陷(SPD)-致密颗粒内容物缺陷Gray platelet syndrome-α颗粒内容物缺陷(PF4、vWF、血小板反应素、促血小板生长因子PDGF)花生四稀酸代谢异常血小板膜花生四稀酸释放缺陷环氧化酶缺陷血栓素酶合成缺陷正常颗粒内容物和花生四稀酸代谢途径释放异常胞内钙流缺陷早期反应缺陷-肌球蛋白轻链磷酸化,磷脂酰肌醇代谢对特异诱导剂的受体缺陷或受体受阻(包括巨血小板综合症和血小板无力症)肾上腺素受体缺乏-脊髓增生混乱(MPD)胶原受体缺乏U46,619药物缺陷-血栓素A2类似物血小板凝集活性缺陷-血小板构成凝块的骨架三、原理血小板聚集是指血小板相互粘附的过程。
血小板聚集仪操作规程1
![血小板聚集仪操作规程1](https://img.taocdn.com/s3/m/f33a94bf65ce05087632134e.png)
血小板聚集仪操作规程1.开机:打开仪器电源,然后打开打印机及显示器的电源,最后打开电脑的电源。
2.预热:等待约20分钟,仪器预热可达到检测温度。
3.登录:进入血小板聚集运行软件HemoRam,屏幕显示血小板聚集操作界面。
无需输入登录名,直接点击进入即可。
4.检测光路:在工具栏File中选择Maintenance中的Optical,分别拿出一个石英杯,并在石英杯中加入400μl的蒸馏水,放在1、2、3、4通道上,按下仪器上开始键,进行光路检测。
5.检测:(1)在收到病人标本后,将病人标本混匀后以1000 g∕5分钟离心,此时病人血清为富血小板血清。
(2)在病人标本离心期间,选择软件工具栏上的第一个图标,进行病人信息的录入,逐项录入后点击save进行保存。
(3)选择软件工具栏中的第二个图标,在Worklist ID栏中选择“1”,进行检测项目和病人病案号的选择与输入。
注意:选好检测项目后,注意改变其单位、最终浓度。
(4) 将离心好的富血小板血清的病人标本放入试管架内,从血清中抽出225μl富血小板血清沿石英杯壁缓慢打入,避免气泡的产生。
将石英杯放在仪器上预热。
(5)再次混匀病人标本后以1000g∕10分钟离心,使病人标本血清成为乏血小板血清。
(6)从病人第二次离心的血标本中,抽取250μl的乏血小板血清沿石英杯壁缓慢打入,不要产生气泡。
(7)点击软件工具栏中的第三个图标,在Worklist ID栏中选择与在检测项目选择的Worklist ID相同的编码。
点击Begin run开始进行检测。
将装有250μl乏血小板血清的石英杯放入检测通道,点击仪器上的开始键,两秒钟后在Steps表中的pppO.D出现检测值。
当pppO.D在正常范围数值后,取出石英杯。
(8)在拿取225μl(富血小板血清)石英杯,将磁棒横向放入石英杯内,把石英杯放入检测通道内,抽取25μl试剂(二磷酸腺苷、肾上腺素、胶原、花生四烯酸)。
血小板抗体检查及配血操作规程
![血小板抗体检查及配血操作规程](https://img.taocdn.com/s3/m/9b3c2dc1af1ffc4ffe47acab.png)
血小板抗体检查及配血操作规程【目的】 Capture-P®是设计用来检测血小板IgG抗体的固相系统。
可为血小板输注无效患者进行血小板配血。
【适用范围】血小板输注无效患者血小板输注前配血【检测原理】Capture-P是一个固相抗体检测系统,是由 Rachel等人4、Juji等人5和Shibata 等人6发表的检测过程改良而来。
患者或供体血小板首先结合于聚苯乙烯微孔表面。
然后用它们来捕获患者或供体血浆中的血小板抗体。
血清在结合有血小板的微孔中进行简短孵育,使抗体与血小板结合(如果抗体存在)。
把微孔中游离的IgG 冲洗掉,并加入结合抗 IgG 指示红细胞。
进行离心,这样会使指示红细胞与结合于固定的血小板上的抗体接触。
阳性检测中,在指示红细胞和结合血小板抗体间形成了抗免疫球蛋白G 桥联,从而阻止了指示红细胞向微孔底部的移动。
