苯丙氨酸解氨酶(PAL)检测试剂盒(苯丙氨酸比色法)

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高效液相色谱法快速直接测定酪氨酸_苯丙氨酸和色氨酸

( 2) 样品溶液的制备: 将 172300 氨基酸注射液分别稀释 1、5、10、50 倍, 移入进样小瓶中。
(3)A ccQ. T ag 法测定 172300 氨基酸样品处理方法, 参见 A ccQ. T ag 法测定水解氨基酸标准手册。
2. 3 色谱条件流动相: 8. 5 mM N aA c- 5% 甲醇溶液, 用
4 讨论 4. 1 测定波长的选择本方法在测定酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸时, 选择了三种不同的波长, 即在 230 nm 处测定酪氨酸、在 210 nm 处测定苯丙氨酸、在 278 nm 处测定色氨酸, 其根据是这三种氨基酸的紫外吸收图谱 (见图 2)。
图 2 T yr, Phe, T rp 的紫外吸收光谱图
测定波长的选择本方法在测定酪氨酸苯丙氨酸和色氨酸时选择了三种不同的波长即在230nm处测定酪氨酸在210nm处测定苯丙氨酸在278nm处测定色氨酸其根据是这三种氨基酸的紫外吸收图谱见图氨基酸投料量5010的计算结果可以看出在测定172300氨基酸注射液时以稀释10倍最为合适测定结果与投料最为接近而稀释50和不稀释时测定的结果均偏低且与投料量相差较大
磷酸调节 pH = 4. 0; 流速: 1. 2 m l m in; 柱温: 36℃; AU FS: 2. 000; 波长开始设为 230 nm , 分析至 2 m in 时自动变换为 210 nm , 4 m in 时变换为 278 nm , 至 7 m in 分析结束。
3 结果分析 3. 1 各组分的分离效果
从表 2 的计算结果可以看出, 在测定 172 300 氨基酸注射液时, 以稀释 5 倍或 10 倍最为合适, 测定结果与投料最为接近, 而稀释 50 倍和不稀释时测定的结果均偏低, 且与投料量相差较大。通过计算可知: 将样品稀释 50 倍时,

丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒(丙氨酸底物法)产品技术要求lepu

丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒（丙氨酸底物法）适用范围：用于体外定量测定人血清中丙氨酸氨基转移酶的活性。

1.1 规格试剂1:3×60 mL，试剂2:1×45 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×20 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×12 mL；试剂1:4×60 mL，试剂2:4×15 mL；试剂1:2×40 mL，试剂2:2×10 mL；试剂1:3×28 mL，试剂2:3×7 mL；试剂1: 1×4L，试剂2: 1×1L；试剂1: 2×4L，试剂2: 1×2L。

1.2 主要组成成分试剂1主要组分：试剂2主要组分：2.1 净含量应不低于试剂瓶标示装量。

2.2 外观试剂1：无色或淡黄色透明溶液；试剂2：无色或淡黄色透明溶液。

外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度应不小于1.0（波长340nm，光径1cm）。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率（△A/min）应不大于0.004。

2.4 分析灵敏度测试100U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.0025。

2.5 准确度用参考物质(GBW09177)定值的血清测定，实测值与标示值的偏差不超过±12.0％。

2.6 重复性批内变异系数（CV）应不大于5%。

2.7 线性2.7.1在[0.5，800]U/L区间内，线性相关系数r应不低于0.9900；2.7.2[0.5，96）U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±11.52U/L；[96，800]U/L 区间内，线性相对偏差应不超过±12%。

2.8 批间差批间差应不大于10％。

2.9 稳定性取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测，检测结果应符合2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7的要求。

高效液相色谱法测定酶转化液中d-苯丙氨酸

高效液相色谱法测定酶转化液中d-苯丙氨酸
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的鉴定和测定化合物的方法。

下面是一种用于测定酶转化液中d-苯丙氨酸的HPLC 方法：
仪器和试剂：
- 高效液相色谱仪
- C18色谱柱
- 紫外检测器
- 甲醇
- 0.1％磷酸溶液（pH 2.5）
步骤：
1. 准备样品：将酶转化液进行适当的前处理，如稀释或净化，以获得可测定d-苯丙氨酸浓度的样品。

