生物碱类成分的薄层色谱分析
第五章生物碱介绍
第七页，编辑于星期日：七点 十四分。
极性溶剂系统：极性较大的生物碱可用
中性甲醇、乙醇、酸水（常用0.1%-1%的盐酸、硫酸等）以及缓冲液提取，
但提出的杂质较多，需净化。
第五章 中药制剂中各类化学成分分析
第一节 含生物碱（alkaloid）类成分的分析
第一页，编辑于星期日：七点 十四分。
生物碱的分布
含生物碱量多的科有罂粟科、防已科、茄科、小 檗科、毛茛科、芸香科、夹竹桃科、马钱科及茜 草科等，中药有三尖杉、麻黄、黄连、黄柏、乌 头、延胡索、粉防已、颠茄、洋金花、贝母、百 部等。
品精密称定，加无水乙醇溶液并放置24小时，过滤，减压
回收乙醇，至残留液至小量时加2%盐酸溶液（注2），
移入分液漏斗中，用乙醚萃取3次（注3），在样品液中
滴 加 氨 试 液 调 PH9 10 （ 注 4 ） ， 再 用 乙 醚 - 氯 仿 （3:1）混合液提取３次（注5），合并萃取液，蒸干， 加无水乙醇溶解．精密加入硫酸液（0.01mol/l）与
通常用磷酸盐缓冲液，但操作时由于存在 盐，做过后应充分洗柱，以免腐蚀柱子。
第二十六页，编辑于星期日：七点 十四分。
（2）、固定相方面的改进 A：选择C链较短的键合相硅胶为固定相，如C8
比C18好，原因是由于硅烷的C链较短则覆盖硅 胶的表面较好，只有较少的游离硅醇基。 B：封尾技术可使填料的键合更彻底，常用三甲 基氯硅烷（TMCS）处理，可减少残余羟基，增 加单体覆盖度。
人有了知识，就会具备各种分析能力，
明辨是非的能力。
所以我们要勤恳读书，广泛阅读，
8398生物碱类的检识天然药物化学
（三）生物碱的纸色谱（分配原理）：
色谱条件与生物碱的存在状态有关。 1.生物碱盐的状态（离子型、 极性大） 固定相：水。 展开剂：偏酸性（使生物碱以盐的状态存在）、极性较
大的有机溶剂（正丁醇—冰醋酸—水4：1：5上层 ，即 BAW系统 ）。
（三）生物碱的纸色谱（分配原理）：
2. 游离态生物碱（脂溶性、 极性小） 固定相：甲酰胺。 ห้องสมุดไป่ตู้展开剂：偏碱性（使生物碱以游离状态存在） 、极性
生物碱类的检识
生物碱的检识：
➢理化检识： 物理性质，沉淀反应，显色反应
➢色谱检识： TLC, PC, HPLC
（一） 生物碱的吸附薄层层析
硅胶、氧化铝 硅胶薄层（弱酸性） 适用于大多数生物碱，但强碱性生物碱可能出现 Rf太小和 复斑或拖尾,影响检识效果。
（一） 生物碱的吸附薄层层析
解决办法：
（1）碱液（0.1~0.5mol/L NaOH）制板。 （2）碱性展开剂（中性展开剂 + 少许二乙 胺或氨水）。 （3）在层析槽中放一盛有氨水的小器皿。
（一） 生物碱的吸附薄层层析
展开剂： 亲脂性展开剂，以氯仿为基本溶剂。根据色谱 结果调整展开剂极性。
显色： 观察斑点；荧光；改良碘化铋钾；特殊显色剂。
（一） 生物碱的吸附薄层层析
一般来说，硅胶和氧化铝薄层色谱适用于分离 和检识脂溶性性生物碱。尤其氧化铝吸附力较硅胶 强，更适于分离亲脂性较强的生物碱。
较小的有机溶剂（甲酰胺饱和的苯、氯仿）。
练习
请比较下列化合物在硅胶吸附层析和反相薄层层析中的Rf.
