BCA蛋白浓度测定试剂盒完整版
BCA蛋白浓度测定试剂盒
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装价格P0012 BCA蛋白浓度测定试剂盒500次258.00 元O 碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
O 灵敏度高，检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1-20微升。
O 在50-2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
O BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20, 60, 80。
但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM。
不适用BCA法时建议使用碧云天Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
O BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性表，参见BCA蛋白浓度测定兼容性表。
O 每个试剂盒可以检测500个样品。
包装清单：BCA试剂A 100 mlBCA试剂B 3 ml蛋白标准（5mg/ml BSA） 1 ml说明书 1 份保存条件：BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。
本试剂盒自订购之日起一年注意事项：O 需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。
需96孔板。
如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整A液,B液和样品的体积。
使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
O 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
O 为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。
O EDTA浓度必需小于10mM，不兼容EGTA。
不适用BCA法时，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书
在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。
4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。
包装及保存
BCA试剂A70ml室温保存
BCA试剂
B1.4ml室温保存
蛋白标准
C0.5ml-20C保存(5mg/1ml BSA)
本试剂盒自订购xx一年内有效。
大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂
SDS TritonX-100,Tween不影响检测结果，但受螯合剂（EDTA EGTA）还原剂
（DTT巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背 景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与 之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。
大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂SDS，TritonX-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂（EDTA，EGTA、）还原剂 （DTT巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背 景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与 之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。
使用说明
1.配制工作液:
根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B
(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。
2.稀释标准品：
取10微升标准品用PBS稀释至100微升(标准品一般可用PBS稀释)，使 终浓度为
0.5mg/ml。将标准品按0, 1,2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准 品孔中，力口PBS补足到20微升。
碧云天 BCA蛋白浓度测定试剂盒
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装P0012 BCA蛋白浓度测定试剂盒 500次产品简介：¾BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
¾灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。
¾在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
¾BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。
但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。
不适用BCA法时建议试用碧云天生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0006)。
¾BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质的详细的兼容性，请参见碧云天如下网页:/Compatibility Chart For BCA Kit.pdf¾每个试剂盒可以检测500个样品。
包装清单：产品编号产品名称包装P0012-1 BCA试剂 A 100mlP0012-2 BCA试剂 B 3mlP0012-3 蛋白标准(5mg/ml BSA) 1ml—说明书1份保存条件：BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。
本试剂盒自订购之日起一年内有效。
注意事项：¾需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。
需96孔板。
如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。
P0012S BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书
使用说明：
1. 取0.8ml蛋白标准配制液加入到一管蛋白标准(20mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后可立即 使用，也可以-20℃长期保存。
2. 取适量25mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml。例如取20l 25mg/ml蛋白标准，加入980l稀释液即可配制成 0.5mg/ml蛋白标准。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS 稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准也可以-20℃长期保存。
15. Zong-Chun Yi, Hong Wang, Guang-Yao Zhang, Bing Xia. Downregulation of connexin 43 in nasopharyngeal carcinoma cells is related to promoter methylation. Oral Oncol. 2007 Feb 14;
注: 也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反 应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 7. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
常见问题：
1. 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。 可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质，详细的BCA法的兼容性列表请参考碧云天如下网页: /Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
9. Le-Feng Zhang, Shuang-Qing Peng, Sheng Wang. Influence of lead (Pb2+) on the reactions of in vitro cultured rat aorta to 5-hydroxytryptamine. Toxicology Letters 159 (2005) 71–82.
