苯丙氨酸解氨酶(PAL)检测试剂盒(苯丙氨酸微板法)
苯丙氨酸氨裂解酶
苯丙氨酸氨裂解酶
苯丙氨酸氨裂解酶
苯丙氨酸氨裂解酶（Phenylalanine Ammonia Lyase，PAL）是一种细胞色素P（cytochrome P450）家族的酶，主要用于氨基酸类植
物激素的合成。
它是一种非常重要的酶，可以帮助植物抗逆性的生长和发育过程。
苯丙氨酸氨裂解酶的分子量约为50kDa，分子结构由许多氨基酸组成。
它有两个催化中心，在一个催化中心，它可以将氨基酸转化为其他氨基酸，在另一个催化中心，它可以将氨基酸转化为植物激素。
此外，PAL还具有一定的调控作用，它可以抑制或激活植物激素的形成。
苯丙氨酸氨裂解酶有许多应用。
它可以用于调控植物激素的合成，从而影响植物的生长和发育。
它还可以用于研究调控植物激素合成的分子机制，这对了解植物的生长发育有重要意义。
此外，它还可以用于生产植物激素，这些植物激素可以用于农业生产。
苯丙氨酸氨裂解酶是一种重要的酶，可以帮助植物抗逆性的生长和发育过程。
它可以用于调控植物激素的合成，研究调控植物激素合成的分子机制以及生产植物激素。
苯丙氨酸脱氨酶实验报告
一、实验目的1. 了解苯丙氨酸脱氨酶（Phenylalanine Dehydrogenase，简称PAH）的基本性质和作用。
2. 掌握苯丙氨酸脱氨酶活性的测定方法。
3. 通过实验验证不同条件下苯丙氨酸脱氨酶活性的变化。
二、实验原理苯丙氨酸脱氨酶是一种参与生物体内氨基酸代谢的酶，其活性对于许多生物学过程至关重要。
本实验采用邻苯二胺法测定苯丙氨酸脱氨酶活性。
该方法原理是：苯丙氨酸脱氨酶将苯丙氨酸脱氨后，产生苯丙酮酸，苯丙酮酸在反应中与邻苯二胺反应，生成深蓝色化合物。
该化合物的蓝色深浅与苯丙酮酸的浓度成正比，可以通过分光光度计测量吸光度来测定苯丙酮酸的生成速率，从而计算苯丙氨酸脱氨酶的活性。
三、实验材料1. 实验试剂：苯丙氨酸、邻苯二胺、氢氧化钠、三氯化铁、蒸馏水等。
2. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验方法1. 配制苯丙氨酸溶液：称取苯丙氨酸0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1mg/ml的苯丙氨酸溶液。
2. 配制邻苯二胺溶液：称取邻苯二胺0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1mg/ml的邻苯二胺溶液。
3. 氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠0.5g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成5%的氢氧化钠溶液。
4. 三氯化铁溶液：称取三氯化铁0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1%的三氯化铁溶液。
5. 样品处理：取适量样品，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成一定浓度的样品溶液。
6. 实验步骤：a. 取试管一支，加入苯丙氨酸溶液2ml。
b. 加入样品溶液2ml。
c. 加入邻苯二胺溶液2ml。
d. 加入氢氧化钠溶液2ml。
e. 混匀，置于恒温水浴锅中，在特定温度下反应一定时间。
f. 取出试管，加入三氯化铁溶液1ml。
g. 混匀，用分光光度计在特定波长下测定吸光度。
h. 根据吸光度计算苯丙氨酸脱氨酶活性。
五、实验结果与分析1. 苯丙氨酸脱氨酶活性随温度升高而升高，在50℃时达到峰值，随后随温度升高而降低。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)
丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)简介：Leagene 丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，在ALT 催化下，其反应公式如下：L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。
二硝基苯肼与α-酮酸反应，生成相应的二硝基苯腙，在碱性条件下，二硝基苯腙的吸收光谱有差异，通过酶标仪检测在500-520nm 处差异最大，以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量，进而计算酶的活性。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①_x0001_ 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT 的检测。
②_x0001_ 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT 的检测。
