珠子参DNA不同提取方法
磁珠纯化dna步骤
磁珠纯化dna步骤
磁珠纯化DNA是一种常见的DNA提取和纯化方法。
以下是通用的磁珠纯化DNA的步骤：
1. 样品准备：将DNA样品稀释到合适的浓度，通常用Tris-EDTA缓冲液（TE缓冲液）稀释。
2. 磁珠制备：将磁珠固定在磁板上，并加入磁珠结合缓冲液，使磁珠悬浮在缓冲液中。
3. 靶标捕获：将DNA样品加入磁珠结合缓冲液中，使DNA 与磁珠结合。
4. 磁珠分离：将磁板放在磁力板上，吸附磁珠到磁板上，使用磁力将磁珠分离至磁力板内壁，将上清液丢弃。
5. 洗涤：将洗涤缓冲液加入到分离后的磁珠上，重复磁珠分离步骤，以去除杂质。
6. DNA洗脱：将洗脱缓冲液加入到磁珠上，使磁珠中的DNA 与洗脱缓冲液中的物质交换，并离开磁板。
7. 验证DNA纯化：使用DNA定量方法（如紫外吸收光谱或荧光定量）检查纯化后的DNA浓度和质量。
注意：具体步骤可能会因不同厂商提供的试剂盒和设备而有所不同。
请根据所使用的具体试剂盒和设备的说明进行操作。
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作，它是获取DNA样本的过程。
DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。
其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分（如蛋白质）之间的亲和性差异。
在高盐环境下，DNA更容易溶解而不与蛋白质结合，从而实现DNA的提取。
具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从细胞中分离出来。
具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。
DNA样本在经过一系列处理后，通过硅胶柱，DNA能够与硅胶颗粒结合，而杂质则被洗脱。
最后，通过洗脱DNA，即可获得高纯度的DNA。
硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单，适用于分子生物学研究和临床诊断。
4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。
其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性，实现DNA的选择性吸附和洗脱。
具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。
除了上述常用的DNA提取方法外，还有其他一些特殊的DNA提取方法，如酶解法、离心法、凝胶切割法等。
这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。
总结起来，DNA提取的方法多种多样，选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验操作，以确保提取到高质量的DNA样本。
DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此在进行DNA提取时，需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素，以获得可靠且高纯度的DNA。
磁珠法提取dna原理
磁珠法提取dna原理
磁珠法提取DNA原理是利用磁性珠子及其表面修饰的特定分子与DNA之间的亲和性来实现DNA的富集和分离。
具体原理如下：
1. 磁性珠子的选择：选择具有一定磁性的微米级珠子作为DNA富集的固相载体。
这些磁性珠子通常由磁性材料（如Fe3O4）制成，可以通过磁力来进行分离和收集。
2. 磁性珠子表面修饰：在磁性珠子表面修饰特定的分子，通常是寡核苷酸（如单链DNA、RNA或寡聚核苷酸）或核酸结合蛋白，使其具有与目标DNA相互作用的能力。
修饰的分子上还可以加入亲和标记物（如亲和素或抗体），以便进一步增强富集效果。
3. DNA结合：将修饰后的磁性珠子与DNA样品混合，通过与DNA靶标相互作用，使目标DNA与磁性珠子表面的修饰分子结合，并形成稳定的DNA-珠子复合物。
4. 分离和富集：在结合后，应用外加的磁场或磁力来分离磁性珠子及其结合的DNA-珠子复合物。
由于磁性珠子的磁性，可以迅速将其吸附到反应容器的侧壁上，然后将上清液排除，实现DNA的富集和纯化。
5. 磁珠洗脱：在磁性珠子上吸附的DNA可以通过改变离心管内磁场或洗涤条件来洗脱，得到纯化的DNA产物，然后可以进一步进行下游分析，如PCR扩增、测序等。
总之，磁珠法通过磁性珠子的特性以及表面修饰分子与DNA之间的亲和性，实现了对DNA的高效富集和纯化，成为DNA提取和纯化领域中常用的方法。
DNA提取方法及注意事项
DNA提取方法及注意事项DNA提取是生物学研究中的一个重要的组成部分，它有助于发现和分析基因组结构，通过分析不同生物物种之间的差异，来研究生物的特性、发育和进化历史。
抽取DNA也可以用于鉴定物种、界定雌雄和比较个体之间的联系。
DNA提取一般用以下几种方法之一进行：模板/组织/细胞。
模板提取的DNA大部分来源于液相或固体血清和血清，这种类型的DNA提取能够最快地从样品中获得DNA。
而组织和细胞提取则专注于对特定组织或细胞的研究，这种方法会受到某些条件的影响，比如其他生物学因素和样本形式，它们可能需要进行一系列复杂的操作才能被成功提取。
在使用DNA提取方法时需要注意以下几点：1. 选择正确的样本以进行DNA提取。
样本是DNA提取的基础，必须认真选择有效的样本用于DNA提取，否则将无法从样本中获得有效的DNA。
2. 谨慎操作。
在添加和混合试剂、清洗矿物油和离心时，需要特别注意安全和清洁，以避免污染样本和样品中的DNA。
3. 避免外源污染。
一定要使用消毒的空气枪和无菌工具，以防止外源物质污染提取到的DNA。
4. 正确储存DNA样品。
提取到的DNA样品需要在低温（-20℃）环境中储存，以防止样品中的DNA被非特异性酶所降解。
5. 了解DNA信息的损坏。
因为DNA是非常脆弱的，在操作过程中需要尽量避免RNA降解，低pH和温度过高，空气中的氧气也会导致DNA损坏，可能会失去DNA信息的混合物或单一的DNA分子。
在DNA提取方法的选择和使用上，应特别注意上述注意事项，以避免DNA样品的污染和损坏，从而确保研究的准确性和可靠性。
dna提取的各种方法介绍
１、二苯胺试剂：使用前称取 0.8g 二苯胺（需在70% 乙醇试 剂中重结晶 2 次 ) ，溶于 180 ml 冰乙酸中，再加入 8ml 过氯酸 （60%以上），混匀待用，临用前加入0.8ml 1.6%乙醛溶液，所 配试剂应为无色。 每组需56ml 共需2800ml ２、DNA标准溶液：（须经定磷法确定其浓度）取标准DNA 以0.01N NAOH配成200微克／毫升的标准液。 每组需12ml 共需600ml ３、1.6% 乙醛：取 47% 乙醛 3.4ml，加重蒸水定容至 100ml （放于冰箱中，一周之内可以使用）。 共需70ml ４、 ( 测样品液：准确称取猪脾 DNA 或用紫外分光法中剩下 的DNA液配成10微克／毫升的溶液。 每组需4ml 共需200ml
