植物组织培养技术

三．组培苗生长环境有何特点？如何针对这些特点提高移栽成活率？

1.组培炼苗是组培过程较为重要的一个环节，是一个较为复杂的技术体系，提高炼苗成活率是决定组培成败和降低组培成本的关键。试管苗一般在高湿（100%）、弱光（3000-4000Lux）、恒温（25℃）下培养，

2.1组培苗的特点

叶片无保护组织（角质层、蜡质、表皮毛等），加之细胞间隙大，气孔开张大，因此水分散失较快，易于萎蔫。根无根毛或极少，并且有些从愈伤组织上发育的根与芽的疏导组织不相同，因此吸水能力较弱。

2.2提高移栽成活率的方法

而当炼苗移栽时，环境有了极大的改变：湿度降低、光照增强、温度升高、温差变大。具以上特点的组培苗，在此环境下，叶片失水较严重，根系吸水能力不足，即吸水量小于蒸腾水量，从而造成植物萎蔫，炼苗失败。另一种情况是，空气温度上升要比基质温度上升快，而根系的吸水能力在一定范围内与温度是成正比的，当气温升高时，加之湿度较低，叶片蒸腾急速增加，此时基质温度上不去，根系吸水能力不够，造成蒸腾大于吸水的失衡状态，从而萎蔫死亡。要想获得高的炼苗成活率就得针对以上问题，一方面提高出瓶苗的质量，提高其抗逆性，生根前的壮苗、理想的生根配方和生根培养环境的调控是关键；另一方面就得有针对组培苗特点创造一个适宜的炼苗环境，比如保证空气湿度，平衡空气和基质的温度平衡关系等。

四、生长素类分裂素类调节剂在主培中有哪些生理作用？在快速繁殖的起始，芽增殖及生根培养阶段应该如何使用？

培养中生长素一方面用于诱导愈伤组织的形成和生根，另一方面是与一定量的细胞分裂素配合使用共同诱导不定芽的分化，侧芽的萌发与生长以及某些植物胚状体的诱导。

在植物组织培养中的细胞分裂素的主要功能是促进细胞的分裂和分化，打破顶端优势，诱导芽的分化和增殖，促进组织和器官的不定芽发育。当培养基中的细胞分裂素与生长素的比例高时，诱导芽的分化，反之，诱导根的分化。

快速繁殖的起始阶段培养基中加入适量的生长素和细胞分裂素类

芽增殖阶段向培养基中加入较多的细胞分裂素类的物质促进芽的分化

生根培养阶段向培养基中加入较多的生长素类物质促进根的分化

五．利用组织培养技术生产苗木及次生代谢物的手段有哪些？培养对象分别是什么？培养新品种的手段有哪些？培养对象分别是什么？

六．影响植物组织培养成功的因素有哪些？

1)实验室要合适，要很好的控制好光照，湿度和温度。

2)培养材料及所需要的实验用具要洗净，严格的消毒灭菌。

3)培养基配置技术要合理，要注意调溶液的PH等（如：如果要培养长根的话，可以适当

的加大生长素的浓度）

4)注意无菌操作技术

5)实验操作是要注意无菌操作（操作幅度不要过大，手要消毒彻底等）

6)外植体的选择（同一植物不同部位的细胞活性不同，一般植物鲜嫩的部位比较好，比如

说茎尖。像木质部就不合适。）

7)各种激素类物质的配合比例要合适。

七．阐述植物组织培养的主要障碍，发生原因及防治措施？

八．某地区的一种马铃薯经多年种植后，植株变得矮小，产量和品质下降，请用所学组织知识分析原因，并设计一个解决方案。

原因：几乎所有的栽培植物都发现感染甚至几种病毒，大部分的病毒属于RNA病毒，病毒对植物的生长发育产生不良的影响，常常会导致植物矮小，产量和品质的下降。

解决方案：（分生组织培养脱毒法）

1.分生组织的分离

从大田中取健壮的植株的顶芽或萌发芽，带回实验室除去可见叶，材料清洗干净。用

75%酒精漂洗，在用20倍的次氯酸钠消毒8-10分钟，无菌水冲洗3次，然后在无菌操作室进行无菌操作。切下生长点转入合适的培养基进行培养。

2.培养

茎尖分生组织分离后转入到琼脂培养基上于25℃-27℃条件下进行光培养。

3.建立无性繁殖体系

利用生长点培养无毒苗的成活率和脱毒率都非常低，培养出来的新苗要进行鉴定，鉴定无毒后再用新苗的茎尖再进行培养新苗。

4.脱毒苗试管株的移栽和品种特性鉴定

将试管苗移栽到土壤中，这个转变要有一个逐渐锻炼适应。

九．现有MS培养基母液6瓶，母液1为50倍，母液2为50倍，母液3为50倍，母液4为100倍，母液5为20倍，母液6为200倍，激素母液有1mg/ml IAA,0.5mg/ml NAA,2mg/ml 6-BA,4mg/ml KT,以及蔗糖和琼脂若干，请利用这些材料配置2L MS+2mg/L IAA+1mg/L NAA+3mg/L6-BA+3%蔗糖+0.7%琼脂培养基，写出配制方法步骤及灭菌过程。

配制方法：

配制2L的各种物质的用量如下：

吸取母液的用量为：

母液1：2000ml/50=40ml

母液2：2000ml/50=40ml

母液3：2000ml/50=40ml

母液4：2000ml/100=20ml

母液5：2000ml/20=100ml

母液6：2000ml/200=10ml

激素用量：

IAA：吸取1mg/ml IAA母液4ml

NAA:吸取0.5mg/ml NAA母液4ml

6-BA:吸取2mg/ml 6-BA母液3ml

蔗糖：60g 琼脂：14g

灭菌过程：

将混合的培养液加琼脂加热，到适宜的温度后调PH值为5.8后倒入培养瓶中，冷却看是否凝固，如果凝固的话放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌。（0.1Mpa 121℃ 20分钟）灭菌之前要看灭菌锅中是否有水，如果水不够是话要加水，灭菌好了之后，关掉电源放气，当指针指到0 Mpa时就可以打开灭菌锅的盖子，最后拿出培养瓶放好，千万不要打开瓶盖。

十．简述植物无糖组培的意义及技术要点？

无糖组培的意义：传统的主旨植物组织培养都使用含糖的培养基，杂菌很容易侵入培养容器并在培养基中繁殖造成污染，是造成组织培养的一大障碍。为了防止杂菌的侵入，在组织培养中通常将培养容器完全密闭，这种方式使植物生长相对缓慢，且易出现形态及生理的异常，同时也大大提高人工费用和生产成本。而无糖组培解决了这些问题。无糖组培在培养基中不加入糖，只是通过提高培养空间的光照度，二氧化碳的浓度，温度和湿度，以及气流交换速度等来增强组织培养植物的光合速率，从而促进植物的增殖，生长和发育。但是要求的环境控制设备高。

无糖组培的技术要点：

外植体的选择：带有芽或侧芽、叶或根的外植体。要进行光合作用制造能量供自己生长。环境的控制：提高培养空间的光照度、二氧化碳的浓度、温度和湿度以及气流交换速度。