免疫吸附治疗ppt课件
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蛋白A免疫吸附的原理以及在肾病风湿性疾病的临床应用
精品课件
系统性红斑狼疮/狼疮肾炎
✓ 典型的自身免疫性疾病，多种自身抗体明确具有致病性。
研究发现多种 自身抗体具有
致病性
[1]Rahman A and Isenber DA. N Engl J Med. 2008;
358(9):929-39. 精品课件
[2] Hohenstein B, et al. Atheroscler Suppl. 2013 Jan;14(1):185-9.
生物亲和吸附
- 基于分子的化学 和生物化学特征
- 亲和层析原理
- 免疫吸附 - 内毒素吸附等
精品课件
免疫吸附的定义
ASFA（American Society for Apheresis，美国血液净化协会）的 定义：
免疫吸附：将患者血浆分离后流经一种器械， 通过该器械的活性配基 （如蛋白A）的特异性结合去除免疫球蛋白的血液净化疗法。
系统性红斑狼疮/狼疮肾炎
✓ 清除血浆中的大量自身抗体，有利于迅速控制和缓解病情。
✓ 免疫吸附（IA）与血浆置换（PE）比较，治疗SLE/LN的疗效和安全性如何？
2016年发表于Autoimmunity Reviews的一篇系统性综述。 - 检索并筛选的文献：PE，15篇，10例以上/篇，共270例（1981-2011年）； IA，14篇，5例以上/篇，共158例（1990-2013年）。 - 高亲和力免疫吸附柱：蛋白A免疫吸附柱，Ig-Therasorb，Globaffin
精品课件
蛋白A免疫吸附的临床应用范围
◆ 自身免疫性疾病
◆ 器官移植
- 术前脱敏（PRA高， ABO不相容等）
- 术后抑制急性排斥反应
- 移植围手术期
（根据文献资料和临床实践）
系统性红斑狼疮/狼疮肾炎
✓ 典型的自身免疫性疾病，多种自身抗体明确具有致病性。
研究发现多种 自身抗体具有
致病性
[1]Rahman A and Isenber DA. N Engl J Med. 2008;
358(9):929-39. 精品课件
[2] Hohenstein B, et al. Atheroscler Suppl. 2013 Jan;14(1):185-9.
生物亲和吸附
- 基于分子的化学 和生物化学特征
- 亲和层析原理
- 免疫吸附 - 内毒素吸附等
精品课件
免疫吸附的定义
ASFA（American Society for Apheresis，美国血液净化协会）的 定义：
免疫吸附：将患者血浆分离后流经一种器械， 通过该器械的活性配基 （如蛋白A）的特异性结合去除免疫球蛋白的血液净化疗法。
系统性红斑狼疮/狼疮肾炎
✓ 清除血浆中的大量自身抗体，有利于迅速控制和缓解病情。
✓ 免疫吸附（IA）与血浆置换（PE）比较，治疗SLE/LN的疗效和安全性如何？
2016年发表于Autoimmunity Reviews的一篇系统性综述。 - 检索并筛选的文献：PE，15篇，10例以上/篇，共270例（1981-2011年）； IA，14篇，5例以上/篇，共158例（1990-2013年）。 - 高亲和力免疫吸附柱：蛋白A免疫吸附柱，Ig-Therasorb，Globaffin
精品课件
蛋白A免疫吸附的临床应用范围
◆ 自身免疫性疾病
◆ 器官移植
- 术前脱敏（PRA高， ABO不相容等）
- 术后抑制急性排斥反应
- 移植围手术期
（根据文献资料和临床实践）
免疫吸附治疗适应症及疗效评价护理课件
治疗中护理
监测生命体征
在治疗过程中，密切监测 患者的生命体征，如血压 、心率、呼吸等，确保患 者安全。
观察不良反应
注意观察患者是否出现过 敏反应、低血压、溶血等 不良反应，及时处理并报 告医生。
协助操作
协助医生进行免疫吸附柱 的安装、血液的采集和分 离等操作，确保治疗过程 顺利进行。
治疗后护理
观察病情变化
03
04
过敏反应
如出现过敏症状，应立即停止 治疗，给予抗过敏药物和氧气
吸入等紧急处理。
低血压
密切监测患者血压，如出现低 血压症状，应立即减缓血流速
度，补充血容量。
出血或渗血
如出现出血或渗血，应立即停 止治疗，压迫止血，并通知医
生处理。
吸附剂脱落
如吸附剂脱落，应立即停止治 疗，重新更换吸附柱，并通知
医生处理。
常见感染性疾病包括重症肺炎、感染 性休克、急性胰腺炎等。
肿瘤
肿瘤是异常增生的细胞在体内形成肿块，可引发一系列症状。免疫吸附治疗可以通过吸附肿瘤细胞和相关抗原，调节免疫功 能，达到辅助治疗肿瘤的目的。
常见肿瘤疾病包括肝癌、肺癌、结直肠癌等。
其他疾病
其他疾病是指除上述适应症之外，免疫吸附治疗还可以用于治疗其他一些与免疫系统相关的疾病，如 免疫性血小板减少症、免疫性溶血性贫血等。
THANKS。
适应症
自身免疫性疾病
自身免疫性疾病是由于免疫系统异常活化，攻击自身组织 而引发的疾病。免疫吸附治疗通过吸附并清除体内异常抗 体和免疫复合物，达到缓解症状、改善病情的目的。
常见自身免疫性疾病包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼 疮、强直性脊柱炎等。