DNA的提取方法简介
为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常 需要从不同的生物材料中提取DNA.由于DNA 分子在生物体内的分布及含量不同，要选择适 当的材料提取DNA。 动植物中，小牛胸腺۰动物肝脏۰鱼类精子，植 物种子的胚中都含有丰富的DNA。 微生物中，谷氨酸菌体含7%~10%，面包酵母 含4%，啤酒酵母含6%，大肠肝菌含9%~10%。
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以 1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于 蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对 DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子 的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取 DNA.
1、核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则 为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有 鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。 DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于 水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离 酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA 在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中， DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
脱蛋白法和脱色法纯化珠子参多糖的工艺研究
脱蛋白法和脱色法纯化珠子参多糖的工艺研究刘小琴，陈 涛，巩仔鹏*，唐金毅（三峡大学医学院，湖北 宜昌 443002）摘要：目的 优化珠子参粗多糖的纯化工艺。
方法 主要对珠子参多糖提取中脱蛋白和脱色方法进行优化，从而得到最佳纯化工艺。
结果 在30 ℃加入链酶蛋白酶和三氯乙酸于冰箱放置过夜，再采用Sevage 法共同除蛋白的方法效果最好；脱色则在30 ℃用7.5%~8%H 2O 2溶液最好。
结论 本方法用于脱色及去除珠子参粗多糖中蛋白质成分切实可行，可作为纯化珠子参粗多糖的纯化手段之一。
关键词：珠子参粗多糖；脱蛋白；纯化中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2009)05-0050-04Studies on the Puri fi cation Technology of Rhizoma Panzcis Majoris Polysaccharide by Deproteinization and Decolorization MethodsLIU Xiao-qin, CHEN Tao, GONG Zi-peng, TANG Jin-yi( Medical College, Three Gorges University, Yichang 443002, China )Abstract: Objective To optimize the purification technology of Rhizoma Panzcis Majoris crude polysaccharide. Methods The main purpose is to optimize the way of deproteinization and decolorization.Chiefly, we compares two methods which are Sevage and TCA, in order to find out the best way to optimize removing proteins. Secondly, we control one variable to get the best usage amount. Then, in order to fi nd the best technology of decolorization we compare three decolored approachs as follows resin, hydrogen peroxide and absorbite. Conclusion Using Sevage and TCA together with pronase to remove proteins and using 7.5%~8% hydrogen peroxide to decolor is the best way to optimize puri fi cation technology of Rhizoma Panzcis Majoris polysaccharide. Results The method can be used effectively to decolor and remove proteins from Rhizoma Panacis Majoris crude polysaccharide as well as an effective puri fi cation method.Key words: Rhizoma Panzcis Majoris crude polysaccharide; deproteinization; puri fi cation收稿日期：2008-12-31基金项目：湖北省自然科学基金资助项目，（NO. 2006ABA200）作者简介：刘小琴（1956-）女，副教授，主要从事天然产物的研究。
DNA提取
几种DNA提取方法的优缺点比较文章来源：洛阳吉恩特生物科技有限公司自然界中无论是植物、动物还是病毒，DNA作为大部分生物的遗传物质，在遗传中起着不可替代的作用，为了研究生物的基因，就需要将DNA从细胞中提取出来，这个过程有很多方法可以实现，目前比较常用的有苯酚氯仿抽提法、离心柱法和磁珠法，吉恩特实验室就这三种提取方法进行了梳理和比较，总结出各方法的优缺点供广大科研工作者参考。
