常用westernblot试剂配方
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Western blot常用试剂配方
1. 丙烯酰胺-双丙烯酰胺储存液：30% AB（100ml）
丙烯酰胺29 g
双丙烯酰胺1g
加蒸馏水至100ml，过滤，棕色瓶保存。
2. 10% SDS：（10ml）
电泳级SDS 1 g
蒸馏水9 ml
初始PH约为，用针尖蘸少许浓盐酸调PH 至，定容至10ml。（四甲基乙二胺）（成品）
4. Lower-buffer （1.5M Tris-Cl PH ）：50ml
Tris-base 9.085 g
蒸馏水45 ml
加浓盐酸（约）调PH至后定容至50ml，4℃保存。
5. upper buffer（1.0M Tris-Cl，PH ）：50ml
Tris-base 6.055 g
蒸馏水44 ml
加浓盐酸调PH至后定容至50ml，4℃保存。
6. 10%过硫酸铵（10% AP）：新鲜配制
称取0.05g AP于EP管中，储存于-20℃，用时溶于蒸馏水7. 5 × loading buffer：（1ml）50ml
upper buffer ml
甘油（丙三醇）ml 25ml
SDS g 5g
DTT 0.0385 g
溴酚蓝
加蒸馏水溶解后定容至1ml。取加蒸馏水配成工作液。8. 5 × running buffer：（1000ml）
Tris-base 15.1 g
甘氨酸（Glycine）94 g
SDS 5 g
加蒸馏水溶解后定容至1000ml。用时加4000 ml蒸馏水。
9. 考马斯亮蓝染液：100ml（可重复利用）
甲醇30 ml
冰乙酸10 ml
蒸馏水60 ml
考马斯亮-250 0.05 g
10. 考马斯亮蓝脱色液500ml：现用现配
乙酸（10%）50ml
甲醇（30%）150ml
加蒸馏水定容至500ml。
11. Transbuffer（PH ）：100ml 现用现配
Tris-base 0.3028 g
甘氨酸 1.4872 g
甲醇20 ml
加蒸馏水定容至100ml。
12. 10 x 丽春红染液（储存液）：（可重复利用）
（用时用蒸馏水稀释为1 X 的）染色后用纯水脱色
丽春红 2 g
三氯乙酸30 g
磺基水杨酸30 g
加H2O 定容至10 ml（储存液）。4℃保存。
用1 × TBST洗脱
13. 10 ×TBS：500 ml
Tris-base 12.1 g
NaCl 40g
加浓盐酸5ml调PH至，加蒸馏水定容至500ml（储存液）。4℃保存。用时蒸馏水稀释为1 × TBS（1份10 ×储存液，9份水）.
14. 1 × TBST （加Tween-20的TBS）洗涤液：Tween-20含量%
15. 封闭液：含5%脱脂奶粉的TBST
脱脂奶粉1g
1 × TBST 20 ml
16. ECL 发光底物：两种溶液1:1混合，均匀涂于膜上。
17. H202配制
取普通纯水按照每10ml纯水加入40μl30% H2O2比例配成新鲜H2O2溶液替代ECL溶液B使用