血小板聚集仪中文操作手册

血小板聚集仪中文操作手册

第一章

原理和功能介绍

血管损伤后，血小板黏附于血血管的损伤处， 聚集、合成前列腺素，释放5-羟色氨、ADP 、 ATP 。前列腺素的合成与释放产物会引起更进一步的聚集。同时血浆凝固开始、凝血酶产生、 纤维蛋白形成和血小板栓子堵塞损伤的血管。

由于细胞膜糖蛋白、细胞内存储颗粒、血小板酶血浆凝血因子缺乏常引起过量出血，常 见的临床表现为：鼻衄、损伤、擦伤失血过多。另外，外科手术的患者尽管经常存在血小板 功能障碍，但经常到出血不止或术后出血不止才能发现。

在1962年，Born 描述了用ADP 诱导的血小板聚集并改革用比浊计测量富血小板血浆的 聚集过程。这种改变包括：预温 37度，搅拌和用记录笔记录一定时间内透过光的变化。

在1977年，Fein man 设计了一台仪器，同时测量血小板聚集和 ATP 释放。这台仪器利用 紫外光测量聚集，在聚集光路的的右侧放置敏感的光度计， 通过荧光的产生测量 ATP 的释放。

在1980年，Cardinal 和Flower 设计了电阻法测量全血中的聚集，非常小的电流通过两个 电极，当电极刚与血接触时，在其表面会附着一层血小板，当聚集剂加入后，更多的血小板 会聚集在其表面，引起电阻增加。电阻法的测量又构成了一台全血荧光聚集仪。

在1984年，Wojenman 和Slier 设计了一种快速的方法去进行常规实验室的操作。这种方 法就是同时测量聚集和 ATP 的释放，用血量为5ml ，30分钟内完成检测。这种方法避免富血 小板血浆的准备时间。

在1985年johnson 创造了一种方法去检测洗涤血小板的钙流，这种方法有利于研究钙离 子在血小板聚集中的作用。

血小板聚集仪的功能-----定量血小板的功能缺陷:

粘附缺陷

von Willebrand disease —定量或定性血浆内 vWF 因子的缺乏， Bernard-Soulier Syndrome-伯白-苏综合症（BBS ）亦称巨血小板综合症

缺乏血小板膜糖蛋白lb （GPIb ）

聚集缺陷

Afibri nogen emia-纤维蛋白原缺乏血症

Glanzmann ' s Thrombasthenia 格茨曼血小板功能不全

缺乏膜糖蛋白IIb-IIIa

血小板颗粒释放缺陷

储存池缺陷（SPD ）-致密颗粒内容物缺陷

Gray platelet syn drome-a 颗粒内容物缺陷 PDGF ）

综述

PF4、vWF 、血小板反应素、促血小板生长因子

花生四稀酸代谢异常

血小板膜花生四稀酸释放缺陷

环氧化酶缺陷

血栓素酶合成缺陷

正常颗粒内容物和花生四稀酸代谢途径释放异常

胞内钙流缺陷

早期反应缺陷-肌球蛋白轻链磷酸化，磷脂酰肌醇代谢对特异诱导剂的受体缺陷或受体受阻

（包括巨血小板综合症和血小板无力症）肾上腺素受体缺乏-脊髓增生混乱（MPD）胶原受体缺乏

U46, 619药物缺陷-血栓素A2类似物血小板凝集活性缺陷-血小板构成凝块的骨架

二、原理

血小板聚集是指血小板相互粘附的过程。当一定数量的诱导剂存在时，血小板在各种情况下均能发生聚集现象。因此在富血小板血浆中或全血加入诱导剂即可检测血小板的聚集功能。血小板的聚集依赖钙离子、纤维蛋白原、一个或多个血浆因子及诱导剂的存在，对于不同的诱导剂、不同的诱导剂浓度血小板聚集各异。在光学法检测血小板聚集时常用ADP、肾上腺素、胶原、瑞氏托酶素等诱导剂进行监测，并为临床诊断提供直接信息。

试剂选择的理论基础：血小板的储存颗粒内含有ADP和肾上腺素，在初级血栓形成时从储存颗粒内释放，诱导进一步的聚集。实验证明，体外血小板对诱导剂的反应有助于诊断出血性疾患的本质。

血小板内无胶原的存在，但见于血管壁的结缔组织中，所以胶原被认为是第一步聚集或为血小板与血管壁接触的前期因子。因此体外研究血小板对胶原的反应具有重要意义。

其他的试剂如：凝血酶、A23187钙离子载体、花生四稀酸、瑞氏托酶素、皿因子、5-羟色氨也应用于不同目的。

血小板聚集是目前能获得检测血小板功能最有效的实验。血小板聚集仪能帮助诊断、选择正确治疗方案。

血小板聚集仪在诊断遗传性或获得性血小板功能缺陷时具有重要意义。血小板对不同诱导剂的反应是诊断血小板功能缺陷的基础。如下表；

总结

1、 电阻法聚集不但可应用于全血，亦可应用于 PRP

2、 电阻法聚集不引起聚集波的震荡，因为在光学聚集中磁棒会干扰光的透过

3、 电阻法聚集与光学法聚集具有一致性的结果

4、 在全血中聚集与PRP 聚集相比应较慢，这是由于红细胞存在降低了血小板间的相互作用

5、 全血中血小板会保存更长时间

第二章 血小板聚集试剂

水

用于复溶剂。要求无离子和其他保护剂，如：乙醇会抑制聚集和释放

生理盐水

用于复溶剂，要求无离子和其他保护剂，如：乙醇会抑制聚集和释放

CHRONO — LUME Reage nt 荧光试剂

货号：395 成份：

0.2mg 荧光素、22,000units 荧光素酶、硫化镁、血清白蛋白、稳定剂和缓冲液

储存浓度：0.2mg 荧光素加22,000units 荧光素酶/1.25ml 使用浓度：2 口 M/L 荧光素/荧光素酶/1.25ml 水 试剂保存：未开封：0 C 以下冻存至瓶上效期

复溶后：-20 C 保存30天 工作保存：2-8C 避光8小时

试剂准备：加入1.25ml 的蒸馏水，轻轻转动混合，使用前至少放置 20分钟，直到试剂完全溶解

使用方法：稀释式全血样本：加入

100 口 L 的试剂到900 口 L 的稀释/全血标本中测量 ATP 的释放

PRP :加入50 口 L 的试剂加入到 450 口 L 的PRP 中检测ATP 的释放

四、光学法聚集与电阻法聚集的比较

PRP-富血小板血浆

1、 将静脉血1000转/分离心10分钟，

获得PRP 。

2、 离心剩下红细胞1500转/分获得PPP

3、 用PPP 调整PRP 中血小板数为

3X 108/ ml

4、 加入450 口 l 标本到反应杯中，所需时间

全血聚集

1、 用等量盐水稀释

2、 加入900 口 I 稀释的标本到反应杯

45分钟

3、所需时间5分钟