③_x0001_ (选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ALT/GPT 含量。
2、 制作ALT 标准曲线：取适量的丙酮酸标准(100mmol/L)，按丙酮酸标准(100mmol/L)：丙酮酸标准稀释液=1：49的比例混合，即为丙酮酸标准工作液-丙酮酸标准(2mmol/L)，按下表制备标准曲线。
最好设定平行检测管，求平均值。
编号 名称TE0121 100T Storage试剂(A): 丙酮酸标准(100mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 丙酮酸标准稀释液 2ml RT 试剂(C): 标准对照液 2ml 4℃ 试剂(D): ALT assay buffer 3ml -20℃ 避光 试剂(E): 二硝基苯肼显色液 3ml 4℃ 避光 试剂(F): ALT 显色基液 25mlRT 使用说明书1份加入物0 1 2 3 4 丙酮酸标准(2mmol/L)(μl)2468标准对照液(μl) 4 4 4 4 4ALT assay buffer(μl)(37℃提前孵育5min) 20 18 16 14 12相当于ALT/GPT(卡门单位) 0 28 57 97 150 混匀，向各管中加入二硝基苯肼显色液20μl，混匀，37℃孵育20min后，加入ALT 显色基液200μl，混匀。
苯丙氨酸(Phe)检测
苯丙氨酸（Phe）检测
苯丙氨酸（Phenylalanine, Phe），又称2-氨基-3-苯基丙酸，是人体必需氨基
酸之一，属芳香族氨基酸。
在体内大部分经苯丙氨酸羟化酶催化作用氧化成酪
氨酸，并与酪氨酸一起合成重要的神经递质和激素，参与机体糖代谢和脂肪代谢。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液质联用(LC-MS)法，可高效、精准的检测苯丙氨酸的含量变化。
此外，我们还提供其他氨基酸及其代谢物检测服务，以满足您的不同需求。
HPLC和LC-MS测定苯丙氨酸样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报
告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关质谱参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 苯丙氨酸含量信息
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
LC-MS氨基酸测定项目样本报告，点击查看>。
苯丙氨酸解氨酶
苯丙氨酸解氨酶引言苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia-lyase，简称PAL）是一种重要的酶，参与苯丙氨酸代谢途径中的第一步反应。
它能够将苯丙氨酸转化为酪氨酸和氨。
因此，苯丙氨酸解氨酶在植物中的生理功能和途径调控中拥有重要的地位。
结构苯丙氨酸解氨酶是一种单体酶，其分子量约为40-65 kDa。
在不同的物种中，苯丙氨酸解氨酶的结构存在一定的差异。
但是总体上，它通常由若干个结构域组成，包括一个N末端的酶活性结构域，一个中间的调节结构域以及一个C末端的底物结合结构域。
反应机制苯丙氨酸解氨酶在催化反应中使用了一个共轭辅酶，被称为5,6,7,8-四羟基二氢类黄酮酸（pteridin-6醌的衍生物）。
该辅酶能够捕捉氨基的一个负电荷，并将其转移到供体分子上。
催化反应的步骤如下：1.苯丙氨酸进入酶活性结构域，并与共轭辅酶产生一个中间产物。
2.中间产物失去氨基，生成一个酮体。
3.该酮体再次与共轭辅酶发生反应，生成氨和酪氨酸。
生理功能苯丙氨酸解氨酶在植物的生长和发育过程中发挥着重要的作用。
它不仅参与苯丙氨酸代谢途径中的第一步反应，还能够产生次级代谢产物，如类黄酮类物质。
这些次级代谢产物在植物中具有抗氧化、抗病原体和抗逆境等多种生理功能。
苯丙氨酸解氨酶的活性和表达水平受到多种因素的调控。
其中，水分、光照和温度是三个关键的调控因素。
此外，植物激素和环境胁迫也会对苯丙氨酸解氨酶的表达产生影响。
应用苯丙氨酸解氨酶在医药和食品加工领域具有广泛的应用前景。
例如，苯丙氨酸解氨酶可以用于合成抗癌药物和抗病毒药物。
此外，它还可以用于食品加工中，用于改善食品的口感和提高食品的营养价值。
结论苯丙氨酸解氨酶是植物中重要的酶，参与苯丙氨酸代谢途径中的第一步反应。
它在植物的生理功能和途径调控中具有重要的地位。
苯丙氨酸解氨酶的结构和反应机制已经被研究得较为清楚，其生理功能受到多种因素的调控。
此外，苯丙氨酸解氨酶还具有广泛的应用前景，在医药和食品加工领域有着重要的应用价值。
苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液
苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液简介：苯丙氨酸解氨酶(L－phenylalanine ammonia-lyase ，PAL)是催化直接脱掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。
该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，是1961年J.Koukol 在大麦中发现的，推测其分子量约为30万，这是一个可把苯丙氨酸用于酚类化合物合成的酶。
在组织中的活性可随外界因素而发生显著变化，用光照、病伤害、植物激素处理等会使活性显著增加。
在多数情况下，在组织中活性增加时，酶发生失活作用，这时组织中具有活性酶的量很快就会减少，据认为这种失活是与类蛋白质物质作用有关。
Leagene 苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的苯丙氨酸解氨酶。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、蒸馏水2、离心管或试管3、匀浆器或研钵4、低温离心机操作步骤(仅供参考)：1、取植物组织清洗干净，切碎。
2、加入苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液，冰浴情况下充分捣碎或研磨。
3、离心，留取上清液。
4、冻存，用于苯丙氨酸解氨酶的检测或其他用途。
计算：组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%注意事项：编号名称CS0366Storage 苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液500ml 4℃避光使用说明书1份1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液稀释样品后重新测定。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。
苯丙氨酸定量检测试剂盒（酶法）说明书
苯丙氨酸定量检测试剂盒（酶法）说明书【产品名称】通用名称：英文名称：【包装规格】【预期用途】【检验原理】【主要组成成分】【储存条件及有效期】【适用机型】【样本要求】【检验方法】【参考值（参考范围）】【检验结果的解释】【检验方法的局限性】【产品性能指标】【注意事项】【参考文献】【生产企业】【医疗器械生产企业许可证编号】【医疗器械注册证书编号】【产品标准编号】【说明书批准及修改日期】【产品名称】通用名：苯丙氨酸定量检测试剂盒（酶法） 英文名称：Phenylalanine Kit （Enzyme ）【包装规格】96人份/盒 480人份/盒【预期用途】用于定量检测采集在S&S903# 滤纸上的新生儿全血样品中苯丙氨酸的浓度。
本试剂盒适用于新生儿苯丙酮尿症（PKU ）的筛查检测。
仅用于体外检测。
苯丙酮尿症（简称PKU ）是一种较常见的常染色体隐性遗传性氨基酸代谢病，发病率约1/10,000。
本病可因苯丙氨酸羟化酶缺乏引起，也可因辅酶因子BH 4缺陷引起。
这些缺陷致使苯丙氨酸不能被转化为酪氨酸，导致大量的苯丙氨酸及其代谢产物在体内堆积，引起中枢神经系统损害。
其临床主要表现为：发育迟缓，毛发、皮肤及虹膜变浅，癫痫，进行性智力低下等。
由于本病的早期发现早期治疗，对患儿的生长发育、智力发育不受影响，因此被我国列为新生儿疾病筛查项目之一。
检测方法还有细菌抑制法、荧光法等。
【检验原理】采用三氯醋酸（TCA）从干血片中萃取苯丙氨酸。
苯丙氨酸被苯丙氨酸脱氢酶转化成苯丙酮酸 。
这个反应伴随着反应混合物中存在的辅酶NAD+减少，生成NADH，这个氧化还原反应中把添加的四唑盐转化成橙黄色物质Formazane。
Formazane 的量与样本中苯丙氨酸的量成正比。
使用酶标仪检测其光密度值，即可换算成其对应的苯丙氨酸浓度值，酶标仪波长使用450nm。
【主要组成成分】名称96人份/盒 480人份/盒 包装酶稀释液（Triton X-100缓冲液） 11ml /瓶 55ml /瓶无色透明玻璃瓶或棕色玻璃瓶底物（四唑盐）11ml /瓶 55ml /瓶 中和液（碳酸盐缓冲液） 5.5ml /瓶 27.5m l/瓶 三氯醋酸溶液（3%） 17ml /瓶 85 m l/瓶 酶（冻干粉） 1瓶（冻干粉） 5瓶（冻干粉） 辅酶（冻干粉） 1瓶（冻干粉）5瓶（冻干粉）96孔微孔板2块 10块 铝箔袋 标准血片S1～S5 1.1、2.8、5.3、9.6、17.3mg/dl 1份 2份 无色透明塑料袋质控血片C1：2.2– 4.2 mg/dl C2：4.6– 8.6 mg/dl 1份2份说明书 1份 质量验证单1份注：标准品或质控品的浓度若有改变，将在试剂盒内放通知单，同时电话通知。
