不同组织的蛋白提取方法99

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提取膜蛋白的方法

提取膜蛋白的方法提取膜蛋白是一项关键的实验步骤，用于研究膜蛋白的结构和功能。

本文将介绍几种常用的膜蛋白提取方法。

1. 浸泡法浸泡法是一种简单的膜蛋白提取方法。

将细胞或组织样品置于适当的缓冲液中，如磷酸盐缓冲液或生理盐水中，并加入一些溶解剂（如阴离子洗涤剂）以破坏膜结构。

浸泡一段时间后，离心以分离出溶液中的膜蛋白。

2. 磷脂双层溶液法磷脂双层溶液法利用磷脂双层膜的特性来提取膜蛋白。

首先，将细胞或组织样品放入含有磷脂双层的液体中。

磷脂双层膜与细胞膜相似，可吸附并保持膜蛋白的结构和功能。

然后，用洗涤液洗涤磷脂双层，使膜蛋白释放到洗涤液中。

3. 超声法超声法是一种物理方法，通过超声波的能量来提取膜蛋白。

将细胞或组织样品置于含有缓冲液的管中，并使用超声波处理。

超声波的能量可以破坏细胞膜结构，使膜蛋白溶解到缓冲液中。

然后，对溶液进行离心，将膜蛋白分离出来。

4. 酸碱提取法酸碱提取法利用pH的变化来提取膜蛋白。

首先，将细胞或组织样品放入酸性或碱性溶液中，并搅拌。

酸性或碱性环境可以破坏细胞膜结构，使膜蛋白溶解到溶液中。

然后，通过调整pH值，使膜蛋白沉淀，进一步提纯。

5. 亲水基质法亲水基质法是一种通过亲水基质与疏水膜蛋白的选择性结合来提取膜蛋白的方法。

细胞或组织样品与亲水基质接触，亲水基质与细胞膜的亲水区域结合，使膜蛋白释放到溶液中。

然后，通过离心和洗涤步骤来分离和纯化膜蛋白。

这些方法在膜蛋白的研究中应用广泛，但根据具体的实验目的和样品特性，可以选择适合的方法进行膜蛋白提取。

实验中还应注意选择合适的缓冲液、溶液浓度和温度，并结合离心、洗涤等步骤进行蛋白的纯化和分离。

此外，需要根据实验目的选择合适的检测方法，如SDS-PAGE、Western blot等来确定提取的膜蛋白的质量和纯度。

总之，膜蛋白提取是膜生物学研究的重要一环，不同方法适用于不同的样品和实验要求。

正确选择和操作提取方法可以高效地提取膜蛋白，并为后续研究提供可靠的样品。

动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤

动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤步骤一：收集和处理样品首先，需要收集要研究的动物细胞或组织样品。

样品可以是从细胞培养物中收集的细胞，也可以是从动物体内收集的组织。

在收集样品之前，可以用生理盐水冲洗样品，以去除与研究无关的物质。

步骤二：细胞破碎和组织研磨接下来，需要将细胞破碎或组织研磨，以释放细胞内或组织内的蛋白质。

对于细胞破碎，可以使用一些方法，如机械破碎、超声波破碎或冻融破碎等。

对于组织研磨，可以使用搅拌器或研磨器等工具进行研磨。

步骤三：离心步骤四：蛋白质提取将经过离心的上清液取出，即为蛋白质提取物。

蛋白质提取液可以选择不同的组成，以适应研究的目的。

一般来说，一个典型的蛋白质提取液可能包含以下成分：蛋白酶抑制剂（如PMSF）、还原剂（如DTT或β-巯基乙醇）、溶解剂（如甲醇或异丙醇）、洗涤剂（如Triton X-100或Tween-20）以及缓冲液（如磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液）等。

这些成分对于蛋白质的稳定性、可溶性和抽提效果起着重要作用。

步骤五：蛋白质浓缩为了浓缩蛋白质，可以使用一些方法，如醋酸沉淀、有机溶剂沉淀或钙盐沉淀等。

这些方法可以使蛋白质从提取液中沉淀下来，以减少液体体积并提高蛋白质浓度。

步骤六：蛋白质分析最后，可以对蛋白质抽提物进行分析。

常用的蛋白质分析方法包括SDS-凝胶电泳、Western blotting、质谱分析等。

这些方法可以用于分析蛋白质的分子质量、浓度、结构和功能等。

总结起来，动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤包括：收集和处理样品、细胞破碎和组织研磨、离心、蛋白质提取、蛋白质浓缩和蛋白质分析。