BCA蛋白定量试剂盒
BCA 蛋白定量试剂盒简介：目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA 蛋白定量试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford 蛋白定量试剂盒(Bradford Protein Assay Kit)。
BCA 法与传统方法相比，更简单、更稳定、更灵敏度。
BCA 法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，对于5%以内的SDS 、Triton X-100、Tween 20、 Tween 80具有很好的兼容性。
BCA 法测定蛋白浓度易受螯合剂、高浓度的还原剂影响， BCA Protein Assay Kit 在50～1000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系， 其最小检出量为25μg/ml 。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 取1ml 蛋白标准配制液加入到蛋白标准(BSA)(20mg)中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。
2、 取适量20mg/ml 蛋白标准，稀释至终浓度为500μg/ml 或所需浓度。
3、 根据样品数量，按试剂(A):试剂(B)=50:1的比例配制BCA 工作液，即取50份BCA 试剂A 和1份BCA 试剂B ， 充分混匀，即获得BCA 工作液。
4、 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl 加到96孔板的标准品孔，加稀释液补足至20μl 。
5、 加适当体积待测蛋白样本到96孔板的样品孔中。
6、 各孔加入200μl 配置好的BCA 工作液, 37℃放置20～30min 。
7、 测定562nm 波长处的吸光值，如无562nm ，540～595nm 之间的波长也可。
8、 根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
注意事项：1、 蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存。
BCA试剂盒说明书
BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书
二. 分光光度计法
如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。
步骤如下：
1.配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工
作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。
BCA工作液室温24小时内稳定。
2.稀释标准品：取100微升BSA标准品用PBS稀释至1ml（样品一般可用PBS稀释），使终浓
度为0.5mg/ml。
3.取八支（或者更多）5ml离心管，标让号，按下表加入试剂。
4.37℃放置15-30分钟。
用分光光度计测562nm处吸光值，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
BCA蛋白定量
BCA蛋白定量试剂盒配制及内部操作SOP一、BCA试剂盒配制流程1、标准品配制：配制2mg/ml的BSA标准品，以50ml为例，各成分加入量如下表：原料浓度加入量（mg）厂家货号牛血清白蛋白（BSA）0.2%100北京（二楼生产部提供）YSCW2500氯化钠（NaCl）0.9%450国药集团化学试剂有限公司10019308叠氮化钠0.05%25成都金山化学试剂有限公司/注意：为了确保检测的准确性，应用微量天平精准称量100mg，然后定容至50ml，1ml/管分装，4℃保存。
2、工作液配制由于A液和B液加入比例为50:1，因此配制工作液时A液各成分加入量按照1000ml配制量加入，B液成分按照25ml配制量加入。
原料浓度加入量（g）厂家货号A液（1000ml）二喹啉甲酸（BCA）1％10aladdin B107658无水碳酸钠2％20天津博迪化工股份有限公司/碳酸氢钠0.95%9.5国药集团化学试剂有限公司10018960酒石酸钠0.16% 1.6国药集团化学试剂有限公司30169818氢氧化钠0.4％4国药集团化学试剂有限公司10019762B液（25ml）硫酸铜4％1国药集团化学试剂有限公司81005261备注：A液各成分混合之后，调节PH至11.25。
二、BCA法蛋白定量操作SOP1、标准品稀释按照下表制备一组蛋白质标准品。
将一安瓿的牛血清白蛋白标准品（BSA）稀释到几个干净的小瓶中，最好使用与待测样品相同的缓冲液。
每一个1mL安瓿的2mg/mL牛血清白蛋白标准品足够用于制备下表中所列出的任意一组稀释范围的标准品；每个稀释浓度的标准品的体积足够用于3次重复检测。
用于标准方案的稀释方法（检测范围=20-2,000ug/mL）如下：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A03002000B125375ul的A1500C325325ul的A1000D175175ul的B750E325325ul的C500F325325ul的E250G325325ul的F125H400100ul的G25I40000用于试管增强方案的稀释方法如下（检测范围=5–250ug/mL）：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A700100250B400400ul的A125C450300ul的B50D400400ul的C25E400100ul的D5F400002.样品稀释：根据需要，将样品用用PBS或者与待测样品缓冲液相同的溶液稀释至线性范围内（所用稀释液与标准品稀释液应保持一致）。
BCA测蛋白浓度
B C A测蛋白浓度Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998BCA蛋白浓度测定一. 原理 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
检测浓度下限达到25 微克/毫升，最小检测蛋白量达到微克，待测样品体积为1～20微升。
