之微生物菌种选育

（3）菌对所采用的设备和生产过程的适应性 （4）菌的稳定性 （5）菌的产物得率和产物在培养液中的浓度 （6）容易从培养液中回收产物。
生产性能
之微生物菌种选育
抗生素产生菌的筛选
抗生素产生菌 的筛选
抑菌圈法
稀释法
扩散法
Text
之微生物菌种选育
生物自显影法
抑菌圈法
之微生物菌种选育
产生药理活性化合物菌株的筛选 生长因子产生菌的筛选 多糖产生菌的筛选
②补充培养基（SM，supplemental medium）——在 基本培养基中有针对性地补加某一种或几种营养成 分，以满足相应的营养缺陷型菌株生长需要（其他 营养缺陷型仍不能生长）的培养基。
③完全培养基（CM，complete medium）——可满足 该菌各种营养缺陷型菌株营养需要的天然或半合成
之微生物菌种选育
酵母菌
酿酒酵母 异常汉逊氏酵母异常变种
假丝酵母属
毕赤氏酵母属 汉逊氏Ad酵Tdit母Yleo属ur
之微生物菌种选育
霉菌
曲霉属 青霉属 根霉属
毛wk.baidu.com属
之微生物菌种选育
二、工业微生物来源
source 1
向菌种 保藏机 构索取
source 2
source 3
从大自然 中分离筛 选
从发酵 制品中 分离
之微生物菌种选育
诱变育种的原理
诱变育种的理论基础是基因突变
紫外线 快中子
物理诱变剂
NTG NM
化学诱变剂
噬菌体 转座子
生物诱变剂
之微生物菌种选育
小型X射线衍射仪
▪ 超净工作台
之微生物菌种选育
Co60射线机
诱变
诱变育种的 一般步骤
保
筛选
放大之罐微试生物验菌，种中选育试考查
大型投产
诱变育种步骤
出发菌株的选择 制备菌悬液 诱变处理 突变菌株的筛选
第二章 微生物菌种选育
LOGO
之微生物菌种选育
Contents
1
菌种的来源
2
发酵高产菌种选育
3
菌种退化和菌种保藏
4
微生物菌种的扩大培养
之微生物菌种选育
第一节 菌种的来源
一、工业发酵 常见微生物
细菌
担子菌 放线菌
菌种
霉菌
酵母
之微生物菌种选育
细菌
醋酸杆菌 假单胞菌
乳酸菌
大肠杆菌 枯草芽Ad孢Tdit杆Yleo菌ur 棒杆菌、短杆菌
之微生物菌种选育
第二节 发酵高产菌种的选育
诱变育种
杂交育种
自然选育 基因工程育种
原生质体融合
之微生物菌种选育
菌种改良
生物
物理
遗传基因
化学
之微生物菌种选育
一、自然选育
自然选育
在生产过程中，不经过人工处理， 利用菌种的自发突变，选育出优 良菌种的过程。
之微生物菌种选育
诱变育种
诱变育种是利用物理或化学诱变剂处理 均匀分散的微生物细胞群，促进其突变 率大幅度提高，然后采用简便、快速和 高效的筛选方法，从中挑选少数符合育 种目的的突变株，以供生产实践或科学 研究用。
之微生物菌种选育
(一)出发菌株的选择
1．自然界新分离的野生型菌株，对诱变处 理较敏感，容易达到好的效果。
2．在生产中经生产选种得到的菌株与野生 型较相像，也是良好的出发菌株。
3．每次诱变处理都有一定提高的菌株，往 往多次诱变能积累较多的提高。
之微生物菌种选育
4．出发菌株开始时可以同时选2～3株，在 处理比较后，将更适合的出发菌株留作继 续诱变。
培养基。
之微生物菌种选育
筛选营养缺陷型的步骤
▪ 诱变 ▪ 淘汰野生型 ▪ 检出缺陷型 ▪ 确定生长谱
之微生物菌种选育
一、诱变方法
▪ 物理诱变 ▪ 化学诱变
之微生物菌种选育
二、淘汰野生型
▪ 抗生素法：野生型能在MM中生长，而缺陷型 不能，于是将诱变处理液在MM中培养短时让 野生型生长，处于活化阶段，而缺陷型无法生 长，仍处于休眠状态。由于细菌或酵母对一些 抗生素敏感，于是就相应加入一定量的抗生素， 结果活化状态的野生型就被杀死，保存了缺陷 型。一般细菌可以采用青霉素，酵母可采用制 霉菌素。
(三)诱变处理 根据前面有关诱变剂及诱变处理的介绍，结合 诱变对象的实际，设计诱变处理方案。
之微生物菌种选育
(四) 突变菌株的筛选
▪ 筛选分初筛和复筛。 ▪ 初筛以迅速筛出大量的达到初步要求的分
离菌落为目的，以量为主。 ▪ 复筛则是精选，以质为主，也就是以精确
度为主。因此在具体方法上就有差异。
之微生物菌种选育
之微生物菌种选育
平板划线法
b.
分区划线分离法
连续划线分离法
之微生物菌种选育
1.稀释平皿分离平法板稀释法
(1)稀 释 1ml
1ml 1ml 1ml 1ml
1g
100ml 1/100
9ml
9ml
9ml
1/1000 10-4 10-5
9ml
10-6
之微生物菌种选育
9ml
10-7
9ml
10-8
（2）倒平板
▪ 菌丝过滤法：对于霉菌，因孢子生长后会长出 菌丝体，就可用滤纸过滤法将菌丝滤去，而缺 陷型孢子却因未发芽而不能滤过。
1) 营养缺陷型的选育
▪ 营养缺陷型是指通过诱变而产生的缺乏合成 某些营养物质如氨基酸、维生素和碱基等的 能力，必须在其基本培养基中加入相应的营 养成分才能正常生长的变异株。
▪ 与营养缺陷型对应的是野生型。
之微生物菌种选育
▪ 与筛选营养缺陷型有关的三类培养基：
①基本培养基（MM，minimal medium）——能满足 某一菌种的野生型菌株营养要求的最低成分的合成 培养基。
a.涂布平皿分离法 b.倾注平皿分离法
之微生物菌种选育
目的菌的筛选
用刚果红染色法鉴定筛选 降解纤维素的菌株
抗生素筛选
羧甲基纤维素钠作培养物
检定菌培养，加上发酵液
之微生物菌种选育
影印平板法筛 选目的菌
之微生物菌种选育
四、重要工业微生物菌种的分离
▪ 筛选菌株的一些重要指标： （1）菌的营养特征 （2）菌的生长温度
之微生物菌种选育
三、微生物菌种的选择性分离
1 微生物样品的采集
3 目的菌种的分离
2 微生物样品的富集培养
4 目的菌的筛选
之微生物菌种选育
微生物样品的采集
之微生物菌种选育
微生物样品的富集培养
1
控制培养 基的营养 成分
2
控制培养 条件
3
抑制不需 要的菌类
之微生物菌种选育
目的菌种的分离
平板划线法
平板稀释法
5．要尽量选择单倍体细胞、单核或核少的 多细胞体来作出发诱变细胞，这是由于变 异性状大部分是隐性的，特别是高产基因。
之微生物菌种选育
(二)处理菌悬液的制备 ▪ 这一步骤的关键是制备单细胞和单孢子状态的、
活力类似的菌悬液，为此要进行合适培养基的 培养，并要离心，洗涤，过滤。
带玻璃珠的之三微角生物瓶菌种内选,育加无菌水