这些步骤的选择和优化将根据具体的实验目的和要求进行调整。

蛋白提取方法

蛋白提取方法蛋白是构成生物细胞的基本组成部分，它们在细胞中承担着重要的生物功能，如调节细胞活动，参与代谢反应和分子交互等。

蛋白质的提取是生物学上研究蛋白质本身及其生物学功能的基础，也是生物医学研究的基础和进行商业应用的前提条件。

因此，正确有效的蛋白提取方法的选择至关重要。

一、蛋白提取动机蛋白的提取有多种动机，例如研究形式结构、鉴定活性、分离活性组分等。

蛋白提取既可以用于基本生物学研究，也可用于临床诊断，在从分子水平解释疾病发病机理和从抗病毒新药研发方面发挥重要作用。

二、蛋白提取方法1.超声提取法超声蛋白质提取是一种与传统的蛋白提取技术相比较更快捷的新型技术。

它的原理是，利用特定频率的高声波熔融细胞壁，蛋白质就能被融合在液体中。

优点是：此法可提取高纯度蛋白质，操作简便，可以大量提取，而且可以提取活性蛋白，不会因长时间性热处理而失去活性。

2.离子交换技术离子交换法是一种常用的蛋白提取技术，它是利用离子交换树脂对蛋白质进行离子交换染色，以分离蛋白。

它的优点是：操作简便，提取蛋白的效率高；不会受温度和pH的影响；根据离子强度的大小可以提取活性蛋白；选择交换材料可以提取不同的蛋白。

3.沉淀法沉淀法是非离子性的一种技术，它的原理是利用特定的物质把蛋白质从溶液中沉淀出来。

它的优点是：可以提取活性蛋白，能够提取任何种类的蛋白；可以提取特定蛋白，从而降低沉淀蛋白和其它物质的比例；操作简便，可以快速大量提取蛋白。

4.膜技术膜技术是一种常用的研究蛋白功能和结构的技术，它是利用特定分子组织膜与蛋白结合来提取蛋白。

它的优点是：提取的蛋白质纯度高，可以提取活性的特异性蛋白；还可以同时提取一系列蛋白质；可以提取表达量低的特异性蛋白。

5.硬酸柔酯法硬酸柔酯蛋白提取是一种提取蛋白质活性和纯度高的技术。

它的原理是利用硬酸柔酯将蛋白和其他溶解物分离开来。

其优点是：可以提取不同类型的蛋白；可以提取超低量的蛋白；可以提取活性蛋白，不会因热处理而失去活性；可以提取高纯度的蛋白，操作简便。

动物固体组织蛋白提取-Protocol

动物固体组织蛋白提取1、前夜将磁珠及匀浆管洗净置入75%乙醇中浸泡。

早晨取出磁珠和匀浆管，自然晾干；也可放入烤箱中，速度较快。

2、裂解液配制：：100：1，现配现用。

（100010）。

置入4℃冰上。

3、抽蛋白（应冰上进行）：a、适量组织（最好放入液氮中反复研磨成粉状）加入裂解液中。

一般10管体系中加入：7-8粒磁珠、100组织、110、1 。

b、匀浆。

手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。

机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。

超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。

反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右），但有部分酶活力会受影响。

c、将组织匀浆转入1.5的管中（管、离心管）。

12000 4°C 离心15。

d、离心后管中液体分三层，提取中间无色液相，移入新的管中。

可-80℃保存。

4、蛋白浓度测定。

a、配工作液：溶液A：溶液50：1（200：4）。

*200；2*（1+1）*4。

需测试复孔。

标本X，则需Ac、复孔，取蛋白6加入0.6管，再加入542O，混匀。

即10倍稀释。

d、取20-25 10倍稀释蛋白样本加入96孔板平底板内，再加入200工作液，混匀振荡后，37℃30。

注：应现加蛋白样本，再加工作液。

玉米不同组织提取总蛋白浓度测定2种方法的比较

ｌｅａｖｅｓａｔｓｅｅｄｌｉｎｇｓｔａｇｅ，ｆｌａｇｌｅａｖｅｓａｔｔａｓｓｅｌｉｎｇｓｔａｇｅ，ａｎｄ１０一ｄａｙ，２０一ｄａｙ，３０一ｄａｙａｎｄ４０一ｄａｙｇｒａｉｎｓａｆｔｅｒｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎｗｅｅｒｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍ８