1.苯酚氯仿抽提法苯酚氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶KEDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，变性降解核蛋白，使DNA从核蛋白中游离出来。
而DNA易溶于水，却不溶于有机溶剂。
蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。
当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。
离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。
利用萃取原理，根据蛋白核酸溶于不同的试剂层，将枪头伸入不同液层内抽取所需的成分，经多次洗涤后获得纯化核酸。
该方法的缺点是由于使用了苯酚、氯仿等试剂，毒性较大，长时间操作对人员健康有较大影响，而且核酸的回收率较低，损失量较大，由于操作体系大，不同实验人员操作重复性差，不利于保护RNA，很难进行微量化的操作。
优点是采用了实验室常见的试剂和药品，做起来成本比较低廉。
2.离心柱法吉恩特生物离心柱法主要原理是将对核酸有吸附作用的官能基团固定在离心柱模上，通过加入不同的裂解试剂、洗涤试剂并反复离心，以达到核酸与杂质分离的目的，获得纯化的核酸。
离心柱法DNA提取它的优点是比传统的酚氯法提取的纯度高，有利于RNA保护，而且能进行微量操作，以其低廉的价格和相对便捷的操作，渐逐取代了传统DNA提取方法，被高校科研所等市场普遍接受。
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA是生物体中的遗传物质，它携带着生物体的遗传信息。
提取DNA是研究基因组学、遗传学等领域的重要基础工作。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. CTAB法CTAB法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）与DNA结合形成离子对，然后通过盐溶液的浓度差异，使DNA从溶液中沉淀出来。
该方法适用于提取植物细胞中的DNA。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种常用的DNA提取方法。
其原理是利用DNA在酚相中溶解，而其他细胞组分则在氯仿相中溶解，通过酚/氯仿两相的分离，从而将DNA分离出来。
该方法适用于提取动物细胞和细菌等样品中的DNA。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效、纯化度较高的DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性，将DNA吸附在硅胶颗粒上，然后通过洗涤、离心等步骤，将DNA从硅胶颗粒上洗脱下来。
该方法适用于提取各种样品中的DNA。
4. 磁珠法磁珠法是一种基于磁性颗粒的DNA提取方法。
其原理是将带有亲和基团的磁性颗粒与DNA结合，然后通过磁力的作用，将颗粒和DNA一起沉淀下来，最后通过洗涤等步骤，将DNA从颗粒上洗脱下来。
该方法具有快速、高效的特点，适用于高通量的DNA提取。
以上是几种常用的DNA提取方法及其原理。
不同的方法适用于不同类型的样品和实验需求。
在实际操作中，可以根据具体情况选择合适的方法进行DNA提取。
同时，为了保证提取到的DNA质量和纯度，还需要注意提取过程中的一些关键步骤，如细胞破碎、蛋白质酶处理、DNA沉淀等。
DNA的提取是基因研究和遗传学研究的重要步骤，通过合适的提取方法可以获取到高质量的DNA样品，为后续的实验和分析提供可靠的基础。
随着技术的不断进步，提取方法也在不断改进和优化，为科学研究提供更多的可能性。
DNA提取方法和步骤
DNA提取方法和步骤一、常见的DNA提取方法：1. 酚/氯仿法（Phenol/Chloroform Extraction）：通过使用酚/氯仿等有机溶剂来分离DNA分子。
2. 盐水法（Salting out）：通过使用高盐浓度来析出DNA分子。
3. 硅胶柱法（Silica-based purification）：通过与硅胶矩阵相互作用，从混合溶液中纯化DNA。
4. 高盐法（High salt method）：通过使用高盐浓度来沉淀DNA。
5. CTAB法（Cetyltrimethylammonium bromide method）：通过使用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）来分离DNA。
二、通用的DNA提取步骤：1.样本收集：从所需生物体（如植物组织、动物组织、血液等）中收集样本。
样本的品质对提取后的DNA质量影响很大，因此需要保证样本的新鲜度和完整性。
2.细胞破碎：将收集到的样本进行细胞破碎，使DNA从细胞的内部释放出来。
这可以通过机械方法（搅拌、刮擦等）、溶解酶或离心等方法来实现。
3. 除去蛋白质和RNA：加入蛋白酶等酶解蛋白质，使其降解分解。
同时，也可以加入RNase酶降解RNA，以免在提取过程中受到污染。
4.DNA沉淀：加入盐溶液以增加DNA的溶解性，然后加入酒精来沉淀DNA分子。
酒精的加入可以调节盐溶液中Na+和DNA的酒精沉淀剂（如异丙醇或乙醇）的比例，从而沉淀出DNA。
5.洗涤：将沉淀下的DNA溶于适当的缓冲液中，以去除沉淀剂、盐等杂质。
6. 保存：最后，将DNA保存在适当的缓冲液中，如TE缓冲液（Tris-EDTA），并在低温下存储。
三、酚/氯仿法DNA提取步骤：1.细胞破碎：将细胞或组织加入到含有裂解缓冲液的试管中，使用机械方法（高速离心、搅拌等）或酶解来破碎细胞膜。
2.调整pH值：加入适量的酚/氯仿溶液，并快速倒转试管数次，使试管中的溶液充分混合。
酚会与细胞残渣中的蛋白质结合形成亲水性复合物，而氯仿可以帮助去除蛋白质。
磁珠法提取dna原理
磁珠法提取dna原理磁珠法提取DNA原理DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，磁珠法是一种常用的DNA提取方法。
磁珠法利用了磁性珠子的特性，使得DNA在磁场作用下能够与磁珠结合，从而实现DNA的快速、高效提取。
磁珠法提取DNA的原理基于亲和层析技术，其中亲和剂是磁性珠子表面的修饰物。
这些修饰物能够与DNA的特定区域结合，例如特定序列、结构或染色体上的特定区域。
磁珠法的基本步骤包括样品裂解、DNA与磁珠结合、磁珠分离、洗涤和DNA的洗脱。
样品需要经过裂解步骤，以破坏细胞膜和核膜，使DNA释放到溶液中。
裂解液中通常包含蛋白酶K和蛋白酶K缓冲液，以消化细胞蛋白质。