2. 准备标准曲线：准备一系列浓度已知的d-苯丙氨酸标准溶液。

可以使用纯品的d-苯丙氨酸，或者通过其他方法制备。

3. 色谱条件设置：
- 使用C18色谱柱，柱温设定为适当的温度。

- 流动相使用甲醇和0.1％磷酸溶液（pH 2.5），以一定比例混合，并根据实验需要进行调整。

- 设定流速和检测器波长以最佳条件进行分析。

通常，流速为1 mL/min，波长为210 nm。

4. 注入样品和标准溶液：将样品和标准溶液分别注入色谱仪进行分析。

保证注入的样品和标准溶液体积足够小，以避免过度稀释。

5. 分析和计算：根据标准曲线和样品的峰面积，计算样品中的
d-苯丙氨酸浓度。

可以使用内标法或外标法进行定量。

根据不同的实验要求和仪器设置，上述方法可能需要进行调整。

在进行HPLC分析时，确保操作准确和安全，并按照相关的
实验室规定进行。

苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液

苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液简介：苯丙氨酸解氨酶(L－phenylalanine ammonia-lyase ，PAL)是催化直接脱掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。

该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，是1961年J.Koukol 在大麦中发现的，推测其分子量约为30万，这是一个可把苯丙氨酸用于酚类化合物合成的酶。

在组织中的活性可随外界因素而发生显著变化，用光照、病伤害、植物激素处理等会使活性显著增加。

在多数情况下，在组织中活性增加时，酶发生失活作用，这时组织中具有活性酶的量很快就会减少，据认为这种失活是与类蛋白质物质作用有关。

Leagene 苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的苯丙氨酸解氨酶。

该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水2、离心管或试管3、匀浆器或研钵4、低温离心机操作步骤(仅供参考)：1、取植物组织清洗干净，切碎。

2、加入苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液，冰浴情况下充分捣碎或研磨。

3、离心，留取上清液。

4、冻存，用于苯丙氨酸解氨酶的检测或其他用途。

计算：组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%注意事项：编号名称CS0366Storage 苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液500ml 4℃避光使用说明书1份1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液稀释样品后重新测定。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。

拟南芥苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因的研究进展

拟南芥苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因的研究进展孙海燕;全雪丽;付爽;吴松权【摘要】苯丙氨酸解氨酶(PAL)是催化苯丙烷代谢途径第1步反应的限速酶,广泛地参与植物生长发育过程中的各种生理活动.本文概述了拟南芥PAL基因的分子生物学和生理学研究进展,主要包括PAL基因的结构、表达特性、调控机制及其参与的植物生理学的意义,为进一步阐明PAL基因的功能提供参考依据.【期刊名称】《延边大学农学学报》【年(卷),期】2016(038)001【总页数】5页(P88-92)【关键词】拟南芥;苯丙氨酸解氨酶;表达;生理作用【作者】孙海燕;全雪丽;付爽;吴松权【作者单位】延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002【正文语种】中文【中图分类】Q943苯丙烷代谢途径是陆生植物生长和发育所必需的，是植物长期适应自然环境的结果[1-2]。

苯丙氨酸解氨酶(EC 4.3.1 5, PAL)催化L-苯丙氨酸(L-Phe)的非氧化脱氨基作用，生成肉桂酸，是生物合成苯丙烷类天然产物的第1步[3-4]，也是第1个被鉴定的植物“防御基因”[5]。

也是苯丙烷类代谢途径中研究最多的酶[6]。

肉桂酸是植物生长、发育和环境适应所必需的各种苯丙烷类物质的合成起始物[7]。

苯丙烷类化合物是植物中大量酚类化合物的前体，包括木质素、黄酮类、异黄酮类、香豆素、芪类和水杨酸等，它们在维持植物结构、抵御紫外线、形成花青素和植保素、保持花粉活力、信号转导与交流等方面发挥着重要作用 [1,5,8]。

自1961年Koukol和Conn首次描述PAL以来，苯丙氨酸解氨酶得到了广泛的研究[9]，它是控制苯丙烷途径生物合成去向的关键酶和限速酶[7,10]。

拟南芥是一种十字花科植物，广泛用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究，已成为一种典型的模式植物，该植物具有个体小、生长周期快、形态特征简单、生命力强、基因组小、遗传操作简单等优点[11-12]。

生化实验报告(数据处理)

生化实习报告班级：生物技术08指导教师：敖新宇、贾璐学号：姓名：日期：2009-12-19生物化学综合实验摘要：本次实验包括苯丙氨酸解氨酶的纯化及其活性测定和大玉米粉中营养成分的测定两个实验。