二. 试剂盒组份组份 Cat: KGPBCA （250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯）蛋白标准溶液（0. 5 μg/μL ） 5 mL BCA试剂A 25 mL×2 BCA试剂B 1mL三. 操作步骤A．酶标板操作1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂孔号 0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液（μL） 0 1 2 4 8 12 16 20 去离子水（μL） 20 19 18 16 12 8 4 0 对应蛋白含量（μg） 02. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；3. 各孔加入200μL BCA工作液；4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。
以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。
四. 注意事项1. 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 加入BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。
BCA蛋白浓度测定-酶标仪法
BCA法测定蛋白浓度-酶标仪一、药品1.BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0012，500次酶标仪，碧云天），含以下成分：a)BCA试剂A（P0012-1，100ml，碧云天），室温保存b)BCA试剂B（P0012-2，3ml，碧云天），室温保存c)蛋白标准（5mg/ml BSA）（P0012-3，1ml，碧云天），-20度保存二、仪器和试剂1.酶标仪（测定波长为540-595nm之间，562nm最佳），水浴锅2.96孔单条可拆酶标板（平底）3.15 ml 离心管1个（准备BCA工作液用）4. 1.5 ml 离心管1个（准备蛋白标准品工作液用）5.单道移液器和枪头，8道移液器（排枪）和枪头6.PBS三、操作步骤1.水浴锅调至37℃。
2.蛋白标准品工作液（1 mg/ml）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml）从-20℃冰箱中取出，完全溶解并混匀。
取60μl 蛋白标准品（5mg/ml），加入240μl PBS，即稀释5倍，即配成蛋白标准品工作液（1 mg/ml）。
3.计算BCA工作液总量= 0.2 ml×（样本数+8）×2×1.1（标准品和样本均需测复孔）。
BCA工作量按50体积的BCA试剂A加上1体积的BCA试剂B配制（即50:1），需充分混匀。
BCA 工作液室温24小时内稳定。
4.按下表配制8个蛋白标准液（S0~S7），充分摇匀。
5.将96孔酶标板的A1孔放在左上角，按下表加入蛋白样本和标准品。
（1）先在第3~4条酶标板的蛋白样本孔（N 1~N8）中加入待测蛋白样本各2μl，再用排枪在蛋白样本孔中追加PBS液各18μl，使总量达到20μl。
（此时蛋白样本的稀释比为10，适用于预计蛋白浓度为2~8mg/ml时。
如预计蛋白浓度太高或太低，可适当调整稀释比例）（2）再在第1~2条酶标板的蛋白标准品孔（S0~S7）中加入上面配制的8个蛋白标准液各20μl。
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A S0 S0 N1 N1B S1 S1 N2 N2C S2 S2 N3 N3D S3 S3 N4 N4E S4 S4 N5 N5F S5 S5 N6 N6G S6 S6 N7 N7H S7 S7 N8 N86.用排枪在各孔中加入200μl BCA工作液，轻轻摇匀，37℃放置30分钟或室温放置2小时。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明BCA法（bicinchoninic acid assay）是一种用于测定蛋白质含量的常用方法。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明如下：试剂盒组成：1.BCA试剂A：含有重铜离子和碱性溶液。
2.BCA试剂B：含有双咪唑试剂和碱性溶液。
3.蛋白标准溶液：一系列已知浓度的牛血清蛋白标准溶液。
4.BCA试剂C：含有特殊缓冲溶液。
注意事项：1.所有试剂和样品在使用前均需室温下静置至少30分钟。
2.打开试剂盒后，避免将试剂直接暴露于空气中，以免影响试剂稳定性。
3.在所有步骤中，使用干净且蛋白污染的工具可能会导致错误的结果。
步骤1：制备标准曲线1.准备一系列不同浓度的蛋白标准溶液，如0、20、40、60、80和100μg/mL。
2.取0.1mL蛋白标准溶液加入1.9mL去离子水，即配制出100μg/mL的稀释溶液。
3.以同样的方法依次配制出20、40、60和80μg/mL的稀释溶液。
4.将每个稀释溶液的0.2mL与2mLBCA试剂A混合，放置30分钟。
5.加入0.5mLBCA试剂B，再次混合均匀。
6.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
7. 使用紫外-可见光谱仪测定吸光度，以280 nm为波长，绘制标准曲线。
步骤2：测定待测样品1.取待测样品，如细胞裂解液，加入BCA试剂C进行稀释，使得样品中的蛋白质浓度在标准曲线范围内。
2.取样品0.1mL加入1.9mL去离子水，配制出与标准曲线相同浓度的稀释液。
3.加入1mLBCA试剂A混合均匀，放置30分钟。
4.加入0.2mLBCA试剂B，再次混合均匀。
5.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
6. 使用280 nm波长的紫外-可见光谱仪测定吸光度。
步骤3：计算蛋白质含量1.将待测样品的吸光度值与标准曲线进行比较，根据吸光度值确定样品中蛋白质的含量。
2.通过线性拟合标准曲线计算待测样品中蛋白质的浓度。
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书一、产品简介BCA 蛋白定量试剂盒是一种常用的蛋白质浓度测定方法，具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点。
本试剂盒适用于细胞裂解液、组织匀浆、血清、血浆等多种样品中总蛋白浓度的定量测定。
二、试剂盒组成1、 BCA 工作液：A 液与 B 液按 50:1 的比例混合而成，现配现用。
2、蛋白标准品（2mg/ml）：牛血清白蛋白（BSA）溶液。