然后，磁性珠子被加入裂解液中，这些珠子的表面修饰物能够与DNA结合。
修饰物可以是亲和剂，如亲合素或抗体，也可以是特定的DNA引物。
在结合步骤中，磁性珠子与DNA结合形成复合物。
通过磁场的作用，磁珠复合物被吸附到管壁或磁珠法专用的磁力架上，从而实现DNA的分离。
与传统的离心分离方法相比，磁珠法具有更高的纯度和回收率。
此外，磁珠复合物的形成和分离速度较快，节省了实验时间。
分离步骤通常涉及将磁力架移除至洗涤液中，以去除非特异性结合物质。
洗涤步骤可以使用乙酸盐缓冲液、乙醇或其他洗涤缓冲液来去除冗余的污染物。
洗涤后，磁力架被重新放置到洗脱液中，DNA 从磁珠上解离，溶解在洗脱液中。
洗脱液通常是低盐缓冲液或去离子水，以确保DNA的高纯度。
磁珠法提取DNA的优点不仅在于其高纯度和回收率，还在于其灵活性和可扩展性。
磁珠的表面修饰物可以根据实验需求进行选择，以实现对特定DNA序列或特定组分的选择性结合。
此外，磁珠法可应用于多种样品类型，包括血液、组织、细胞和体液等。
对于大规模的DNA提取，磁珠法可以进行高通量自动化处理，提高操作效率和样品数量。
总结起来，磁珠法提取DNA的原理是利用磁性珠子与DNA的特异性结合，通过磁场的作用将DNA分离和纯化。
这种方法具有高纯度、高回收率、灵活性和可扩展性的优点，广泛应用于分子生物学研究、临床诊断和法医学等领域。
经典各种DNA提取方法().doc
各种DNA提取方法提取方法提取方法提取方法一，基因组DNA提取方法制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。
主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。
2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。
根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤：1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。
试验步骤2再重新作一边。
3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/LTris-cl0.1mol/LEDTAo.5%SDS)混匀。
4、加入25ul 蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴3h 5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。
加入等体积的5mol/L的LiCL混匀，冰浴，10min.。
7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。
加入等体积的异丙醇。
室温10min。
2500rpm离心10min。
弃上清。
8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。
-20℃20min。
9、12000r/min室温离心5min。
弃上清。
将DNA溶于适量TE中。
二，外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm 离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml 离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml 溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、3000rpm离心10min，弃上清。
dna提取方法
dna提取方法
DNA提取是分离和纯化细胞内的DNA分子的过程。
以下是常用的DNA提取方法：
1. 经典的酚-氯仿提取法：将细胞裂解并溶于酚-氯仿溶液中，通过离心分离DNA上清液和蛋白质/ RNA/酚相，然后分别用异丙醇沉淀和洗涤 DNA，最后用缓冲液溶解 DNA。
2. 盐溶解法：将细胞裂解并使用盐水缓冲溶解 DNA，然后离心去除蛋白质和碎细胞碎片。
最后，通过异丙醇沉淀 DNA，洗涤和溶解 DNA。
3. 磁珠法：利用表面修饰的磁珠、离心和磁场来分离和纯化DNA。
磁珠上会吸附 DNA，然后用缓冲液洗涤和溶解 DNA。
4. 硅胶柱法：利用硅胶膜在碱性条件下与 DNA 结合，然后用缓冲液洗涤和溶解 DNA。
5. 腐蚀酶法：通过腐蚀细胞壁和细胞膜来释放细胞内 DNA，然后离心去除细胞渣。
最后，通过异丙醇沉淀 DNA，洗涤并溶解 DNA。
这些方法都可以从不同来源（如细菌、动植物组织和血液）中提取 DNA，以便分析、克隆或测序。
提取的 DNA 可用于分子生物学研究、犯罪鉴定、基因组学研究等各种应用。
提取dna的方法及步骤
提取dna的方法及步骤提取DNA的方法及步骤DNA（脱氧核糖核酸）是构成生物遗传信息的基本单位，因此，准确提取DNA样本是进行遗传研究、基因工程和犯罪侦查等领域的重要步骤。
以下将介绍几种常见的DNA提取方法及其步骤。
方法一：酚氯仿法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其步骤如下：1. 收集样本：可以是人体组织、血液、细胞培养物等。
确保样本新鲜，并避免受到污染。
2. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
3. 酚氯仿提取：将沉淀加入酚氯仿混合液中，轻轻混匀，并离心以分离DNA。
4. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法二：盐析法盐析法是一种简单易行的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 盐析提取：加入高盐缓冲液使DNA与其他核酸和蛋白质分离。
3. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
4. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
5. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法三：硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 硅胶柱处理：将细胞沉淀加入硅胶柱中，经过洗涤和离心，将DNA吸附在硅胶柱上。
3. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤硅胶柱，以去除杂质。