关键词：苯丙氨酸解氨酶、Sephadex G—25层析、DEAE纤维素层析、活力、比活力、大玉米粉、凯式定氮法、索式提取法、3，5—二硝基水杨酸比色法。

实验一苯丙氨酸解氨酶的纯化及其活性测定一实验目的1.学习掌握分离纯化生物大分子的方法；2.学习掌握酶活性的测定方法；3.了解在分离纯化过程中酶活性的变化；4.了解高速冷冻离心机的操作步骤二实验原理苯丙氨酸解氨酶（L—phenylalanine: ammonia lyase,简称PAL；EC4.3.1.5）是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物生长发育和抵制病菌侵害过程中起重要作用。

PAL催化L—苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值。

规定1h内增加0.01为PAL的一个活力单位。

酶的比活力是指样品中每毫克蛋白质所含的酶活力单位数。

在实验中将会看到随着PAL的逐步被纯化，其比活力也在逐步增加。

在蛋白质溶液中加入一定量的中性盐（如硫酸铵、硫酸钠等）使蛋白质沉淀析出称为盐析。

溶液的盐浓度通常以盐溶液的饱和度表示，饱和溶液称100%饱和度。

沉淀一种酶所需的具体浓度需要经实验确定。

Sephadex(交联葡萄糖凝胶)是有细菌葡聚糖长连，用交联剂1—氯2—，3—环氯丙烷交联而成。

凝胶商品名后面的G值表示每克干胶吸水量（毫升数）的10倍。

交联度大，网孔小；交联度小，网孔大。

交联度的大小还与凝胶颗粒的机械强度有关，交联度大，机械强度也大（硬胶），在柱层析中流速快。

根据需要，选用一定型号的的凝胶柱做柱层析介质（蛋白脱盐一般用G—25或G—50，G—100~G—200分离不同分子质量的蛋白组分）。

苯丙氨酸解氨酶（PAL）在植物中的作用及其活性测定方法

苯丙氨酸解氨酶（PAL）在植物中的作用及其活性测定方法生命科学实验117篇原创内容公众号苯丙氨酸解氨酶（PAL）催化 L-苯丙氨酸解氨生成反式肉桂酸，是连接初级代谢和苯丙烷类代谢、催化苯丙烷类代谢第一步反应的酶，也是苯丙氨酸代谢途径的关键酶和限速酶。

莽草酸途径产生的莽草酸通过分枝酸、预苯酸经转氨作用生成苯丙氨酸，从而进入苯丙烷类代谢途径，苯丙烷类代谢可生成反式肉桂酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸等中间产物，这些中间产物可进一步转化为香豆素、绿原酸，也可以形成 CoA酯，再进一步转化为木质素、黄酮、异黄酮、生物碱、苯甲酸酯糖苷等次生代谢产物。

一切含苯丙烷骨架的物质都由该代谢途径直接或间接生成。

在生物次生物质代谢中具有防紫外线伤害、抵抗病原体的侵害、保持花粉生活力及形成植物花青素等多种重要作用。

该酶在不同组织中、不同的内外因素调节下，含量水平及其基因表达的时空方式均有所不同。

1.PAL对植物生理代谢的意义植物的代谢分为初级代谢和次级代谢。

植物的次级代谢有多条途径，苯丙烷类代谢途径是其中很重要的一条。

苯丙烷类途径生成的黄酮、异黄酮、生物碱等次生代谢产物在植物的生长发育过程中起着重要的作用，所以PAL对植物的生理意义非常重大。

1.1在木质化中的作用在植物的木质化组织中含有较高的PAL活性。

用分离的百日草叶肉细胞研究了苯丙烷类代谢酶类与木质素、管状分子形成和细胞分化的关系，发现在百日草细胞分化过程中，木质素的合成及管状分子形成与PAL 活性的增加成正相关，细胞溶质中的 PAL 活性在木质化之前迅速上升，微粒体和细胞壁的 PAL 活性在木质化期间快速增加。

1.2在植物色素形成过程中的作用花色素是植物花朵、果实和叶片颜色的重要组成部分，花色素等的合成可由苯丙烷类产物反香豆酰 CoA 经过类黄酮途径生成，该过程与 PAL 密切相关。