苯丙氨酸解氨酶（PAL）在植物中的作用及其活性测定方法
苯丙氨酸解氨酶（PAL）在植物中的作用及其活性测定方法生命科学实验117篇原创内容公众号苯丙氨酸解氨酶（PAL）催化 L-苯丙氨酸解氨生成反式肉桂酸，是连接初级代谢和苯丙烷类代谢、催化苯丙烷类代谢第一步反应的酶，也是苯丙氨酸代谢途径的关键酶和限速酶。
莽草酸途径产生的莽草酸通过分枝酸、预苯酸经转氨作用生成苯丙氨酸，从而进入苯丙烷类代谢途径，苯丙烷类代谢可生成反式肉桂酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸等中间产物，这些中间产物可进一步转化为香豆素、绿原酸，也可以形成 CoA酯，再进一步转化为木质素、黄酮、异黄酮、生物碱、苯甲酸酯糖苷等次生代谢产物。
一切含苯丙烷骨架的物质都由该代谢途径直接或间接生成。
在生物次生物质代谢中具有防紫外线伤害、抵抗病原体的侵害、保持花粉生活力及形成植物花青素等多种重要作用。
该酶在不同组织中、不同的内外因素调节下，含量水平及其基因表达的时空方式均有所不同。
1.PAL对植物生理代谢的意义植物的代谢分为初级代谢和次级代谢。
植物的次级代谢有多条途径，苯丙烷类代谢途径是其中很重要的一条。
苯丙烷类途径生成的黄酮、异黄酮、生物碱等次生代谢产物在植物的生长发育过程中起着重要的作用，所以PAL对植物的生理意义非常重大。
1.1在木质化中的作用在植物的木质化组织中含有较高的PAL活性。
用分离的百日草叶肉细胞研究了苯丙烷类代谢酶类与木质素、管状分子形成和细胞分化的关系，发现在百日草细胞分化过程中，木质素的合成及管状分子形成与PAL 活性的增加成正相关，细胞溶质中的 PAL 活性在木质化之前迅速上升，微粒体和细胞壁的 PAL 活性在木质化期间快速增加。
1.2在植物色素形成过程中的作用花色素是植物花朵、果实和叶片颜色的重要组成部分，花色素等的合成可由苯丙烷类产物反香豆酰 CoA 经过类黄酮途径生成，该过程与 PAL 密切相关。
如苋红素是中央种子目植物所特有的色素，当用白光、蓝光或红光照射尾穗苋黄化苗后，发现 PAL活性均有不同程度地上升，并有苋红素的积累。
苯丙氨酸解氨酶活性检测试剂盒说明书 BC0215
苯丙氨酸解氨酶（PAL微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0215规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶4℃保存试剂一液体15 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2瓶4℃保存试剂三液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前取1瓶加入2.5 mL蒸馏水充分溶解待用；现配现用，4℃可保存2周。
产品说明：PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶和限速酶，在动物体内尚未发现。
与一些重要的次生物质如木质素、类黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育、抗病、抗逆反应中起重要作用。
PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
10000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。
2、操作表：（在EP管或96孔板中按顺序加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管空白管样本5试剂一145150试剂二4040BC0215 -- 第1 页，共2 页混匀，30℃准确反应30min试剂三1010混匀，静置10min后，290nm处记录测定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。
IVD检验代码
FT4 总三碘甲状腺原氨酸测定试剂盒（化学发光法） TT3 甲功七项 TT4 TSH
TPO TGAB
总甲状腺素测定试剂盒（化学发光法） 超敏人促甲状腺激素测定试剂盒（化学发光法）
抗甲状腺过氧化物酶抗体测定试剂盒（化学发光法） 甲状腺球蛋白抗体测定试剂盒（化学发光法） 甲状腺球蛋白测定试剂盒（化学发光法） 甲胎蛋白测定试剂盒（化学发光法） 癌胚抗原测定试剂盒（化学发光法） 癌抗原125定量检测试剂盒（化学发光法） 癌抗原15-3定量检测试剂盒（化学发光法） 糖类抗原19-9定量检测试剂盒（化学发光法） 前列腺特异抗原测定试剂盒（化学发光法）
TG AFP 肿瘤抗原1 CEA CEA125 CEA153 肿瘤抗原2 CEA199 PSA
FPSA 免疫 FER FOL 贫血三项
游前列腺特异抗原测定试剂盒（化学发光法） 铁蛋白测定试剂盒（化学发光法） 叶酸测定试剂盒（化学发光法）