4. DNA洗脱：加入低盐缓冲液，使DNA从硅胶柱上洗脱出来。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤洗脱后的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法四：酶解法酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
dna提取方法
dna提取方法
dna提取主要是CTAB方法，其它的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。
化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。
生物方式：酶法。
一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb。
二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。
生成DNA约80kb。
四.异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)。
五.表面活性剂快速制备法：用TritonX-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。
七.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。
dna提取磁珠法
DNA提取磁珠法概述DNA提取是分子生物学中的基础实验技术之一，它是从生物样本中分离出DNA分子的过程。
DNA提取磁珠法是一种常用的DNA提取方法，它利用磁性珠子的特性，通过磁力的作用将DNA分离出来。
本文将详细介绍DNA提取磁珠法的原理、步骤和应用。
原理DNA提取磁珠法的原理基于磁性珠子的特性。
磁性珠子是一种通过外加磁场可以被吸附和释放的微小颗粒，通常由磁性材料（如氧化铁）和表面修饰剂组成。
在DNA 提取过程中，可以将磁性珠子表面修饰成带有亲合性的配体，如亲核酸（如DNA或RNA亲和基序），通过与DNA分子的亲和作用，将DNA选择性地吸附到磁性珠子表面。
步骤DNA提取磁珠法一般包括以下步骤：1. 样本处理首先，需要对待提取DNA的样本进行处理。
对于不同的样本类型，处理方法可能有所不同。
一般来说，样本需要经过细胞破碎、蛋白质酶解和细胞膜溶解等步骤，以释放DNA分子。
2. DNA与磁珠的结合将处理后的样本与修饰了亲核酸的磁性珠子混合，使其充分接触。
亲核酸上的亲和基序与DNA分子的亲和性使得DNA与磁珠发生结合。
3. 磁珠的分离通过外加磁场，可以使磁性珠子快速沉降到底部，形成一个磁珠- DNA复合物。
而其他杂质则会悬浮在上层。
通过磁力的作用，将磁珠与DNA复合物从样本中分离出来。
4. 清洗将磁珠- DNA复合物进行洗涤，以去除残留的杂质。
洗涤过程中，可以利用磁力将磁珠- DNA复合物快速沉降到底部，然后去除上层液体，以达到清洁的目的。
5. DNA的洗脱最后，将洗涤后的磁珠- DNA复合物与洗脱缓冲液进行接触，使DNA从磁珠上脱离。
洗脱后的DNA可以用于后续分析，如PCR扩增、酶切或测序等。
应用DNA提取磁珠法广泛应用于各个领域的科研和实验室工作中。
以下是一些常见的应用：1. 分子生物学研究DNA提取是进行分子生物学研究的前提步骤之一。
DNA提取磁珠法可以高效、快速地提取纯度较高的DNA，为后续的PCR、酶切、测序等实验提供可靠的样本。
dna的提取方法
dna的提取方法DNA（脱氧核糖核酸）的提取方法是分子生物学研究中的重要步骤之一。
DNA提取是指从生物样品中分离纯净的DNA分子，以便进行后续的实验操作。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法，包括传统的酚-氯仿法、盐法和商业化DNA提取试剂盒法。
一、酚-氯仿法酚-氯仿法是最早被广泛应用的DNA提取方法之一。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从其他细胞成分中分离出来。
具体步骤如下：1. 取样品，如血液、组织或细胞。
2. 加入细胞裂解缓冲液，使细胞破裂释放DNA。
3. 加入酚-氯仿混合液，混合均匀。
4. 离心分离混合液，得到上清液和有机相。
5. 通过酚-氯仿提取法分离DNA。
二、盐法盐法是一种简单且经济的DNA提取方法，适用于提取小样本量的DNA。
其原理是利用DNA在高浓度盐溶液中的溶解特性，将DNA 分离出来。
具体步骤如下：1. 取样品，如口腔拭子、唾液或头发。
2. 加入盐溶液，使DNA溶解。
3. 加入冷酒精，使DNA沉淀。
4. 离心分离上清液和DNA沉淀。
5. 通过盐法提取DNA。
三、商业化DNA提取试剂盒法商业化DNA提取试剂盒是现代科研实验室常用的DNA提取方法。
这种方法利用了特定试剂盒中的缓冲液、酶和离心管等配套设备，实现了高效、快速和稳定的DNA提取。
具体步骤如下：1. 根据试剂盒说明书，准备样本和试剂。
2. 加入细胞裂解缓冲液，使细胞破裂释放DNA。
3. 加入消化酶，去除蛋白质和RNA。
4. 加入洗涤缓冲液，洗涤DNA沉淀。
5. 加入洗涤缓冲液，洗涤DNA沉淀。
6. 加入洗涤缓冲液，洗涤DNA沉淀。
7. 通过商业化DNA提取试剂盒法提取DNA。
在实际应用中，选择何种DNA提取方法应根据实验目的、样本类型、样本数量和实验预算等因素进行合理选择。
以上介绍的酚-氯仿法、盐法和商业化DNA提取试剂盒法都是常用的DNA提取方法，具有各自的优缺点。
研究人员可以根据实际需求选择最适合的方法。
DNA提取方法总结
对一些DNA提取方法的总结细菌DNA的提取：（一）试剂：1. 抽提缓冲液2% CTAB (W/V)2% PVP K25 (w/v) （去色素）100mM Tris-HCl (pH8.0)25mM EDTA (pH8.0)2.0M NaCl2.10M LiCl3. 2M LiCl4.DEPC-water（抑制RNA酶活性）5. 3M NaAc (pH5.2)6. 96% 乙醇7. 70% 乙醇步骤：1.抽提缓冲液65℃预热；2. 加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min；3. 加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），振荡，离心12,000rpm，10min；4.取上清，加氯仿/异戊醇（24：1）振荡，离心12,000rpm，10min；5. 取上清，重复4步骤；6. 加入1/10体积的3M醋酸钠和1.5倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇），－20C沉淀；11. 离心12,000rpm，10min；12. 弃上清，70％乙醇洗，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml 水中。