感染性疾病
感染性疾病是由微生物（如细菌、病 毒、真菌等）感染人体而引发的疾病 。免疫吸附治疗可以吸附并清除体内 病原体及其毒素，有助于控制感染、 减轻症状。
血液净化常用技术及适应症PPT课件
MMW-S
PB-S
Blood
Dialysate
溶质依浓度梯度通过半透膜向透析液弥散
血液透析
功能
血液透析清除的毒物主要以分子量较小 （＜500道尔顿）的水溶性物质为主
弥散: 溶质通过半透膜从高浓度向低浓度处运 动。 渗透：溶剂或稀释溶液从低浓度溶液向高浓度溶 液侧运动的过程。 超滤：利用透析膜两侧的压力差，使血液中的水 分向透析液侧移动，从而排除体外。
驱动力：压力差 方式：水带溶质，伴随超滤进行 清除物质：所有溶质，以中、大分子为主 膜 高力压低力压
压 力 高
膜
压 力 低
对流交换的原理
半透膜 负压 半透膜 负压
三、基本组成
机器设备（包括水处理） 耗材：专用、通用 血管通路 其它：0.9%氯化钠注射液、 肝素等
四、哪些血液净化的模式？
血液净化常用技术原理及适应症
医院
2017.06.16
一、血液净化的定义或概念
通过体外技术清除或补充体内（血液内） 的某些物质过程。 血液净化的目的：补其不足，去其有余
补充血液中缺乏物质 清除血液中有害物质
二、哪些技术原理？
弥散：浓度梯度 对流：压力 超滤：压力 吸附：膜功能
THANK
YOU
SUCCESS
2019/4/15
血液透析(HD)
单纯超率（单超UF） 序贯透析
根据治疗时间：
血液滤过(HF) 血液透析滤过(HDF) 血浆置换(PE) 血液灌流(HP) 全血/血浆吸附（PP） 连续性血液净化(CRRT)
间隙性
持续性
腹透(PD)
1、血液透析概念
利用半透膜将病人的血液与透析液进行充 分交换，从而清除体内毒性物质、纠正体 液失衡的治疗方法。
实验四酶联免疫吸附试验ELISA演示精品PPT课件
2、洗板：甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μl，静置3分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，重复 3次。
3、每孔加酶标单抗100μl，置37℃温育30分钟。 4、洗板：洗涤3次（方法同步骤2）。切记每次在干吸水纸上拍干。 5、显色与终止：每孔先加底物A液、再B液各1滴(50μl)，混匀。室温（18-25 ℃）避光显色10分钟后。 6、终止：每孔加终止液1滴(50μl) （0.25% 氢氟酸），终止反应。 7、10分钟内测定结果。采用波长630nm的酶标仪测定OD值。检测样本的OD值≥0.35为阳性 8、结果判定：试验成立的条件是：阴性对照孔平均OD630值与阳性对照孔平均OD630值之差≥0.4。 S=样品孔OD630值，N=阴性对照孔OD630值 如果S/N比值≤0.6，样品判定为PRV抗体阳性。 如果S/N比值≤0.7但> 0.6，样品重测。 如果S/N比值> 0.7，样品判定为PRV抗体阴性
双抗体夹心法（Sandwich ELISA)： • 将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗 • 检测液相中的可溶性抗原
竞争法（Competitive ELISA) ： • 将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体 • 检测液相中的可溶性抗原或抗体
阻断法（Block ELISA) ： • 将已知抗原吸附于固相载体，酶标记单克隆抗体 • 检测液相中的可溶性抗体
✓ 酶联免疫吸附试验：可溶性抗原或抗体 ✓ 酶免疫组化法： 组织中或细胞表面的抗原。
酶联免疫吸附试验
(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, EL或抗体检测液体（血液、细胞液） 中未知抗体或抗原的方法。
2.原理
（1）利用抗原与抗体的特异反应将待测物
实验方法
1.抗原的处理： 2.包被抗原： 取酶标板，加入100μL/孔的抗原稀释液
3、每孔加酶标单抗100μl，置37℃温育30分钟。 4、洗板：洗涤3次（方法同步骤2）。切记每次在干吸水纸上拍干。 5、显色与终止：每孔先加底物A液、再B液各1滴(50μl)，混匀。室温（18-25 ℃）避光显色10分钟后。 6、终止：每孔加终止液1滴(50μl) （0.25% 氢氟酸），终止反应。 7、10分钟内测定结果。采用波长630nm的酶标仪测定OD值。检测样本的OD值≥0.35为阳性 8、结果判定：试验成立的条件是：阴性对照孔平均OD630值与阳性对照孔平均OD630值之差≥0.4。 S=样品孔OD630值，N=阴性对照孔OD630值 如果S/N比值≤0.6，样品判定为PRV抗体阳性。 如果S/N比值≤0.7但> 0.6，样品重测。 如果S/N比值> 0.7，样品判定为PRV抗体阴性
双抗体夹心法（Sandwich ELISA)： • 将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗 • 检测液相中的可溶性抗原
