苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液

（精选）保护酶活性测定方法一、过氧化物酶（pod）活性测定1、酶液的制备...

保护酶活性测定方法一、过氧化物酶（POD）活性测定1、酶液的制备：称取样品3 g，加入预冷的0.05 mol/L pH7.8的磷酸缓冲液少量，用粗纱布过滤，定容至10ml，低温离心（12×104r/min,0~4℃）15min,取上清夜置于低温冰箱备用。

2、试剂：0.05 mol/L pH 5.5磷酸缓冲液0.05 mol/L 愈创木酚溶液（2-甲基酚）20%三氯乙酸溶液2%H2O23、仪器：分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸量管4、过氧化物酶活性测定：（1）加入反应混合液2.9 ml磷酸缓冲液1 ml愈创木酚溶液（2-甲基酚）1 ml H2O20.1ml酶液（2）37℃水浴锅中保温15min,迅速转入冰浴，并加入2ml三氯乙酸溶液终止反应（3）过滤，适当稀释。

在470nm处测OD470。

5、结果计算：以每分钟内OD变化0.01为1个酶活力单位。

即酶活力=OD×D / 0.01t酶的比活力= OD×D /（0.01tw）其中：OD为反应时间内吸光度的变化W为材料鲜重t为反应时间D为稀释倍数。

即提取的总酶液为反应系统内酶的倍数二、多酚氧化酶（PPO）活性测定1、酶液的制备：称取样品3 g，加入预冷的0.05 mol/L pH7.8的磷酸缓冲液少量，用粗纱布过滤，定容至10ml，低温离心（12×104r/min,0~4℃）15min,取上清夜置于低温冰箱备用。

2、试剂：0.05 mol/L pH 5.5磷酸缓冲液0.05mol/L儿茶酚溶液（邻苯二酚）20%三氯乙酸溶液2%H2O23、仪器：分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸量管4、多酚氧化酶活性测定：（1）加入反应混合液3.9 ml磷酸缓冲液1 ml 儿茶酚溶液0.1 ml酶液（2）37℃水浴锅中保温15min,迅速转入冰浴，并立即加入2ml三氯乙酸溶液终止反应。

（3）过滤，适当稀释。

几种抗氧化酶的作用

一.超氧化物歧化酶(SOD):超氧化物歧化酶，是一种新型酶制剂，是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。

SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。

SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。

它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。

由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要！超氧化物歧化酶(SOD)按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。

SOD是一种含有金属元素的活性蛋白酶。

超氧化物岐化酶（SOD）能催化如下的反应：O2-+H+→H2O2+O2，O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。

它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。

SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。

尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶（POD）会立即将其分解为完全无害的水。

这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。

目前，人们认为自由基（也称游离基）与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。

所谓的自由基就是当机体进行代谢时，能夺去氧的一个电子，这样这个氧原子就变成自由基。

自由基很不稳定，它要在身体组织细胞的分子中再夺取电子来使自己配对，当细胞分子推陈出新一个电子后，它也变成自由基，又要去抢夺细胞膜或细胞核分子中的电子，这样又称会产生新的自由基。

几种抗氧化酶的作用

一.超氧化物歧化酶(SOD):超氧化物歧化酶，是一种新型酶制剂，是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。

SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。

SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。

它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。

由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要！超氧化物歧化酶(SOD)按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。

SOD是一种含有金属元素的活性蛋白酶。

超氧化物岐化酶（SOD）能催化如下的反应：O2-+H+→H2O2+O2，O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。

它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。

SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。

尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶（POD）会立即将其分解为完全无害的水。

这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。

目前，人们认为自由基（也称游离基）与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。

所谓的自由基就是当机体进行代谢时，能夺去氧的一个电子，这样这个氧原子就变成自由基。

自由基很不稳定，它要在身体组织细胞的分子中再夺取电子来使自己配对，当细胞分子推陈出新一个电子后，它也变成自由基，又要去抢夺细胞膜或细胞核分子中的电子，这样又称会产生新的自由基。