ｎｅａｒ — ｉｓｏｇｅｎｉｅｌｉｎｅｓｏｆｈｉｇｈｌｙｓｉｎｅｍａｉｚｅ，ｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅＰｌａｎｔＴｏｔａｌＰｒｏｔｅｉｎＥｘｔｒａｔｉｏｏｎＫｉｔ．Ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｈｏｔｓｅｔｏｔａｌｐｏｔｒｅｉｎｓｗａｇｄｅｔｅｒ－
西
４ Hale Waihona Puke ６南农业
学
报
２０１４年２７卷１期
Ｖ０Ｌ２７Ｎｏ．１
ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
文章编号：１００１— ４８２９（２０１４）０１ — ０４５６— ０３
玉米不同组织提取总蛋白浓度测定２种方法的比较
杨文鹏，王伟，王明春，王秀影
（１．贵州省旱粮研究所，贵州贵阳５５０００６；２．贵州省农业生物技术重点实验室，贵州贵阳５５０００６）

组织提取蛋白步骤

组织提取蛋白步骤
嘿，朋友们！今天咱就来唠唠组织提取蛋白那些事儿。

你想想看，蛋白就像是身体里的小宝贝，咱们得小心翼翼地把它们给弄出来。

首先呢，得把组织准备好呀，这就好比要做饭得先有食材不是？把组织弄得干干净净的，可不能有啥杂质混进去。

然后呢，就该给组织来点儿“魔法药水”啦，让它舒舒服服地躺在那里，把蛋白慢慢地释放出来。

这时候就像是在哄小宝贝开心，得有耐心，不能着急。

接下来呀，得把这些混合的东西好好地搅和搅和，让蛋白充分地和其他东西分开。

这就像洗衣服一样，得把脏东西都洗掉，留下干净的蛋白。

再之后呢，把搅和好的东西通过一些特殊的办法，比如离心啥的，把蛋白给分离出来。

就好像从一堆沙子里把金子给挑出来一样，得细心，不能把蛋白给弄丢了。

哎呀，这提取蛋白的过程可不简单呐！就像一场小小的冒险，每一步都得走好。

要是哪一步不小心出了差错，那蛋白可能就不乖乖出来啦。

你说，这是不是挺有意思的？咱得像爱护宝贝一样对待这些蛋白，让它们能好好地为咱的实验或者研究服务呀。

在这个过程中，可不能粗心大意哦！要是不小心把蛋白给弄坏了，
那不就白忙活啦？所以呀，每一个步骤都得认真对待，就像对待一件
特别重要的事情一样。

而且哦，不同的组织提取蛋白的方法可能还不太一样呢！这就好比
不同的菜有不同的做法，得根据实际情况来调整。

总之呢，组织提取蛋白可不是一件随随便便就能做好的事情。

得有
耐心、细心，还得有那么一点儿小技巧。

大家可得好好记住这些步骤，说不定啥时候就能派上大用场呢！你说是不是呀？哈哈！。

蛋白提取方法

蛋白质提取的方法总汇 2005-4-15 23:00:00 来源：生命经1、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。

2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。

3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！2、植物组织蛋白质提取方法三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。

3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。

4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。

药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。

这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！3、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心： 7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇 2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。

骨组织蛋白提取方法(一)