竞争法（Competitive ELISA) ： • 将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体 • 检测液相中的可溶性抗原或抗体
阻断法（Block ELISA) ： • 将已知抗原吸附于固相载体，酶标记单克隆抗体 • 检测液相中的可溶性抗体
✓ 酶联免疫吸附试验：可溶性抗原或抗体 ✓ 酶免疫组化法： 组织中或细胞表面的抗原。
酶联免疫吸附试验
(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, EL或抗体检测液体（血液、细胞液） 中未知抗体或抗原的方法。
2.原理
（1）利用抗原与抗体的特异反应将待测物
实验方法
1.抗原的处理： 2.包被抗原： 取酶标板，加入100μL/孔的抗原稀释液
酶联免疫吸附实验ppt课件
作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通 过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。 3、若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后 重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 4、试剂盒灵敏度：最小可测人TNF-a达4pg/ml。
19
20
第四.五部分: 注意事项(1)
1、手工洗板时，甩尽孔内液体，每孔加洗涤 液350μl，静止30秒后甩尽液体，在厚迭吸 水纸上拍干，洗4次。
23
工作液 100ul/孔，封住板孔， 37℃孵育60分钟。
16
第四.三部分: 实验方法和步骤
9、洗板4次。 10 、除空白孔外，加入1：100稀释的酶结合
工作液(100 ul/孔).封住板孔, 37℃孵育30分 钟. 11 、洗板4次. 12、各孔加入显色剂100 ul/孔,避光37℃孵育 10-20分钟。 13、各孔加入终止液100ul/孔,混匀后即刻测 A450值(5分钟内)。15ຫໍສະໝຸດ 第四.三部分: 实验方法和步骤
5、从密封袋中取出所需板条，其它板条密封放回 4℃
6、除空白孔外，分别将不同浓度标准品/标本100ul/ 孔加入板条的相应孔中，标准品和标本应作双复 孔或三复孔。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵育 90分钟。
7、洗板4次。 8、除空白孔外，加入1:100稀释的生物素化抗体(2a)
• 2、将浓缩洗涤液（4）用双蒸水稀释(1:20)。未 用完的放回4℃。
• 3、标准品:以标准品/标本稀释液(1b)1.0ml复溶冻 干标准品(1a), 静置15分钟后混匀，按说明稀释至 所需浓度，再进行倍比稀释至所需浓度。未用完 的复溶标准品放入-20℃保存, 稀释的标准品不应 重复使用。
• 4、可根据实际情况，将标本做适当倍数稀释(可 做预实验，以确定稀释倍数)。
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第四.五部分: 注意事项(1)
1、手工洗板时，甩尽孔内液体，每孔加洗涤 液350μl，静止30秒后甩尽液体，在厚迭吸 水纸上拍干，洗4次。
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工作液 100ul/孔，封住板孔， 37℃孵育60分钟。
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第四.三部分: 实验方法和步骤
9、洗板4次。 10 、除空白孔外，加入1：100稀释的酶结合
工作液(100 ul/孔).封住板孔, 37℃孵育30分 钟. 11 、洗板4次. 12、各孔加入显色剂100 ul/孔,避光37℃孵育 10-20分钟。 13、各孔加入终止液100ul/孔,混匀后即刻测 A450值(5分钟内)。15ຫໍສະໝຸດ 第四.三部分: 实验方法和步骤
5、从密封袋中取出所需板条，其它板条密封放回 4℃
6、除空白孔外，分别将不同浓度标准品/标本100ul/ 孔加入板条的相应孔中，标准品和标本应作双复 孔或三复孔。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵育 90分钟。
7、洗板4次。 8、除空白孔外，加入1:100稀释的生物素化抗体(2a)
• 2、将浓缩洗涤液（4）用双蒸水稀释(1:20)。未 用完的放回4℃。
• 3、标准品:以标准品/标本稀释液(1b)1.0ml复溶冻 干标准品(1a), 静置15分钟后混匀，按说明稀释至 所需浓度，再进行倍比稀释至所需浓度。未用完 的复溶标准品放入-20℃保存, 稀释的标准品不应 重复使用。
• 4、可根据实际情况，将标本做适当倍数稀释(可 做预实验，以确定稀释倍数)。
免疫学临床应用ppt课件
