糖原合成酶激酶

糖原合成酶激酶

【关键词】胃癌；,,GSK

摘要：目的：探讨糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase3β，GSK3β) 与胃癌细胞中PCNA表达之间的关系及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测75例人胃癌组织和10例正常胃粘膜组织中GSK3β和PCNA的蛋白表达。结果：GSK3β蛋白在胃癌中的阳性率为48.00%。GSK3β的蛋白表达与胃癌患者的分化程度、TNM 分期以及淋巴结转移均密切相关（P＜0.05）。在75例人胃癌组织中，COX2、EGFR蛋白表达之间呈显著负相关（P=0.000, r=0.422）。结论：GSK3β的低表达促进了胃癌细胞的增殖，有一定的预后意义。

关键词：胃癌； GSK3β； PCNA；免疫组织化学

糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase3β，GSK3β)作为一种丝/苏氨酸蛋白激酶，其生物学作用已远远超过了最初认为的糖代谢调节酶的功能。新近研究发现，GSK3β能磷酸化多种底物，包括代谢与信号蛋白、细胞结构蛋白和转录因子等，因而在细胞的生长、发育、肿瘤发生等过程中发挥着重要的作用［1,2］。近几年来的研究发现GSK3β的活性能抑制某些肿瘤细胞的增殖和生存［3］，关于GSK3β参与胃癌细胞增殖的确切机制目前尚不清楚。因此，本研究探讨了GSK3β与胃癌细胞中PCNA表达之间的关系及其临床意义。

1 材料与方法

11 标本来源

随机收集本院2003年9月～2005年10月手术切除后的胃癌标本75例，其中男性48例，女性27例；年龄35～73岁，平均年龄56岁。临床TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期33例，Ⅲ期28例，Ⅳ期4例。伴有淋巴结转移的胃癌组织49例，不伴有淋巴结转移的肺癌组织26例。癌细胞分化程度：高分化21例，中分化31例，低分化23例。正常胃组织10例，为非肿瘤患者手术标本。胃癌手术切除标本取材后经4%中性缓冲福尔马林固定。以4μm厚连续切片3张，1张进行苏木素伊红染色，由两名高级病理医师复查切片并重新诊断，另2张进行GSK3β、PCNA的蛋白检测。

12 试剂

兔抗人GSK3β多克隆抗体（SC9166）、鼠抗人PCNA单克隆抗体（ZM0213）、通用型SP试剂盒（SP9000）和DAB底物试剂盒（ZLI9018）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

13 免疫组织化学染色及结果判断

采用免疫组织化学SP法。DAB显色，苏木素复染，并镜检分析结果。空白对照用PBS取代一抗，其余步骤不变。GSK3β阳性信号主要定位在细胞胞质，而PCNA则定位在细胞胞核。每例标本在400倍高倍显微镜下选择染色最强的4个视野，计数阳性细胞数。参照文献方法来分析GSK3β、PCNA的表达水平，即“－”为不表达或<30%细胞表达；“+”为视野中阳性细胞数在30 %～50 %之间；“++”为阳性细胞数51%～70 %；“+++”为阳性细胞数＞70 %。

14 统计处理

根据SPSS11. 0 统计软件进行处理。用χ2检验和Fisher 精确概率法比较GSK3β与胃癌患者临床病理特征以及PCNA表达的关系，P<0.05时被认为有统计学意义。 2 结果

21 GSK3β蛋白在不同胃组织中的表达

GSK3β蛋白在正常胃组织中呈阳性表达，在肿瘤组织中表达明显减弱，其阳性率分别为：100.00%（10/10）、48.00%（36/75），两者之间的差异有显著性（P=0.002）。

22 GSK3β蛋白表达与胃癌临床病理特征及PCNA表达的关系