N H3C
H
OMeMeO
OR O O
OMe
N CH3
H
粉防己甲素 R=CH3 粉防己乙素 R=H
中医药材中的活性成分与鉴定方法
中医药材中的活性成分与鉴定方法活性成分是指中医药材中具有药理活性和治疗作用的化学成分。
中医学认为，药材中的活性成分是药物的主要组成部分，直接影响药物的疗效。
因此，对中医药材中的活性成分及其鉴定方法进行深入研究具有重要意义。
一、中医药材中的活性成分中药材中的活性成分种类繁多，根据其化学性质和药理作用，可分为以下几类：1. 生物碱类生物碱是指由含有一环或多环芳香核的含氮碱性天然产物，具有广泛的生物活性。
常见的中药材中含有的生物碱包括马钱子中的鸦片碱、黄连中的黄连素等。
2. 单体类单体是指一种特定的天然有机化合物，它通常是由一个基本单位构成的。
常见的中药材中含有的单体类活性成分包括黄酮类、黄酮糖苷类、生物类碱和苯乙基醇等。
3. 多糖类多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的复杂碳水化合物。
多糖在中药中广泛存在，具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。
人参、枸杞等药材中的多糖成分是其药效的主要来源。
4. 有效成分组合许多中草药中的活性成分存在于复杂的生物组合中，相互之间具有协同作用或加强作用。
例如，天麻中的多种酯类成分共同发挥镇静和镇痛作用。
二、活性成分的鉴定方法为了准确鉴定中医药材中的活性成分，科学家们常常采用多种分析方法和技术。
以下是几种常用的鉴定方法：1. 薄层色谱法薄层色谱法是一种将化学样品通过分子在固定相上的吸附、分配和迁移来实现分离和鉴定的方法。
通过和标准物质对比，可以确定中药材中的活性成分。
2. 气相色谱法气相色谱法是一种通过样品在气相固定相之间的分配和迁移来分离和鉴定化学物质的方法。
该方法具有分离效果好、分离速度快、分析结果准确等优点。
3. 液相色谱法液相色谱法是一种将溶剂通过柱上固定的固定相，使溶质在固定相和溶剂之间分配和迁移来完成分离和鉴定的方法。
该方法适用于多种中药材中活性成分的分离和测定。
4. 质谱法质谱法是一种通过样品中化学物质的质量谱图来鉴定样品中的成分的方法。
质谱法具有高分辨率、高灵敏度和高特异性等特点，可以准确鉴定中药材中的活性成分。
生物碱类药物含量测定方法
生物碱类药物含量测定方法
生物碱是一类具有生物活性的碱性化合物，在自然界中广泛存在，尤其在植物和微生物中含量丰富。
生物碱的含量测定方法有多种，常用的方法包括比色法、紫外-可见分光光度法、荧光法、薄层色谱法、高效液相色谱法等。
1.比色法：该方法是通过生物碱与特定的显色剂发生化学反应，
生成有色离子或分子，根据颜色的深浅程度进行含量测定的方
法。
例如，苦参碱可以通过与溴甲酚绿显色剂发生反应来进行
含量测定。
2.紫外-可见分光光度法：该方法是通过测量生物碱溶液在紫外和
可见光区的吸收光谱，进而计算其含量的方法。
例如，盐酸吗
啡碱可以在254nm波长处进行含量测定。
3.荧光法：该方法是利用生物碱分子在特定波长激发下发出的荧
光强度来计算其含量的方法。
例如，荧光素钠在紫外光激发下
可以发出绿色荧光，可以用于含量测定。
4.薄层色谱法：该方法是利用生物碱在不同极性溶剂中的分配系
数差异，将样品溶液展开在薄层板上，然后用显色剂显色，根
据斑点面积或荧光强度来计算生物碱的含量。
5.高效液相色谱法：该方法是利用高效液相色谱仪对生物碱进行
分离和检测，然后根据峰面积或峰高来计算生物碱的含量。
该
方法具有分离效果好、灵敏度高、重现性好等优点，是生物碱
含量测定的常用方法之一。
生物碱的提取和分离技术
生物碱的提取和分离技术
生物碱是一类具有生物活性的有机化合物，广泛存在于植物、动物等生物体内，具有
多种生理活性和药理作用。
提取和分离生物碱是研究和开发生物碱的重要工作之一，以下
介绍几种常用的生物碱提取和分离技术。
1. 溶剂浸提法
溶剂浸提法是最常用的生物碱提取方法之一。
通过物质溶解度差异，利用某种溶剂将
生物碱从生物材料中提取出来。
常用的溶剂有乙醇、乙醚、醋酸乙酯等。
该方法简单易行，但对溶剂的选择、浓度的控制和提取时间等条件要求较高。
2. 离子交换树脂法
离子交换树脂法是一种分离和富集生物碱的有效方法。
树脂对生物碱具有较高的亲和性，可以通过串联多个离子交换柱进行逐步分离和纯化。
该方法适用于生物材料中生物碱
含量较低的情况，但操作复杂，需要灵活控制洗脱液的浓度和pH值。
3. 气相色谱法
气相色谱法是一种常用的生物碱分离和检测方法，通过GC柱将混合物中的生物碱分离并测定其相对含量。
该方法准确、灵敏度高，对样品要求低，但需要纯化样品并进行衍生
化反应，操作复杂，且只适用于描记类生物碱。
5. 薄层色谱法
薄层色谱法是一种常用的生物碱质量分析方法，通过物质在薄层层析板上的迁移速度
差异，分离和鉴定混合物中的生物碱。
该方法操作简便，不需要专门的仪器设备，但分离
效果一般，只适用于样品中生物碱含量较低的情况。
生物碱类药物的分析
三、色谱法
—吸附或分配性质的差异
（一）薄层色谱法 ——自身稀释对照法 （二）高效液相色谱法
薄层色谱法
第四节 含量测定
一、非水溶液滴定法（非水碱量法）
原料药 （一）原理
水溶液中滴定突跃不明显，在非水
介质中，碱性增强，使滴定顺利进行
置换滴定：
BH A HClO4 BH ClO HA
（三）方法适用范围
• 主要用于Kb<10-8的有机碱盐，对于不同碱 性的杂环类药物只有选择合适的溶剂和指 示终点方法才能获得满意的滴定结果
注意酸根的影响
• 冰醋酸溶液中各酸根的酸性强弱如下： 高氯酸 > 氢溴酸 > 硫酸 > 盐酸 >