如苋红素是中央种子目植物所特有的色素，当用白光、蓝光或红光照射尾穗苋黄化苗后，发现 PAL活性均有不同程度地上升，并有苋红素的积累。

苯丙氨酸检验操作规程

苯丙氨酸检验操作规程1．目的：建立苯丙氨酸检验操作规程，便于检验人员规范操作。

2．范围：适用于配制各种氨基酸注射液的苯丙氨酸测定。

3．责任：质检科检验员对实施本规程负责。

4．程序：4.1性状：白色结晶或结晶性粉末，无臭、味微苦。

4.2鉴别试验本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集983图）一致。

4.3酸度（PH值）测定4.3.1测定范围：5.4-6.04.3.2配制溶液：取本品0.2g，加水20ml溶解后。

4.3.3操作步骤：同亮氨酸。

4.4溶液的透光度测定4.4.1测定范围：>99.0%4.4.2溶液配制；取本品0.5g，加水20ml水中。

4.4.3操作步骤：同亮氨酸。

4.5比旋度测定4.5.1测定范围：-33.50～-35.004.5.2需要试剂：水。

4.5.3操作步骤：取样品，精密称定，加水溶解并稀释成每1ml中约含20mg的溶液，依法测定（见旋光度测定操作规程）4.6氯化物测定4.6.1测定范围：＜0.02%4.6.2试剂和试液：同亮氨酸。

4.6.3操作步骤：同亮氨酸4.7硫酸盐测定4.7.1测定范围：<0.02%4.7.2试剂和试液：同亮氨酸。

4.7.3操作步骤：同亮氨酸。

4.8铵盐测定4.8.1测定范围：<0.02%4.8.2试剂和试液：同亮氨酸。

4.8.3操作步骤：同亮氨酸。

4.9铁盐测定4.9.1测定范围：<0.001%4.9.2试剂和试液：同亮氨酸。

4.9.3 操作步骤：同亮氨酸。

4.10重金属测定4.10.1测定范围：<百万分之十。

4.10.2试剂和试液：同亮氨酸。

4.10.3操作步骤：同缬氨酸。

4.11砷盐测定4.11.1测定范围：<0.0001%4.11.2试剂和试液：同亮氨酸。

4.11.3操作步骤：同苏氨酸。

4.12其它氨基酸测定4.12.1测定范围：<0.5%4.12.2试剂和试液4.12.2.1 2%茚三酮的丙酮溶液：取茚三酮2g，加丙酮100ml溶解，即得。

苯丙氨酸定量检测试剂盒（荧光法）说明书

苯丙氨酸定量检测试剂盒（荧光法）说明书【产品名称】通用名称：英文名称：【包装规格】【预期用途】【检验原理】【主要组成成分】【储存条件及有效期】【适用机型】【样本要求】【检验方法】【参考值（参考范围）】【检验结果的解释】【检验方法的局限性】【产品性能指标】【注意事项】【参考文献】【生产企业】【医疗器械生产企业许可证编号】【医疗器械注册证书编号】【产品标准编号】【说明书批准及修改日期】【产品名称产品名称】】通用名称：苯丙氨酸定量检测试剂盒（荧光法）英文名称：Phenylalanine Kit （FA ）【包装规格包装规格】】96人份/盒 480人份/盒【预期用途预期用途】】用于定量检测采集在S&S 903# 滤纸上的新生儿全血样品中苯丙氨酸的浓度。

适用于新生儿苯丙酮尿症（PKU ）的筛查，仅用于体外检测。

苯丙酮尿症（简称PKU ）是一种较常见的常染色体隐性遗传性氨基酸代谢病，发病率约1/10,000。

本病可因苯丙氨酸羟化酶缺乏引起，也可因辅酶因子BH 4缺陷引起。

这些缺陷致使苯丙氨酸不能被转化为酪氨酸，导致大量的苯丙氨酸及其代谢产物在体内堆积，引起中枢神经系统损害。

其临床主要表现为：发育迟缓，毛发、皮肤及虹膜变浅，癫痫，进行性智力低下等。

由于本病的早期发现早期治疗，对患儿的生长发育、智力发育不受影响，因此被我国列为新生儿疾病筛查项目之一。

检测方法还有细菌抑制法、酶法等。

【检验原理检验原理】】在含有琥珀酸缓冲液、二肽溶液和茚三酮溶液的混合液中，茚三酮可以和苯丙氨酸反应，产生一种荧光物质，其中二肽可提高此荧光反应，琥珀酸缓冲液控制PH 5.8±0.1，可保证理想的荧光值和最大的特异性，加入铜溶液后可以使荧光化合物更加稳定并终止反应。