苯丙氨酸脱氨酶实验报告

一、实验目的1. 了解苯丙氨酸脱氨酶（Phenylalanine Dehydrogenase，简称PAH）的基本性质和作用。

2. 掌握苯丙氨酸脱氨酶活性的测定方法。

3. 通过实验验证不同条件下苯丙氨酸脱氨酶活性的变化。

二、实验原理苯丙氨酸脱氨酶是一种参与生物体内氨基酸代谢的酶，其活性对于许多生物学过程至关重要。

本实验采用邻苯二胺法测定苯丙氨酸脱氨酶活性。

该方法原理是：苯丙氨酸脱氨酶将苯丙氨酸脱氨后，产生苯丙酮酸，苯丙酮酸在反应中与邻苯二胺反应，生成深蓝色化合物。

该化合物的蓝色深浅与苯丙酮酸的浓度成正比，可以通过分光光度计测量吸光度来测定苯丙酮酸的生成速率，从而计算苯丙氨酸脱氨酶的活性。

三、实验材料1. 实验试剂：苯丙氨酸、邻苯二胺、氢氧化钠、三氯化铁、蒸馏水等。

2. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。

四、实验方法1. 配制苯丙氨酸溶液：称取苯丙氨酸0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1mg/ml的苯丙氨酸溶液。

2. 配制邻苯二胺溶液：称取邻苯二胺0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1mg/ml的邻苯二胺溶液。

3. 氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠0.5g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成5%的氢氧化钠溶液。

4. 三氯化铁溶液：称取三氯化铁0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1%的三氯化铁溶液。

5. 样品处理：取适量样品，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成一定浓度的样品溶液。

6. 实验步骤：a. 取试管一支，加入苯丙氨酸溶液2ml。

b. 加入样品溶液2ml。

c. 加入邻苯二胺溶液2ml。

d. 加入氢氧化钠溶液2ml。

e. 混匀，置于恒温水浴锅中，在特定温度下反应一定时间。

f. 取出试管，加入三氯化铁溶液1ml。

g. 混匀，用分光光度计在特定波长下测定吸光度。

h. 根据吸光度计算苯丙氨酸脱氨酶活性。

五、实验结果与分析1. 苯丙氨酸脱氨酶活性随温度升高而升高，在50℃时达到峰值，随后随温度升高而降低。

植物花青素合成代谢途径及其分子调控

植物花青素合成代谢途径及其分子调控一、本文概述植物花青素是一类广泛存在于自然界中的天然色素，它们以其丰富的色彩和独特的生物活性，在植物的生长、发育以及适应环境过程中发挥着重要作用。

花青素的合成代谢途径是一个复杂而精细的网络，涉及到多个酶的催化作用和各种调控机制的协同作用。

本文将对植物花青素合成代谢途径及其分子调控进行系统的阐述，旨在深入理解花青素生物合成的分子机制，挖掘其在植物生物学中的应用潜力，为植物遗传改良和农业生产提供理论依据。

本文将详细介绍植物花青素合成代谢途径的基本框架和关键步骤，包括前体物质的合成、花色苷合成酶系的催化作用以及最终产物的形成等。

通过对这些基本过程的分析，我们可以清晰地了解花青素如何从简单的无机物质逐步转化为复杂的有机色素。

本文将深入探讨花青素合成代谢途径中的分子调控机制。

这包括转录水平、翻译水平和翻译后水平等多个层次的调控，涉及多种转录因子、miRNA、激素信号转导通路以及蛋白质相互作用等。

通过对这些调控机制的研究，我们可以揭示花青素合成代谢途径的复杂性和灵活性，了解植物如何根据环境条件的变化调整花青素的合成量和种类。

本文将总结花青素合成代谢途径及其分子调控在植物生物学中的应用前景。

随着对花青素生物合成机制的深入理解，我们可以利用基因工程、代谢工程等现代生物技术手段，对植物进行遗传改良，提高花青素的含量和品质，进而开发出更具营养价值和观赏价值的植物新品种。

