金黄色葡萄球菌检测

血浆凝固酶试验：
吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试 管中，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌 肉浸液肉汤培养物0.5 mL，振荡摇匀， 置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察 一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒 置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结 果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。
血平板上金黄色葡萄球菌菌落形态
金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血平 板上形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿 润、金黄色（有时为白色），菌落周围可 见完全透明溶血圈。
完全溶血和不完全溶血
β溶血
α溶血
• BP平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮 源、硫、维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠是一种生长促进剂 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分 解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的 其它菌株有抑制作用。
分布
• 在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动 物的排泄物中都可找到。 • 传播媒介为被该菌污染的食品，主要为淀粉类(如 剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、 蛋类等。被污染的食物在室温20℃-22℃放置5小 时以上时，病菌大量繁殖，并产生肠毒素。
葡萄球菌皮肤感染
耐受力
• 几乎所有的消毒试剂以及热加工过程对金 黄色葡萄球菌都有严重的破坏作用
＊＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较 多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温度条 件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数量的肠毒 素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。人 摄食该菌污染的食物2～3小时后可引起中毒症状， 它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。 此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶 酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
目前，随着研究的深入，一些快速和采用 现代技术的检测方法不断出现，这些新的快速 方法，一般都缩短了传统检测方法的时间，能 够较快地得到检测结果，并且操作相对简单。 比如：法国梅里埃公司生产的RPF培养基 、API检测系统等。梅里埃公司生产的mini VIDAS利用荧光免疫的方法检测葡萄球菌 肠毒素，在仪器上45 min可以得到结果。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌污染食品

防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染： 如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，不能挤 用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要 迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、细菌 繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料，注意 低温保存。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌污染食品

对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、 畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适 当方式处理后进行加工生产。
法国梅里埃公司生产的RPF培养基
将兔血浆包括在培养基中作为直接确认菌落的手段
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凝固酶阳性葡萄球菌 : 菌落周围形成沉淀圈 (例) 金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌的流行病学特点
季节分布，多见于春夏季；中毒食品 种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此 外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起 的中毒事件也有报道。 上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%， 所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
金黄色葡萄球菌的流行病学
一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下 途径污染食品： 食品加工人员、炊事员或销售人员带 菌，造成食品污染；食品在加工前本身带 菌，或在加工过程中受到了污染，产生了 肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不 严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳 腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位 的污染。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成
应在低温和通风良好的条件下贮藏食物， 以防肠毒素形成； 在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴 凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻 底加热。

金黄色葡萄球菌的检验 GB4789.10-2010
• 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验 适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验 • 第二法 金黄色葡萄球菌 Baird-Parker平板计数 适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色 葡萄球菌的计数； • 第三法 金黄色葡萄球菌MPN计数 适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高 的食品中金黄色葡萄球菌的计数。
*金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生 问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起 的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%， 加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此 类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件： 存放温度，在37℃内，温度越高，产毒 时间越短； 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠 毒素； 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同 时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。
B-P平板
金黄色葡萄球菌的检验
• 3.鉴定 • 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性 球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜， 直径约为0.5 μm～1 μm。 • 金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶，因此对 其鉴别的主要实验是测定其凝固酶。 • 对于凝固不完全的菌株，可以通过一些其 他实验来进一步确认，例如：厌氧葡萄糖 发酵、溶葡萄球菌酶敏感性实验、耐热核 酸酶实验等。
第一法 金黄色葡萄球菌定性检验
1、样品的处理 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受 15%的氯化钠），用含10%氯化钠的胰酪胨 大豆肉汤增菌。 按无菌操作取检样25 g（mL），加入盛有 225 mL 7.5%氯化钠肉汤或10%胰酪胨大豆 肉汤无菌容器内，振荡混匀。
2、增菌及分离培养 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混 浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大 豆肉汤内呈混浊生长。 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板和血平板，血平板36 ℃±1 ℃培养18h～ 24 h。Baird-Parker 平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 或45 h～48 h。
3、生化特性：
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸 不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。 许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝 酸盐，液化明胶。 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺 类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏 感。
金黄色葡萄球菌的致病性
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可 引起局部化脓 感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等， 甚至败血症、脓毒症等全身感染。 金黄色葡萄球菌的致病力 强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五种，能损伤 血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液 或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞 的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶 能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋 白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F六种血清型。
金黄色葡萄球菌的流行病学
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在， 空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可 找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要 存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上， 50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球 菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌的流行病学
近年来，美国疾病控制中心报告，由 金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅 次于大肠杆菌。
• 肠毒素可耐受100℃ 30分钟不被破坏。 • 对于加工过的食品或食品加工设备而言， 此菌或其肠毒素的存在通常作为卫生条件 差的一种指标。
污染的控制
• 防ห้องสมุดไป่ตู้金黄色葡萄球菌污染食品

防止带菌人群对各种食物的污染：定期对 生产加工人员进行健康检查，患局部化脓 性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸 道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾 病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗 位。
金黄色葡萄球菌 检测概述
一、金黄色葡萄球菌的生物学特性
1、形态与染色：(staphylococcus aureus) 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数 无荚膜。 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径 0.8 mm左右，显微镜下排列成葡萄串状。
革兰氏染色阳性。
2、培养特性：
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养 基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度 37℃，最适生长pH 7.4。 平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，边缘整 齐、表面光滑、湿润，直径一般为1～2 mm。血 平板菌落周围形成透明的溶血环。 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.5～ 15%NaCl肉汤中生长。
4、金黄色葡萄球菌肠毒素的检测
一、动物学试验 主要用幼猫和猴。 二、血清学试验 肠毒素作为抗原，可以 和特异性抗体发生结合性反应，产生可见 沉淀。 用血清学反应检验金黄色葡萄球菌肠 毒素，方法主要有： 1.免疫琼脂扩散法 2.反向间接血凝试验 3.免疫荧光法 4.酶联免疫吸附法
5、金黄色葡萄球菌快速检测方法
金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态
在Baird-Parker琼脂平板上菌落呈圆形，表面光滑 、凸起、湿 润，直径2～3 mm。灰黑色至黑色，有光泽 ，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明圈 （沉 淀），其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有 黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株，除没有 不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同。从长期贮存 的冷冻或脱 水食品中分离的菌落，其黑色常较典型菌落 浅些，且外观可能较粗糙，质地较干燥。