硫酸氢根 > 硝酸 > 磷酸、有机酸
置换滴定：
BH A HClO4 BH ClO HA
4ml 与结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴 定液（ 0.1mo1/L ）滴定至溶液显翠绿 每 1ml 高氯酸滴定液（ 0.1mol/L ）相
色，并将滴定的结果用空白试验校正。 当于 20.17mg 的C10H15NO· HCl。
2. 硫酸盐的测定
生物碱的硫酸盐，在冰醋酸介质中只 能被滴定至生物碱的硫酸氢盐。
难溶于水 易溶于有机溶剂
H 生物碱盐
OH
易溶于水 不溶于有机溶剂
（三）旋光性 天然生物碱多为左旋体
一般左旋体有生理活性
阿托品虽有手性C，但为消旋体
第二节 鉴别试验
一、一般鉴别反应
（一）沉淀反应
生物碱 + 生物碱沉淀试剂
H+
↓
常用的生物碱沉淀试剂为：
1. 重金属盐类，如K2HgI4、KBiI4、 I2—KI、二氯化汞等；
第一节 含生物碱类成分的分析 一、含生物碱类成分中药制剂的定性
实例 疏风定痛丸中麻黄碱含量测定 P144
第二节 黄酮类制剂的分析
一、含黄酮类成分的定性鉴别 定性鉴别方法主要有化学显色反应，纸色谱和薄层色谱
(一)化学显色反应 1.还原反应 盐酸-镁粉反应显色反应的机理是黄酮类 成分经还原反应后生成花色甙元及其二聚物。
定性鉴别的操作：将中药制剂用适当方法提取分离。组 分较少的制剂可用有机溶剂提取，常用的溶剂有甲醇、乙 醇或乙酸乙酯；取样品液5～10mL，加入数滴盐酸，然后 加入少许镁粉，如果有黄酮、黄酮醇或其二氢化合物存在， 数分钟后则可产生橙色或红色。必要时，需作空白试验。
W =（ A/ε）×M×V/1000 式中，M：生物碱雷氏盐沉淀的分子量，W：生物碱雷氏盐沉淀 的重量；A：吸收度；ε：克分子消光系数；V：丙酮毫升数。 本方法可不需要标准对照品，但需注意生物碱生成单盐或双盐， 并要注意样品的净化。
(2)酸性染料比色法：在一定pH的介质中，生物碱B与氢离子H+ 结合成盐(BH+)，与某些酸性染料的阴离子In-结合成有色化合物 [BH+In-]，它能定量的被有机溶剂提取出来，此结合物碱化或酸化 后，即定量放出染料可进行比色，或测定该有色的有机溶液。
2．与金属盐类试剂的络合反应
黄酮类成分能与金属离子如Al3+，Zr4+等产生络合 作用，产生荧光或颜色加深等。
黔产野生和栽培钩藤中生物碱类成分薄层色谱分析研究
１ ９６： ３ ２ ９ ３
作用 ，进一 步说 明黄 瓜 香对 平滑 肌 的抑制 作用 不单
纯 是通 过 阻断 Ｍ —Ｒ受 体所 致 。 ４ ３ 黄 瓜香对 平 滑肌 兴奋 —— 收缩 偶联 的影 响 ． ｃ “在 介导 平 滑肌 收缩 反应 中起 核心 作用 ，通 ａ
中药药理与临床 ，１９ ，（ ） ２ ９ ４ ２ ：８９
１ 戴 媛媛 ，刘保林 ，窦昌贵．吴茱萸氯仿提取物对 胃排空的 ｌ 影响 ［ ］ Ｊ ．中药药理与临床 ，２ ０ ，１ （ ） ６～１ ０ ３ ９ ３ ：１ ９ （ 收稿 日期 ：２０ ０ ７年 ６月 ２ ０日）
维普资讯
中 国 民 族 民 间 医 药
・
总第 ８ ８期 ２ ０ ０ ７年第 ５期
Ｖｏ ． ８， Ｎｏ ５，２ ０ １８ ． ０ ７
２ ５２ ・
Ｃ ｉｅｅ ｏｒａ ｏ ｔｎ ｍ ｄｃｎ ｎ ｔｎｐ ａｍ ｃ ｈｎ ｓ ｕｎｌ ｆｅ ｏ ｅｉｉｅａ ｄｅｈ ｏｈｒ ａｙ ｊ ｈ
提示 在与 中枢 神经 、体液 调 控脱 离 的条 件下 ，黄 瓜 香对离 体肠 管有 显 著 的抑 制 作用 。
４ ２ 黄 瓜香 对胆 碱 能递质 系 统 的影 响 ．
乙酰胆碱是平滑肌内兴奋传递的化学物质 ，能
激动 Ｍ 胆 碱 能 受 体 ，兴 奋 胃肠 道 ，使 其 收 缩 的 幅
度 、张力 增 加 。新 斯 的 明是抗 胆碱 酯 酶药 ，抑 制胆 碱 酯酶水 解 乙 酰胆 碱 活 性 ，发 挥 完全 拟 胆 碱 作 用 。 黄 瓜香在 离体 实验 中对各 种 乙酰胆 碱 和新 斯 的明 的
生物碱类天然产物的常用分离方法
生物碱类天然产物的常用分离方法
生物碱类天然产物是一类具有广泛生物活性的天然化合物，包括多种植物和微生物产生的化合物。
由于生物碱类天然产物在药物、农药和化妆品等领域具有重要的应用价值，因此针对这类化合物的分离和纯化方法得到了广泛的研究和应用。
常用的生物碱类天然产物的分离方法包括以下几种：
1. 溶剂萃取法：这是最常见的分离方法之一。
通过将原料与适当溶剂进行反复提取，将目标化合物从原料中分离出来。
该方法适用于溶解性好、极性适中的生物碱类天然产物。
2. 薄层色谱法（TLC）：这是一种简单且广泛应用的分离方法。
将样品涂于薄层色谱板上，然后通过在合适的溶剂中进行上样，待溶剂沿着色谱板上升时，不同成分会在不同位置上形成斑点，从而实现分离。
分离出的斑点可以进一步进行收集和纯化。
3. 柱层析法：柱层析法是一种高效的分离方法，可用于分离具有不同极性和相对分子质量的生物碱类天然产物。
通过将样品通过填充在色谱柱中的吸附剂上，然后通过适当的溶剂流动，不同成分会在不同的速度下通过柱层析分离。
4. 液相色谱法（HPLC）：高效液相色谱法是一种常用的分离和纯化生物碱类天然
产物的方法。
该方法利用高压将样品通过液相色谱柱，通过调整流动相和静相的性质，使得不同成分在柱上的停留时间不同，从而实现分离。
该方法具有高分离效率、高灵敏度和高选择性的优点。
以上仅是常用的分离方法之一，根据不同的实验目的和样品性质，还可以使用其他方法如气相色谱法、毛细管电泳等技术。
此外，还可以结合质谱技术对分离后的化合物进行鉴定和结构分析，以进一步确定生物碱类天然产物的结构和性质。