花青素作为一种天然色素和生物活性物质，在食品、医药和化妆品等领域也具有广阔的应用前景。

因此，对植物花青素合成代谢途径及其分子调控的研究具有重要的理论和实践意义。

二、植物花青素合成代谢途径植物花青素（Anthocyanins）是一类重要的次生代谢产物，广泛存在于各类植物的花、果实、叶片和茎干中，赋予植物丰富多彩的色泽。

这些色素不仅影响植物的观赏价值，而且在植物应对环境胁迫（如紫外线、低温、干旱等）和防御病虫害方面发挥重要作用。

植物生理指标

植物生理指标1、植物酶液提取：1)PVPP(固体,PVP单体与金属元素结合) 酚类吸附剂，酚的羟基与蛋白质的羰基形成氢键，醌导致蛋白质聚合。

或polyclarAT（Polyclar-AT is insoluble PVP, also called as PVPP (PolyVinyl PolyPyrrolidine).It binds phenols etc more efficiently than PVP and is easilyremovable by filtration or a low speed spin）去除酚的毒害防止醌颜色干扰。

PVP的肽键中的氧与酚羟基上的质子牢固结合，防止酚与酶中肽键结合，保护了酶。

2)母液制备：0.1mol/L二硫苏糖醇DTT: 100mg至微量离心管，+650ul 水0.5mo/L EDTA : 93gEDTANa,10g NaOH,定容到500ml10mg/ml BSA：100mgBSA于9.5ml 水中2、可溶性总糖测定（蒽酮比色法）（1）原理：糖+硫酸—糠醛，其与蒽酮形成绿色络合物，620nm下显色。

本实验采用浓硫酸，倒入水中产生大量热，促进反应发生。

（2）标准曲线绘制：取略大于0.01g的葡萄糖，105度烘干至恒重，取0.01g 定容至100ml，配成100ug/ml的溶液。

取200mg蒽酮，溶于100ml 浓硫酸，冷却，保存于棕色瓶。

（注意：不需定容，量取100ml硫酸倒入烧杯即可，定容混匀时产气热溅出。

注意硫酸中是否存在杂质。

蒽酮非常敏感，不能用勺等挖取，只能直接倒，否则就会污染。

溶液配后呈亮黄色，放置620nm.实验结果：实际上并不理想，因abs均偏低，可试将标糖浓度适当升高。

葡萄糖含量ug 20 40 60 80 100abs 0.09 0.169 0.259 0.332 0.4273、电导率（DDS-11A）1)接通电源前观否指零，若有偏差调节表头下方凹孔，使其恰指零。

酶活性测定方法

体系一酶和蛋白质提取消过毒的打孔器进行伤口处理后，在每个伤口处添加50μL以下处理：（1）无菌水，对照；（2）浓度为1000μg/mlGA3；（3）浓度为1 ×104 spores/ml P. expansum孢子悬浮液；（4）浓度为1000μg/mlGA3+浓度为1 ×104 spores/ml P. expansum孢子悬浮液。

处理后湿纱布覆盖并用PE塑料膜密封作保湿处理。

贮藏于常温（20-25℃）下。

分别在0、12、24、36和48小时取样进行测定酶活性。

取样时沿伤口用刀小心切下1g果实组织，加入10 mL冷(4℃)的50 mmol/L磷酸缓冲液（PBS）内含1.33 mmol/L EDTA和1% PVPP缓冲液(pH 7.8)。

研钵加入少量液氮预冷后，在冰浴中碾磨，破碎组织，然后在冷冻离心机12000rpm离心15分钟。

取上清液供酶活性和蛋白质含量用。

蛋白质含量测定试验材料和试剂：牛血清白蛋白标准溶液：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL的原液。

8.1.2 蛋白试剂考马斯亮蓝G-250：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。

8.1.3 乙醇；磷酸（85％）。

试验方法：分别取牛血清白蛋白标准溶液（1000μg／mL）0,、10μL、20μL、40μL、60μL、80μL、100μL，无菌水补至100μL，加入考马斯亮蓝G-250试剂5mL，作为标准溶液；分别取标准溶液和上清液（试验7中得到）400μL加到酶标板，以无菌水置零，测定OD595；酶活的测定9.1 试验材料和试剂9.1.1 氮蓝四唑；甲硫氨酸；核黄素；过氧化氢；愈创木酚；邻苯二酚。

9.1.2 Na2HPO4-12H2O；NaH2PO4-2H2O。

9.1.3 磷酸缓冲液PBS配制母液：0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水；0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水。