（1）鉴定病原菌：诊断疾病 （2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌 （3）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定 （4）检测药物半抗原： 确认运动员是否服用兴奋剂
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等 ）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
副作用：明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等
其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷 、 严重感染、 肿瘤
抗体为基础的免疫治疗
一、免疫血清
抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗 淋巴细胞丙种球蛋白等
二、单克隆抗体（mAb）：用于靶向治疗等。 三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性
化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A
有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙
适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者
1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症：激素
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法：ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法
③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等 ）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
副作用：明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等
其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷 、 严重感染、 肿瘤
抗体为基础的免疫治疗
一、免疫血清
抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗 淋巴细胞丙种球蛋白等
二、单克隆抗体（mAb）：用于靶向治疗等。 三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性
化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A
有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙
适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者
1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症：激素
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法：ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法
③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
酶联免疫吸附试验
▲ 因此，双波长比色测定具有能排除由微孔板本身、板孔内标本的非特异性 吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色干扰的优点。
酶联免疫吸附试验
四、全自动酶免工作站
1、加 样 模 块 2、孵 育 模 块 3、洗 板 模 块 4、读 数 模 块 5、控 制 模 块（软件）
医院 计生站 疾控中心
全自动--从加样、孵育、洗涤到数据处理打印报告都由仪器自动完成； 无污染--直接使用原样本试管和原试剂瓶，消除生物污染和试剂污染； 高效率--一次性处理样本量大；
酶联免疫吸附试验
一、酶联免疫吸附试验（ELISA）概述
▲ 基本原理： 抗原抗体的特异性结合以及抗SA）概述
酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定 是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量 成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并 依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。
