家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测

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家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测姓名温正煌学号 201912200904011 专业临床医学班级本部 4 班实验目的

1. 用氯化汞中毒方法复制家兔急性肾功能不全模型。

2. 观察急性肾功能不全时肾功能评价指标变化，从而探讨致病因素及急性肾功能不全的可能发病机制。

实验材料和方法实验仪器：

分光光度计，离心机，恒温水浴锅，哺乳动物手术器械，注射器，试管架，试管，试管夹，微量移液器，量筒实验药品和试剂：

20%氨基甲酰乙酯， 0. 6%酚红溶液， 20%葡萄糖溶液， 10%NaOH，12. 5%NaOH 溶液， 50%乙酸溶液， 1%氯化汞，碱性你苦味酸，生理盐水，肌酐标准应用液，蒸馏水实验动物家兔实验步骤 1.

1 急性肾功能不全模型复制：

于实验前 24h，取两只家兔，称重，一只作为实验兔，按0. 8~1. 0ml/kg 体重剂量皮下或肌肉注射 10g/L 氯化汞造成急性肾功能不全备用，另一只皮下注射或肌肉注射等量的生理盐水作为对照兔。

1. 2 麻醉固定：

用 200g/L 氨基甲酸乙酯按 5ml/kg 体重剂量注射耳缘静脉，缓慢注射。

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待兔麻醉后将其仰卧，先后固定四肢及兔头。

1. 3 心脏采血：

剪去家兔胸前区部位的毛，在第 3~4 肋间靠近胸骨处，用左手食指摸到心跳最明显处，右手持注射器垂直刺入心脏，当针穿刺心脏时，血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器，取血 3ml，推入干燥试管，静置。

1. 4 膀胱插管术：

从耻骨联合向上沿中线作约 3~4 厘米的切口，沿腹白线打开腹腔，将膀胱轻拉至腹壁外，先辨认清膀胱和输尿管的解剖部位，先用注射器取尿液 2ml 于试管中，然后在输尿管下方穿线结扎尿道，再用止血钳提起膀胱前壁（靠近顶端部分），选择血管较少处，切一纵行小口，插入插管后结扎，将膀胱插管平放于耻骨处，引流管自然下垂，管口低于膀胱水平，排空膀胱，术毕，用温热生理盐水纱布覆盖腹部切口。

然后准备小烧杯，收集尿液。

1. 5 酚红排泄试验：

按 1ml/kg 耳缘静脉注射 0. 6%酚红溶液, 开始计时，再按30ml/kg 耳缘静脉缓慢注射 20%葡萄糖溶液。

从注射酚红溶液起收集 15 分钟（对照组）， 30 分钟（模型组）尿液。

1. 6 生化检测 1. 6. 1 测酚红排泄率 a. 收集注射酚红后的全部尿液移入 500ml 量筒内，加入 10%NaOH10ml，使之显色，

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再加入自来水至 500ml 摇匀。

b. 从量筒中吸出尿液置于试管中，与标准管比色管进行比较，即为 15min、 30min 酚红排泄率。

1. 6. 2 测血肌酐将静置后心脏采血的血用离心机 2019r/min 离心 5 分钟，小心吸取血清置于另一干燥试管中，测血肌酐用。

取硬质试管 3 支编号，分别为空白管、标准管及测定管。

按表 1 加样，混匀，37℃水浴 30min，用分光光度计以波长510nm，空白调零，读 OD 值。

然后各管液体倒回试管，加 50%乙酸溶液两滴，静置 6min 后，再测 OD 值。

按公式 Cr（mg%）=（OD 测-OD测） /（OD 标-OD标） 0. 01/0. 2100（正常值=0. 7~0. 8mg%）表 1 血清肌酐测定单位/ml 空白管标准管测定管肌酐标准应用液/（0. 05mg/ml) 0. 2 血清0. 2 蒸馏水 0. 2 碱性苦味酸 2. 0 2. 0 2. 0 1. 6. 3 测尿肌酐 a. 按表 2 中步骤操作 b. 混匀，放 10min 后加蒸馏水6. 0ml，摇匀，用分光光度计以波长 530nm，空白调零，读取 OD 值，按公式计算尿肌酐值[Cr]p(mg%) =OD 测/OD 标0. 05mg100ml/0. 1ml 表 2 尿肌酐测定单位/ml 空白管标准管测定管尿液（原尿或 1: 50 稀释） 0. 1 尿肌酐标准应用液 0. 1 蒸馏水 0. 1 碱性苦味酸 2. 0 2. 0 2. 0 12. 5%NaOH 溶液 0. 5 0. 5 0. 5 1. 6. 4 内生肌酐清除率内生肌酐清除率=尿中肌酐

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含量/血中肌酐含量尿量（ml/min) 1. 7 肾形态学观察：于耳缘静脉注射 10ml 空气处死家兔，解剖取出肾脏，沉重，计算肾脏与体重之比（即肾系数），并观察肾外形、质地，包膜，最大径纵向剖开肾脏，观察肾切面包膜、肾实质色泽、皮髓质结构改变。

实验结果：

家兔的血肌酐、尿肌酐数据表管号对照组模型组血肌酐尿肌酐血肌酐尿肌酐加乙酸前加乙酸后加乙酸前加乙酸后标准管 0. 423 0. 052 0. 461 0. 051 0. 016 0. 181 测定管 0. 056 0. 049 0. 157 0. 150 0. 040 0. 086 对照组和模型组家兔各项生化指标血清肌酐[Cr]p（mg%）尿肌酐[Cr]u（mg%）尿肌酐/血肌酐酚红排泄率（%）肾比重（g/kg) 内生肌酐清除率对照组模型组 9. 4 15. 7 7. 85 4. 3 0. 83 0. 27 45 5 8. 79 7. 33 0. 0835 0. 0054 不同浓度标准比色液分光光度值排泄率（%） 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 OD 值 0. 01 0. 034 0. 065 0. 1130. 1340. 1640. 1780. 272 0. 284 0. 312 结果说明：

与正常组的家兔对比，急性肾功能不全的家兔血清肌酐升高，尿肌酐明显降低，每分钟的尿量减少，内生肌酐清除率明显下降，酚红排泄率下降，肾系数降低（由于实验中结扎尿道时不慎将输尿管结扎，造成尿路梗阻，肾脏积水，以致对照组肾系数大于模型组）。

正常肾脏颜色为红褐色，切面色泽鲜艳，皮髓质分界清晰。