生物化学实习报告

生物化学实验报告生物化学综合实验摘要：本次实验包括苯丙氨酸解氨酶的纯化及其活性测定和大米粉中营养成分的测定两个实验。

关键词：苯丙氨酸解氨酶、Sephadex G—25层析、DEAE纤维素层析、活力、比活力、大米粉、凯式定氮法、索式提取法、3，5—二硝基水杨酸比色法。

实验一苯丙氨酸解氨酶的纯化及其活性测定一、实验目的1.学习掌握分离纯化生物大分子的方法；2.学习掌握酶活性的测定方法；3.了解在分离纯化过程中酶活性的变化；4.了解高速冷冻离心机及蛋白质检测仪的操作步骤。

二、实验原理苯丙氨酸解氨酶（L—phenylalanine: ammonia lyase,简称PAL；EC4.3.1.5）是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物生长发育和抵制病菌侵害过程中起重要作用。

PAL催化L—苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值。

规定1h 内增加0.01为PAL的一个活力单位。

酶的比活力是指样品中每毫克蛋白质所含的酶活力单位数。

在实验中将会看到随着PAL的逐步被纯化，其比活力也在逐步增加。

在蛋白质溶液中加入一定量的中性盐（如硫酸铵、硫酸钠等）使蛋白质沉淀析出称为盐析。

溶液的盐浓度通常以盐溶液的饱和度表示，饱和溶液称100%饱和度。

沉淀一种酶所需的具体浓度需要经实验确定。

Sephadex(交联葡萄糖凝胶)是有细菌葡聚糖长连，用交联剂1—氯2—，3—环氯丙烷交联而成。

凝胶商品名后面的G值表示每克干胶吸水量（毫升数）的10倍。

交联度大，网孔小；交联度小，网孔大。

交联度的大小还与凝胶颗粒的机械强度有关，交联度大，机械强度也大（硬胶），在柱层析中流速快。

根据需要，选用一定型号的的凝胶柱做柱层析介质（蛋白脱盐一般用G—25或G—50，G—100~G—200分离不同分子质量的蛋白组分）。

由于被分离物质的分子大小和形状不同，分子质量大的进入凝胶网孔中被阻滞，从而后流出层析住，达到分离的目的。

植物苯丙氨酸解氨酶研究进展

植物苯丙氨酸解氨酶研究进展摘要苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase，pal，e.c4.3.1.5)是催化苯丙烷代谢途径第一步反应的酶，也是这个途径的关键酶和限速酶，对植物具有非常重要的生理意义。

综述了苯丙氨酸解氨酶的存在与分布、基本特性、生理代谢意义、抗病以及基因表达与调控等，为pal在植物抗病的应用上提供基础数据。

关键词苯丙氨酸解氨酶；生理作用；抗逆境；基因表达与调控中图分类号s661.1文献标识码a文章编号1007-5739(2009)01-0030-04苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase，pal，e.c4.3.1.5)催化l-苯丙氨酸解氨生成反式肉桂酸，是连接初级代谢和苯丙烷类代谢、催化苯丙烷类代谢第一步反应的酶，也是苯丙氨酸代谢途径的关键酶和限速酶。

莽草酸途径产生的莽草酸通过分枝酸、预苯酸经转氨作用生成苯丙氨酸，从而进入苯丙烷类代谢途径，苯丙烷类代谢可生成反式肉桂酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸等中间产物，这些中间产物可进一步转化为香豆素、绿原酸，也可以形成coa酯，再进一步转化为木质素、黄酮、异黄酮、生物碱、苯甲酸酯糖苷等次生代谢产物[1，2]。

一切含苯丙烷骨架的物质都由该代谢途径直接或间接生成。

在生物次生物质代谢中具有防紫外线伤害、抵抗病原体的侵害、保持花粉生活力及形成植物花青素等多种重要作用。

该酶在不同组织中、不同的内外因素调节下，含量水平及其基因表达的时空方式均有所不同。

1pal的存在和分布1961年koukal和conn首次在绿色植物大麦幼苗中发现了pal，并进行了分离纯化[3]。

随着研究的深入，该酶已被固定化，用于工业化生产苯丙氨酸。

至今，pal已在所有绿色植物中发现，在真菌、细菌、藻类中也有存在。

不同植物中pal活性不同，在同一株植物的不同组织部位，pal活性也不同。

一般越嫩的部位pal活性越高，如杨树的幼叶、顶芽、幼茎中pal活性最高，而老茎和成熟叶中pal则较低[4]。

河南省2024-2025年金太阳高三年级联考(三)生物学试题(含解析)