维生素B12测定试剂盒（化学发光法） VB12 LH FSH PROG E2 UE3 性激素 HGH TESTO PRL
FT4 总三碘甲状腺原氨酸校准品 TT3 TT4 TESTO 免疫校准品 PRL LH FSH PROG E2 HGH PTH COR TGAB TPO TG FER UE3 VB12 FOL 甲状腺球蛋白抗体校准品 抗甲状腺过氧化物酶抗体校准品 甲状腺球蛋白校准品 铁蛋白校准品 雌三醇校准品 维生素B12校准品 叶酸校准品 免疫球蛋白A检测试剂盒(免疫比浊法) Immunoglobulin A 免疫球蛋白G检测试剂盒(免疫比浊法) 免疫球蛋白M检测试剂盒(免疫比浊法) Immunoglobulin M 补体C3检测试剂盒(免疫比浊法) C0mplement C3 补体C4检测试剂盒(免疫比浊法) λ 轻链检测试剂盒(免疫比浊法) 特定蛋白 κ 轻链检测试剂盒(免疫比浊法) Kappa Light Chain C反应蛋白检测试剂盒(免疫比浊法) 抗链球菌溶血素O检测试剂盒(免疫比浊法) 孕酮校准品 雌二醇校准品 人生长激素校准品 甲状旁腺激素校准品 皮质醇校准品 泌乳素校准品 黄体生成素校准品 促卵泡生成激素校准品 总甲状腺素校准品 睾酮校准品
超氧化物歧化酶(SOD)过氧化物酶(CAT)苯丙氨酸解氨酶(PAL)实验测定方法总结
超氧化物歧化酶（SOD）活性测定-----氮蓝四唑（NBT）法依据测定的蛋白含量计算出不同品种葡萄所需的酶液量（mL），并按照表2顺序加入试剂，注意核黄素要最后加入，共做6管。
表2 NBT法测定SOD酶活性50mM pH 7.8磷酸缓冲液（mL）130mM甲硫氨酸溶液（mL）750μM氮蓝四唑溶液（mL）100μMEDTA-Na2（mL）蒸馏水（mL）酶粗提液（mL）20μM核黄素溶液（mL）1 3.2 0.6 0.6 0.6 0.4 0 0.62 3.2 0.6 0.6 0.6 0.4 0 0.63 3.18 0.6 0.6 0.6 0.4 0.02 0.64 3.18 0.6 0.6 0.6 0.4 0.02 0.65 3.18 0.6 0.6 0.6 0.4 0.02 0.66 3.18 0.6 0.6 0.6 0.4 0.02 0.6注：1号为不光照对照管，2号为光照对照管各溶液显色反应用量混合后，将1号管置于黑暗处，其余各管置于光照处，反应约10 min（温度低时，反应时间延长；光照强时，缩短反应时间）。
反应结束后，全部移入暗处，以不光照对照管作为空白对照，在560nm处测定吸光度，记录数据。
以每变化0.1个吸光度为一个酶活单位SOD酶活计算公式：SOD（U/Pr.mg)=(Ack-Ae)/(Ack*0.1*C)式中：C-蛋白含量（mg）Ack-用缓冲液代替酶液的照光对照管吸光度Ae-样品管吸光度试剂配制方法：（1）0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）。
91.5ml0.05MNa2HPO4（1.638582g）+8.5ml0.05M NaH2PO4(0.06630425g)（2）130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml。
（3）750µmol/L氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。
[医疗保健]苯丙酮尿症筛查细菌抑制法
![[医疗保健]苯丙酮尿症筛查细菌抑制法](https://img.taocdn.com/s3/m/276afb6ea58da0116c1749fc.png)
4. 用直径3mm打孔器分别打取标准血片、质控血 片和待检血片，按照加样模板所示排列在培养 皿上，将培养皿倒置放入37℃±0.5℃恒温箱中 培养16-18小时
新生儿疾病筛查是在非选择新生儿群体中， 用快速、简便、敏感的检验方法对某些危害严重 的先天性，代谢缺陷性疾病筛查，从而对那些阳 性病儿在症状出现之前，能够及时给以治疗，避 免痴呆儿等严重后果的发生，保障儿童正常的体 格和智能发育的系统服务。
1982年，第二届国际新生儿疾病筛查大会提 出适合大规模筛查的四种疾病：甲状腺功能减低 症（ＣＨ）、苯丙酮尿症（ＰＫＵ）、半乳糖血 症和先天性肾上腺皮质增生症。
炎 中 药 方 -肺 胃郁热 【肺炎症状】身热有汗不解，咳嗽痰内 见红， 舌苔薄 腻而黄 ，脉濡 滑数。
【肺炎治法】清宣肺胃而化痰热 【肺炎方药】嫩前胡4.5克，清水豆卷12克，水 炙桑叶 9克， 金银花9克，连 翘壳9克，光 杏仁9克 ，象贝 粉4.5克 ，黑山 栀9克 ，生甘 草3克
【用法】ห้องสมุดไป่ตู้煎服。
【肺炎按语】风温，身热有汗不解，无 形寒头 痛之象 ，病邪 由表入 里，尚 在卫、 气之间 。叶香 岩谓“ 在卫汗 之可也 ，到气 才可清 气”， 故治以 栀子豉 汤法清 气透卫 。以其 身热汗 出， 表卫已虚，故透卫仅取