3、 96 孔板三、所需设备1、酶标仪（波长 562nm）2、移液器（量程分别为20μl、200μl、1000μl）3、涡旋振荡器4、离心机四、操作步骤1、标准曲线的绘制（1）将蛋白标准品（2mg/ml）用 PBS 或生理盐水稀释成一系列浓度梯度，如0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、600μg/ml、800μg/ml、1000μg/ml、1500μg/ml、2000μg/ml。
（2）在 96 孔板中，每个浓度梯度设置 2 个复孔。
分别向孔中加入25μl 不同浓度的标准品溶液。
（3）向每个孔中加入200μl BCA 工作液，轻轻振荡混匀，37℃孵育 30 分钟。
（4）使用酶标仪在 562nm 波长下测定吸光度值（OD 值）。
（5）以蛋白浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品测定（1）将待测样品用 PBS 或生理盐水适当稀释（若样品浓度过高，可能会超出标准曲线范围）。
（2）在 96 孔板中，设置样品孔和空白孔（仅加25μl 稀释液和200μl BCA 工作液）。
向样品孔中加入25μl 稀释后的样品。
（3）向每个孔中加入200μl BCA 工作液，轻轻振荡混匀，37℃孵育 30 分钟。
（4）使用酶标仪在 562nm 波长下测定样品孔和空白孔的吸光度值（OD 值）。
（5）样品的蛋白浓度可根据标准曲线计算得出。
五、注意事项1、 BCA 工作液应现配现用，避免长时间放置导致失效。
BCA蛋白浓度测定试剂盒完整版
BCA蛋白浓度测定试剂盒说明23225蛋白质化验试剂盒：为500试管或5000微孔板的检测提供充足的试剂23227蛋白质化验试剂盒：为250试管或2500微孔板的检测提供充足的试剂试剂盒组分：BCA 试剂A，1000 mL (No. 23225产品中) 或500mL ( No. 23227产品中)，碳酸钠，碳酸氢钠，二喹啉甲酸，酒石酸钠溶于0.1 M氢氧化钠中。
BCA 试剂B , 25 mL, 包括4%硫酸铜一次性标准白蛋白, 2mg/ mL, 10 × 1 mL 安瓿, 包含2 mg/ mL牛血清白蛋白(BSA) 存在于0.9% 盐和0.05%叠氮化钠中。
储存：以上试剂保持在室温下储存和装运注意：如果试剂A 或试剂B 在低温下运输或长期储存时出现沉淀现象，可以通过缓慢加温或轻轻搅拌溶液使沉淀物溶解。
当试剂变色或确定微生物污染时请丢球试剂盒。
目录介绍 (1)准备标准试剂和工作试剂 (2)准备试管 (3)准备微型版 (3)故障检修 (4)有关美国热电其他产品 (5)附加信息 (5)参考文献 (6)介绍美国热电（Thermo）公司的BCA蛋白浓度测定试剂盒是基于二喹啉甲酸(BCA)通过比色检测和定量测定总蛋白的洗涤剂兼容配方。
该方法通过碱性介质中的一种蛋白结合了Cu2使其显著减少转变为Cu1 （缩二脲反应）。
用一种含二奎琳甲酸的试剂选择性的比色法高敏感的比色杯中的Cu1. 这种测定方法的紫色色反应产物是通过BCA的两个分子和亚铜离子螯合作用形成的。
这种水溶性复合物在562nm 处有强吸收峰。
在大的活性范围内(20-2000µg / mL）几乎同蛋白浓度增加呈线性关系。
BCA 法不是真正的终点的方法；也就是说，最终颜色继续发展。
孵化之后, 继续的颜色发展速度是足够慢以允许一起进行测定大量样本。
大分子结构的蛋白质,肽键的数量和存在的四个特定氨基酸(半胱氨酸,胱氨酸，色氨酸和酪氨酸)据说是与BCA形成颜色产物的原因。
BCA蛋白浓度测定-酶标仪法
.酶标仪BCA法测定蛋白浓度-一、药品500次酶标仪，碧云天），含以下成分：BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0012，1. 100ml，碧云天），室温保存试剂A（P0012-1，a)BCA ，碧云天），室温保存P0012-2试剂B（，3mlb)BCA 度保存P0012-3，1ml，碧云天），-20c)蛋白标准（5mg/ml BSA）（二、仪器和试剂最佳），水浴锅酶标仪（测定波长为540-595nm之间，562nm1. 孔单条可拆酶标板（平底）2.96 1个（准备BCA工作液用）3.15 ml 离心管个（准备蛋白标准品工作液用） 1.5 ml 离心管14. 道移液器（排枪）和枪头5.单道移液器和枪头，8PBS 6. 三、操作步骤℃。
1.水浴锅调至37℃冰箱中取出，）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml）从-202.蛋白标准品工作液（1 mg/ml倍，即配μl PBS，即稀释5完全溶解并混匀。
取60μl 蛋白标准品（5mg/ml），加入240 成蛋白标准品工作液（1 mg/ml）。
BCA。
2×1.1（标准品和样本均需测复孔）BCA计算工作液总量= 0.2 ml×（样本数+8）×3.BCA需充分混匀。
50:1），体积的BCA试剂B配制（即试剂工作量按50体积的BCAA加上1 24工作液室温小时内稳定。
S0~S7），充分摇匀。
4.按下表配制8个蛋白标准液（0.2 20 D 80S30.3 S4 7030E0.4 S5 F 40 600.5 G 50 50S61.00S7100H5.将96孔酶标板的A1孔放在左上角，按下表加入蛋白样本和标准品。
（1）先在第3~4条酶标板的蛋白样本孔（N 1~N8）中加入待测蛋白样本各2μl，再用排枪在蛋白样本孔中追加PBS液各18μl，使总量达到20μl。
（此时蛋白样本的稀释比1 / 2.时。
如预计蛋白浓度太高或太低，可适当10，适用于预计蛋白浓度为2~8mg/ml为调整稀释比例）个蛋白标准液S0~S7）中加入上面配制的8）（2再在第1~2条酶标板的蛋白标准品孔（。
BCA蛋白浓度测定试剂盒
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装价格P0012 BCA蛋白浓度测定试剂盒500次258.00 元O 碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
O 灵敏度高，检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1-20微升。
O 在50-2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
O BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20, 60, 80。
但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM。
