维生素类药物的分析

第二节 维生素A
R : -H
维生素A醇
-COCH3 维生素A醋酸酯
-COC15H31 维生素A棕榈酸酯
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一、结构与性质 （一）为一个具有共轭多烯侧链的环己烯
❖ 具有UV吸收 ❖ 存在多种立体异构化合物
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维生素A 新维生素Aa 新维生素Ab 新维生素Ac 异维生素Aa 异维生素Ab
H3C
CH3 O CH3
CH3
CH3
H3C CO O
CH3
dl－α－生育酚醋酸酯
CH3 CH3
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一、结构与性质 苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链 1、易溶于有机溶剂，不溶于水 2、UV 3、酯键 易水解
VitE HorOH 生育酚 △ 醌型化合物[O]
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二、鉴 别 （一）硝酸反应
第三节 维生素E
O HO
苯并－二氢吡喃醇
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CH3
R2
O*
*
HO
R1
名称
α-生育酚 β-生育酚 γ -生育酚 δ -生育酚
R1
CH3 CH3 H H
R2
CH3 H CH3 H
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*
相对活性
1.0 0.5 0.2 0.1
生物效价: 右旋体 ：消旋体 = 1.4 ：10
（天然品） （合成品）
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三点校正法： 1. 条件： （1）杂质的吸收在310~340nm波长范围 内呈一条直线，且随波长的增大吸收度 减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。
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2. 波长的选择： （1） 1： VitA的max（328nm） （2） 2 和 3
分别在1的两侧各选一点
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条件： 无水无醇
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+
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+
CH2
-
SbCl5 RCOO
蓝色
CH2
-
SbCl5 RCOO
紫红
（二）UV法 （BP（1998）） VitA 无水乙醇 HCl 去水VitA
△
λmax为326nm 一个吸收峰
λmax为350～390nm 三个吸收峰
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三、检查 （一）原 理
游离生育酚
利用游离生育酚的还原性，将硫酸 铈还原成硫酸亚铈 生育酚 2Ce4 2Ce 3 对 生育醌
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（二）试剂
硫酸铈滴定液（0.01mol/L）
二苯胺（亮黄→灰紫）
T CM n
（M生育酚= 430.8）
T 0.01 430.8 2.15（4 mg / ml） 2
VitA
CH2
去水VitA（VitA3）
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（三）TLC法 BP： 杂质对照品法 显色剂： 三氯化锑 USP： 显色剂：磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值
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三、含量测定 （一）UV法 立体异构体 氧化产物及光照产物 合成中间体 去氢维生素A（ VitA2） 去水维生素A（ VitA3）
100％
＝IU / g标平示均量丸重100％
A 换算因数 平均丸重
C
标示量
100％
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(1)第一法 维生素A醋酸酯 • 方法：
S 环己烷 9～15IU / ml溶液 分别于300、316、328、340、360nm处测Ai
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• 判断 max 是否在326～329nm之间
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四、含量测定 （一）GC法 1. GC特点 选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好
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挥发性低、不稳定、 极性强→衍生化易受 样品蒸气压限制
2. VitE测定的色谱条件 载气→N2 固定液→硅酮（OV-17） 担体→硅藻土或高分子多孔小球 柱温→265℃ 检测器→氢火焰离子化检测器(FID) 内标→正三十二烷 n ≥ 500 R≥2
第一法： 等波长差法
328 316 340 328
A328校正 3.522A328 A316 A340
测定对象： VitA醋酸酯
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第二法： 等吸收度法(皂化法)
6 7
A1
A2
A3
A325校正 6.815A325 2.555A310 4.260A334
VitA醛 VitA酸
❖ △或有金属离子存在时氧化↑
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环氧化物
VitA醛
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VitA酸
（三）与三氯化锑发生呈色反应
VitA SbCl 3蓝色 紫红
（四）溶解性
不溶于水 易溶于有机溶剂和植物油等
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二、鉴别 （一）三氯化锑反应
VitA SbCl 3蓝色 紫红
max在326～329nm之间
是
否
• 求算 Ai / A328 改用第二法
并与规定值比较
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Ai / A328 规定值
A300 / A328 -
0.555
A316 / A328 -
0.907
A328 / A328 - 1.000
A340 / A328 - 0.811
A360 / A328 - 0.299
g）
2907000 1530
=1900
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1IU 0.300g维生素A醇
效价（IU / g） 1106g 3330000 0.300g
换算
因数＝效价（IU / E% 1cm(纯)
g）
3330000 1820
=1830
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第四步：求标示量％
标示量％＝IU / 丸 标示量
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• 判断 A300 /A325 是否大于0.73
否
是
计算A325(校正)
取未皂化样品采用 色谱法纯化后再测 定
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A325校正 6.815A325 2.555A310 4.260A334
f A325(校正) A325 100%
A325
A325(校正）
A325
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内标法
供试液（样品+内标） 对照液（对照+内标）
内标物
是样品中不存在的物质 与被测组分峰靠近 能与各组分完全分离
药典规定
消耗硫酸铈液（0.01mol/L）≤1.0ml
若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，应 重新计算硫酸铈的消耗量
设：应消耗硫酸铈液≤ V ml
0.01×1.0 ＝实际浓度× V
V（ml
）
0.011.0 硫酸铈实际浓度
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例 Ce(SO4)2 = 0.01020mol/L V（ml） 0.01 1.0 0.98（ml） 0.01020
例 取本品0.10g，加无水乙醇5mL溶解后，加
二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）
滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过
1.0mL。