桑叶、豆卷等微幸微甘之品，勿令重虚 其表， 庶免汗 多亡阳 ；以其 已具脉 数、苔 黄之侯 ，尚无 烦躁、 口渴等 症，里 热未炽 ，故清 气只用 银花、 连翘、 山栀等 轻清之 品，使 药力不 犯中 下二焦，勿令药过病所；以其“未传 心包， 邪尚在 肺”， 故以前 胡、杏 仁、象 贝粉等 宣肺化 痰。 4.肺 炎 中 药 方 -痰热雍 肺，木 火侮金
小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒操作方法
小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒操作方法本试剂盒仅供研究使用。
小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒检测范围96T40ng/L -1200ng/L小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒使用目的本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中降钙素原（PCT）含量。
小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人降钙素原（PCT）水平。
用纯化的人降钙素原（PCT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入降钙素原（PCT），再与HRP标记的降钙素原（PCT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的降钙素原（PCT）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人降钙素原（PCT）浓度。
小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒组成小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
小鼠L苯丙氨酸解氨酶ELISA试剂盒操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
植物苯丙氨酸代谢相关酶基因启动子研究进展
[收稿日期]20100319 [基金项目]国家自然科学基金项目(30971974);湖北省自然科学基金重点项目(2008CDA061);湖北省教育厅产学研合作资助项目(CXY2009B009) [第一作者简介]唐 寅(1983),男,湖北武汉人,硕士研究生,研究方向为银杏分子生物学. [通讯作者]程水源,E -mail :s y cheng @sina .comdoi :10.3969/j .issn .16731409(S ).2010.02.020植物苯丙氨酸代谢相关酶基因启动子研究进展 唐 寅,张威威,许 锋 (长江大学园艺园林学院,湖北荆州434025) 程水源 (黄冈师范学院生命科学与工程学院,湖北黄冈438000)[摘要]苯丙氨酸代谢途径是植物重要的次生代谢途径,主要包括苯丙烷代谢途径和异黄酮合成代谢途径,其中每一步都由不同酶调控。
启动子是基因的一个组成部分,控制基因表达(转录)的起始时间和表达程度。
综述了苯丙氨酸代谢途径3种重要酶,即苯丙氨酸解氨酶、查尔酮合成酶和查尔酮异构酶基因启动子的研究进展。
[关键词]苯丙氨酸代谢途径;异黄酮合成途径;启动子;分子机理[中图分类号]Q946.5[文献标识码]A [文章编号]16731409(2010)02S06804植物的代谢分为初级代谢和次级代谢,而次级代谢有多条途径。
从碳流的角度来看,苯丙氨酸代谢途径是植物次生代谢最重要的途径之一。
在一个细胞中,20%以上的代谢通过丙氨酸代谢途径,一切含苯丙烷骨架的物质都是由这一途径直接或间接生成的。
苯丙氨酸代谢主要包括2个代谢途径,即苯丙烷代谢途径和类黄酮合成代谢途径[1,2]。
植物启动子是重要的顺式作用元件,是位于结构基因5'端上游区的DNA 序列,它能指导RNA 聚合酶与模板的正确结合,是转录调控的中心。
研究苯丙氨酸代谢相关酶基因的启动子,能从分子机理分析其代谢过程,为研究各种次生代谢产物的分子调控打下基础[1]。
小鼠苯丙氨酸(LPA)ELISA试剂盒使用说明书本
小鼠苯丙氨酸(LPA)ELISA试剂盒使用说明书本本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中α半乳糖基抗体(LPA)的含量。
试验原理：LPA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知LPA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将LPA和生物素标记的抗体同时温育。
小鼠苯丙氨酸洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中LPA的浓度呈比例关系。