骨组织蛋白提取方法(一)骨组织蛋白提取骨组织蛋白是一种对于骨骼生长及修复都非常重要的蛋白质。

因此，提取骨组织蛋白对于医学研究及实践都非常重要。

本文将详细介绍几种常见的骨组织蛋白提取方法。

钙盐溶解法钙盐溶解法是最常用的骨组织蛋白提取方法之一。

主要原理是以EDTA或酸溶解骨骼中的无机物，释放出骨基质中的有机物质，包括蛋白质，以达到提取目的。

优点：简便易行，不需要干燥过程；无需昂贵的设备。

缺点：不能完全分离纯净的成分；酸和EDTA的使用可能对骨基质蛋白的活性和稳定性产生影响。

碱性清洗法碱性清洗法是通过在碱性条件下清洗骨组织，去除无机物质，使有机物质（蛋白质）裸露出来，从而实现骨组织蛋白的提取。

优点：纯净度相对比较高。

缺点：提取时间较长，可能对蛋白质质量产生影响。

超声波法是通过超声波对骨组织进行蛋白提取。

超声波的震荡作用会使得细胞结构变得不稳定，而从而加快细胞组分离。

优点：提取效率相对较高。

缺点：适用性较窄，需要较昂贵的超声设备。

总结骨组织蛋白提取方法虽然各异，但都可以达到相同的目的：将骨基质中的有机物质提取出来。

每种方法都有其优势和不足，因此在不同场合下需要选择不同的提取方法。

接下来，我们将对每种骨组织蛋白提取方法进行更详细的说明。

钙盐溶解法钙盐溶解法是一种常见的骨组织蛋白提取方法，主要用于提取胶原蛋白和骨形成蛋白。

步骤1.将新鲜的骨组织除去软骨、骨髓和周围结缔组织，洗净。

2.用酸或EDTA将骨组织中的钙盐溶解。

3.以不同的方式，如离心过滤、电泳或柱层析等，分离出所需的蛋白物质。

1.采用钙盐溶解法提取骨组织蛋白应使用先进的离子交换柱分离技术，以避免由于低温或定向结晶导致蛋白结构受损。

2.钙盐溶解法在提取蛋白的过程中常需要酸洗，因此操作时需要注意安全。

碱性清洗法碱性清洗法主要用于提取胶原蛋白，常用的碱性溶液有NaOH和Na₂CO₃。

步骤1.将新鲜的骨组织除去软骨、骨髓和周围结缔组织，洗净。

2.用较高浓度的碱性溶液（如NaOH）在低温下清洗骨组织。

软骨蛋白提取步骤

软骨蛋白提取步骤软骨蛋白提取是一种常见的实验方法，用于从软骨组织中提取出蛋白质。

软骨蛋白质是一种重要的生物大分子，具有多种生物学功能。

下面将介绍软骨蛋白提取的步骤。

1. 软骨样本收集需要收集软骨样本作为提取的原料。

软骨可以来自不同的动物，如牛、猪等。

在收集样本时，要保持样本的新鲜度，避免受到外界的污染。

可以将软骨样本切成小块，以便后续的处理。

2. 组织破碎和均质将软骨样本放入离心管中，加入足够的缓冲液。

缓冲液的选择取决于实验的要求，常用的缓冲液有磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液等。

然后使用均质器对样本进行均质处理，以破碎细胞壁和组织结构，释放出蛋白质。

3. 离心和收集上清液将均质后的样本离心，以去除细胞碎片和大颗粒物质。

离心过程中，较重的细胞碎片和颗粒物质会沉淀到离心管的底部，上清液则会浮在上方。

将上清液小心地转移到干净的离心管中，以便后续的处理。

4. 进一步纯化为了更纯化目标蛋白质，可以使用一些特定的技术进行进一步的纯化。

常用的纯化方法包括离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析等。

这些方法可以根据蛋白质的特性选择合适的纯化步骤，以去除其他杂质和非目标蛋白质。

5. 浓缩和储存在纯化后，需要对目标蛋白质进行浓缩处理。

常用的浓缩方法有醋酸铵沉淀、有机溶剂沉淀等。

这些方法可以将蛋白质溶液中的水分去除，使蛋白质浓度增加。

浓缩后的蛋白质溶液可以储存在低温条件下，以防止蛋白质的降解和变性。

软骨蛋白提取是一项复杂的实验过程，需要严格控制各个步骤的条件和操作。

每个步骤的选择和处理都会对提取得到的蛋白质产生影响。

因此，在进行软骨蛋白提取时，需要根据实验的目的和要求进行合理的步骤选择和优化。

同时，还需要注意实验中的卫生和安全问题，避免对人体和环境造成危害。

软骨蛋白提取是一项重要的实验技术，可以用于研究和应用领域。

通过合理的步骤选择和操作，可以获得高纯度的软骨蛋白质，为后续的实验和研究提供有力支持。