河南省名校联盟2024-2025学年高三上学期10月底联考（三）生物学本试卷满分100分，考试用时75分钟。

注意事项：1．答题前，考生务必将自己的姓名、考生号、考场号、座位号填写在答题卡上。

2．回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。

如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。

回答非选择题时，将答案写在答题卡上。

写在本试卷上无效。

3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。

4．本试卷主要考试内容：人教版必修1、必修2。

一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。

在每小题给出的四个选项中，只有一项符合题目要求。

1．大豆和小麦是我国重要的粮食作物，均富含营养物质。

下列相关叙述错误的是（）A．大豆富含蛋白质，重金属盐能使蛋白质变性失活B．大豆油富含不饱和脂肪酸，在室温下往往呈液态C．小麦富含淀粉，淀粉的水解产物是葡萄糖和果糖D．在一定的条件下，细胞内的脂肪和糖类可相互转化2．下列对教材相关实验结果的分析，正确的是（）A．观察黑藻的叶绿体时，可见叶绿体呈椭圆形，基粒结构明显B．洋葱鳞片叶外表皮细胞失水时，可观察到液泡膜与细胞壁分离C．分离菠菜叶的光合色素时，最接近滤液细线的色素带呈蓝绿色D．观察洋葱根尖细胞的有丝分裂时，部分细胞的染色体数目不同3．叶肉细胞合成的蔗糖进入维管束鞘细胞后，只能沿着维管束鞘细胞→居间细胞→筛分子细胞的方向运输，不能反向运输。

为解释上述现象，植物学家提出了多聚体—陷阱模型，具体内容如图所示。

下列叙述正确的是（）A．蔗糖能与斐林试剂发生反应，产生砖红色沉淀B．蔗糖和棉子糖都能通过居间细胞两侧的胞间连丝C．与居间细胞相比，筛分子细胞能截留更多的蔗糖D．胞间连丝的孔径和糖分子的直径不同是模型成立的前提4．易位子是一种位于内质网膜上的蛋白质复合体，其中心有一个直径约为2纳米的通道，能与信号肽结合并引导新合成的多肽链进入内质网。

多肽链若在内质网中未正确折叠，则会通过易位子被运回细胞质基质。

苯丙氨酸解氨酶活性检测试剂盒说明书 BC0215

苯丙氨酸解氨酶（PAL微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0215规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶4℃保存试剂一液体15 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2瓶4℃保存试剂三液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前取1瓶加入2.5 mL蒸馏水充分溶解待用；现配现用，4℃可保存2周。

产品说明：PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶和限速酶，在动物体内尚未发现。

与一些重要的次生物质如木质素、类黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育、抗病、抗逆反应中起重要作用。

PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

10000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。

2、操作表：（在EP管或96孔板中按顺序加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管空白管样本5试剂一145150试剂二4040BC0215 -- 第1 页，共2 页混匀，30℃准确反应30min试剂三1010混匀，静置10min后，290nm处记录测定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。