使用荧光读数仪（激发光390nm ，发射光486nm ）测定荧光物质的强弱，即可反映苯丙氨酸的浓度。

【主要组成成分主要组成成分】】名称96人份/盒 480人份/盒包装琥珀酸缓冲液（琥珀酸）5ml /瓶 25ml /瓶无色透明玻璃瓶或白色塑料瓶二肽溶液（L-leucyl-L-alanine ） 1 ml /瓶 5ml /瓶茚三酮溶液（茚三酮）2 ml /瓶 10m l/瓶铜溶液（碳酸钠、酒石酸钾纳、硫酸铜） 25ml /瓶 125m l/瓶96孔微孔板（透明） 1块 5块无色透明塑料袋96孔微孔板（白色）1块 5块标准血片S 1～S6 （0.24、1.06、2.76、5.32、8.34、13.47 mg/dl ） 1份 2份铝箔袋质控血片C1、C2 1份2份说明书 1份质量验证单1份注：标准品或质控血片的浓度若有改变，将在试剂盒内放通知单，同时电话通知。

生防真菌与氨基寡糖素组合对烟草黑胫病和根黑腐病的防治

生防真菌与氨基寡糖素组合对烟草黑胫病和根黑腐病的防治作者：彭海莹田叶韩李晓芳张蕊王德浩梁元存高克祥来源：《中国烟草科学》2021年第01期摘要：針对烟草黑胫病和根黑腐病两种烟草土传病害日益加重的现状，利用生防真菌棘孢木霉MX菌株和产紫青霉Q2菌株分别与植物诱抗剂氨基寡糖素进行组合，在盆栽条件下测定了其分别在两种病害胁迫下的抗病效果。

结果表明，产紫青霉Q2和棘孢木霉MX对烟草黑胫病菌和根黑腐病菌均有较强的拮抗作用，其发酵滤液能有效抑制两种病原菌的生长，与氨基寡糖素组合后能够更好地促进烟草幼苗的生长，对黑胫病和根黑腐病的防治效果均达到65%以上，能显著提高发病烟草中防御酶PAL、SOD、POD的活性。

关键词：烟草黑胫病;烟草根黑腐病;棘孢木霉;产紫青霉;氨基寡糖素;生物防治Abstract： The present situation of two kinds of tobacco soil-borne diseases， black shank disease and root black rot disease， is increasing， which greatly aggravates the degree of tobacco diseases. In this study， two excellent biocontrol strains， Penicillium purpurogenum strain Q2 and Trichoderma asperellum strain MX， were used to combine with amino oligosaccharides， a plant inducer of disease resistance， respectively. Effects on tobacco growth promoting and control efficacy of tobacco black shank and black root rot have been investigated by two fungal biocontrol agents and their combination with amino oligosaccharides in the potting experiment. The results showed that P. purpurogenum strain Q2 and T. asperellum strain MX had strong antagonism against P. parasitica var. nicotianae and T. basicola， and the combination of them and amino oligosaccharides could better promote the growth of tobacco seedlings， and the control effect on the tobacco black shank and black root rot was more than 65%， which could significantly improve the activities of PAL， SOD and POD in the diseased tobacco.Keywords： tobacco black shank; tobacco black root rot; Trichoderma asperellum; Penicillium purpurogenum; amino oligosaccharide; biological control烟草黑胫病是由寄生疫霉菌烟草致病变种（Phytophthora parasitica var. nicotianae）引起的土传卵菌病害[1-3]，当环境条件有利时，任何生长阶段都可发生。