同时，在进行软骨蛋白提取时，还需要注意实验的可重复性和稳定性，以确保实验结果的准确性和可靠性。

蛋白质有哪些提取方法

蛋白质有哪些提取方法蛋白质提取方法有很多种，根据提取目的和样品特点的不同，可以选择适合的方法。

下面将介绍一些常用的蛋白质提取方法。

1. 机械破碎法：机械破碎法是最简单、最常用的蛋白质提取方法之一。

可以通过研磨、绞碎等方法将样品直接破碎，然后使用缓冲液溶解并离心，收集上清液中的蛋白质。

这种方法适用于坚硬组织的提取，如植物种子、皮肤等。

2. 超声波法：超声波法是一种通过高频震荡来破碎细胞膜的方法。

将样品与缓冲液混合后，利用超声波仪器进行处理，使细胞破裂释放出蛋白质。

这种方法操作简便、高效，适用于细胞培养物和柔软组织的提取。

3. 高压法：高压法是利用高压力破坏细胞膜，使蛋白质从细胞内部释放出来。

将样品与缓冲液混合后，置于高压容器中，施加高压力进行破碎。

这种方法适用于细胞培养物和柔软组织的提取，可以得到较高纯度的蛋白质。

4. 化学法：化学法是通过使用化学试剂使细胞破裂，溶解蛋白质。

常用的化学试剂包括乙醇、酸、酶等。

根据试剂的选择和浓度的不同，可以得到不同纯度和类型的蛋白质。

这种方法操作简单，适用于多种样品的提取。

5. 溶剂提取法：溶剂提取法是一种将样品与有机溶剂混合后，通过振荡、搅拌等方法使目标蛋白质溶于溶剂中，然后用离心将蛋白质从溶液中分离出来的方法。

常用的有机溶剂包括甲醇、醋酸乙酯等。

这种方法适用于脂质较多的样品，如种子、脂肪组织等。

6. 离心法：离心法是将样品与缓冲液混合后进行离心，利用离心过程中的离心力使细胞破裂，然后收集上清液中的蛋白质。

这种方法操作简单，适用于多种样品的提取，尤其适用于含有较多细胞碎片的样品。

7. 电泳法：电泳法是一种利用电场将蛋白质在凝胶中分离的方法。

通过混合样品与凝胶，然后施加电场，不同大小和带电性的蛋白质会在凝胶中运动，从而实现分离。

这种方法适用于复杂样品的蛋白质组分分析和纯化。

总结起来，蛋白质的提取方法多种多样，根据样品特点的不同选择合适的方法非常重要。

以上介绍的方法只是其中的一部分，还有许多其他方法，如柱层析法、磁珠法等。

膜蛋白的提取方法

膜蛋白的提取方法
膜蛋白的提取方法通常包括以下几个步骤：
1. 细胞裂解：将包含膜蛋白的细胞或组织用不同的方式进行裂解，例如超声波处理、酸碱处理、高压处理等。

2. 膜蛋白分离：通过离心、过滤等方法将膜蛋白分离出来。

3. 纯化：采用膜层联萃取、柱层析、电泳等方法对膜蛋白进行纯化。

4. 确认：通过蛋白质定量、SDS-PAGE、Western blot等方法验证膜蛋白的存在和纯度。

常见的膜蛋白提取方法有：
1. 酸性洗涤法：利用低pH值时，膜蛋白和膜脂亲性增强的特性，将细胞裂解物在酸性条件下洗涤获得膜蛋白。

2. 有机溶剂提取法：利用膜蛋白亲性较强的有机溶剂，如丙酮、甲醇等，将膜蛋白从细胞裂解物中提取出来。

3. 离心法：通过离心分离膜细胞，从而获得膜蛋白。

4. 免疫亲和层析法：利用特异性抗体将目标膜蛋白从混合蛋白中分离纯化。

以上方法的选择需根据具体情况来定，不同的细胞类型或膜蛋白性质有着不同的最佳提取方法。

植物不同组织可溶性蛋白提取和多肽组分差异研究

植物不同组织可溶性蛋白提取和多肽组分差异研究方案可行。

最好用第二个。

实验目的:1、掌握冷冻离心机的操作使用方法。

2、掌握植物可溶性蛋白的提取方法和原理。

3、掌握分光光度计的使用方法和原理。

4、掌握可溶性蛋白的定量测定方法和原理。

5、掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理和基本操作过程。

实验包括三个部分内容：一、植物不同组织可溶性蛋白的提取。

二、植物可溶性蛋白含量的测定。

三、聚丙烯凝胶电泳分离可溶性蛋白。

原理:植物不同组织可溶性蛋白的提取植物材料中通常含有两类蛋白，一种是易溶于水主要存在于细胞基质、叶绿体基质和线粒体等细胞器基质中的可溶性蛋白，另一类是难溶于水主要存在于各种细胞器膜上的膜结合蛋白。

将植物材料在一定的提取缓冲液和0～4℃低温下充分研磨，可溶性蛋白将溶解在提取缓冲液里，通过离心将未破碎细胞器和膜蛋白去除，得到的离心上清夜就是可溶性蛋白的粗提物。