烟草苯丙氨酸解氨酶活力与多酚含量的关系研究

烟草苯丙氨酸解氨酶活力与多酚含量的关系研究邵伏文;薛宝燕;郭家明;陈学平【摘要】[目的]测定不同品种烟草幼苗中苯丙氨酸解氨酶(PAL)活力、比活力以及多酚含量,研究PAL活力与多酚含量的关系.[方法]3个烟草品种分别为西1#、东2#和中3#.[结果]不同酶提取缓冲液对测定的PAL活力值有影响,其中10％ PVP 的效果最好；烟草幼苗中的多酚含量高,则其PAL活力及比活力都较高,而且PAL 活力与酶提取液中β-巯基乙醇的浓度呈正向相关关系.在试验材料中,多酚含量没有达到抑制PAL活力的水平.[结论]该研究可为探索改进PAL活力测定方法,明确多酚含量与PAL酶活力间的关系提供参考依据.%[Objective] The purpose was to determine the activity of phenylalanine ammonia lyase (PAL) , specific activity and polyphenol content in different varieties of tobacco seedling, and study the relationship between PAL activity and polyphenol content. [ Method] Three tobacco variety was west 1#, east 2# and middle 3#, respectively. [ Result] The enzyme extraction buffers had some effects on PAL activity value, in which 10% PVPs effects was the best. The PAL activity of the tobacco variety seedling with higher polyphenol content was higher, and PAL activity showed a positive correlation with the concentration of β-mercaptoethanol in enzyme extraction buffer. Polyphenol content could hardly inhabit the activity of PAL. [Conclusion] The study provides a reference basis for exploring modified determination method of PAL activity , and confirm the relationship between PAL activity and polyphenol content.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(000)012【总页数】3页(P7009-7011)【关键词】PAL;活力;比活力;多酚含量【作者】邵伏文;薛宝燕;郭家明;陈学平【作者单位】安徽省烟草公司,安徽合肥230022;安徽省烟草公司,安徽合肥230022;中国科学技术大学烟草与健康研究中心,安徽合肥230051;中国科学技术大学烟草与健康研究中心,安徽合肥230051【正文语种】中文【中图分类】S124+.1近年来研究表明，烟草中相当多的香气物质是在生长前、中期积累，而在成熟期调制过程中转化与代谢的［1］。

超氧化物歧化酶(SOD)过氧化物酶(CAT)苯丙氨酸解氨酶(PAL)实验测定方法总结

超氧化物歧化酶（SOD）活性测定-----氮蓝四唑（NBT）法依据测定的蛋白含量计算出不同品种葡萄所需的酶液量（mL），并按照表2顺序加入试剂，注意核黄素要最后加入，共做6管。

表2 NBT法测定SOD酶活性50mM pH 7.8磷酸缓冲液（mL）130mM甲硫氨酸溶液（mL）750μM氮蓝四唑溶液（mL）100μMEDTA-Na2（mL）蒸馏水（mL）酶粗提液（mL）20μM核黄素溶液（mL）1 3.2 0.6 0.6 0.6 0.4 0 0.62 3.2 0.6 0.6 0.6 0.4 0 0.63 3.18 0.6 0.6 0.6 0.4 0.02 0.64 3.18 0.6 0.6 0.6 0.4 0.02 0.65 3.18 0.6 0.6 0.6 0.4 0.02 0.66 3.18 0.6 0.6 0.6 0.4 0.02 0.6注：1号为不光照对照管，2号为光照对照管各溶液显色反应用量混合后，将1号管置于黑暗处，其余各管置于光照处，反应约10 min（温度低时，反应时间延长；光照强时，缩短反应时间）。

反应结束后，全部移入暗处，以不光照对照管作为空白对照，在560nm处测定吸光度，记录数据。

以每变化0.1个吸光度为一个酶活单位SOD酶活计算公式：SOD（U/Pr.mg)=(Ack-Ae)/(Ack*0.1*C)式中：C-蛋白含量（mg）Ack-用缓冲液代替酶液的照光对照管吸光度Ae-样品管吸光度试剂配制方法：（1）0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）。

91.5ml0.05MNa2HPO4（1.638582g）+8.5ml0.05M NaH2PO4(0.06630425g)（2）130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml。

（3）750µmol/L氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。

钙对感染白粉菌甜瓜幼苗中苯丙烷类物质代谢的影响

钙对感染白粉菌甜瓜幼苗中苯丙烷类物质代谢的影响作者：徐永茹于成龙徐田敏等来源：《山东农业科学》2011年第02期摘要：采用钙和钙离子螫合剂EGTA喷施甜瓜幼苗叶片，研究了外源钙对接种白粉菌甜瓜叶片中苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)活性以及阿魏酸、木质素、绿原酸含量的影响。

结果表明，喷施CaCl2的植株再接种白粉菌时，叶片中PAL、PPO、POD的活性以及阿魏酸、木质素、绿原酸含量都显著高于未接种的对照1(K1)和单独接种自粉菌的对照2(K2)；而喷施EGTA的植株再接种白粉菌时，酚类物质含量及相关酶活性则低于对照2。