(二)（我们常用的方法，但是有时有些细菌特别不好提，就用上面的方法）1. 将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。
2. 取1.5ml培养物12000rpm离心2min。
3. 沉淀物加入567 ul的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30ul 10%SDS和15ul的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h.4. 加入100ul 5mol/L NaCl, 充分混匀，再加入80ul CTAB/NaCl溶液，混匀后再65℃温育10min。
5. 加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min, 将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，沉淀可稍加离心。
6. 沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇．真菌DNA的提取：（一）1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2.加入4mL提取液，快速振荡混匀3.加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚，可以节约成本的哟！）4.1000rpm，4℃，5min5.上清用体积的氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次（10,000 rpm，4℃离心5 min）6.取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 minulTE中 7.用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 8.加入1 ul RNaseA （10 mg/mL），37℃处理1 hr9.用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）10.取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上11.沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ulTE中，-20 ℃保存备用DNA提取液：0.2M Tris-HCl（pH 7.5），0.5M NaCl，0.01M EDTA，1％SDS，3M NaAc（二）1.真菌菌丝0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉2.加入3 mL 65℃预热的DNA提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30 min, 期间混匀2-3次3．加入1 mL 5M KAc，冰浴20 min4．等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）5．取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇, 混匀, 静置约30 minL 6．用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 TE 中7．加入1 ul RNaseA （10 mg/mL），37℃处理1 hr8．用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）9．取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上10．沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ul TE中，-20 ℃保存备用。
DNA提取原理与方法
DNA质控标准-琼脂糖凝胶电泳
• DNA电泳结果图
谢谢！
该种特性而不会结合到纯化柱上。
新鲜组织DNA提取方法
裂解
✓ 加蛋白酶K；降解组蛋白，使DNA充分游离 ✓ 加裂解液buffer GL、buffer GTL；裂解细胞膜，释放DNA；使DNA沉淀 ✓ 放于56℃、1300rpm转速恒温震荡仪孵育10min；蛋白酶的最适工作温度
过柱
✓ 加无水乙醇将溶液转移至DM管中；无水乙醇沉淀DNA， DNA高效特异的结合到硅基质 离心吸附柱上
溶解dna磁珠法dna提取和柱式dna提取方法对比提取方法提叏样本类型通常全血血片血浆细胞组织较少较多结合电荷吸附硅胶柱吸附优缺点浓度较高但纯度相对较低浓度相对较低纯度相对较高石蜡dna提取方法福尔马林
DNA提取原理 及常用方法
DNA基本结构
DNA基本结构
DNA基本结构
DNA提取的基本步骤
✓ 放入转速12000rpm离心机离心1min；
洗涤
✓ 分别用GW1，GW2洗涤DNA吸附柱；洗掉其他杂质
洗脱
✓ 用GE缓冲液将吸附柱上的DNA洗脱下来；溶解DNA
磁珠法DNA提取和柱式DNA提取方法对比
提取方法 提取样本类型（通常）
加样量 结合 优缺点
磁珠法 全血，血片，血浆
较少 电荷吸附 浓度较高，但纯度相对较低
血浆DNA提取方法
血浆DNA提取方法
• 裂解 ✓100ul的10%的SDS，15ul的蛋白酶k，1ml血浆 （去除蛋白） ✓60℃孵育20min,冰浴5min
• 结合 ✓加入625ul的Binding Solution ✓ 7.5ul的CF DNA Magnetic Beads
• 漂洗 ✓500ul的Wash Buffer（洗两次） ✓1000ul 80%乙醇（洗两次）
珠子参DNA的不同提取方法的研究
珠子参DNA的不同提取方法的研究摘要：目的：探讨适合SSR标记的DNA不同提取方法。
方法：用经典CATB 法,改良CATB法，SDS法，高盐低PH法，提取新鲜珠子参根部中总DNA，并对DNA进行电泳得出最佳提取方法。
结论：最佳提取方法为改良CATB法。