离心机基本原理⒈离心力（centrifugal force，Fc）离心作用是根据在一定角度速度下作圆周运动的任何物体都受到一个向外的离心力进行的。

离心力（Fc）的大小等于离心加速度ω2X与颗粒质量m的乘积，即：FC＝mω2X其中ω是旋转角速度，以弧度/秒为单位；X是颗粒离开旋转中心的距离，以cm为单位；m是质量，以克为单位。

⒉相对离心力（relative centrifugal force，RCF）由于各种离心机转子的半径或者离心管至旋转轴中心的距离不同，离心力而受变化，因此在文献中常用“相对离心力”或“数字×g”表示离心力，只要RCF值不变，一个样品可以在不同的离心机上获得相同的结果。

RCF 就是实际离心场转化为重力加速度的倍数RCF＝F离心力/F重力＝m ω2X/mg=1.118×10－5 . N . XN（rpm）=RCF×105 /（1.118×X）式中X为离心转子的半径距离，以cm为单位；g为地球重力加速度（980cm/sec2）；N为转子每分钟的转数（rpm）。

组织蛋白提取方法

组织蛋白提取方法
组织蛋白提取方法是研究生物学的一个重要分支。

组织蛋白提取技术
是一种重要的生物分离和纯化方法，它可以分离和纯化细胞内蛋白质，为生物学研究提供了重要工具。

随着科技的日益发展和生物学研究的
深入，组织蛋白提取技术的应用越来越广泛。

组织蛋白提取方法的选择取决于样品类型和蛋白的特性。

一般来说，
组织蛋白提取方法可分为机械法、化学提取法、复合提取法等。

机械法是最常用的蛋白质提取方法之一。

此法通过机械力量破碎组织
细胞结构，使蛋白质溶解于缓冲液中。

机械法的步骤包括组织研磨、
超声波振荡、高压融解等。

其中，超声波振荡法是目前最常使用的机
械法。

其优点是操作简单，易于掌握，但其缺点是易产生氧化和热量，可能造成蛋白质的失活。

化学提取法主要是利用化学方法分离蛋白质。

这种方法一般用化学溶
液（如三氯乙酸，甲醛等）沉淀蛋白质。

化学提取法的优点是高效，
稳定，且能够提取大量的蛋白质，但其缺点是蛋白质结构容易变性，
可能影响蛋白质的活性和稳定性。

复合提取法是机械法和化学法的结合。

这种方法一般将样品经过机械
法振荡或切碎，然后再用化学溶液进行沉淀和纯化。

该方法的优点是在保持蛋白质完整性和活性的前提下提取了一定量的蛋白质。

总之，对于不同种类的样品和不同的研究目的，选择不同的组织蛋白提取方法是十分重要的。

近年来，组织蛋白提取技术得到了广泛的应用，不仅可以在生物学领域中应用，还可以在医学、食品、环境等多个领域中应用，大大推进了相关学科的研究进展。

提取蛋白的常规方法

1、原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。

但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，- 105 - 蛋白质提取与制备Protein Extraction and Preparation因而对提取要求更复杂一些。

原料的选择主要依据实验目的定。

从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。

尽量要新鲜原料。

但有时这几方面不同时具备。

含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。

一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。

要事前调查制备的难易情况。

若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。

如利用胰蛋白酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。

但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。

研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。

可能时尽量用全年均可采到的原料。

对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。

2、前处理a、细胞的破碎材料选定通常要进行处理。

要剔除结缔组织及脂肪组织。

如不能立即进行实验，则应冷冻保存。

除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。

不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。

如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。

⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。

常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间隔只有十分之几毫米，对细胞破碎程度较高速捣碎机高，机械切力对分子破坏较小。

细胞组织裂解（提蛋白）方法

细胞组织裂解（提蛋⽩）⽅法第⼀种⽅法蛋⽩匀浆缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH7.5) 150 mM NaCl5 mM EDTA1 % NP-40 1 mM PMSF操作步骤直接⽤这个进⾏组织匀浆然后于10000 rpm 离⼼20分钟收集上清作SDS－PAGE电泳从染⾊的情况来看所得到的总蛋⽩纯度都不错条带⽐较清晰。