从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗体或致敏淋巴细胞发生 特异性反应的物质。
抗体：是由抗原刺激动物的免疫系统后，由免疫系统产生分泌的能和相 应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。
酶结合物：酶与抗体或抗原、半抗原在交联剂作用下联结的产物,它不仅 具有抗体抗原特异的免疫反应，还能催化酶促反应，显示出生物放大作用。
（药品冷藏箱（2~8℃）） 结果分 析
吸光度 测量
孵育
加入终 止液
酶联免疫吸附试验
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
例：饲料中黄曲霉毒素B1的检测
天平
粉碎机
电动振荡器
移液器
酶联免疫吸附试验
离心机
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
酶联免疫吸附试验
四、全自动酶免工作站
1、加 样 模 块 2、孵 育 模 块 3、洗 板 模 块 4、读 数 模 块 5、控 制 模 块（软件）
医院 计生站 疾控中心
全自动--从加样、孵育、洗涤到数据处理打印报告都由仪器自动完成； 无污染--直接使用原样本试管和原试剂瓶，消除生物污染和试剂污染； 高效率--一次性处理样本量大；
酶联免疫吸附试验
一、酶联免疫吸附试验（ELISA）概述
▲ 基本原理： 抗原抗体的特异性结合以及抗SA）概述
酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定 是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量 成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并 依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。
从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗体或致敏淋巴细胞发生 特异性反应的物质。
抗体：是由抗原刺激动物的免疫系统后，由免疫系统产生分泌的能和相 应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。
酶结合物：酶与抗体或抗原、半抗原在交联剂作用下联结的产物,它不仅 具有抗体抗原特异的免疫反应，还能催化酶促反应，显示出生物放大作用。
（药品冷藏箱（2~8℃）） 结果分 析
吸光度 测量
孵育
加入终 止液
酶联免疫吸附试验
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
例：饲料中黄曲霉毒素B1的检测
天平
粉碎机
电动振荡器
移液器
酶联免疫吸附试验
离心机
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
血液净化ppt课件
⑧ 极度衰竭、临危患者；
⑨高龄患者。
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17
血液净化方式
血液透析(HD) 血液灌流(HP) 连续性肾脏替代治疗（CRRT） （连续性血液净化治疗（CBP）） 血浆置换(PE) 免疫吸附(IA)
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18
血液灌流（hemoperfusion,HP）
是将患者的血液引出体外，通过灌流器中 吸附剂的吸附作用清除外源性和内源性毒物、 药物以及代谢废产物，从而达到净化血液的目 的。但是不能够清除体内多余的水份，不能够 纠正电解质以及酸碱平衡紊乱。目前主要用于 药物以及毒物中毒、联合血液透析治疗尿毒症 并发症、肝性脑病、某些感染性疾病的内毒素 吸附等。
5、有机磷和有机氯等；
6、毒蕈类；
7、尿毒症毒素和可能导致肝性脑病的代谢毒物等。
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21
血液灌流的临床应用
安眠药中毒 有机磷中毒 洋地黄中毒 甲亢危象• • • • •
ppt课件完整
22
血液灌流的指征：
1、血浆药物浓度已达致死浓度； 2、药物或毒物有继续再吸收的可能； 3、严重中毒导致低换气、低体温、低血压，尽管经
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4
血液净化的目的
清除血液中的有害物质，主要清除方式有：弥散、 对流及吸附，不同的净化模式清除原理不同：
HD——弥散
CRRT——对流及部分吸附
HP 、IA——吸附
不同物质被清除的方式也不同，小分子物质弥散效 果好，中大分子物质则以对流及吸附效果好。
根据不同的临床需要，甚至在病情的不同阶段，选 择恰当的治疗模式。
Hemodialysis
SMW-S
Diffusion
MMW-S
➢小分子物质
酶联免疫吸附试验(ELISA)PPT课件
6. 酶反应终止液 常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓
度按加量及比色液的最终体积而异，在板 式ELISAБайду номын сангаас一般采用2mol/L。
7.参考标准品 定量测定的ELISA试剂盒应含有制作
标准曲线用的参考标准品，应包括覆盖可 检测范围的4-5个浓度，一般均配入含蛋 白保护剂及防腐剂的缓冲液中。
ELISA测定方法
前两种方法主要用于测定抗体和大分子 抗原，适用于临床诊断上，而竞争法事测 定小分子抗原的方法，因而尤其适用于食 品分析。
ELIZA 方法图示
间接法
“Indirect” ELISA
1.The steps of "indirect" ELISA follows the mechanism below: A buffered solution of the protein antigen to be tested for is added to each well of a microtiter plate, where it is given time to
5. 洗涤液 洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性
缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是 疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团 ，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的 疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋白质 与固相载体的结合，并借助于亲水基团和 水分子的结合作用，使蛋白质回复到水溶 液状态，从而脱离固相载体。洗涤液中的 非离子型洗涤剂一般是吐温20，其浓度可 在0.05%-0.2%之间，高于0.2%时，可使 包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低 试验的灵敏度。
ELISA属于标记免疫学技术的一种，1971 年由荷兰和瑞典的学者提出，由于其操作过 程简单易行并可以定量，从而使其在食品安 全和卫生检测中得到了广泛的应用。目前市 场上有多种基于ELISA方法开发的用于食品 中抗生素检测的试剂盒产品。
elisa检测技术 ppt课件
生物素是一种生长因子，广泛分布于动、植物体内，又称辅 酶R或维生素H。亲和素由四个亚单位组成，对生物素具有高度 亲和力，即一个亲和素可以结合4个生物素分子。因此，本方法 具有信号放大功能（特点）。
该方法可用于抗原、抗体以及DNA和RNA（生物素）检测。
BAS-ELISA实验原理
竞争法ELISA
竞争法ELISA的实验原理：将包被了抗体的酶标板的微孔分 为测定孔和对照孔，在对照孔中加入已知浓度的系列标准品溶液 和酶标记物（酶标抗原）；在测定孔中同时加入酶标抗原和待检 样本（抗原），酶标抗原和样品互相竞争包被抗体的结合点，形 成酶标记的抗原-抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标抗 原通过洗涤去除，加入底物后，复合物上的酶催化底物生成有色 产物。当测定孔内的样本不含抗原时，固相上的抗体将和酶标抗 原结合，加入底物后显色较深；当样本含有抗原时，样本中的抗 原和酶标抗原共同竞争抗体的结合位点。酶标抗原结合的比例越 高，说明结合在固相抗体上的待测抗原就越少，反之亦然；在一 定的条件下，复合物上酶的量和酶产物呈现的色泽成正比，用分 光光度计进行测定，从而计算出参与反应的抗原和抗体的量，从 而进一步得知样本中抗原的多少。
37℃, 30min
洗涤3次, 拍干 加底物溶液 (空孔除外) 避光 37℃, 10-30min 加终止液 (空孔除外)
上机检测、绘制标准曲线 (空孔调零)
从标准曲线上 读取样品含量
ELISA试验中的注意事项
必须设立阳性、阴性和空孔对照孔，控制试验条件并检验 试剂盒的质量； 待测样品应设立双复孔或三复孔； 酶标板洗涤时确保洗涤干净，避免假阳性过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
DH2+ H2O2
D + H2O
该方法可用于抗原、抗体以及DNA和RNA（生物素）检测。
BAS-ELISA实验原理
竞争法ELISA
竞争法ELISA的实验原理：将包被了抗体的酶标板的微孔分 为测定孔和对照孔，在对照孔中加入已知浓度的系列标准品溶液 和酶标记物（酶标抗原）；在测定孔中同时加入酶标抗原和待检 样本（抗原），酶标抗原和样品互相竞争包被抗体的结合点，形 成酶标记的抗原-抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标抗 原通过洗涤去除，加入底物后，复合物上的酶催化底物生成有色 产物。当测定孔内的样本不含抗原时，固相上的抗体将和酶标抗 原结合，加入底物后显色较深；当样本含有抗原时，样本中的抗 原和酶标抗原共同竞争抗体的结合位点。酶标抗原结合的比例越 高，说明结合在固相抗体上的待测抗原就越少，反之亦然；在一 定的条件下，复合物上酶的量和酶产物呈现的色泽成正比，用分 光光度计进行测定，从而计算出参与反应的抗原和抗体的量，从 而进一步得知样本中抗原的多少。