关键词：珠子参；DNA提取；SSR分析；CATB法；SDS法；高盐低PH 法Beads and DNA from different methodsYangShen(Yuxi teachers college, Resources and environment college, Biological science)Abstract: objective: to study the different extraction methods of the SSR markers for the DNA. Methods: using classical CATB method, advanced CATB method, SDS method, high salt low PH method, fresh and root extract beads of total DNA, and through electrophoresis obtains the best extraction method. Conclusion: the best extraction method for improvement CATB method.Keywords: beads; DNA extracted; SSR analysis; CATB method; SDS method; High salt low PH method珠子参(PanacisMajirisRhizama)属于五加科、串珠状根茎植物，别称钮子七、珠儿参、扣子七。
分布于我国的四川、陕西、云南等省。
药用植物珠子参新鲜块根DNA提取方法研究
药用植物珠子参新鲜块根DNA提取方法研究杨维泽;史云东;许宗亮;杨绍兵;张金渝【期刊名称】《云南中医学院学报》【年(卷),期】2014(037)004【摘要】目的为获取珠子参高质量、高产量的总DNA,满足SSR-PCR标记实验.方法采用经典CTAB法、改良CTAB法、高盐低PH法和SDS法对珠子参总DNA提取方法进行比较研究,用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量.结果 4种方法中产量最高的为经典CTAB法,产率为149.533ng/g,纯度最高的为改良CTAB法,OD260/OD280为1.796.结论 4种方法提取的DNA质量均满足SSR-PCR标记实验,扩增效果改良CTAB法和SDS法效果最佳.【总页数】4页(P25-28)【作者】杨维泽;史云东;许宗亮;杨绍兵;张金渝【作者单位】云南省农业科学院药用植物研究所,云南昆明650231;玉溪师范学院化学与环境科学系,云南玉溪653100;云南省农业科学院药用植物研究所,云南昆明650231;云南省农业科学院药用植物研究所,云南昆明650231;云南省农业科学院药用植物研究所,云南昆明650231【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.几种药用植物基因组DNA提取方法研究 [J], 冯图;黎云祥2.药用植物艾纳香基因组DNA提取方法研究 [J], 庞玉新;王文全;张影波;刘国道;莫廷辉3.远志属4种药用植物不同干燥方法叶材料DNA提取方法研究 [J], 樊杰;申飞翔;何益;马全级;箫迪;白妍;束明月4.药用植物大黄种子基因组DNA的提取方法研究 [J], 任海龙5.珠子参新鲜和干燥块茎DNA提取方法的比较研究 [J], 黄文静;谢培;孙琛;宋忠兴;孙晓春;李铂;王楠;唐志书因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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珠子参DNA的不同提取方法的研究摘要：目的：探讨适合ssr标记的dna不同提取方法。
方法：用经典catb法,改良catb法， sds法，高盐低ph法，提取新鲜珠子参根部中总dna，并对dna进行电泳得出最佳提取方法。
结论：最佳提取方法为改良catb法。
关键词：珠子参； dna提取；ssr分析； catb法；sds法；高盐低ph法beads and dna from different methodsyangshen(yuxi teachers college, resources and environment college, biological science)abstract: objective: to study the different extraction methods of the ssr markers for the dna. methods: using classical catb method, advanced catb method, sds method, high salt low ph method, fresh and root extract beads of total dna, and through electrophoresis obtains the best extraction method. conclusion: the best extraction method for improvement catb method.keywords: beads; dna extracted; ssr analysis; catb method; sds method; high salt low ph method珠子参(panacismajirisrhizama)属于五加科、串珠状根茎植物，别称钮子七、珠儿参、扣子七。
分布于我国的四川、陕西、云南等省。
具有活络、止血的功效 [1-2]。
现代药理学研究显示, 珠子参具有较广泛的药理作用, 对心血管系统、血液及造血系统、免疫系统、肿瘤等均有作用[2]。
因此珠子参具有极高的研究价值，所以本实验用珠子参作为材料进行实验。
珠子参根部次生代谢产物较多，其中酚类多糖类物质会影响珠子参总dna的提取及srr分析。
本实验主要为了选取适合ssr分析的dna不同提取方法的最佳方法，以便更加有效地提取珠子参总dna。
1材料与实验方法及操作1.1材料1.1.1实验材料实验材料取自大理市鹤庆县草海镇马厂的珠子参。
该实验需要用到不同的提取方法及不同的保存方法，所以将各类方法和保存方法做如下标记：a、经典ctab法，b、改良ctab，c、sds法，d、高盐低ph值法。