不适用BCA法时建议使用碧云天Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
O BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性表，参见BCA蛋白浓度测定兼容性表。
O 每个试剂盒可以检测500个样品。
包装清单：BCA试剂A 100 mlBCA试剂B 3 ml蛋白标准（5mg/ml BSA） 1 ml说明书 1 份保存条件：BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。
本试剂盒自订购之日起一年注意事项：O 需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。
需96孔板。
如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整A液,B液和样品的体积。
使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
O 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
O 为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。
O EDTA浓度必需小于10mM，不兼容EGTA。
不适用BCA法时，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南
BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南1.简介BCA蛋白定量试剂盒是一种用于测定蛋白质浓度的试剂盒。
该试剂盒采用双硫键还原法，可以通过比色法快速、准确地测定样品中的蛋白质浓度。
本使用指南将详细介绍BCA蛋白定量试剂盒的使用方法和相关注意事项。
2.实验前准备2.1 试剂准备根据试剂盒的说明书，准备好所需的试剂物品，包括BCA试剂、标准品、还原缓冲液、洗涤缓冲液等。
2.2 样品准备将需要测定的样品进行处理和提取，并根据实验要求进行稀释。
确保样品无杂质和干扰物，以免影响测定结果。
3.样品处理3.1 样品加标准曲线制备将已知浓度的标准品按照一定比例加入到已处理好的样品中，制备出一系列浓度梯度的样品。
3.2 样品处理步骤按照试剂盒说明书的要求，逐步进行样品处理，包括样品还原、洗涤等步骤。
确保每个步骤的操作正确，以获得准确的测定结果。
4.比色测定4.1 样品吸光度测定使用紫外-可见分光光度计测定各个标准品和待测样品的吸光度值。
记录吸光度值，以备后续计算使用。
4.2 绘制标准曲线将各个标准品的浓度与吸光度值进行统计和计算，绘制出标准曲线。
通过标准曲线，可以计算出待测样品的蛋白质浓度。
5.结果分析根据标准曲线计算出待测样品的蛋白质浓度，并进行结果统计和分析。
6.结论根据实验结果得出结论，并对实验过程中出现的问题进行总结和改进。
附件：1.BCA蛋白定量试剂盒说明书2.实验记录表格法律名词及注释：1.BCA蛋白定量试剂盒：BCA全称为Bicinchoninic Acid，是一种常用于蛋白质浓度测定的试剂盒。
2.双硫键还原法：一种用于将蛋白质中的二硫键还原为巯基的方法，常用于蛋白质结构研究和蛋白质定量实验中。
3.比色法：一种通过物质吸收或散射光线的特性，根据吸光度或透过率的变化来测定物质浓度的方法。
全文结束 \。
BCA测蛋白浓度
BCA蛋白浓度测定2017.8.18一. 原理BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
检测浓度下限达到25 微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。
二. 试剂盒组份组份Cat: KGPBCA （250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯）蛋白标准溶液（0. 5 μg/μL） 5 mL BCA试剂A 25 mL×2 BCA试剂B 1mL三. 操作步骤A．酶标板操作1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂孔号0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液（μL）0 1 2 4 8 12 16 20 去离子水（μL）20 19 18 16 12 8 4 0 对应蛋白含量（μg）0 0.5 1.02.0 4.0 6.0 8.0 10.02. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA 工作液，充分混匀；3. 各孔加入200μL BCA工作液；4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。
以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。
四. 注意事项1. 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 加入BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。
BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)
2. 取适量25mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml。例如取20µl 25mg/ml蛋白标准，加入980µl稀释液即可配制成 0.5mg/ml蛋白标准。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS 稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准也可以-20℃长期保存。
14.Wang Yichao, Zou Quanming, Ren Jianmin, Liu Jian,Wang Xiaoqin. Preparation and character of microspheres of Helicobacter pylori whole cell protein encapsulated by chitosan - alginate. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 2005,20(5):375-7.
