胶体金法各种方法法原理
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双抗体夹心法原理
以FABP 为例(检测抗原)
阳性反应
Y1=F14A (标记了胶体金)
Y2=F104B (固定在NC 膜上即T 线)
Y3=羊抗鼠IgG (固定在NC 膜上即C 线)
此方法较常用,主要用于较大分子量的蛋白(抗原)的检测。要求两株抗体针对一个抗原的不同位点才可以。也有个别的检测项目是双抗原夹心检测抗体的,原理类似。
样品(血清)含FABP 蛋白
金标记F14A 抗体
金-F14A-FABP
金-F14A-FABP-F14A
金-F14A-羊抗鼠IgG
金-F14A-FABP
羊抗鼠IgG
显示红色 显示红色
金标记F14A 抗体
不显色 显示红色
金-F14A-羊抗鼠IgG
阴性反应
阳性反应
竞争法原理
以吗啡为例(检测抗原)
阳性反应
Y1=胶体金标记的吗啡单抗 Y2=吗啡-BSA 偶联物 Y3=羊抗鼠
此方法主要用于小分子抗原(毒品、农药、肽链等)的检测。由于抗原分子量小不能直接固定于NC 膜上,常常用化学方法把小分子偶联到BSA 等大分子物质上再固定于NC 膜上。此结果与双抗原夹心法相反,阴性CT 两条都是红线,阳性只有C 线一条红线。
金-吗啡抗体-吗啡
吗啡-BSA
金标记吗啡抗体
显示红色
不显色
金-吗啡抗体-吗啡
羊抗鼠
样品(尿液)含吗啡
显示红色
显示红色 金标记吗啡抗体
金-吗啡抗体-羊抗鼠
阴性尿液抗体-吗
阴性反应
阳性反应
间接法原理
以HIV 为例(检测抗体)
此方法主要用于血清中抗体检测,纯化或者重组的抗原固定于NC 膜上,标记多为蛋白A(ProteinA 或叫SPA ,抗体Fc 端结合而与其它蛋白质不结合)。此方法要求胶体金过量,一般来说样品再加入前需要稀释或者加极少量后再加缓冲液。 斑点免疫渗滤法使用就是间接法。
显示红色 显示红色
显示红色
不显色