烟草苯丙氨酸解氨酶活力与多酚含量的关系研究

烟草苯丙氨酸解氨酶活力与多酚含量的关系研究邵伏文;薛宝燕;郭家明;陈学平【摘要】[目的]测定不同品种烟草幼苗中苯丙氨酸解氨酶(PAL)活力、比活力以及多酚含量,研究PAL活力与多酚含量的关系.[方法]3个烟草品种分别为西1#、东2#和中3#.[结果]不同酶提取缓冲液对测定的PAL活力值有影响,其中10％ PVP 的效果最好；烟草幼苗中的多酚含量高,则其PAL活力及比活力都较高,而且PAL 活力与酶提取液中β-巯基乙醇的浓度呈正向相关关系.在试验材料中,多酚含量没有达到抑制PAL活力的水平.[结论]该研究可为探索改进PAL活力测定方法,明确多酚含量与PAL酶活力间的关系提供参考依据.%[Objective] The purpose was to determine the activity of phenylalanine ammonia lyase (PAL) , specific activity and polyphenol content in different varieties of tobacco seedling, and study the relationship between PAL activity and polyphenol content. [ Method] Three tobacco variety was west 1#, east 2# and middle 3#, respectively. [ Result] The enzyme extraction buffers had some effects on PAL activity value, in which 10% PVPs effects was the best. The PAL activity of the tobacco variety seedling with higher polyphenol content was higher, and PAL activity showed a positive correlation with the concentration of β-mercaptoethanol in enzyme extraction buffer. Polyphenol content could hardly inhabit the activity of PAL. [Conclusion] The study provides a reference basis for exploring modified determination method of PAL activity , and confirm the relationship between PAL activity and polyphenol content.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(000)012【总页数】3页(P7009-7011)【关键词】PAL;活力;比活力;多酚含量【作者】邵伏文;薛宝燕;郭家明;陈学平【作者单位】安徽省烟草公司,安徽合肥230022;安徽省烟草公司,安徽合肥230022;中国科学技术大学烟草与健康研究中心,安徽合肥230051;中国科学技术大学烟草与健康研究中心,安徽合肥230051【正文语种】中文【中图分类】S124+.1近年来研究表明，烟草中相当多的香气物质是在生长前、中期积累，而在成熟期调制过程中转化与代谢的［1］。

CHI活性的测定

酶合成的发展变化，在红色的外观和黄酮类化合物的绿色苹果品种摘要：三黄酮类化合物合成酶（苯丙氨酸解氨酶（PAL），查尔酮异构酶（CHI）和糖基转移酶（UFGT））测定在发展苹果（海棠purnila穆勒）水果。

总黄酮和花青素含量测定（高效液相色谱）在同一时期。

所有三种酶活动的变化相同的模式观察红色（“蝶舞”）和一个绿皮肤的品种（“青苹”）。

酶活动是在未成熟的水果高，在中间下降对成熟的季节和上升，成熟的果实中的活动普遍不高未成熟的果实。

智活动相关的总黄酮含量和UFGT整个发展。

在“青苹”有关联黄酮含量和PAL之间，而不是在“蝶舞”期间除外成熟时，果实变红。

在“蝶舞”的所有三个黄酮类化合物的活性酶与花青素水平在泛红。

在所有阶段在“蝶舞”的酶活力比“青苹”高数倍;每日黄酮类化合物的合成率也高得多。

关键词：花青素，苹果皮，查尔酮异构酶，黄酮类化合物的合成，果实发育，糖基转移酶，苯丙氨酸解氨酶。

引言类黄酮生物合成的主要途径大约20年前，推导出使用从chemicogenetical数据研究（Harborne1962年），从与研究放射性标记的前体（Grisebach1965）。

在过去的几年中相当大的进展已取得在阐明了黄酮类化合物的合成及其酶学。

与异常的花青素，几个反应仍下落不明，基本步骤的主要黄酮类化合物的生物合成途径类已经确立（Harborne1988）。

“黄酮类化合物的合成有关的酶被归类分为三个一般组：（1）所涉及的酶前体合成，如苯丙氨酸解氨酶（PAL，EC4.3.1.5）（2）参与合成的酶黄酮类，如查耳酮异构酶（CHI，欧共体5.5.1.6）及（3）酶黄酮修改负责，如糖基转移酶（海勒和Forkmann1988年）。

所有的类黄酮生物合成有关的酶只有两个已经从先前报告苹果，这些都是PAL（荒川等A11986;布兰肯希普和Unrath1988久保]）和黄酮类化合物的葡萄糖（Macheix等A1，1981）。

PAL制式催化反应是在脱氨L-苯丙氨酸产生反式肉桂酸和氨。

植物激素及理化指标检测书

► 积的变化不会影响影响定量结果。内ꢉ法抵消了前处理的操作误差，乃至流动相、检测器的影响。
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类别游离态生长素结合态生长素
生长素前体
脱落酸游离态茉莉酸结合态茉莉酸茉莉酸前体游离态水杨酸结合态水杨酸
天然细胞分裂素
人工合成细胞分裂素赤霉素系列油菜素内酯
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比色法
乙醇提取-比色法测定

小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒操作方法

小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒操作方法本试剂盒仅供研究使用。

小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒检测范围96T40ng/L -1200ng/L小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒使用目的本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中降钙素原（PCT）含量。