3. Zheng CH, Gao JQ, Zhang YP, Liang WQ. A protein delivery system: biodegradable alginate-chitosan-poly(lactic-co-glycolic acid) composite microspheres. Biochem Biophys Res Commun. 2004 Oct 29;323(4):1321-7.
BCA法测定蛋白质浓度
BCA法测定蛋白质浓度P1511：蛋白质定量试剂盒 (BCA法) 使用说明描述：Bicinchoninic acid (BCA )法是近来广为应用的蛋白定量方法。
其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。
BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。
与Bradford 法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
组成与储存：(1) BCA Reagent 100 ml，室温保存；(2) Cu Reagent 2.5 ml，室温保存；(3) BSA standard 4 mg/ml 1 ml，-20oC冻存。
1年内有效。
可进行500次微板(microplate)测定或50次2ml比色杯测定。
所需设备：光密度测定仪（比色计或酶标仪、微板比色仪），工作波长565 nm或在520-600 nm之间。
工作溶液(Working Reagent, WR)配制：将50体积试剂BCA Reagent与1体积Cu Reagent混合后即为标准工作试剂，呈嫩绿色。
此WR工作溶液在室温稳定，1周内使用不明显影响测定精度。
标准蛋白溶液配制：用双蒸水、0.9%生理盐水、PBS、或用待蛋白样品之缓冲液进行倍比稀释: 100 μl 4000 μg/ml BSA + 100 μl稀释溶液(H2O/PBS/0.9%NaCl) = 200 μl (BSA=2000 μg/ml)，取100 μl 连续倍比稀释7次，得到BSA标准溶液2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625 μg/ml。
蛋白测定蛋白质浓度线性检测范围为10-2000 μg/ml。
标准测定用1 cm 光程玻璃或塑料比色皿，反应终体积2 ml，用比色计测定。
P0010S BCA蛋白浓度测定试剂盒_增强型_
包装清单：
产品编号 P0010S-1 P0010S-2 P0010S-3 P0010S-4
—
产品名称 BCA试剂 A BCA试剂 B 蛋白标准(BSA) 蛋白标准配制液
说明书
包装 40ml 1.2ml 20mg 1ml 1份
保存条件：
室温保存。蛋白标准配制成溶液后-20℃冻存。
注意事项：
¾ 需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。需96孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测 定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用 量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
3. Zheng CH, Gao JQ, Zhang YP, Liang WQ. A protein delivery system: biodegradable alginate-chitosan-poly(lactic-co-glycolic acid) composite microspheres. Biochem Biophys Res Commun. 2004 Oct 29;323(4):1321-7.
15.Wu ZQ, Li M, Chen J, Chi ZQ, Liu JG. Involvement of cAMP/cAMP-dependent protein kinase signaling pathway in regulation of Na+,K+-ATPase upon activation of opioid receptors by morphine. Mol Pharmacol. 2006 Mar;69(3):866-76.
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
BCA蛋白浓度测定试剂盒说明23225蛋白质化验试剂盒：为500试管或5000微孔板的检测提供充足的试剂23227蛋白质化验试剂盒：为250试管或2500微孔板的检测提供充足的试剂试剂盒组分：BCA 试剂A，1000 mL (No. 23225产品中) 或500mL ( No. 23227产品中)，碳酸钠，碳酸氢钠，二喹啉甲酸，酒石酸钠溶于0.1 M氢氧化钠中。