37℃, 30min
洗涤3次, 拍干 加底物溶液 (空孔除外) 避光 37℃, 10-30min 加终止液 (空孔除外)
上机检测、绘制标准曲线 (空孔调零)
从标准曲线上 读取样品含量
ELISA试验中的注意事项
必须设立阳性、阴性和空孔对照孔，控制试验条件并检验 试剂盒的质量； 待测样品应设立双复孔或三复孔； 酶标板洗涤时确保洗涤干净，避免假阳性过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
DH2+ H2O2
D + H2O
免疫吸附ppt课件
历史回顾 80年代，由Seidel教授创立 B.Braun先生合作 已治疗100000例（截止1999.9)
15
H.E.L.P原理
LDL,LP(a)和FIB被低PH值的肝素有选 择地结合后沉淀，随后沉淀物经过滤后 被分离出来
多余的肝素由阴离子置换柱在指定的PH 下与肝素结合吸收
10
IA技术
SPA HELP MARS LDL
11
葡萄球菌A蛋白的特性
分子量为42000 N端有4 个高度类同的fc结合区，可与哺
乳动物免疫球蛋白fc段结合（IgG） C 端为非免疫球蛋白结合区，可以交联
至各种支架结构上，可与交叉连接珠状 琼脂（Sepharose）共价耦合 对温度、PH变化和变性剂的作用稳定 解离（PH2.3-2.5)，再生（PH7.0）
免疫吸附（Immunoadsorption)
1
提要 前言 IA剂的条件及分类 IA技术 临床应用 结语
2
前言
1979年，Teman第一次将IA技术应用于 临床，IA已逐渐成为BP领域的一个重要 分支，日益受到人们广泛关注。
IA是指高度特异性的抗原、抗体或有特 定物理化学亲和力的物质（配基）与吸 附材料（载体）结合，制成吸附剂，当 全血或血浆通过这种吸附剂时，即可选 择性或特异性地清除体内相应的致病因 子，净化血液。
27
结 语（2）
IA有效地清除抗体，已应用于自身免疫 性疾病或同种异体抗原（HLA,VIII因子 等）致敏的病人获得了满意的结果
血泵
枸缘酸盐
血泵
缓冲液 pH7.0
洗脱液 pH2.2
免疫吸附柱
分级纯化
废物
7
生物亲和作用
15
H.E.L.P原理
LDL,LP(a)和FIB被低PH值的肝素有选 择地结合后沉淀，随后沉淀物经过滤后 被分离出来
多余的肝素由阴离子置换柱在指定的PH 下与肝素结合吸收
10
IA技术
SPA HELP MARS LDL
11
葡萄球菌A蛋白的特性
分子量为42000 N端有4 个高度类同的fc结合区，可与哺
乳动物免疫球蛋白fc段结合（IgG） C 端为非免疫球蛋白结合区，可以交联
至各种支架结构上，可与交叉连接珠状 琼脂（Sepharose）共价耦合 对温度、PH变化和变性剂的作用稳定 解离（PH2.3-2.5)，再生（PH7.0）
免疫吸附（Immunoadsorption)
1
提要 前言 IA剂的条件及分类 IA技术 临床应用 结语
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前言
1979年，Teman第一次将IA技术应用于 临床，IA已逐渐成为BP领域的一个重要 分支，日益受到人们广泛关注。
IA是指高度特异性的抗原、抗体或有特 定物理化学亲和力的物质（配基）与吸 附材料（载体）结合，制成吸附剂，当 全血或血浆通过这种吸附剂时，即可选 择性或特异性地清除体内相应的致病因 子，净化血液。
27
结 语（2）
IA有效地清除抗体，已应用于自身免疫 性疾病或同种异体抗原（HLA,VIII因子 等）致敏的病人获得了满意的结果
血泵
枸缘酸盐
血泵
缓冲液 pH7.0
洗脱液 pH2.2
免疫吸附柱
分级纯化
废物
7
生物亲和作用
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A蛋白吸附的适应症及疗效
3 血液病：
• 免疫性溶血性贫血、伴有白细胞抗体的白细胞减少 症、伴有免疫复合物的过敏性紫癜: 可清除相应抗 体起治疗作用。 • 冷球蛋白血症: 可使常规治疗无效的混合型冷球蛋 白血症患者的皮肤溃疡及关节疼痛减轻或消失。 • 多发性骨髓瘤: 通过清除患者体内明显升高的免疫 球蛋白及轻链蛋白等, 改善血液粘滞度、防治重要 器官( 如肾脏) 受损。
• 将不同吸附剂装入特制的容器。这种装置 称为免疫吸附器 • 免疫吸附器一般呈圆柱状, 又称免疫吸附 柱。
免疫吸附 ( immunoadsorption， IA)
免疫吸附剂配体有：
• • • • A 蛋白 特定的抗原( DNA) 特定的抗体( 抗人LDL 抗体、抗人IgG 抗体) C1q 、聚赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等
A蛋白吸附的适应症及疗效
5内分泌、代谢疾病： • 1 型糖尿病： • 清除多种糖尿病相关的自身抗体, 如 抗胰岛细胞抗体( ICA) 、抗胰岛素抗 体( IAA) 、抗谷氨酸脱羧酶抗体 ( GADA) 等