小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人降钙素原（PCT）水平。

用纯化的人降钙素原（PCT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入降钙素原（PCT），再与HRP标记的降钙素原（PCT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的降钙素原（PCT）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人降钙素原（PCT）浓度。

小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒组成小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

植物(Plant)苯丙氨酸解氨酶(PAL)-NEWA

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断植物（Plant）苯丙氨酸解氨酶（PAL）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被苯丙氨酸解氨酶（PAL）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的苯丙氨酸解氨酶（PAL）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。

3.植物萃取液或其它相关样本：请1000x g离心20分钟，取上清即可检测。

4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1、2、4、8、16U/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

固定化酶的比较

A Com par ison of Phenyla lan ine Amm on ia - lya ses I mm ob il ized by D ifferen t M ethods
W AN G X iao 2hua, SU H a i2x iang
Guang z h 510182, C h ina
・122・丙烯酸所需的酶量为一个活性单位。
2. 2 苯丙氨酸测定用荧光法。 2. 3 蛋白质含量测定: 用改良 L ow ry 氏法。 2. 4 固定化偶联率测定分别测定固定化加样中
肿瘤防治研究 2001 年第 28 卷第 2 期
胆固醇、磷脂酰丝氨酸 CHOL = 7 ∶ 2 ) ; C: 卵磷脂、 ( PC ∶CHOL ∶PS= 7∶2∶1) A 、 B、 C 配方分别溶于氯仿溶液 ( 100m g m l) 。采用三种方法制备脂质体, 超声法得单片层小囊泡脂质体。复乳法又称双乳化法。脱水再加水法[ 8 ] 得单片层大囊泡脂质体。 2. 6. 4 固定化细胞将经 L 2Phe 诱导培养的深红酵母细胞收集后, 立即悬浮于 pH 7. 4、 0. 05 m o l L T ris2HC l 缓冲液中 ( 3g 湿细胞 10m l) , 缓慢加入 20 倍体积210℃预冷的丙酮, 剧烈搅拌 15m in, 5000 ×g 离心 20m in, 收集细胞, 以上述缓冲液洗涤三次, 除去剩余丙酮, 冷冻干燥贮存。对照采用同期培养的细胞, 离心收集以缓冲液洗涤三次后冻干贮存。处理后细胞在人工肠液 ( 按 85 年版中国药典配制) 中对 L 2苯丙氨酸的降解作用: 取处理后细胞0. 2 g, 置含 0. 2mm o l L L 2Phe 的人工肠液 20m l 中, 于恒温振荡器 37℃模拟肠蠕动, 共 4h r. , 每小时取 1m l, 8000×g 离心 20m in, 测上清液中 L 2Phe 含量, 对照用未经处理细胞, 方法同上。处理后细胞在人工肠液中的抗胰蛋白酶试验: 取处理后细胞 0. 2g, 加人工肠液 20m l, 37℃模拟肠蠕动, 共 4h r. , 每小时取 1m l, 8000 ×g 离心 20m in, 收集细胞, 超声破膜, 再离心, 取上清测 PAL 活性及蛋白含量。对照用未经处理的酵母细胞 0. 2g, 加 0. 05 m o l L PB S 1m l, 先超声破膜后再加入 pH 6. 8、人工肠液 20m l, 同上孵育, 定时取样, 测定。 3 结果 3. 1 包埋法偶联率及活性保留百分数见表 1, 结果表明: 采用 T ∶C 比为 8 ∶30 时固定化酶不仅偶联率高且活性明显高于 T ∶C 比为 8∶19。

苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定

苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定一、目的掌握纯化酶的基本操作和方法；学习一种常用的酶活力测定法。

二、原理苯丙氨酸解氨酶（l-phenylalanine：ammonialyase,缩写pal；ec4.3.1.5）就是植物体内苯丙烷类新陈代谢的关键酶，与一些关键的次生物质例如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等制备紧密有关，在植物正常生长发育和抵挡病菌侵犯过程中起至关键促进作用。

pal催化剂l-苯丙氨酸水解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处为最小稀释值。

若酶的重新加入量适度，a290增高的速率可以在几小时内维持维持不变，因此通过测量a290增高的速率以测量pal活力。

规定1h内a290减少0.ol为pal的一个活力单位。

三、试剂和材料(1)0.lmol硼酸一硼砂缓冲液(ph8.7)(2)酶提取液0.1mol/i硼酸一硼砂缓冲液（含1mmol/i,edta,20mmol/lβ一巯基乙醇）（3）0.6m.ol/i-l一苯丙氨酸溶液（4）6mol/lhcl(5）固体硫酸铵(6）0.02mol/l-磷酸盐缓冲液（ph8.0,含0.5mmol/ledta,2.5%甘油，20nlmol/l.β-巯基乙醇）（7）sephadexg一25（8）deae纤维素52（9）标准蛋白质溶液（100ug/ml）：精确称取10mg牛血清自蛋自于烧杯内，用蒸馏水熔化，全然迁移至100ml容量瓶内，定容至刻度，搅匀。