试剂盒组成：自备材料蒸馏水。
加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
PAL 苯丙氨酸解氨酶所使用的缓冲液配制方法
PAL 苯丙氨酸解氨酶所使用的缓冲液——硼酸盐缓冲液首先配制0.2 Mol/L硼酸和0.05 Mol/L 硼砂。
然后再根据不同的pH值，再配制成0.2Mol/L 的硼酸缓冲液。
具体如下所示：1．硼酸（Ｈ3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。
2．硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。
不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH 0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）7.4 1.0 9.07.6 1.5 8.58.4 4.5 5.57.8 2.0 8.08.2 3.5 6.58.7 6.0 4.08.0 3.0 7.09.0 8.0 2.0pAL的提取与活性的测定按照Lister等的方法[0·2 M硼酸盐缓冲液(pH8·8), 0·018 Mβ-巯基乙醇], 0·1 g PVPP(以去除酚类物质对颜色的干扰),加少量石英砂,于-20℃预冷的研钵中冰浴研磨, 4层纱布过滤.滤液经4℃, 15 000 g离心20 min,取上清液作为粗酶液,用于PAL活性测定:取1 mL粗酶液加2 mL蒸馏水再加1 mL反应底物(0·02 M的L-苯丙氨酸),对照不加底物,加1mL蒸馏水. 34℃恒温水浴30 min,加0·5 mL 35%的三氯乙酸(TCA)终止反应. 12 000 g离心10 min去除变性蛋白,于290 nm波长处测定吸光度.以1 mL反应液每小时在290 nm处吸光度变化0·01为1个酶活单位,用U表示[20].以上实验操作重复3次,每次操作设3个重复。
苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定
苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定一、目的掌握纯化酶的基本操作和方法；学习一种常用的酶活力测定法。
二、原理苯丙氨酸解氨酶（l-phenylalanine：ammonialyase,缩写pal；ec4.3.1.5）就是植物体内苯丙烷类新陈代谢的关键酶，与一些关键的次生物质例如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等制备紧密有关，在植物正常生长发育和抵挡病菌侵犯过程中起至关键促进作用。
pal催化剂l-苯丙氨酸水解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处为最小稀释值。
若酶的重新加入量适度，a290增高的速率可以在几小时内维持维持不变，因此通过测量a290增高的速率以测量pal活力。
规定1h内a290减少0.ol为pal的一个活力单位。
三、试剂和材料(1)0.lmol硼酸一硼砂缓冲液(ph8.7)(2)酶提取液0.1mol/i硼酸一硼砂缓冲液（含1mmol/i,edta,20mmol/lβ一巯基乙醇）（3）0.6m.ol/i-l一苯丙氨酸溶液（4）6mol/lhcl(5）固体硫酸铵(6）0.02mol/l-磷酸盐缓冲液（ph8.0,含0.5mmol/ledta,2.5%甘油，20nlmol/l.β-巯基乙醇）（7）sephadexg一25（8）deae纤维素52（9）标准蛋白质溶液（100ug/ml）：精确称取10mg牛血清自蛋自于烧杯内，用蒸馏水熔化，全然迁移至100ml容量瓶内，定容至刻度，搅匀。
（10）托福马斯亮蓝g-250蛋白质染色液：称取10mg托福马斯亮蓝g-250,溶5ml95`%乙醇中，重新加入85％（w/v）磷酸loml，搅匀后即为母液。
用时，按15ml母液提85m1蒸馏水的比例吸收，搅匀后过滤器即为为稀释液。
（11）滴管(l2)木患夹材料：供试植物材料四、操作步骤（1）酶液抽取植物材料lg，剪大段，重新加入5倍体积的酶提取液，于冰浴上研钵研磨。
(2)将已匀浆的酶液用三层纱布过滤。
滤液转入离心管，10000g冷冻离心30分钟。
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苯丙氨酸解氨酶(PAL)检测试剂盒(苯丙氨酸微板法)
简介：
苯丙氨酸解氨酶(L－phenylalanine ammonia-lyase，PAL)是催化直接脱掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。