作为这种桥联的结果,指示红细胞会形成一个汇合单层从而覆盖固定的血小板。
相反,如果是阴性检测,当不存在血小板抗原-抗体反应时,指示红细胞的移动就不会被阻止,就会被离心到微孔底部,进而形成紧密压缩、清晰的细胞扣。
可以使用事先经过冲洗和保存的血小板,这个步骤是可以选择的。
使用血小板冲洗和储存溶液洗涤血小板,使之不含污染性血浆蛋白和非血小板细胞成分,这样的血小板可以用来制备 Capture-P检测微孔的单分子层。
【主要组成成份】Capture-P检测微孔板:1X8 微带板,坚硬 U 型底部,表面覆盖特异性血小板粘合剂。
每个微带板可以进行8个单独的检测。
这些微带板保存于一个可重复性密封的铝箔袋中,铝箔袋中含有干燥剂和湿度计。
微带板可以单使用,也可以多个使用。
未使用的微带板、干燥剂和湿度计要立即谨慎重新密封于铝箔袋中,以免暴露于湿气中使粘合剂失效。
Capture检测微孔的辅助试剂:(另行购买)Capture LISS:低离子强度溶液,含有甘氨酸、溴甲酚紫染料和防腐剂叠氮化钠 (0.1%)* 。
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LBY-NJ4型血小板聚集仪操作手册
一、准备工作:
1、开机: 开机后待温度升到37。
C后再进行测试。
2、标本采集: 用109mmol/L的枸橼酸钠做抗凝剂,取血量和抗凝剂的比例为9:1,要充分颠倒
混匀。
3、富含血小板血浆(PRP)的制备: 抗凝血标本用水平离心机500-800转/分,离心5分钟,待
自然停止后取出标本,小心吸取上层富含血小板血浆,并计数其血小板数量。
注: 离心后的富含血小板血浆(PRP)中,不应含有红细胞,否则应加大离心机转速再次离心机,各实研室应根椐所用的离心机调正到合适的转速和离心时间,富含血小板血浆(PRP)应无溶血。
4、贫含血小板血浆(PPP)的制备: 将已吸取过富含血小板血浆(PRP)的血再次用3000转/分,
离心10分钟,待自然停止后取出标本,小心吸取上层无血小板的备用血浆,
5、富含血小板血浆(PRP)中血小板数量的调整: 计数PRP中血小板数量后,若血小板数
量 >200x109/L,应用将其稀释为200x109/L。
如 <200x109/L则不需要调整。
注: PRP中的血小板数量是影响血小板聚集的重要因素,每次每个患者标本测定时,均应严格调整,PPP >200x109/L时对测定结果有影响。
(调整公式:C1V1=C2V2)
6、血小板聚集诱导剂的准备: 一般用ADP较多。
ADP 一般用生理盐水配成3000umol/L浓
度,在-20。
C以下小量分装,低温冻存,临用时复溶,并用生理盐水稀释至300umol/L
浓度备用。
例如:ADP的分子量为427,精确称取ADP 6.4mg,溶于5ml生理盐水中,待完全溶解
后分装于尖底塑料管中(0.1ml/管)。
做实验时,直接解冻即可使用。
二、操作步骤:
1、在测定样品方杯中加入一小磁棒和300ul PRP置恒温孔中预热5分钟备用,在另一方杯
中加入300ul PPP备用。
2、将仪器调至Test壮态,在测试通道中插入PPP方杯,按【确认】键或通道键仪器自动
检测零点。
窗口显示:R25(该数值为血浆中血小板的相对浓度,R25约为2x105 左右), 待该数值稳定后按【确认】键或通道键。
3、取出PPP方杯,插入PRP方杯,窗口显示:R256(该数值为血浆中血小板的相对浓度,R256
约为3x106 左右,仪器的线性范围为2 x106 — 4 x106),待该数值稳定后,按【确认】
键或通道键后窗口显示:ADP。
4、用微量进样器吸取5ul ADP加入杯底,按【确认】键或通道键仪器进入血小板聚集测试状态,
窗口显示计时或当时血小板最大聚集率。
5、测试结束后,仪器会自动打印出相应的结果和曲线。
一般只报设定点时间的聚集率和最大聚集
率。