A蛋白吸附的适应症及疗效
6心脏病：
• 扩张性心肌病: • 通过清除多种心肌自身抗体如抗B1- 肾上腺 素受体抗体( B1-AABs) 等,使扩张的心脏得 以恢复。有报道一年内免疫吸附组患者与 标准药物组相比, 左心室射血分显著增加, 左心室舒张末期直径显著缩小
A蛋白吸附的适应症及疗效
7 肿瘤：
• 乳癌、皮肤癌、肺癌等： • 可通过吸附清除封闭因子, 活化免疫系统, 增强机体对肿瘤的免疫功能。可见到癌组 织缩小、癌细胞坏死。 • ※但也有因无效而中断治疗的报告。
A蛋白吸附的适应症及疗效
不良反应&副作用：
• • • • 轻度畏寒 发热 一过性低血压 暂时性低血钙症（用柠檬酸钠有关）
A蛋白吸附的适应症及疗效
4 风湿系统疾病：
• 系统性红斑狼疮： 可有效地清除抗核抗体、抗 dsDNA、抗Sm 等多种自身抗体, 控制由这些抗体 介导的炎症反应, 使病情快速缓解, 继后用免疫抑 制剂维持效果。用常规治疗效果不佳或无效的重症、 对激素抵抗或使用环磷酰胺有禁忌症的系统性红斑 狼疮疗效极佳。 • 重症类风湿关节炎、皮肌炎、多发性硬化症、原发 性系统性血管炎、结节性多动脉炎、韦格内肉芽肿、 干燥综合征等——特别是激素无效, 或不能迅速奏 效的患者
A蛋白吸附的适应症及疗效
4 神经系统疾病：
• 重症肌无力：血清中有抗乙酰胆碱受体抗体 ( AchRAb) 干扰神经-肌肉传递, 导致肌肉无力, 免 疫吸附能清除抗体, 迅速改善重症肌无力的症状。
• 格林-巴利( Guillain-Barr e) 综合征: 通过免疫吸附 清除抗周围神经组织的自身抗体, 使患者迅速恢复。
A蛋白吸附的适应症及疗效
2 肾脏疾病：
• 原发性或由肺出血-肾炎综合征、韦格内肉芽肿、 结节性多动脉炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾 病继发急进性肾小球肾炎： 可通过免疫吸附清除 自身抗体和免疫复合物, 使临床症状、肾功能和组 织学得以改善 • 局灶节段性肾小球硬化、原发性肾病综合征: 可清 除蛋白尿因子使尿蛋白减少, 肾功能改善。
免疫吸附治疗
免疫吸附( immunoadsorption， IA)
• 通过体外循环，利用特异性抗原－ 抗 体免疫反应除去血液( 浆) 中的致病因 子或利用特异性吸附材料除去血液 ( 浆) 中与免疫有关的致病因子，达到 治疗疾病目的的一种治疗技术。 • 免疫吸附疗法是在血浆置换基础上发 展起来的新技术，是血液净化的重要 组成部分。
自身免疫性疾病
• • • • • • 多发性硬化症 格林- 巴利综合征 Miller- Fisher 综合征 类风湿性关节炎 系统性红斑狼疮 慢性脱髓鞘性神经根炎
免疫吸附 ( immunoadsorption， IA)
• 免疫吸附的临床应用范围正在日益 扩大 • 其临床应用范围远远超出血浆置换 无需置换液，疗效也更好、安全， 副作用小 • 为目前临床无法治疗的疾病提供了 新的治疗途径。
免疫吸附 ( immunoadsorption， IA)
• 免疫吸附剂( Immuno、葡聚糖、二氧化硅凝胶、聚乙稀醇珠、 树脂等。
A蛋白吸附的适应症及疗效
1 器官移植：
• 肾移植前, 对高敏免疫状态患者, 应用免疫 吸附迅速清除抗H LA 抗体, 降低群体反应 性抗体， 使交叉配型转阴, 可减少术后急性 排斥反应, 提高移植肾存活率。 • 此外, 也有报告将免疫吸附应用于其他器官 移植,如骨髓、干细胞移植、肺移植 等
• 免疫吸附器( Immunoadsorber)
免疫吸附 ( immunoadsorption， IA)
• 将具有免疫吸附活性的物质配体 （Ligand） 固定在高分子化合物载体 （Carrier material ）上制成免疫吸附剂
• 配体是与吸附对象发生吸附反应的核心部分。 • 载体能够通过交联或偶联的方式牢固结合或固定 配体, 并作为基质起构架和固定作用。
A蛋白吸附的适应症及疗效
2 肾脏疾病：
• 膜性肾病、IgA 肾病、糖尿病肾病及淀粉样 变继发的肾病综合征：降低蛋白尿的作用 • 癌症并发溶血性尿毒症综合征: 有效清除 IgG- IC,使补体水平恢复正常, 溶血停止伴红 细胞、血红蛋白、LDL及血小板上升, 进行 性肾损害缓解
A蛋白吸附的适应症及疗效
多克隆抗人IgG 抗体吸附(IgTherasorb)的适应症及疗效
适应症与A蛋白相似 疗效略有差异
IgG IgM IgA 白蛋白↓
Ig-Therasorb 60%~80%
50%
50%
20%
A蛋白
60%~80%
20%~40%
20%~40%
15%
苯丙氨酸吸附(PH-350和PH250吸附)的适应症及疗效
3 血液病：
• 先天性血友病A、血友病B 及获得性血友病：通过 清除凝血因子或抑制物( 抗体) , 控制急性出血或作 手术前准备。 • 免疫性血小板减少性紫癜, 包括特发性血小板减少 性紫癜和血栓性血小板减少性紫癜: 对免疫吸附治 疗也有良好反应。 • 肿瘤、爱滋病毒( H IV) 相关性血小板减少：可使 血小板数量增加, 出血症状改善。