该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，是1961年J.Koukol在大麦中发现的，推测其分子量约为30万，这是一个可把苯丙氨酸用于酚类化合物合成的酶。
在组织中的活性可随外界因素而发生显著变化，用光照、病伤害、植物激素处理等会使活性显著增加。
在多数情况下，在组织中活性增加时，酶发生失活作用，这时组织中具有活性酶的量很快就会减少，据认为这种失活是与类蛋白质物质作用有关。
测定细胞木质素合成途径中间代谢物及关键酶活性，可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
Leagene苯丙氨酸解氨酶(PAL)检测试剂盒(苯丙氨酸微板法)检测原理是以苯丙氨酸作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于酶标仪290nm处检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。
该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的苯丙氨酸解氨酶活性，尤其适用于检测水果中苯丙氨酸解氨酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、蒸馏水
2、研钵或匀浆器
3、离心管或试管
4、低温离心机
5、恒温箱或水浴锅
6、酶标板
7、酶标仪
操作步骤(仅供参考)：编号
名称TE0401
100T
Storage
试剂(A):PAL Lysis buffer250ml4℃避光试剂(B):PAL Assay buffer5ml4℃避光使用说明书1份
1、准备样品：
①植物样品：取植物组织或水果中层果肉，加入PAL Lysis buffer，冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆，离心，留取上清液，冻存，用于苯丙氨酸解氨酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于苯丙氨酸解氨酶的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，离心，取上清液，冻存，用于苯丙氨酸解氨酶的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的苯丙氨酸解氨酶，可以使用蒸馏水或PAL Lysis buffer稀释进行恰当的稀释。
2、PAL加样：按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生
气泡。
如果样品中的PAL活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置2平行孔，求平均值。
加入物(μl)对照孔测定孔
蒸馏水150100
待测样品5050
PAL Assay buffer－50
3、PAL检测：立即以酶标仪，以对照孔为对照，测定测定孔的吸光度(A测定0)。
准确孵育
后，立即加入PAL终止液终止反应(备选方案)，以酶标仪，以对照孔为对照，测定测定孔的吸光度(A测定1)。
注意：加入PAL终止液终止反应不是必须步骤，可准确孵育后直接以酶标仪，以对照孔为对照，测定测定孔的吸光度(A测定1)。
计算：
PAL活性单位的定义：在该实验条件下，每小时吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。
组织样本PAL(U)={(A测定1-A测定0)×V T}/(W×V S×0.01×t)
式中：A测定1=孵育1h后测定孔的吸光度值
A测定0=加入PAL Assay buffer后立即测定的测定孔吸光度值
W=组织样本的重量(g)
V T=提取酶液的总体积(ml)
V S=测定时所用酶液体积(ml)
液体样本PAL(U)=(A测定1-A测定0)/(0.01×t)
式中：A测定1=孵育1h后测定孔的吸光度值
A测定0=加入PAL Assay buffer后立即测定的测定孔吸光度值
t=反应时间
注意事项：
1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、获得上清液为PAL酶液，应尽快检测，亦可保存。
3、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定。
4、每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CM0004LB培养基
DC0032Masson三色染色液
DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)
NR0001DEPC处理水(0.1%)
PS0013RIPA裂解液(强)
TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。