苦马豆生物碱成分薄层色谱分析
苦马豆生物碱成分薄层色谱分析白玛桑姆;杨晓雯;马烽;周启武;刘晓学;王磊;赵宝玉【摘要】In order to determine whether Sphaerophysa salsula contains swainsonine and analysis alkaloid, we used alkaloid extraction,thin layer chromatography analysis techniques and software of planar chroma-tography for quantitative image.The results showed that 5 kg Sphaerophysa salsula got 650.2 g total ex-tract by the reflow method of industrial alcohol (the rate is 13%).We chose 200 g extract and then pro-cessed by acidification,alkalization,chloroform and n-butyl alcohol.We got extract 3.01 g,0.53 g and 23.13 g in the parts of acidity chloroform,basic chloroform and basic n-butyl alcohol (the rate is 1.51%, 0.27% and11.57%).By thin layer chromatography analysis,we found that Sphaerophysa salsula con-tained at least 5 kinds of alkaloids in the parts of basic chloroform and basic n-butyl alcohol.Swainsonine was mainly in the part of basic n-butyl alcohol.We used the method of column chromatography on silica gel to isolate and purify this part,after comparing with swainsonine standard sample,our study found this part contained swainsonine.%为了确证苦马豆（Swainsona salsula ）是否含有苦马豆素等生物碱成分，采用生物碱系统提取法、薄层色谱分析、平面色谱图像定量分析软件及柱层析分离等技术，对苦马豆生物碱成分进行分析和分离。
黄连药材薄层色谱鉴别
h1 h
Rf 2
h2 h
Rf 3
h3 h
画出薄层板，计算Rf值
5、检出
实验内容与步骤
紫外灯下检测结果
结果处理
讨论与思考
1、何为薄层色谱法的规范化操作，为什么要进行规 范化操作？ 2、边缘效应产生的原因，如何减小边缘效应？ 3、薄层色谱法的的优点和缺陷。
注意事项及要求
1、实验室的要求； 2、废液、毛细管、层析缸及薄层板的处理；
盐酸-甲醇（1：100）约95mL，60℃水浴中加热15 分钟，取出，超声处理30分钟，室温放置过夜，加 甲醇至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。
2、对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1mL
含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。
实验内容与步骤
3、点样 吸取供试品溶液2μL和对照品溶液4μL，分别交
预饱和 展开
1、必须用移液管 2、必须混合均匀
4、展开
实验内容与步骤
展开剂不过原点 展开过程要密闭
展开
展开结束，取出，挥干
实验内容与步骤
5、检出
将薄层板置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱Βιβλιοθήκη ，在与对照品色谱相应位置上，显相同黄色
的荧光斑点。
溶剂前 沿
h
h3
h2
h0
h1
Rf 0
h0 h
Rf 1
实验原理 中药黄连中主要有效成分为小檗碱等生物碱 类成分，利用薄层色谱法可将药材中各成分分 离，用盐酸小檗碱对照品加以对照，可起到鉴 别黄连的作用。
仪器与试剂
双槽层析缸 薄层预制板（10×20，0.3mm） 点样毛细管 盐酸小檗碱对照品 黄连药材 其它试剂均为分析纯
薄层层析的原理与操作
薄层层析的原理与操作薄层色谱,或称薄层层析(thin-layer chromatography),是以涂布于支持板上的支持物作为固定相,以合适的溶剂为流动相,对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。
这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法,从50年代发展起来至今,仍被广泛采用。
一、基本原理薄层层析是把支持物均匀涂布于支持板(常用玻璃板,也可用涤纶布等)上形成薄层,然后用相应的溶剂进行展开。
薄层层析可根据作为固定相的支持物不同,分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。
一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。