我是作的⼩⿏⼋种常规组织也包括肾脏在内。

将抽提好的蛋⽩分装后直接放在负⼋⼗保存。

上样⼤概3~8ul每孔都可以的具体看个⼈需要。

70v浓缩，150v分离第⼆种⽅法裂解液配⽅：尿素：8M CHAPS:4% DTT:65mM(现加）PMSF:1mM(现加）MiliQ ⽔操作步骤：取300mg样品在液氮环境下研磨，加⼊1ml裂解液混匀，室温静置1⼩时（实验证明改为匀浆更好，蛋⽩降解轻），15000g离⼼1⼩时，取上清测定蛋⽩质浓度。

在裂解液中加IPG buffer有两个作⽤:1,增强蛋⽩质的溶解性2,可以结合核酸,在沉淀的时候予以除去。

建议最好加，浓度从0.5-2%不等（这取决于您样品蛋⽩质的难溶程度）。

IPG buffer 是载体两性电解质，IPG buffer另外⼀个作⽤是促进蛋⽩质溶解的,所以IEF前⼀定要加，裂解液中没有IPG buffer可以么？（可以的，最后上胶条的时候可以再加）不过，我觉得液氮研磨以后，最好是粗离⼼⼀下，把⼀些结缔组织给离⼼掉（150g既可）然后再加裂解液。

裂解液加1ML应该没什么问题，主要取决你以后蛋⽩的浓度。

⽤这个⽅法最好经丙酮沉淀⼀次⽐较好）第三种⽅法建议最好加完裂解液后再⽤超声波破碎，我做肝脏蛋⽩提取时⼀般采取400W⼯作10秒，间歇10秒，次数15次，⼀次结束后⼤约30分钟再重复上述步骤⼀次（因为不同的样品⽤⼀根超声柱⼦，可能会导致污染，所以⼀定要⽤双蒸⽔冲洗⼲净，再⽤70%⼄醇洗⼀下，再⽤⽔洗⼀次），另外样品超声时要置于冰浴中，以免产热做过的是⽤10ml蛋⽩裂解液来匀浆3克的组织，最终⽤考马斯亮兰染⾊法测得的蛋⽩浓度⼤概为30~50 ug/ul测595 OD值时，设定⼀个只⽤⽔的空⽩，把所有测得的值都减去这个空⽩。

