金黄色葡萄球菌检测

污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成
应在低温和通风良好的条件下贮藏食物， 以防肠毒素形成； 在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴 凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻 底加热。

金黄色葡萄球菌的检验 GB4789.10-2010
• 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验 适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验 • 第二法 金黄色葡萄球菌 Baird-Parker平板计数 适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色 葡萄球菌的计数； • 第三法 金黄色葡萄球菌MPN计数 适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高 的食品中金黄色葡萄球菌的计数。
金黄色葡萄球菌的流行病学特点
季节分布，多见于春夏季；中毒食品 种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此 外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起 的中毒事件也有报道。 上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%， 所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
金黄色葡萄球菌的流行病学
一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下 途径污染食品： 食品加工人员、炊事员或销售人员带 菌，造成食品污染；食品在加工前本身带 菌，或在加工过程中受到了污染，产生了 肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不 严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳 腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位 的污染。
＊＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较 多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温度条 件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数量的肠毒 素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。人 摄食该菌污染的食物2～3小时后可引起中毒症状， 它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。 此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶 酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
4、金黄色葡萄球菌肠毒素的检测
一、动物学试验 主要用幼猫和猴。 二、血清学试验 肠毒素作为抗原，可以 和特异性抗体发生结合性反应，产生可见 沉淀。 用血清学反应检验金黄色葡萄球菌肠 毒素，方法主要有： 1.免疫琼脂扩散法 2.反向间接血凝试验 3.免疫荧光法 4.酶联免疫吸附法
5、金黄色葡萄球菌快速检测方法
目前，随着研究的深入，一些快速和采用 现代技术的检测方法不断出现，这些新的快速 方法，一般都缩短了传统检测方法的时间，能 够较快地得到检测结果，并且操作相对简单。 比如：法国梅里埃公司生产的RPF培养基 、API检测系统等。梅里埃公司生产的mini VIDAS利用荧光免疫的方法检测葡萄球菌 肠毒素，在仪器上45 min可以得到结果。
血平板上金黄色葡萄球菌菌落形态
金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血平 板上形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿 润、金黄色（有时为白色），菌落周围可 见完全透明溶血圈。
完全溶血和不完全溶血
β溶血
α溶血
• BP平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮 源、硫、维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠是一种生长促进剂 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分 解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的 其它菌株有抑制作用。
金黄色葡萄球菌 检测概述
一、金黄色葡萄球菌的生物学特性
1、形态与染色：(staphylococcus aureus) 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数 无荚膜。 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径 0.8 mm左右，显微镜下排列成葡萄串状。
革兰氏染色阳性。
2、培养特性：
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养 基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度 37℃，最适生长pH 7.4。 平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，边缘整 齐、表面光滑、湿润，直径一般为1～2 mm。血 平板菌落周围形成透明的溶血环。 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.5～ 15%NaCl肉汤中生长。
*金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生 问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起 的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%， 加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此 类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件： 存放温度，在37℃内，温度越高，产毒 时间越短； 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠 毒素； 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同 时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。
分布
• 在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动 物的排泄物中都可找到。 • 传播媒介为被该菌污染的食品，主要为淀粉类(如 剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、 蛋类等。被污染的食物在室温20℃-22℃放置5小 时以上时，病菌大量繁殖，并产生肠毒素。
葡萄球菌皮肤感染
耐受力
• 几乎所有的消毒试剂以及热加工过程对金 黄色葡萄球菌都有严重的破坏作用
金黄色葡萄球菌的流行病学
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在， 空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可 找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要 存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上， 50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球 菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌的流行病学
近年来，美国疾病控制中心报告，由 金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅 次于大肠杆菌。
B-P平板
金黄色葡萄球菌的检验
• 3.鉴定 • 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性 球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜， 直径约为0.5 μm～1 μm。 • 金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶，因此对 其鉴别的主要实验是测定其凝固酶。 • 对于凝固不完全的菌株，可以通过一些其 他实验来进一步确认，例如：厌氧葡萄糖 发酵、溶葡萄球菌酶敏感性实验、耐热核 酸酶实验等。
3、生化特性：
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸 不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。 许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝 酸盐，液化明胶。 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺 类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏 感。
金黄色葡萄球菌的致病性
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可 引起局部化脓 感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等， 甚至败血症、脓毒症等全身感染。 金黄色葡萄球菌的致病力 强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五种，能损伤 血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液 或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞 的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶 能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋 白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F六种血清型。
第一法 金黄色葡萄球菌定性检验
1、样品的处理 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受 15%的氯化钠），用含10%氯化钠的胰酪胨 大豆肉汤增菌。 按无菌操作取检样25 g（mL），加入盛有 225 mL 7.5%氯化钠肉汤或10%胰酪胨大豆 肉汤无菌容器内，振荡混匀。
2、增菌及分离培养 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混 浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大 豆肉汤内呈混浊生长。 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板和血平板，血平板36 ℃±1 ℃培养18h～ 24 h。Baird-Parker 平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 或45 h～48 h。
Hale Waihona Puke Baidu
血浆凝固酶试验：
吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试 管中，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌 肉浸液肉汤培养物0.5 mL，振荡摇匀， 置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察 一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒 置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结 果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。
金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态
在Baird-Parker琼脂平板上菌落呈圆形，表面光滑 、凸起、湿 润，直径2～3 mm。灰黑色至黑色，有光泽 ，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明圈 （沉 淀），其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有 黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株，除没有 不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同。从长期贮存 的冷冻或脱 水食品中分离的菌落，其黑色常较典型菌落 浅些，且外观可能较粗糙，质地较干燥。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌污染食品

防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染： 如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，不能挤 用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要 迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、细菌 繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料，注意 低温保存。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌污染食品

对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、 畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适 当方式处理后进行加工生产。
法国梅里埃公司生产的RPF培养基
将兔血浆包括在培养基中作为直接确认菌落的手段
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凝固酶阳性葡萄球菌 : 菌落周围形成沉淀圈 (例) 金黄色葡萄球菌
• 肠毒素可耐受100℃ 30分钟不被破坏。 • 对于加工过的食品或食品加工设备而言， 此菌或其肠毒素的存在通常作为卫生条件 差的一种指标。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌污染食品

防止带菌人群对各种食物的污染：定期对 生产加工人员进行健康检查，患局部化脓 性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸 道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾 病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗 位。