BCA 试剂B , 25 mL, 包括4%硫酸铜一次性标准白蛋白, 2mg/ mL, 10 × 1 mL 安瓿, 包含2 mg/ mL牛血清白蛋白(BSA) 存在于0.9% 盐和0.05%叠氮化钠中。
储存：以上试剂保持在室温下储存和装运注意：如果试剂A 或试剂 B 在低温下运输或长期储存时出现沉淀现象，可以通过缓慢加温或轻轻搅拌溶液使沉淀物溶解。
当试剂变色或确定微生物污染时请丢球试剂盒。
目录介绍 (1)准备标准试剂和工作试剂 (2)准备试管 (3)准备微型版 (3)故障检修 (4)有关美国热电其他产品 (5)附加信息 (5)参考文献 (6)介绍美国热电（Thermo）公司的BCA蛋白浓度测定试剂盒是基于二喹啉甲酸(BCA)通过比色检测和定量测定总蛋白的洗涤剂兼容配方。
该方法通过碱性介质中的一种蛋白结合了Cu2使其显著减少转变为Cu1 （缩二脲反应）。
用一种含二奎琳甲酸的试剂选择性的比色法高敏感的比色杯中的Cu1. 这种测定方法的紫色色反应产物是通过BCA的两个分子和亚铜离子螯合作用形成的。
这种水溶性复合物在562nm 处有强吸收峰。
在大的活性范围内(20-2000µg / mL）几乎同蛋白浓度增加呈线性关系。
BCA 法不是真正的终点的方法；也就是说，最终颜色继续发展。
孵化之后, 继续的颜色发展速度是足够慢以允许一起进行测定大量样本。
大分子结构的蛋白质,肽键的数量和存在的四个特定氨基酸(半胱氨酸,胱氨酸，色氨酸和酪氨酸)据说是与BCA形成颜色产物的原因。
因此,蛋白浓度的测量通常要参照标准的一个常见的蛋白质如牛血清白蛋白。
一系列已知浓度的蛋白质稀释液是为与之相近的未知蛋白质浓度测定准备的。
因为每一个未知浓度的测定都需要基于标准曲线。
如果需要将一个未知蛋白精确定量，选择一个与未知蛋白特性相似的标准蛋白是可取的。
例如，当测定免疫球蛋白时牛血清丙种球蛋白可以被当做标准蛋白。
以下给出了两种检测过程：其中,试管程序需要一个较大的体积(0.1毫升)的蛋白质样品。
然而,因为它使用了一个样品比例为1:20的工作试剂(v / v),所以将干扰物质的影响降到最小。
在酶处理程序提供了一样品处理酶，需要体积较小(10 -25µL)的蛋白质样品。
然而,由于使用了样品比例为1:8的工作试剂(v / v)，所以在克服干扰物质浓度时灵活性降低，从而获得的检测水平较低。
标准试剂和工作试剂的准备（试验程序需要的两个）A．准备稀释的BSA标准液表1为导向,准备一套蛋白质标准。
稀释标准的内容为,将一个盛在安瓿管中的标准BSA稀释到几个洁净的瓶子中,最好使用和样本(s)相同量的稀释剂。
根据表1的建议：每1毫升的安瓿管中加入2毫克/毫升的BSA标准液对于准备一系列的标准稀释液是足够的。
每个稀释标准重复三次也是足够量的。
表一：准备稀释的BSA标准液标准试管协议和微型版程序的稀释方案（活性范围=20-2000µg/mL）加强试管协议的稀释方案（活性范围=5-250µg/mL）B：准备BCA的工作试剂（WR）1.总共需要的WR的体积可以通过以下公式计算出来：（标准液+未知液）×（平行数目）×（每个样品中加入的WR体积）= 总共所需的WR体积例如：标准的试管程序有三个未知液，每个样品做两组重复：（标准液9mL+未知液3 mL）×（平行数目2）×（2 mL）=总共所需的WR体积48mL 注意：试管程序中每个样品管加2.0ml WR微型版程序中每个样品中只需要加200ul WR2、WR的制备：（BCA 试剂A:B=50:1），对上述样品,将50mL试剂A与1mL试剂B混合。
注意：当试剂B加入到试剂A的开始，浊度观察表明：混合后迅速消失变成澄清的绿色的ＷＲ。
准备充足的WR是基于所测样品数量上的。
如果将WR储存在处于室温（RT）的密闭容器中，那么几天之内WR是稳定的。
试管程序（样品：WR =1:20）1、用移液管移取每个标准品和所测样品的重复0.1ml到有标签的对应试管中。
2、在每个管中加2.0ml的WR，混匀。
3、封口，然后温育试管（选择时间和温度）1）标准方案：37℃30min(working range=20-2000ug/ml)2）RT方案：RT 2h(working range=20-2000ug/ml)3）Enhanced Protocol(加强方案)：60℃30min(working range=5-250ug/ml)注意：每个实验中都增加培育时间和温度，增加５６２ｎｍ的净吸光度，降低试剂的最低检测水平和方案的工作范围；使用水浴加热管要么是标准(37°C培养)或是增强(60°C 培养)协议。
使用强制的培养可能会因为热传递不均匀使其在颜色变化上引进明显的误差。
4、使所有管子冷却至室温5、分光光度计设定在562nm，当比色皿中装的是水时给仪器校零。
随后，确保在10min 内测完所有样品的吸光度。
注意：因为BCA测定不是真正的终点，即使冷却到室温颜色还会继续变化。