吸附是表面的一个重要性质。
任何两个相都可以形成表面,吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。
在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上,都可能发生吸附现象。
物质分子之所以能在固体表面停留,这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。
在固体内部,分子之间相互作用的力是对称的,其力场互相抵消。
而处于固体表面的分子所受的力是不对称的,向内的一面受到固体内部分子的作用力大,而表面层所受的作用力小,因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响,就会被吸引而停留下来。
吸附过程是可逆的,被吸附物在一定条件下可以解吸出来。
在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡,称为吸附平衡。
吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。
例如用硅胶和氧化铝作支持剂,其主要原理是吸附力与分配系数的不同,使混合物得以分离。
当溶剂沿着吸附剂移动时,带着样品中的各组分一起移动,同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。
由于各组分在溶剂中的溶解度不同,以及吸附剂对它们的吸附能力的差异,最终将混合物分离成一系列斑点。
薄层色谱法分析苦豆子提取物中生物碱及黄酮类成分
薄层色谱法分析苦豆子提取物中生物碱及黄酮类成分李雪俐;阳莹;杨晓艺;李建光【摘要】目的：建立苦豆子提取物薄层质量标准。
方法采用硅胶薄层色谱法对苦豆子提取物中的生物碱类活性成分进行鉴别，以甲苯-丙酮-甲醇-氨水（8∶3∶0．2∶0．5）为展开剂，显色剂为改良碘化铋钾试液，白光下检视；采用聚酰胺薄膜层析色谱法对苦豆子提取物中的黄酮类活性成分进行鉴别，以微乳液为展开剂，先喷2-APB，后喷聚乙二醇400进行显色，紫外灯366 nm 下检视。
结果苦豆子提取物的生物碱供试品色谱图中，在与苦参碱、槐果碱、槐定碱对照品色谱相应的位置上，均显相同的橙色斑点，分离度好；黄酮供试品色谱图中有很多斑点，但没有相对应的对照品。
结论采用薄层色谱定性鉴别苦豆子提取物的主要生物碱成分为苦参碱、槐果碱、槐定碱；由于缺乏对照品，不能确定苦豆子提取物中的黄酮类成分具体是哪些物质。
建立的薄层色谱方法简单易行，重现性好，为苦豆子提取物的质量标准提供了依据。
%Objective To establish the quality standard of the extract of Sophora alopecuroides by TLC. Methods Used silica gel thin layer chromatography for the identification of alkaloids in the extract of Sophora alopecuroides ,took Toluene-acetone-methanol-ammonia (8 ∶ 3 ∶ 0.2 ∶ 0.5)as the agent,and modified bismuth po tassium iodide solution as chromogenic agent,then observed under the white light. And the flavonoids in the extract of Sophora alopecuroides were identified by polyamide thin film chroma-tography,With microemulsion as the agent,firstly sprayed 2-APB,then sprayed polyethylene glycol 400 for color rendering,and observed under the UV-366nm.Results The Alkaloids of Sophora alopecuroides extract samples in the chromatogram show thesame orange spots corresponding to the positions of control samples of matrine,sophocarpine and sophoridine,which indicates better degree of separation for them, however there are many spots in the chromatogram of flavonoids,which are no corresponding controls. Conclusion From the above,a thin layer chromatography method was better to use for identifying the al-kaloids and flavonoids in the extract of Sophora alopecuroides ,and the main alkaloids are matrine,sopho-carpine and sophoridine;but due to lack of corresponding controls,the specific substances of the flavonoids of Sophora alopecuroides extract can not be determined.The TLC method is easy to operate with good reproducibili-ty,which provided the basis for the quality standard of the extract of Sophora alopecuroides .