实验一 细胞的显微结构—光镜下的细胞器

பைடு நூலகம்
二、实验原理
光学显微镜通常采用两级放大， 光学显微镜通常采用两级放大，分别由物镜和目 镜完成。被观察物体位于物镜的前方， 镜完成。被观察物体位于物镜的前方，被物镜作第 一级放大后成一倒立的实象， 一级放大后成一倒立的实象，然后此实像再被目镜 作第二级放大，成一虚象，人眼看到的就是虚像。 作第二级放大，成一虚象，人眼看到的就是虚像。 而显微镜的总放大倍率就是物镜放大倍率和目镜放 大倍率的乘积。光学显微镜一般由载物台、 大倍率的乘积。光学显微镜一般由载物台、聚光照 明系统、物镜，目镜和调焦机构组成。 明系统、物镜，目镜和调焦机构组成。
三、实验用品和试剂
②1%、1/5000詹姆斯绿B溶液 1%、1/5000詹姆斯绿B 詹姆斯绿 称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液 称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液 50mg詹姆斯绿 稍加微热（30~400C）使之溶解，用滤纸过滤后， 中，稍加微热（30~400C）使之溶解，用滤纸过滤后， 即为1%原液。 1%原液1ml加入 1%原液 原液1ml加入49ml Ringer溶液 溶液， 即为1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成 1/5000工作液 装入瓶中备用。最好现用现配， 工作液， 1/5000工作液，装入瓶中备用。最好现用现配，以保持 它的充分氧化能力。 它的充分氧化能力。 70%酒精 ③Wright 染液 ④70%酒精 ⑤香柏油 材料：洋葱、石蜡切片、 3．材料：洋葱、石蜡切片、涂片
（示线粒体） 线粒体）
五、实验相关技术
1.石蜡切片制作基本技术 1.石蜡切片制作基本技术 石蜡切片（ section） 石蜡切片（paraffin section） 组织学 常规制片技术中最为广泛应用的方法。 常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切 片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构， 片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也 是病理学和法医学等学科用以研究、 是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判 断细胞组织的形态变化的主要方法， 断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已 相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。 相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。 光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。 光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。 活的细胞或组织多为无色透明， 活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和 细胞内各种结构之间均缺乏反差， 细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜 下不易清楚区别出； 下不易清楚区别出；
六、实验结果
1．观察细胞核及核仁在不同细胞中的分布情 况： 在普通光学显微镜下， 在伊红在普通光学显微镜下，①在伊红-苏木精 染色处理过的肝细胞 蛙卵巢细胞， 肝细胞， 染色处理过的肝细胞，蛙卵巢细胞，横纹肌细 胞等细胞的细胞核呈紫蓝色，形态为球状及椭 等细胞的细胞核呈紫蓝色， 圆形。核仁不着色，形态通常为球状。 圆形。核仁不着色，形态通常为球状。在以上 切片中可以看到多核及多核仁现象。 切片中可以看到多核及多核仁现象。②核形态 差异： 白细胞细胞核被Wright染液呈紫蓝色， Wright染液呈紫蓝色 差异： 白细胞细胞核被Wright染液呈紫蓝色， 形态为马蹄状、多分支状、块状。 形态为马蹄状、多分支状、块状。
五、实验相关技术
3.涂片制作基本技术 3.涂片制作基本技术 概念： 概念：涂片是指用从患者身上采集的液体标 如血液，骨髓液等） 本（如血液，骨髓液等）均匀的涂抹在玻璃片上制 成的标本，用于实验室诊断和病理诊断。 成的标本，用于实验室诊断和病理诊断。 涂片有 很多种类,直接涂片法、厚涂片法等。 很多种类,直接涂片法、厚涂片法等。其实涂片与 装片差不多是同一概念， 装片差不多是同一概念，只是涂片特指一些液体状 标本制成的装片。 标本制成的装片。 方法：耳垂取血，待涂片干，Wright 染液染 方法：耳垂取血，待涂片干， 5min，自来水冲洗后镜检。 色5min，自来水冲洗后镜检。
七、实验注意事项
1．在取材和观察上要注意各种细胞器在不同细胞中 特殊性。 特殊性。 观察细胞器时， 2．观察细胞器时，要注意各种细胞器在不同细胞中 的形态、大小分布、位置和数量。 的形态、大小分布、位置和数量。 观察植物细胞线粒体制作撕片时，要注意① 3．观察植物细胞线粒体制作撕片时，要注意①撕片 的厚薄要均匀，尽量薄、 的厚薄要均匀，尽量薄、快；②染色时要染液少些使 材料半露出来； 装片时，材料要展平。 材料半露出来；③装片时，材料要展平。 观察血细胞制作涂片时，要注意①涂片尽量快， 4．观察血细胞制作涂片时，要注意①涂片尽量快， 以防血液凝固；②涂片要稀薄，便于观察；③注意血 以防血液凝固； 涂片要稀薄，便于观察； 红细胞无核及白细胞核形态的差异。 红细胞无核及白细胞核形态的差异。
五、实验相关技术
