HE染色程序及相关溶液配制

HE染色程序

1.取材与固定：一般取0.5立方米，基木不用再次修形。置于4%甲醛溶液中，至少固定24小时。室温保存即可。

2.水洗：视组织块大小而定。一般与固定时间相等或至少水洗

24小时。

3、脱水：70%酒精(过夜或2h) ->80%酒精(过夜或lh) -90% 酒精

(lh) ->95%酒精I (lh) -95%酒精(lh) 11-100%酒精I (5)-100%酒精II (lh),

梯度酒精脱水

注：当酒精浓度逐渐升高时，特别是100%的酒精，注意观察组织

块情况，不能脱水脱过了，如果拖过了，切片时，组织易碎。如果水

脱的不彻底，则浸蜡时，蜡不能完全浸入，也会影响后期切片。

4、透明：二甲苯I (lOmin)—二甲苯II(lOmin)。

5、浸蜡：58°C 1.5-2h (一般用新蜡)

6、包埋：叠好的蜡槽，一般深lcm,宽lcm,长7cm,放4个组织块为

宜。注：包埋一般采用旧蜡，避免产生气泡。包埋时用来夹取组织块

的银子，要同时放在蜡箱里预热。先向蜡槽内倒蜡，然后用预热的蹑

子夹取浸蜡缸中的组织，放到蜡槽底部，尽量避免漂浮。包埋后，就

不要挪动蜡槽了，否则组织漂浮在蜡槽的表面。

7、常规切片，一般组织3-5微米，神经组织切7微米。展片温度

为52摄氏度。捞片时刻直接从95%的酒精中取载玻片直接捞片，不必

擦干载玻片上的洒精。捞好片后，置于37度温箱恒温干燥过夜。

8、切片脱蜡：二甲苯I (5min)—二甲苯JI(8min),

9、水化：100%酒精(lmin)-90%酒精(lmin)-80%酒精(lmin) -70% 酒精(lmin)

10、水洗2-5min

11、苏木素染色15-20min

12、水洗至灰黄色

13、分化：1%盐酸酒精分化30s至桃粉色，

14^水洗返蓝：2-3h

15、伊红染色：15min

16、脱水：70%酒精(10s) ->80%酒精(20s) -90%酒精(30s) -95%洒精(lmin) -100%酒精(2min)-100%酒精(2min)

17＞二甲苯透明：二甲苯I (5min)—二甲苯II(5min)

18、中型树胶封片，镜检。

相关液体的配制:

1、4%甲醛固定液：40%的甲醛溶液10ml + 90ml蒸憾水,摇匀即可。

2、处理载玻片用的盐酸酒精：95%酒精100ml+ 36-38%盐酸1 ml摇匀即可。

3、分化用1%盐酸酒精：注：1%盐酸酒精配制：75%酒精99ml+36-38%HCL lml 即可。

4、二甲苯：无需配制，用商品化得即可。

5、各个浓度的洒精，均用100%的酒精或95%酒精按比例稀释配制

即可。

6、苏木素的配制：

A液：镀明矶（硫酸铝按）55克加蒸镭水至600ml

B液：苏木素6克加100%酒精50ml混匀

C液：甘油150ml加甲醇150ml

分别配制A、B、C液,将A与B混合过夜，用滤纸过滤后，加入C 液，在温暖有阳光处照射1-2个月，使染料成熟，方可使用。

7、1%伊红的配制（水溶性的）：1克伊红（曙红B）加100ml蒸憾水即可，需放置于阳光下成熟一段时间。一般500ml染液中加入5-6滴醋酸，可以增强其着色力。

HE染色原理;苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

所有化学试剂买“分析纯”级别的。

甲醛：买回来的都是40%浓度的，回来自己配成4%的。

二甲苯：买回来的直接用就行，无需配制。

无水乙醇：

95%乙醇：此两种浓度的酒精，用来配制90%, 80%, 70%浓度的酒精。苏木素：还有叫苏木精的。如果买粉末的话，就按上边给的配方配制,

这样就需要鞍明矶（硫酸铝按、常规药品，都好买。也有商品化的，

买现成的染液，直接就是液体的。

伊红，又有叫曙红B,（千万别买错了，还有叫曙红Y的，这个不能用于HE染色）。粉末状的，按上而的配方自己配。也有现成的商品化的染液，就是价格略贵一些。

蜡：有国产的，国产的比较便宜。有进口的。进口的比较贵，60-100 元/kg价格不等。我们实验室以前买过进口的“探卡”品牌的蜡，60 元

/kg。现在什么价格不知道了。新蜡，都会有气泡的，买蜡的时候, 熔点要56-58°Co