【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2016(039)011【总页数】4页(P1440-1443)【关键词】苦豆子;薄层色谱;生物碱;黄酮【作者】李雪俐;阳莹;杨晓艺;李建光【作者单位】新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830011;新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830011;新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830011;新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830011【正文语种】中文【中图分类】R914苦豆子(Sophora alopecuroides L．)别名苦豆根、苦甘草等，是豆科(Leguminosae)槐属植物苦豆子的干燥全草、根及种子，生长于中亚、西亚一带和我国西北地区荒漠较潮湿的地带[1]。
检识生物碱类化合物的常用化学
检识生物碱类化合物的常用化学全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：生物碱是一类含氮天然产物，在植物和动物体内广泛存在，具有广泛的生物活性和药理作用。
生物碱类化合物在药物开发、医学研究和农业领域具有重要的应用价值。
本文将介绍关于检识生物碱类化合物的常用化学方法。
1. 碱液试剂法碱液试剂法是最常用的碱试剂试验之一。
其原理是将待测物与碱性试剂反应生成相应的离子产物，在化学反应中产生特有的颜色变化。
利用这种方法可以快速、简便地检测生物碱类化合物的存在。
3. 离子交换色谱法离子交换色谱是一种利用吸附剂对待测物进行分离和检测的方法。
生物碱类化合物通常具有带正电荷的性质，可以利用离子交换色谱柱进行分离和检测。
这种方法在生物碱类化合物的分析和检测中具有较高的灵敏度和分辨率。
4. 气相色谱-质谱联用技术气相色谱-质谱联用技术是一种高效的色谱分析方法，可以实现对生物碱类化合物的快速、高灵敏度的检测。
该方法结合了气相色谱的分离和质谱的检测，可以对复杂混合物中的生物碱类化合物进行准确的定量和定性分析。
5. 核磁共振技术核磁共振技术是一种基于原子核的物理性质对化合物进行结构分析的方法。
生物碱类化合物具有特定的核磁性质，可以利用核磁共振技术对其结构进行详细的解析。
这种方法可用于生物碱类化合物的结构鉴定和定量分析。
检测生物碱类化合物的常用化学方法包括碱液试剂法、酸性和硝酸试剂法、离子交换色谱法、气相色谱-质谱联用技朾和核磁共振技术等。
这些方法在生物碱类化合物的分析和检测中发挥着重要的作用，为生物碱类化合物的研究和利用提供了重要的技术支持。
第二篇示例：生物碱类化合物是自然界中常见的有机化合物，具有多种不同的化学结构和生物活性。
它们广泛存在于植物、微生物和动物体内，对生物体的生长、发育和生理功能具有重要作用。
由于生物碱类化合物具有较多的结构类型和生物活性，因此对其进行检识和鉴定具有一定的挑战性。
以下将介绍生物碱类化合物的常用化学检测方法及其特点。
生物碱的提取和分离技术
生物碱的提取和分离技术生物碱是一类具有生物活性的天然产物，广泛存在于植物、动物、微生物等生物体中。
生物碱具有广泛的药理活性，可以作为抗癌药物、镇痛剂、抗菌剂等药物的原料，具有重要的临床应用价值。
生物碱的提取和分离是研究生物碱的重要环节，采用适当的提取和分离技术可以有效地分离和纯化目标生物碱，提高产率和纯度。
本文将介绍几种常用的生物碱提取和分离技术。
（一）溶剂提取法溶剂提取法是最常用的生物碱提取方法之一。
其原理是利用有机溶剂和生物样品中的生物碱发生相互溶解的特性，从而将生物碱从样品中提取出来。
溶剂提取法的操作步骤如下：1. 样品的制备：将样品研磨成细粉末状，并加入适量的溶剂，如乙醇、氯仿等，浸泡一段时间，使生物碱溶解于溶剂中。
2. 溶剂的回收：将样品溶液通过滤纸过滤，将悬浊物和溶液分离。
悬浊物中含有一部分未被溶解的生物碱，可以通过重复提取的方法继续提取。
3. 浓缩和分离：使用旋转蒸发仪将溶液浓缩至一定体积，然后通过再结晶、分离漏斗等方法将生物碱纯化。
溶剂提取法的优点是操作简便、成本较低，适用于生物样品中生物碱含量较高的情况，但其缺点是提取效果受多种因素的影响，包括溶剂的选择、提取时间和温度等。
（二）色谱法色谱法是一种高效分离和纯化生物碱的技术。
常用的色谱法包括薄层色谱、柱层析、高效液相色谱等。
1. 薄层色谱法：将样品溶解在适量的溶剂中，在薄层色谱板上涂抹成一条线，然后置于一定温度下静置，使溶剂上升，生物碱会根据其亲水性质以不同速度上升。
最终通过对比试剂反应或紫外检测器检测分离出的斑点，确定目标生物碱的位置。
2. 柱层析法：将含有样品的溶液通过填充有柱层析剂的柱子，通过洗脱剂的流动，使生物碱在柱子中发生分离。
根据生物碱的亲水性质和交互作用，可以通过控制洗脱剂的性质和流速，实现生物碱的快速分离。