组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败， 组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败， 失去原有正常结构，因此，组织要经固定、 失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包 切片及染色等步骤以免细胞组织死亡， 埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清 晰辨认其形态结构。 晰辨认其形态结构。 石蜡切片制作基本步骤：包括取材、固定、 石蜡切片制作基本步骤：包括取材、固定、洗涤 和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、 和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、 染色、脱水、透明、封片等步骤。 染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取 材固定到封片制成玻片标本需要数日， 材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以 长期保存使用，为永久性显微玻片标本。 长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
六、实验结果
2．中心体 ： 在普通光学显微镜下， 在普通光学显微镜下，在巴西木素特染的动物细胞的 细胞核旁边高尔基区中央可以看到一对中心体 中心体呈深蓝色球 细胞核旁边高尔基区中央可以看到一对中心体呈深蓝色球 状。 线粒体： 3．线粒体： 在普通光学显微镜下， 肝细胞的线粒体呈蓝绿色， 在普通光学显微镜下，① 肝细胞的线粒体呈蓝绿色， 形态通常为线条状。 肾小管细胞的线粒体呈蓝绿色， 形态通常为线条状。②肾小管细胞的线粒体呈蓝绿色，形 态通常为直棒状。 因植物细胞中央大液泡的存在， 态通常为直棒状。③因植物细胞中央大液泡的存在，将细 green·B呈蓝绿色， 胞质挤到边缘，胞质中线粒体 线粒体被 胞质挤到边缘，胞质中线粒体被Janus green B呈蓝绿色， 形态为颗粒状或线头状。 形态为颗粒状或线头状。
实验一
细胞的显微结构——光镜下 光镜下 细胞的显微结构 的细胞器
College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity
一、实验目的
学习并掌握制作植物细胞撕片、 学习并掌握制作植物细胞撕片、石蜡切片 和涂片技术。 和涂片技术。 学会利用光学显微镜观察植物细胞撕片、 学会利用光学显微镜观察植物细胞撕片、 石蜡切片和涂片。 石蜡切片和涂片。 认识并能识别光学显微镜下的各种细胞器 的形态、大小、分布特点及数目。 的形态、大小、分布特点及数目。
八、实验作业
1．简述细胞撕片、石蜡切片和涂片的制作过程。 简述细胞撕片、石蜡切片和涂片的制作过程。 能够辨别光学显微镜下的各种细胞器的形态、 2．能够辨别光学显微镜下的各种细胞器的形态、大 分布的特点及数目。 小、分布的特点及数目。 3．绘制简图表示各种显微结构在一个动物细胞中的 分布的情况。 分布的情况。 4．请查阅资料试述某些细胞多核及多核仁的原因。 请查阅资料试述某些细胞多核及多核仁的原因。
二、实验原理
由于光学显微镜的最高分辨力为0.2 m 由于光学显微镜的最高分辨力为0.2µm，而细胞器大部分 0.2 在0.1µm和10µm之间，所以光学显微镜下可见到一般细胞器 0.1 m 10 m之间， 的外部形态。较大的细胞器如细胞核，线粒体， 的外部形态。较大的细胞器如细胞核，线粒体，质体等还可 见到其细微结构。 见到其细微结构。 细胞器往往由特殊物质组成， 细胞器往往由特殊物质组成，因而可通过特殊物质的特 异染色把它们区别开来。每种细胞器都有其特殊形态， 异染色把它们区别开来。每种细胞器都有其特殊形态，大小 分布及数目，这是我们判断，识别细胞器的依据。 分布及数目，这是我们判断，识别细胞器的依据。而每种细 胞器在不同细胞， 胞器在不同细胞，不同发育时期和不同生理状态下的形态大 小会有所不同。 小会有所不同。所以细胞器的观察可用来判断细胞的生理状 态和发育情况。 态和发育情况。
四、实验内容
1．观察细胞核及核仁在不同细胞中的分布情况： 观察细胞核及核仁在不同细胞中的分布情况： 细胞核及核仁（肝切片，蛙卵巢切片） 伊红①细胞核及核仁（肝切片，蛙卵巢切片）(伊红-苏 木精染色) 木精染色) 多核及多核仁现象（横纹肌切片，蛙卵巢切片） ②多核及多核仁现象（横纹肌切片，蛙卵巢切片） 伊红-苏木精染色) (伊红-苏木精染色) ③核形态差异 （血细胞涂片）(Wright染色) 血细胞涂片）(Wright染色) 染色 马蛔虫受精卵切片） 巴西木素染色) 2．中心体 （马蛔虫受精卵切片）(巴西木素染色) 兔肝切片，肾切片， 3．线粒体 （兔肝切片，肾切片，植物细胞线粒体撕 ）（Janus 染色） 片）（Janus green B 染色）
二、实验原理
光学显微镜的种类很多， 光学显微镜的种类很多，一般常用的是复式 显微镜。复式显微镜的式样虽有不同， 显微镜。复式显微镜的式样虽有不同，但它们的 基本结构相同，都是由光学部分和机械部分构成。 基本结构相同，都是由光学部分和机械部分构成。 光学显微镜是利用光学原理， 光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨 的微小物体放大成像， 的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信 息的光学仪器。表面为曲面的玻璃或其他透明材 息的光学仪器。 料制成的光学透镜可以使物体放大成像， 料制成的光学透镜可以使物体放大成像，光学显 微镜就是利用这一原理把微小物体放大到人眼足 以观察的尺寸。 以观察的尺寸。
三、实验用品和试剂
1．器材：光学显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、无菌 ．器材：光学显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、 注射针头、消毒棉球。 注射针头、消毒棉球。 2．试剂：①Ringer 溶液 试剂： 0.85g（ 氯化钠 0.85g（变 温动物用0.65g 0.65g） 温动物用0.65g） 氯化钾 0.25g 氯化钙 0.03g 蒸馏水 100ml