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（三）限量 ≤2.15％
限量% V T 100% W
限量% 1.0 0.002154 100% 0.1
2.15%
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= + 0.02 = + 0.04
A328校正 3.52 2 A328 A316 A340 3.522 0.628 0.561 0.523
0.605
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f A328(校正) A328 100% A328
3.7% (15% ~ 3%)
标示量%
A328校正 1900
VitE H75N℃O153′生育酚 生育红[O]
橙红色
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强氧化剂
H3C HO
CH3 O
CH3 C16H33
CH3
生育酚
HNO3
CH3
H3C
O CH3
C16H33 生育红 （橙红色）
O
O
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取本品约30mg，加无水乙醇10mL溶 解后，加硝酸2mL，摇匀，在75℃加热15 分钟，溶液应显橙红色。
差值 = = =0 = =
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• 判断差值是否超过规定值的±0.02
有一个以上 超过±0.02
无超过±0.02
计算A328（校正）
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用A328计算
A328校正 3.522A328 A316 A340
f A328(校正) A328 100% A328
第二法 A328（校正）
A328
第二法
－15%
－3% 0 3%
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VitAD胶丸中VitA的含量测定
精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项 下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至 250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精 密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀 释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大 吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度 为：
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• A300 ：0.354 • A316 ：0.561 • A328 ：0.628 • A340 ：0.523 • A360 ：0.216
A300 /A328 ：0.555 A316/A328 ：0.907 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.811
A360/A328 ：0.299
Fe +
3
N
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2+
N Fe
N
3
红色
（三）UV法 0.01%无水乙醇中
λmax = 284nm λmin = 254nm
E11c%m＝41.0 ~ 45.5
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（四）TLC法 薄层板： 硅胶G 展开剂 ：环己烷 -乙醚（4 ：1） 显色剂：硫酸（105℃ 5′）
VitE Rf = 0.7
第三步: 求效价 效价（IU / g）(样) E% 1cm(样) 换算因数
换算因数由纯品计算而得：
换算因数＝效价（IU / g） E% 1cm(纯)
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1IU 0.344g维生素A醋酸酯
效价（IU / g） 1106g 2907000 0.344g
换算因数＝效价（IU / E% 1cm(纯)
S KOH /乙醇 皂化液植Vit物A醋油酸酯甘油V和it脂A醇肪酸盐 乙醚提取除去植物油的干扰挥干乙醚 异丙醇 溶解 稀释至9～15IU / ml 于300、310、325、 334nm 处 测Ai
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• 判断max是否在323～327nm之间
是 计算A300/A325
否
取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定
max
325.5 328 320.5 310.5
323 324
相对生物效价
100% 75% 24% 15% 21% 24%
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❖ 易发生脱氢、脱水、聚合反应
VitA2
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VitA3
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鲸醇
（二）共轭多烯侧链易被氧化
VitA 紫外线、O2、氧化剂
环氧化
物[O]
求本品中维生素A的含量？
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解：
A300 /A328 ：0.564 － 0.555 A316/A328 ：0.893 － 0.907 A328/A328 ：1.000 － 1.000 A340/A328 ：0.833 － 0.811
A360/A328 ：0.344 － 0.299
= + 0.01 = －0.01 =0
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（二）三氯化铁－联吡啶反应
VitE KOH 生育酚 Fe3
△
[O]
对 生育醌
Fe 2 联吡啶 红色
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CH3
H3C
O CH3
生育酚
C16H33
HO
弱氧化
CH3
剂
FFee33＋+
[O]
对-生育醌
H3C O
CH3 O
OH
CH3 C16H33
CH3
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N
2+
第九章 维生素类药物的分析
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第一节 概 述
维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的 微
量营养物资。 人体不能合成维生素
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脂溶性： VitA、D2、D3、 E、K1 等
水溶性： VitB族(B1、B2、B6、B12)
VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺
VitM
VitPP
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C(g / 100ml )
平均丸重 标示量 100%
0.605 1900
0.08262 100%
0.2399 2 1 100 10000
250 20
99.0%
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（2）第二法 （等吸收度法）
【皂化法、6/7A法 】
适用于维生素A醇 第一法无法消除杂质干扰时用此法
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测定对象： VitA醇
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3. 测定法 （1）基本步骤:
❖第一步: A选择 选择依据：
所选A值中杂质的干扰已基本消除
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第二步: 求 %1cm (样)
%1cm(样)
A C(%) l
注意： %1cm (样) %1cm (纯) C 为混合样品的浓度
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Байду номын сангаас
A325(校正）
－3% 0 3%
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三氯化锑比色法 标准曲线法
VitA SbCl3 蓝色 λmax 618nm～620nm 优点： 简便、快速
缺点
呈色不稳定 （5 ~ 10s内） 水分干扰 SbCl 3 H2OSbOCl
与标准曲线温差≤1℃
专属性差 三氯化锑有腐蚀性
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