3. 高效液相色谱法：与传统柱层析法相比，高效液相色谱法具有分离效果更好、操作更简单、分析更快捷的优点。
其原理是将样品溶解在溶剂中，通过高压注射器推动样品溶液进入色谱柱，通过洗脱剂的流动分离生物碱。
巴豆生物碱的薄层色谱鉴别研究
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生物碱类成分的主要性质及分析特征
3、蒽醌类单体成分的测定
•中药制剂中蒽醌类单体成分的测定一般要将样品水解 后再进行测定，测定方法主要有薄层扫描法和高效液相 色谱法。 • 薄层扫描法为蒽醌类成分常用定量分析方法，经层析 分离后，可在可见光、紫外光及荧光下扫描测定。 • 蒽醌类成分在紫外及可见光下均有强吸收，利用高效 液相色谱-紫外可见光检测器测定蒽醌类单体成分，具 有灵敏、准确、简便等特点。在含蒽醌类化合物的中药 制剂分析中应用日趋增多。
（二）中药中生物碱分析 1、总碱分析 （1）定性鉴别 由于中药制剂中成分复杂，有些成分如蛋白质、多肽和 鞣质等也可与试剂生成沉淀而造成假阳性结果，因此，制 备样品供试液时必须净化处理，除去干扰成分，方能用沉 淀反应进行中药制剂中生物碱类成分的鉴别. （2）总生物碱的含量测定 • 化学分析法 化学分析法包括重量分析法和容量分析法。目前主要使 用酸碱滴定法。
强碱滴定生物碱盐时,在70%-90%的乙醇介质中终点比 在水中明显,因此常将生物碱盐溶于90%乙醇,再用标准碱 乙醇液滴定. 酸碱滴定法指示反应终点可用指示剂和各种电位法。 • 分光光度法 目前多用单波长光度法，测定波长可选用待测生物碱 成分本身的吸收波长，也可加入某些试剂如亚硝酸钠试剂、 雷氏盐试剂及酸性染料等反应显色后用可见光波测定。 常用方法：直接测定、离子对萃取比色法
（三）应用示例
戊已丸中生物碱的含量测定 处方组成：黄连、吴茱萸（制）、白芍（炒）。 取本品粉末（过三号筛）0.7-0.9g，精密称定，置索 氏提取器中，加盐酸-甲醇（1：100）适量，加热回 流至提取液无色，提取液浓缩后移至25ml量瓶中， 加乙醇稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，置氧化铝 柱（内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿法装柱，用乙 醇30ml预洗）上，用乙醇35ml洗脱。收集洗脱液， 置50ml量瓶中，加乙醇稀释到刻度，摇匀，照分光 光度法，在345nm处测定吸收度，按盐酸小糪碱的 吸收系数728计算，即得。本品按干燥品计算，每1g 含生物碱以盐酸小糪碱(C20H18ClNO4)计，不得少于 30mg。
薄层色谱法在当前中药质量标准中的应用探讨
一、引言近年来，薄层色谱法作为一种简便、快速、准确的分析方法，得到了广泛应用。
特别是在中药质量标准的制定和审核中，薄层色谱法的应用越来越受到重视。
本文旨在探讨薄层色谱法在当前中药质量标准中的应用情况，并分析其优势和局限性。
二、薄层色谱法在中药质量标准中的应用1. 方法原理薄层色谱法是一种基于物质分离、鉴定和定量的分析方法。
它通过将样品溶液涂布在薄层板上，利用在固定相上运动的色谱分离原理，实现对不同化学成分的分离和定量。
在中药质量标准中，薄层色谱法通常用于中药原料药和中成药的质量鉴定、含量测定和成分分析。
2. 应用范围薄层色谱法可以对中药中的多种成分进行检测和鉴定，如生物碱、黄酮类、皂苷、挥发油等。
它适用于中药药材、中药饮片、中药提取物、中药制剂等各个环节的质量标准制定和审核。
在一些特殊的情况下，薄层色谱法还可以用于判断中药的真伪和地域来源。
3. 实际应用目前，薄层色谱法已经被纳入了我国《中华人民共和国药典》和《中药标准》等质量标准中。
许多中药的质量标准中都对薄层色谱法的操作规程、色谱条件和质量评价进行了详细规定。
在生产和质检过程中，许多医药企业也积极采用薄层色谱法进行中药成分的分析和控制。
三、薄层色谱法的优势1. 检测速度快相比于高效液相色谱法和气相色谱法，薄层色谱法的检测速度更快，一般情况下只需要几十分钟到数小时即可完成分析。
这对于需要大批量样品分析的中药生产企业来说，大大提高了检测效率。
2. 操作简便薄层色谱法的操作相对简单，不需要复杂的仪器设备，只需薄层板、样品溶液、显色剂等简单实用的试剂即可完成分析。
这降低了中小型企业引入该技术的门槛，也方便了基层医疗单位进行快速检测。
3. 成本低廉薄层色谱法所需的设备和试剂成本相对较低，对于一些经济条件有限的单位来说，采用薄层色谱法进行质量检测是一种经济实惠的选择。
四、薄层色谱法的局限性1. 分离效果受限由于薄层色谱法对于分离效果和分辨率的要求较高，对于某些复杂的中药成分，可能无法完全分离，导致检测结果不够准确。
生物碱鉴别阳性反应实验报告
生物碱鉴别阳性反应实验报告生物碱分析试验总结将正丁醇层样品液（101208,原生药浓度16.7g/ml）浓缩至0.1ml 得正丁醇层供试液（101208-1）；将氯仿层样品液（101204原生药浓度3.3g/ml）浓缩至0.05ml，得氯仿层供试液。
（101204-1）将铺好的硅胶G薄层板于110℃烘箱中活化40min,冷却后备用。
生物碱组分的TLC分析预实验薄层板：硅胶G展开剂：三氯甲烷：甲醇：氨水（15：4:1）显色剂：碘-碘化钾试剂显色条件：110℃烘烤5min用毛细管分别吸取0.6μL，0.9μL，1.2μL正丁醇供试液，点于薄层板1上；再分别吸取1.0μL，2.0μL，3.0μL氯仿供试液，点于薄层板2上。
待溶剂挥干后，分别置于展开缸中展开15min，取出晾干。
在薄层板上喷碘碘化钾试剂，晾干后于110℃烘箱中5min显色。