以上结果说明，外源钙通过提高甜瓜叶片中相关酶的活性积累酚类物质，诱导对白粉病菌的抗性，而钙信号系统则可能参与了这个过程。

关键词：钙；甜瓜；白粉病；酚类物质代谢中图分类号：S436.5；S143.7+2文献标识号：A文章编号：1001－4942(2011)02－0037－05钙不仅是植物生长发育所必须的大量元素，而且是偶联胞外信号与细胞内生理生化反应的第二信使，在植物抗病虫及应答各种非生物胁迫反应中起着重要的作用。

病原菌作为激发子能够通过一系列信号传递，开启植物抗病防卫相关基因，表达抗病物质，达到抗病目的。

研究表明，植物的这种应激反应机制与钙离子浓度有密切的联系。

苯丙烷类代谢是植物形成具有抗菌作用产物——酚类物质的重要途径之一，通过苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia－lyase，PAL)、多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)、过氧化物酶(peroxidase，POD)合成大量酚类化合物、香豆酸酯类、类黄酮等抑制病原菌的生长。

目前，钙在植物抗病性中的作用报道很多，如外源钙对黄瓜霜霉病、番茄白粉病、香石竹叶斑病、柑橘油斑病具有明显的抑制作用，但大多从发病率、病情指数、抗氧化酶变化等方面研究，而钙对感病植物苯丙烷类物质代谢影响的报道很少。

植物(Plant)苯丙氨酸解氨酶(PAL)-NEWA

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断植物（Plant）苯丙氨酸解氨酶（PAL）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被苯丙氨酸解氨酶（PAL）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的苯丙氨酸解氨酶（PAL）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。

3.植物萃取液或其它相关样本：请1000x g离心20分钟，取上清即可检测。

4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1、2、4、8、16U/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

PAL 苯丙氨酸解氨酶所使用的缓冲液配制方法

PAL 苯丙氨酸解氨酶所使用的缓冲液——硼酸盐缓冲液首先配制0.2 Mol/L硼酸和0.05 Mol/L 硼砂。

然后再根据不同的pH值，再配制成0.2Mol/L 的硼酸缓冲液。

具体如下所示：1．硼酸（Ｈ3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。

2．硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。

不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH 0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）7.4 1.0 9.07.6 1.5 8.58.4 4.5 5.57.8 2.0 8.08.2 3.5 6.58.7 6.0 4.08.0 3.0 7.09.0 8.0 2.0pAL的提取与活性的测定按照Lister等的方法[0·2 M硼酸盐缓冲液(pH8·8), 0·018 Mβ-巯基乙醇], 0·1 g PVPP(以去除酚类物质对颜色的干扰),加少量石英砂,于-20℃预冷的研钵中冰浴研磨, 4层纱布过滤.滤液经4℃, 15 000 g离心20 min,取上清液作为粗酶液,用于PAL活性测定:取1 mL粗酶液加2 mL蒸馏水再加1 mL反应底物(0·02 M的L-苯丙氨酸),对照不加底物,加1mL蒸馏水. 34℃恒温水浴30 min,加0·5 mL 35%的三氯乙酸(TCA)终止反应. 12 000 g离心10 min去除变性蛋白,于290 nm波长处测定吸光度.以1 mL反应液每小时在290 nm处吸光度变化0·01为1个酶活单位,用U表示[20].以上实验操作重复3次,每次操作设3个重复。

2024年1月浙江省高考生物试题+答案详解

2024年1月浙江省高考生物试题+答案详解（试题部分）一、单选题1. 关于生物技术的安全与伦理问题在我国相关法规明令禁止的是（）A. 试管动物的培育B. 转基因食品的生产C. 治疗性克隆的研究D. 生物武器的发展和生产2. 下列不属于水在植物生命活动中作用的是（）A. 物质运输的良好介质B. 保持植物枝叶挺立C. 降低酶促反应活化能D. 缓和植物温度变化3. 婴儿的肠道上皮细胞可以吸收母乳中的免疫球蛋白，此过程不涉及（）A. 消耗ATPB. 受体蛋白识别C. 载体蛋白协助D. 细胞膜流动性4. 观察洋葱根尖细胞有丝分裂装片时，某同学在显微镜下找到①~④不同时期的细胞，如图。