（10）托福马斯亮蓝g-250蛋白质染色液：称取10mg托福马斯亮蓝g-250,溶5ml95`%乙醇中，重新加入85％（w/v）磷酸loml，搅匀后即为母液。

用时，按15ml母液提85m1蒸馏水的比例吸收，搅匀后过滤器即为为稀释液。

（11）滴管(l2)木患夹材料：供试植物材料四、操作步骤（1）酶液抽取植物材料lg，剪大段，重新加入5倍体积的酶提取液，于冰浴上研钵研磨。

(2)将已匀浆的酶液用三层纱布过滤。

滤液转入离心管，10000g冷冻离心30分钟。

苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4457

苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4457规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110mL×1瓶4℃保存试剂一液体15mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2瓶4℃保存试剂三液体1mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前取1瓶加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用；现配现用，4℃可保存2周。

产品说明：PAL（EC4.315）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶和限速酶，在动物体内尚未发现。

与一些重要的次生物质如木质素、类黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育、抗病、抗逆反应中起重要作用。

PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

10000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。

2、操作表：（在EP管或96孔板中按顺序加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管空白管样本5试剂一145150试剂二4040混匀，30℃准确反应30min试剂三1010混匀，静置10min后，290nm处记录测定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。

苯丙氨酸解氨酶的测定

苯丙氨酸解氨酶的测定一、实验目的利用无土栽培技术培育不同pH下水芹，使用离心技术粗提取苯丙氨酸解氨酶，用分光光度计测不同的吸光值。

二、实验原理无土栽培是用人工配制的培养液，供给植物矿物营养的需要。

离心技术的应用是将样品放入离心机的离心管内，离心机驱动时，样品液就随离心管做匀速圆周运动，于是就产生了一向外的离心力。

由于不同颗粒的质量、密度、大小及形状等彼此各不相同，在同一固定大小的离心场中沉降速度也就不相同，由此便可以得到相互间的分离。

分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。

三、仪器与试剂仪器：高速离心机、分光光度计、玻璃瓶、研钵、烧杯、量筒、试管、剪刀和纱布等。

试剂：霍格兰营养液，磷酸缓冲液,0.02mol/L苯丙氨酸,硼酸缓冲液，高锰酸钾材料：水芹幼苗，0.1mol/LNaOH溶液四、操作步骤一、水芹的无土栽培1.配好无土栽培营养液，准备7个玻璃瓶，分别加入15ml营养液。

再加NaOH溶液把玻璃瓶中pH值调成5，5.5，6，6.5，7，7.5，8，贴上标签。

2.把水芹幼苗从玻璃瓶中取出经过洗净，用高锰酸钾消毒处理后，分别移入盛有营养液的玻璃杯中，放在光照培养箱培养3.定期观察并注意加霍格兰营养液和NaOH溶液使玻璃瓶中pH保持不变。

二、水芹中苯丙氨酸解氨酶的粗提取1.等到水芹大概张到20cm左右，就把它们分别从玻璃瓶中取出，在30℃暗中培养5小时。

然后分别把同一pH值的水芹分别剪成根，茎，叶，根茎，根叶，叶茎，根茎叶七个部分均为0.5g。

2.加预冷的pH7.2磷酸缓冲液5mL，冰浴下充分研磨，均匀混合，用4层纱布过滤。

4000rpm 离心15min，弃沉淀。

获上清液用磷酸缓冲液稀释5倍，作为酶测定的粗提液，置于冰浴下保存备用。

三、水芹中苯丙氨酸解氨酶的吸光度测定设计对照试验：A：取粗水芹酶液0.1mL，加入2.5mL 0.02mol/L苯丙氨酸B：取0.1mL硼酸缓冲液，加入2.5mL 0.02mol/L苯丙氨酸（对照）。