传染病学-综合实验报告

华南农业大学实验报告

实验项目名称：细菌性疾病的微生物学诊断及防治

所属课程名称：兽医传染病学实验A

学生姓名：肖蕊学号： 201130870214 专业年级： 11级历史文化旅游（兽医第二专业）

成绩：

1 实验目的

观察细菌性疾病的临床症状和病理解剖变化

掌握细菌性疾病的微生物学诊断方法及防治措施

2 实验材料和方法

2.1 实验材料

实验动物、血清琼脂平板、营养肉汤，酒精灯、生化发酵管。药敏试纸、剪刀、镊子等

2.2 实验方法

2.2.1 临床症状观察

观察动物的精神状态、皮肤、被毛、粪便、体温等情况

2.2.2 病理剖检变化

观察动物各脏器的病理变化，包括心、肺、肝、脾、肾、肠、淋巴结等。看有没有出血、坏死等病变

2.2.3实验室诊断

①细菌分离培养

无菌取病兔病变组织，如肺、肝、脾或体液、分泌物及局部病灶的渗出液，接种血清营养琼脂或麦康凯琼脂，将培养皿标记后置于37℃温箱，培养24小时后观察结果。

②涂片、染色、镜检

对于液体病料，可用无菌接种环取一环液体病料在载玻片上涂抹成适当大小的薄层即可；对

于实质脏器，可用镊子夹持病变组织，然后用灭菌剪刀剪取一小块，夹出后将其新鲜切面在载玻片上压印即成触片。

革兰氏染色法染色：

1.涂片经火焰固定，加1液（结晶紫溶液）染1-2分钟，用清水冲去染液；

2.加第2液（碘液）染1-2分钟，水洗；

3.加第3液（脱色液），不时摇动玻片约10-30秒，至无紫色脱落为止，水洗；

4.加第4液（复染液），染1分钟，水洗；

5.干后油镜镜检。结果判断：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

（注意：1.严格掌握脱色时间，革兰氏阳性菌脱色时间过长易误认为革兰氏阴性菌，脱色时间过短，革兰氏阴性菌易误认为革兰氏阳性菌；2.选用18至24小时菌龄的细菌为宜，如细菌太老，由于菌体死亡或自溶，常使革兰阳性反应转显为革兰阴性反应。

③生化试验

将细菌的24h纯培养物分别接种到各种生化培养基内，37℃培养24h，观察结果并记录。

巴氏杆菌生化特性

葡萄糖＋

乳糖－

蔗糖＋

甘露醇＋

果糖＋

鼠李糖－

棉子糖－

卫柔醇－

运动力－

麦康凯琼脂－

硝酸盐还原＋

靛基质＋

氧化酶＋

脲酶－

大肠杆菌生化特性

葡萄糖⊕

乳糖⊕

蔗糖－

甘露醇⊕

麦芽糖⊕

运动力＋

脲酶－

枸橼酸盐利用－

硫化氢－

MR ＋

VP －

硝酸盐还原＋

靛基质＋

④动物试验

将病料磨碎，用生理盐水稀释成1:10的悬液（或用分离细菌的肉汤培养物），接种小白鼠0.1-0.2ml，18-72小时死亡后取心、肝、肺等涂片镜检,并接种培养基进行分离培养。根据细菌形态、染色、培养等特性加以鉴定,必要时进行生化鉴定。

2.2.4 药敏试验

（1）用接种环挑取菌落4～5个，接种于肉汤培养基中，37℃培养过夜。

（2）用无菌棉拭子蘸取上述肉汤培养液，在管壁上挤压，除去多余的液体，用棉拭子涂满琼脂表面，盖好平皿，在室温下干燥5min，待平板表面稍干即可放置含药纸片。

（3）用灭菌镊子以无菌操作取出含有不同抗生素纸片贴在涂有细菌的培养基表面。将平皿置于

37℃恒温箱培养16～18h，观察结果。

（4）结果判定：观察含药纸片周围有无抑菌环，量取其直径（包括纸片直径）大小，按抑菌环直径的大小报告敏感、中度敏感和耐药

3 实验结果及诊断结果、

本次实验动物为兔子。在攻毒一个周过后死亡，攻毒前生命体征各项均正常。病理解剖结果可看到心、肝、脾以及淋巴结充血、出血；喉头、气管、肠道黏膜有出血点。

3.1涂片镜检

无菌取病兔心肺实质器官抹片检查时没看到明显的细菌，经瑞氏染色后镜检，可看到细菌呈两极着色，周边有淡红色的荚膜的短小杆菌。

3.2细菌分离培养

无菌取病免的肺接种于鲜血琼脂平板和麦康凯平板上，37度培养，结果麦康凯平板上无任何菌落，而鲜血琼脂平板上有许多淡灰色、圆形湿润、露珠样的小菌落，且周围不溶血。还有一些取菌落作瑞氏染色，镜检。可看到该菌为两极浓染，两端钝圆、有荚膜的短杆菌，还有一些紫色的葡萄样的菌。紫色的菌可判断为葡萄球菌。经肉汤培养以及琼脂培养基多次分离纯培养后，可分离菌株。

3.3生化试验

葡萄糖＋

乳糖－

蔗糖＋

甘露醇＋

果糖＋

鼠李糖－

棉子糖－

卫柔醇－

运动力－

麦康凯琼脂－

硝酸盐还原＋

靛基质＋

氧化酶＋

脲酶－

3.4药敏试验

3.5小鼠感染试验

取亲分离的菌株钝培养，制成细菌钝培养液，接种小鼠，腹腔注射9ml，24h后死亡。解剖的病理变化与免子相同。

4 综合防治措施

对于在大规模养殖的养殖场，主要有以下几点防治措施

①建立无多杀性巴氏杆菌种兔群

②坚持自繁自养原则，不从疫区引种或购买商品兔，引种兔进要严格检疫并隔离观察30天，

经检查无异常症状时方可入群。

③加强饲养管理，增强机体的搞病能力

④消除一切应激因素。

⑤搞好清洁卫生和定期涉消毒，减少疫病感染机会

⑥药物预防可在每50kg饲料中加8-10g乙醇，混合饲喂

⑦严禁其他动物出入兔场，定期灭蚊虫，减少传染源，切断传播途径

⑧治疗可用阿莫西林钠，10-15mg/kg 肌注；或链霉素0.5-1IU/KG,2次/d 肌注

5 实验体会或小结

1.本次实验持续做了几个周的细菌性培养，从最开始的练习兔子的耳缘静脉采血、皮下、皮内、

腹腔注射、肌肉注射，到真正的实验细菌攻毒，细菌的分离培养、小鼠回归试验等多个繁杂的步骤过后，了解了特定病原在动物体内的整个发病过程，以及发病原因进行了详细的探究的探究。