关于这些细胞所处时期及主要特征的叙述，正确的是（）A. 细胞①处于间期，细胞核内主要进行DNA 复制和蛋白质合成B. 细胞②处于中期，染色体数: 染色单体数: 核DNA分子数=1:2:2C. 细胞③处于后期，同源染色体分离并向细胞两极移动D. 细胞④处于末期，细胞膜向内凹陷将细胞一分为二5. 白头叶猴是国家一级保护动物，通过多年努力，其数量明显增加。

下列措施对于恢复白头叶猴数量最有效的是（）A. 分析种间关系，迁出白头叶猴竞争者B. 通过监控技术，加强白头叶猴数量监测C. 建立自然保护区，保护白头叶猴栖息地D. 对当地民众加强宣传教育，树立保护意识6. 痕迹器官是生物体上已经失去用处，但仍然存在的一些器官。

鲸和海牛的后肢已经退化，但体内仍保留着后肢骨痕迹；食草动物的盲肠发达，人类的盲肠已经极度退化，完全失去了消化功能。

据此分析，下列叙述错误的是（）A. 后肢退化痕迹的保留说明鲸和海牛起源于陆地动物B. 人类的盲肠退化与进化过程中生活习性的改变有关C. 具有痕迹器官的生物是从具有这些器官的生物进化而来的D. 蚯蚓没有后肢的痕迹器官，所以和四足动物没有共同祖先7. 某快递小哥跳入冰冷刺骨的河水勇救落水者时，体内会发生系列变化。

下列叙述正确的是（）A. 冷觉感受器兴奋，大脑皮层产生冷觉B. 物质代谢减慢，产热量减少C. 皮肤血管舒张，散热量减少D. 交感神经兴奋，心跳减慢8. 山药在生长过程中易受病毒侵害导致品质和产量下降。

叶绿素合成前体物质及相关酶的测定

叶绿素合成前体物质及相关酶的测定1 ALA （5–氨基酮戊酸）含量的测定（所有操作均在4℃下进行）参照Dei（1985）的方法：用质量体积比为4%的三氯乙酸提取0.5 g 叶片中的ALA，5 mL提取液与2.35 mL NaAc（1 mol·L-1）、0.15 mL乙酰丙酮和2.5 mL 醋酸盐缓冲液（1mol·L-1，pH 4.6）混合后，于沸水浴中加热10 min，冷却至室温后，用Ehrlich-Hg试剂显色，检测波长553 nm处的OD值。

2 PBG（胆色素原）含量的测定参照Bogorad（1962）的方法：取0.5 g叶片用液氮研磨后，加入5 mL 提取缓冲液（0.6 mol·L-1Tris，0.1 mol·L-1EDTA，用盐酸调至pH 8.2）提取叶片PBG，104×g离心10 min，取2 mL上清液加2 mL Ehrlich-Hg试剂，黑暗中显色15 min，测波长553 nm处的OD值。

3 Urogen Ⅲ（尿卟啉原Ⅲ）含量的测定参照Bogorad（1962）的方法：取0.5 g叶片经0.067 mol·L-1磷酸缓冲液（pH6.8）提取，取5 mL提取液加入0.25 mL，溶液（1%），强光照射20 min后，用1 mol·L-1冰醋酸调pH至3.5。

乙醚萃取3次，合并水相并测405.5 nm处的OD值。

叶绿素降解相关酶的测定叶绿素—叶绿素酶—脱植基叶绿素—脱镁螯合酶—脱植基叶绿素酸—脱镁叶绿酸双氧酶—色素丧失1 叶绿素酶活性的测定1.1 剪碎后混合均匀，称取2 g，加入10 mL丙酮，在液氮中研磨后，置于-20℃提取40 min，提取液12000×g 离心5 min，去除上清液，对底部沉淀再用同样条件重复提取2 次。

在沉淀中加入5 mM pH=7 的磷酸缓冲液3 mL（含50 mM KCL，0.24%TritonX-100），30℃下磁力搅拌30min，12000×g 离心5 min，上清液即是酶粗提液。