重复2次。
薄层色谱图如下：薄层板1色谱图由图可见生物碱显色剂阳性反应的斑点，可初步确定样品中含有生物碱组分。
分析色谱图，氯仿层色谱图显色较为理想，说明展开条件比较适宜，且点样量为2.0μL时显色较清晰，拖尾现象较轻，为适宜点样量；正丁醇层色谱图的显色斑点比移值较小，分析可能是展开剂不合适导致组分未分离开。
由于正丁醇层中为水溶性成分，故使其分离需增大展开剂极性，增加甲醇所占比例。
薄层板2色谱图正丁醇层提取物的TLC分析条件优化预试薄层板：硅胶G展开剂：三氯甲烷：甲醇：氨水（15：8:1）显色剂：碘-碘化钾试剂显色条件：110℃烘烤5min用毛细管分别吸取0.6μL，0.9μL，1.2μL正丁醇供试液，点于薄层板上，待溶剂挥干后，置于展开缸中展开15min，取出晾干。
喷以碘-碘化钾试剂，晾干后，于110℃烘箱中5min显色。
重复2次，色谱图见分析色谱图,显色斑点的必移植增大，且组分分离效果较理想，说明此展开条件适于正丁醇层样品的分析。
且点样量为0.9μL时显色较清晰，拖尾现象较轻，为适宜点样量；正丁醇层、氯仿层、小檗碱的TLC分析比较薄层板：硅胶G展开剂：三氯甲烷：甲醇：氨水（15：6:1）显色剂：碘-碘化钾试剂显色条件：110℃烘烤5min用不同毛细管分别吸取0.9 μL正丁醇供试液，2.0μL氯仿层供试液，0.8μL小檗碱对照品溶液，点于同一薄层板上，置于展开缸中展开15min，取出晾干，喷以碘碘化钾试剂，于115℃烘箱中烘烤5min。
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生物碱（alkaloid）是一类含氮的碱性 天然有机物，大多具有复杂的环状结构， 氮原子多在环内，具光学活性，有显著的 生理作用，是中药中重要的有效成分。
• 分布广泛，以双子叶植物最多，其次是单
子叶植物、裸子植物。
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种类多，按结构可分为12类。大具有 重要生理活性的大多集中于异喹啉、吲哚、 莨菪烷类衍生物。
常用含生物碱的中药
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• 生物碱的理化性质： • 1. 物理性质 • 2. 旋光性 • 3. 酸碱性 • 4. 溶解度 • 5. 沉淀反应
一．影响薄层色谱分析的主要因素
• （一）样品的预处理及供试液的制备
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样品供试液的精制方法： 1．单一溶剂萃取法 2．分段萃取法 3．液液萃取法 4．固液萃取法
质能在Rf值0.3 – 0.7之间 • （2）溶剂的选择性：要求达到最佳分离度
• （六）温度对薄层色谱的影响 • （七）影响薄层色谱的其它因素
二．生物碱样品液制备
• （一）与天然药物化学提取、分离、定性
的不同点 • （二）生物碱提取 • 1．提取溶剂 • （1）非极性溶剂 • （2）极性溶剂 • （3）混合溶剂
（二）薄层色谱的上样技术
• 不良的上样是最主要的误差来源之一 • 1．原点位置对样品容积的负荷量是极
为有限的 • 2．上样环行色谱效应 • 3．供试液的溶剂在原点的残留 • 4．上样装置对薄层表面的机械损伤对 色谱质量的影响
（三）吸附剂的活性与相对湿度 对薄层色谱的影响
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1．吸附剂的活性：是由表面能和表面积决定的。 (1) 硅胶 – 硅醇基 – 与化合物形成氢键 (2) 薄层板活化目的：水合硅醇基 – 游离硅醇基 (3) 在不同的相对湿度下，可达到不同程度的吸 附平衡 (4) 薄层色谱的重现性差，薄层板在不同的相对 湿度下操作是主要原因之一 2．相对湿度的控制方法：展开缸中放入适当浓度 的硫酸
• （1）斑点定位：不加显色剂显色；使用显
色剂（可挥去；有显色反应） • （2）洗脱：溶剂的选择 • （3）测定：薄层取样量一般为几微克-几 十微克，常用测定方法为UV或可见分光度 法。 • 注意事项：空白对照；回收率的检测
2．薄层扫描法
• （1）吸附剂和薄层板的选择 • （2）点样方法 • （3）色谱条件的选择：展开剂、显色剂 • （4）相关方法学考察 • （5）误差的来源
黄连的TLC
黄柏的TLC
山豆根 参 TLC-2
川贝母TLC
伊贝母TLC
淅贝母TLC
天仙子TLC
华山参TLC
洋金花TLC
马钱子TLC
青风藤TLC
罂粟壳TLC
延胡索TLC
四．生物碱薄层色谱的定量分析
• 1．薄层色谱 - 分光光度法
• 2．提取方法： • 冷浸、渗漉、超声波、索氏提取、热回
流提取
• （三）生物碱样品的精制
• 1．萃取法 • 2．色谱法 • 3．离子对法
三．生物碱薄层色谱的定性分析
• 1．展开剂 2．吸附剂 3．显色剂 • 4. 对照品定性分析 • （化学对照品、对照药材、阴性对照） • 5．以Rf值为基准定性分析 • （边缘效应及其它影响因素） • 6．薄层扫描定性分析 • （薄层指纹图谱）
（四）溶剂蒸气在薄层色谱中的作用： 饱和问题 （五）关于薄层色谱的优化及溶剂系统 的选择
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1．依靠薄层色谱分离混合物物质需要解决 的主要问题有两个： • （1）相邻物质对的分离 • （2）在一个宽极性范围内的多组分混合 物的分离
• 2．展开剂的选择和优化 • 主要考虑两个方面： • （1）溶剂的极性：要求使欲分离的主要物