提取和纯化动物组织中的胶原蛋白

提取和纯化动物组织中的胶原蛋白胶原蛋白是一种重要的结构蛋白，广泛存在于动物的各种组织中，如皮肤、骨骼、关节、肌肉等。

胶原蛋白具有良好的生物相容性和生物活性，因此在医药、化妆品、食品等领域有着广泛的应用。

提取和纯化动物组织中的胶原蛋白是一项重要的工作，本文将介绍其中常用的方法和步骤。

一、动物组织的准备提取胶原蛋白首先需要获得动物组织样本。

一般常用的动物组织包括动物皮肤、骨骼、肌肉等。

在收获组织样本时应注意无菌操作，以避免细菌污染。

收获的组织样本应立即放入冷藏保存，以防止胶原蛋白的降解。

二、组织的颗粒化颗粒化是提取胶原蛋白的第一步。

将收获的组织样本洗净，并切割成小块，然后用酶解液浸泡，使胶原纤维释放出来。

酶解液的选择根据具体需要而定，一般常用的酶解液有胰蛋白酶、胰凝乳酶等。

酶解条件需要控制好，一般在35-45°C下、pH为7-8的条件下酶解6-12小时。

三、胶原蛋白的沉淀经过酶解后，胶原蛋白溶液中含有很多杂质，需要通过沉淀来分离胶原蛋白。

可以通过离心的方式使胶原蛋白沉淀到底部，然后将上清液倒掉。

重复这个步骤几次，以保证获得纯净的胶原蛋白。

四、胶原蛋白的纯化沉淀得到的胶原蛋白还含有一些其他蛋白和杂质，需要进行纯化。

常用的纯化方法有酸溶解法、盐析法和凝胶过滤法。

酸溶解法是常用的纯化方法之一，通过调节pH值和离心来沉淀杂质，得到纯净的胶原蛋白。

盐析法是通过改变溶液中的盐浓度来使胶原蛋白沉淀。

凝胶过滤法则是通过将胶原蛋白溶液经过层析柱，根据分子大小将胶原蛋白与杂质进行分离。

五、胶原蛋白的浓缩和冻干经过纯化后得到的胶原蛋白溶液可能较为稀释，需要进行浓缩。

可通过旋转蒸发器等设备将胶原蛋白溶液中的水分去除，使其浓缩。

最后，对浓缩后的胶原蛋白进行冻干处理，以便储存和使用。

综上所述，提取和纯化动物组织中的胶原蛋白是一个复杂的过程，需要经过样本准备、组织颗粒化、胶原蛋白沉淀、胶原蛋白纯化、胶原蛋白浓缩和冻干等多个步骤。

蛋白的提取方法

蛋白的提取方法
蛋白质的提取方法根据不同的样品类型和应用需求而有所差异。

以下是几种常见的蛋白质提取方法：
1. 细胞裂解法：
- 使用裂解缓冲液（如RIPA缓冲液）将细胞破裂，释放蛋白质。

- 添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，以防止蛋白质降解。

- 在低温和高速离心的条件下，去除细胞碎片和细胞核等杂质。

2. 组织研磨法：
- 使用液氮或组织研磨器将组织研磨成细碎的粉末。

- 使用裂解缓冲液将组织样品裂解。

- 离心去除细胞碎片等杂质。

3. 离体器官提取法：
- 使用适当的缓冲液冲洗和清洗离体器官，去除表面的污物和杂质。

- 使用裂解缓冲液将离体器官切割或粉碎成细小的样品。

- 离心去除细胞碎片等杂质。

4. 血浆/血清提取法：
- 收集新鲜血液，并使用抗凝剂进行处理，如EDTA或肝素。

- 采用离心法将血液离心，分离血浆/血清。

- 血浆/血清中的蛋白质可通过沉淀、凝胶过滤或其他方法进一步提取和纯化。

5. 特定蛋白提取法：
- 根据需要，可以使用特定的提取方法来富集特定蛋白质。

如免疫沉淀、亲和层析、电泳分离等。

在蛋白质提取过程中，常常需要注意样品的保存温度、缓冲液的配制、抑制剂的添加等细节，以确保蛋白质的稳定和完整性。

同时，不同应用领域可能需要不同的提取方法和蛋白质纯化步骤，因此建议根据具体实验目的和样品类型进行选择和优化。

如果有需要，可以咨询专业的生物化学或分子生物学实验室以获得更准确和具体的方法和建议。

组织蛋白提取

鼠脑组织总蛋白提取一：蛋白提取1.脑组织称重，按照1：8（1g脑组织加8ml）的比例计算蛋白酶抑制剂的量(Aprotinin 、Pepstatin、NaF、Na3VO4、Leupeptin ，PMSF不稳定最后取出来加，都是1:100的稀释)和TNE的量，先在每个EP管中加入计算好的TNE再加蛋白酶抑制剂，每个ＥＰ管中加入３颗珠子，用匀浆器匀浆或用研磨棒研磨。

（蛋白酶抑制剂五种从-20拿到4度冰箱中溶解.各取100微升加入10毫升的TNE中（13层析柜中），TNE缓冲液（1.21g Tris,5.84g NaCl,0.37g EDTA/升），2.匀浆完毕后用枪头将混合好的溶液吸入EP管，一般大块组织加600微，小块加300微，4°离心14000转/min，20min。

3.取上清移入新EP管(最好离两次) ，溴酚蓝·甘油·SDS·巯基乙醇等组成samplebuffer（4X），Sample Buffer与蛋白比为3:1，在97度煮5分钟。

防止盖子开，最好用东西盖住。

始终在冰盒中操作，最后蛋白放入-80。

二：测蛋白浓度计算所需BCA的量，按MA:MB:MC=25：24：1的比例配好，每个孔总量为300ul,BSA:A-I各加150ul,Mix加150ul因BSA是溶解在NaCl，故加样时蛋白溶液和0.9%NaCl共加150ul(蛋白3ul,NaCl 147ul)注意加样时要加复孔。

酶标仪震荡5s37°孵育2小时Western Blot的有效检测下限为0.1-1ng蛋白提取可以分为三个步骤：第一步获取材料。

第二步分离目的细胞或组织成份并破碎。

细胞破碎的方法分为机械法和非机械法，机械法可以是振动、搅拌、研磨、压滤、超声、匀浆，非机械法可以是干燥、改变渗透压、冻融、酶解（纤维素酶、溶菌菌、蜗牛酶）等，不同来源的材料对于不同的处理方法耐受程度是不一样的，例如超声波可以很容易破碎动物细胞，但是破碎酵母细胞就困难许多。

不同组织的蛋白提取方法

不同组织的蛋白提取方法一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。

2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。

3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！或者用三氯醋酸—丙酮沉淀法，这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm 以上1小时）弃上清。

3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm 以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。

药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。

二、组织：肠黏膜应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。