1.1.2仪器离心机，水浴锅，冰箱，电泳仪，移液枪，rcp扩增仪，凝胶成像仪1.1.3试剂ctab提取缓冲液：(10.00gctab，50.0ml 1mol/ltris-hcl(ph8.0)，20.0ml 0.5mol/l edta，41.00g nacl，定容至500ml）；3%sds提取缓冲液：(0.1mol/l tris-hcl（ph8.0），0.05mol/ledta-na2， sds，定容至250ml)；去多糖buffer：(100ml tris-hcl(1mol/l)，50mledta(0.5mol/l），nacl7.305g，定容至500ml)；高盐低ph值提取缓冲液：(0.1mol/l、ph=4.8 naac,0.05mol/l、ph8.0 edta-na2，0.5mol/l nacl，2%pvp，2%sds，ph=5.5)；te：(5ml 1mol/l tris-hcl，1ml 0.5mol edta, 定容至500ml)；3%琼脂糖凝胶：(0.6g琼脂糖,20ml 1%tbe缓冲液)；10x的tbe：（tris碱108.00g，edta7.44g，硼酸55g,定容至1000ml）；40%的聚丙烯酰胺凝胶：（双丙烯酰胺2.00g，丙烯酰胺38.00g，定容至100ml）；6%的聚丙烯酰胺凝胶：（10xtbe 12ml，40%聚丙烯酰胺凝胶18ml，90ml h2o）；银染所需试剂：（0.1%agno3溶液，3%na2co3溶液,10%hac溶液,1%na2s2o3溶液）；0.5mol/l edta，β-巯基乙醇，聚乙烯吡咯烷酮(pvp)，tris饱和酚，氯仿/异戊醇(v/v=24:1)，异丙醇，75%乙醇，琼脂糖，无水乙醇，5mol/l kac，1x的tbe，temed，aps，硝酸，二甲苯氰，溴酚蓝1.2实验方法及操作1.2.1 经典catb法[3] (有改动)(1)取3份新鲜珠子参每份0.5g分别放入3个研磨中加入1200μl 65℃预热的ctab提取缓冲液混匀；(2)迅速将1.5ml离心管置于65℃水浴中，保温60min,每隔15min温和颠倒混匀； (3)待冷至室温后，取出1.5ml离心管，取上清液于另一离心管，每管加入等体积的氯仿/异戊醇(24：1)溶液，混匀后至溶液呈乳浊状，10000r/min离心10min；(4)小心将上清液相转移至另一个1.5ml离心管中，标号a1，a2，a3，在上清液中加入600μl预冷-20℃的异丙醇，轻轻混匀，至有白色絮状沉淀出现，-20℃静置保存1小时。
(5)离心管从冰箱取出后10000r/min离心10min弃上清液，沉淀dna；(6)用400μl 75%的乙醇洗2次， 7000r/min离心3min弃上清液；(7)然后再用400μl 无水乙醇洗，7000r/min离心3min弃上清液，然后置于空气中干燥；(8)沉淀干燥后溶于加有100μl 的te溶解，待溶解后放入冰箱保存备用。
1.2.2改良catb法[3-4] (有改动)(1) 取3份新鲜珠子参每份0.5g分别放入3个研磨中加入少许石英砂和pvp，加入1.2ml的buffer去多糖和24μlβ-巯基乙醇充分研磨成粉末，迅速将研磨好的珠子参粉末装入1.5ml离心管中；(2)10000r/min离心10min 弃上清液；(3)向3个1.5ml离心管中加入600μl 65℃预热的ctab提取缓冲液同时加入24μlβ-巯基乙醇，用毛细玻璃管搅拌充分；(4)迅速将1.5ml离心管置于65℃水浴中保温60min，每隔15min温和颠倒混匀；(5)待冷至室温后，取出1.5ml离心管，每管加入240μlkac，放入冰箱-20℃60min；然后10000r/min离心10min (6)小心将上清液相转移至一干净的1.5ml离心管中，同时加入等体积的氯仿/异戊醇(24：1)溶液，放入垂直振荡器中充分混匀10分钟，然后10000r/min离心10min；(7)取上清液且分别标号b1，b2，b3干净的1.5ml离心管中，然后加入640μl -20冰浴的异丙醇，放入-20℃冰箱冷冻60min；(8)取出后在10000r/min离心10min沉淀dna，弃上清液用75%的乙醇洗2次，7000r/min离心3min弃上清液；然后再用400μl无水乙醇清洗，洗后7000r/min离心3min，弃上清液，沉淀放置空气中干燥过夜；(9)沉淀干燥后溶于加有100μl的te溶解，待溶解后放入冰箱保存备用。
1.2.3sds法[5-6] (有改动)(1) 取3份新鲜珠子参每份0.5g分别放入3个研磨中加入1200μl sds提取缓冲液，并加入240μlβ-巯基乙醇充分研磨成粉末，迅速将研磨好的珠子参粉末装入1.5ml离心管中；(2)65℃水浴保温60min，每15min轻摇一次；(3)待冷却后加入230μl 5mol/l kac,混合后冰浴60min；(5)取出后10000r/min离心10min，将上清液转移至另一1.5ml离心管中，每管加入等体积的氯仿/异戊醇(24：1)溶液，然后放入垂直振荡器中充分混匀10分钟；(4)取出后10000r/min离心10min；(5) 取上清液于分别标号c1，c2，c3干净的1.5ml离心管中，每管加入600μl预冷的异丙醇溶液混匀，放入-20℃冰箱冷冻60min；(6)取出后在10000r/min离心10min沉淀dna；(7)弃上清液用75%的乙醇洗2次，7000r/min离心3min弃上清液；(8)然后再用400μl无水乙醇清洗，洗后7000r/min离心3min，弃上清液，沉淀放置空气中干燥过夜；(9)沉淀干燥后溶于加有100μl的te溶解，待溶解后放入冰箱保存备用。
1.2.4高盐低ph值法[7-8] （有改动）(1) 取3份新鲜珠子参每份0.5g分别放入3个研磨中分别加入1200μl 高盐低ph值提取缓冲液，充分研磨成粉末，迅速将研磨好的珠子参粉末装入1.5ml离心管中；(2)65℃水浴保温60min，每15min轻摇一次； (3)取出后10000r/min离心10min，将上清液转移至另一1.5ml离心管中，每管加入600μl kac溶液，然后混匀，放入-20℃冰箱冷冻60min ；(4)取出后10000r/min离心10min；(5) 取上清液于分别标号d1，d2，d3干净的1.5ml离心管中，每管加入600μl预冷的异丙醇溶液混匀，放入-20℃冰箱冷冻60min；(6)取出后在10000r/min离心10min沉淀dna；(7)弃上清液用75%的乙醇洗2次，7000r/min离心3min弃上清液；(8)然后再用400μl无水乙醇清洗，洗后7000r/min离心3min，弃上清液，沉淀放置空气中干燥过夜；(9)沉淀干燥后溶于加有100μl的te溶解，待溶解后放入冰箱保存备用。
1.3 pcr扩增[9] （有改动）将4种提取方法所提取的总dna于nyc technik inc生产的atc201 pcr扩增仪用ssr分析[10]进行扩增。
反应体积25μl，引物：5’-tagtagcgacgatcaccacg-3’。
pcr扩增反应体系如下（1μl tap酶,1μl dntp(10mm),5μl 10xbuffer(mg2+ 20mm),1μl primerf, 1μl primerr, 1μl dna模板（约50ng）,15μl h2o）。
pcr扩增体系如下（94℃5min,(94℃45s,53℃1min,72℃1min30s进行36次循环)，72℃7min, 4℃保存）。
1.4琼脂糖凝胶电泳用3%的琼脂糖凝胶对4种提取总dna进行电泳。
然后用凝胶成像仪拍照。
1.5聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染[11-12]（有改动）先用6%的聚丙烯酰胺凝胶与促凝剂temed和aps混合制作胶版，然后用pcr扩增出来的样品与溴酚蓝混合后进行点样，250v电泳150min。