然而，由于在室温下颜色变化速度比较慢，所以如果在10min内测完所有试管的吸光度就不会引进明显的误差。
6、所有的单个标准品与所测的样品重复在562nm测得的吸光度都要减去在562nm测得的所有空白标准品的吸光度平均值。
微型板程序（样品：WR =1:8）1、用移液管移取25ul的WR到每一个标准品与未知样品所在的微型板中（working range=20-2000ug/ml）注意：如果样品大小被限制为：每个未知样品和标准品只能使用10ul（sample toWR ratio=1:20）.然而，被测量的working range在这种情况下将被限制为125-2000ug/ml。
2、每个孔中加200ul的WR，用plate shaker混30s，使其彻底混匀3、封口，温育37℃30min4、冷却到室温5、用酶标仪测量在562nm或接近562nm的读数注意：1）这种方法中波长在540-590nm的范围内都能被成功的测量2）因为读板器使用的光线长度比分光光度计的比色皿要短，所以微型板程序需要使用样品比例比较大的工作试剂去获得与标准试管程序相同的灵敏度。
如果需要高于562nm 的测量，要将培养时间增加到2h.3）增加培养时间或样品工作试剂的体积比率，增加每个well在562nm的净测量值，降低实际的最低测量水平和测量的working range。
只要每个标准样与未知样都被同等对待，这样的修改也是有益的。
6、所有的单个标准品与所测的样品重复在562nm测得的吸光度都要减去在562nm测得的所有空白标准品的吸光度平均值。
7、准备一个标准曲线通过绘制每一个标准BSA在562nm测量的相对于空白对照的吸光度平均值。
它ug/ml的浓度。
使用标曲去测量每一个未知样品的蛋白质浓度。
注意：如果联系微型板读数器使用拟合的曲线算法，一个有四个参数的或最合适的曲线将提供比纯线性状态更精确的结果。
如果用手绘制这个结果，一个点-分曲线将比线性更加适合标准点。
A：干扰物质某些物质干扰BCA检测是已知的，包括潜在的还原剂，螯合剂，强酸或强碱。
因为他们可以干扰估算蛋白质每分钟浓度, 作为样品缓冲液的组份应避免下列物质：抗坏血酸EGTA 铁不纯的蔗糖儿茶酚胺不纯的甘油脂质色氨酸肌酸酐过氧化氢蜜二糖酪氨酸半胱氨酸酰肼类苯酚磺酞尿酸其他物质对BCA法检测蛋白量有较少程度的干扰。
并且这些在原来的样本中低于一定浓度只有很小的影响（可以容忍）。
许多物质的最大兼容的浓度在标准测试管协议中被列出。
表2 （见说明的最后一页）。
物质是兼容与标准测试管协议中指定的浓度，如果蛋白浓度的估计的误差是由物质的存在所造成将会小于或等于10 ％。
在每一个实验之前，这些物质都会用现配的WR进行测试。
空白校正的宰562nm的吸光度测量值（1000µg / mL白蛋白标准品+物质）将会同0.9%生理盐水中精确配制的标准品在562nm出的净吸光度进行比较。
样品：WR为1：8 (v/v)的微孔板过程中最大兼容浓度将比较低。
B .消除或减少干扰物质影响的,策略BCA蛋白含量测定中干扰物的影响可以用以下几个方法消除或克服。
●通过透析或凝胶过滤去除干扰物质。
●稀释样品,直到不再有干扰。
这种策略只在起始蛋白质浓度足够多余稀释后仍在检测活性范围之内是有效的。
●用丙酮酸或三氯乙酸(TC A) 沉淀样品中蛋白质。
液体包含干扰物质将被丢弃，蛋白沉淀很容易在超纯水中溶解或直接用碱性BCA WR溶解。
这一方案的详细流程可从我们网站获得。
另外, 23215号产品将被使用(见相关Pierce产品)。
●适当的增加WR中铜的量(准备WR试剂A:B为50:2 或50:3、),这将减少铜螯合剂的干扰注意:为了最大限度的精确度,蛋白质标准品必须和样品(s)同样处理。
有关美国热电其他产品15041 96孔板100/pkg15075 试剂水库200/pkg.15036 96孔板密封带100/pkg.23209 标准白蛋白安瓿2mg/ mL 10×1毫升安瓿,包含牛血清白蛋白23208 预稀释的蛋白质检测标准品：牛血清白蛋白集合，7 × 3.5mL23212 牛伽玛球蛋白标准品2 mg/mL, 10 × 1 mL安瓿23235 微型BCA蛋白检测试剂盒工作范围为0.5-20µg / mL23236 考马斯亮蓝检测试剂盒，工作范围的1 - 1500µg /mL23215 Compat- Able ™蛋白检测试剂组23250 BCA蛋白检测试剂盒-兼容还原剂附加信息A．请访问我们的网站了解更多的信息,包括下列事项:常见问答技术指导：消除样品中干扰物质对蛋白质检测的影响B .替代总蛋白检测试剂如果不能克服样品中还原物或金属螯合物的干扰。
由一个减少物质或metal-chelating物质包含在,试试美国热电公司的23236号考马斯亮蓝检测试剂盒，它对这些物质较不敏感。
C. 玻璃器皿的清洁和重利用小心谨慎使用玻璃器皿。
所有的玻璃器皿必须清洗和最后的超纯水冲洗。
D、不同的蛋白质的反应特征常用的总蛋白含量测定方法某种程度上显示了不同蛋白的不同反应。