不同方法提取谷胱甘肽的比较

实验一不同方法提取谷胱甘肽的比较

一、实验目的

1、掌握从干酵母中粗提谷胱甘肽的各种方法。

2、掌握还原型谷胱甘肽定量的方法。

二、实验原理

谷胱甘肽是种重要的三肽，以还原型（GSH)和氧化型（GSSG)广泛的存在于动、植物及微生物。在生物体内起作用的主要是GSH，是细胞内主要的还原性物质，能保护细胞免受氧化性、毒害性化合物和辐射的伤害，还是酶的辅因子。GSH在临床上是重要的解毒药物。

谷胱甘肽是小分子物质，水中溶解度较大，细胞表面出现裂缝就能分散到溶剂中，故可用一些温和的方法提取。

本实验采用热处理、冰冻处理、酸处理、有机溶剂处理等方法提取酵母细胞中的谷胱甘肽，比较最后的得率，探讨各种提取方法的优点和缺点。

三、实验器材、材料和试剂

1、器材

冰箱，离心机，水浴锅，电炉，滴定管，烧杯，玻棒，研钵。

2、实验材料

活性干酵母，2%偏磷酸，5%碘化钾，0.0001mol/l碘酸钾溶液，淀粉指示剂，

乙酸：乙醇（2:1）,36%乙酸溶液。

四、实验步骤

1、热水抽提：

1g干酵母与5ml水混合，加15ml沸水，置100℃水浴保温10min，立即放入冰水速冷，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V1。

2、冷冻研磨后有机酸搅拌提取：

1g干酵母先在研钵中研细，与10ml水混合，-20℃冷冻成半固体状，研磨5min转入小烧杯，加10ml 36%乙酸搅拌15min，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V2。

3、酸热处理：

1g干酵母加20ml 2%偏磷酸，60℃水浴中搅拌抽提15min，置冰水速冷，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V3。

4、有机混合液处理：

1g干酵母加20ml有机混合液（甲酸：乙醇=2：1），室温搅拌抽提15min，置冰水速冷，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V4。

5、碘量法测定：

取5ml待测样品，置于250ml锥形瓶中，加入5ml2%偏磷酸溶液、1ml5%碘化钾溶液和2滴淀粉指示剂，用0.0001mol/L的碘酸钾滴定至溶液由无色变为蓝色为止。

KIO3+5KI+6HPO3→3I2 +6KPO3 +3H2O

五、结果及分析

1.将各种方法所消耗的碘酸钾的体积数添入下表

2.比较本实验四种提取酵母中谷胱甘肽的方法的优缺点。

六、注意事项

1、待测定的谷胱甘肽提取液置4℃冰箱保存，防止氧化。

2、酸性溶液中，淀粉会水解，使滴定终点的颜色发生变化，故滴定操作要快速完成。