放射免疫分析ria
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体外放射分析
山西医科医科大学第一医院核医学科
基 本 定 义
定义：全称体外放射配体结合分 析---指在体外条件下，以放射性核素
标记的配体为示踪剂，以结合反应为基 础，以放射性测量为定量手段，对微量 活性物质进行定量分析的一类检测技术 的总称。
配体---能与结构上某一部位起互补结
合的分子或化合物，如抗体、抗原，受 体、蛋白激素
概
述
2.类型：（据特异性结合试剂的不同分类）
放射免疫分析（RIA） 1959 竞争性蛋白结合分析（CPBA） 1963 免疫放射分析（IRMA） 1968 放射受体分析（RRA ） 70年代 放射酶学分析 70年代 放射微生物分析
概
述
酶免疫分析（EIA）
其他非放射性标记免疫分析：
三．免疫放射分析（IRMA） 四. 非放射性标记免疫分析技术
酶免疫分析（EIA） 化学发光免疫分析（CLIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）
概
述
1.历史回顾
1959年Berson、Yalow开创了放射免疫分析。 于1977年荣获诺贝尔生物医学奖。
1960年Ekins建立了竞争蛋白结合分析法。 1968年Miles和Hales建立了免疫放射分析。 近年来化学发光、电子化学发光、荧光时间 分辨等非放射性标记免疫分析自动化技术先 后问世，检测灵敏度提高到了10–15g。
1.
2. 3.
样品或标准品 标记物 分离剂 抗血清
混匀 温浴
混匀 立即
1. 加样
2. 加分离剂
ຫໍສະໝຸດ Baidu
3. 离心
4. 去上清分离 5. 测量
RIA分离技术
目的：将游离*Ag 和*AgAb有效分离。 小分子
活性炭吸附法
大分子
沉淀法
Ab
固相法
聚乙二醇
化学发光免疫分析（CLIA）
荧光免疫分析（FIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA） 颗粒计数免疫分析（PACIA） ……
主 要 内 容
一 . 二 .
概述 放射免疫分析（RIA）
基本试剂 操作过程 质量控制 基本原理 分离技术
三．免疫放射分析（IRMA） 四. 非放射性标记免疫分析技术
抗原的概念
基 本 定 义
抗原（antigen,Ag)：是一类能刺激机体免
疫系统发生免疫应答，并能与相应免疫应 答产物（抗体和致敏淋巴细胞)在体内外发 生特异性结合的物质。 抗原的两种特性：免疫原性和抗原性 免疫原性（immunogenicity),能刺激机体 发生免疫应答，产生抗体和致敏淋巴细胞 的能力。 抗原性（antigenicity),能与相应抗体或 致敏淋巴细胞发生特异性结合的能力。
待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系
RIA操作过程
配制已知浓度系列标准抗原（Ag）---现
多由厂家提供已配置好的标准品
加待测抗原（Ag）和抗体（Ab）--温育 加标记抗原（*Ag）和抗体（Ab）--温育 分离复合物*AgAb（B）和游离*Ag（F） 用γ计数器测量放射性计数 根据标准曲线或计算机直接算出
酶免疫分析（EIA） 化学发光免疫分析（CLIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）
放射免疫分析（RIA)
（Radioimmunoassay RIA）
RIA主要内容
基本试剂 基本原理 操作过程 分离技术 质量控制
♣ ♣♣ ♣♣ ♣
RIA定义
是利用标记抗原和非标记抗原竞争结合
其特异抗体，给予充分的时间，使反应达
的稀释倍数，滴度越高，所需的抗血清量越 少，血清的稀释倍数越高，抗血清中杂质干 扰也少。一般滴度高到1：1000以上，血清 中干扰物质影响就很小。
RIA基本原理
最具代表性的一类检测技术，是建立在抗原抗 体结合的高度特异性和放射性测量的高度灵敏性的 基础上的。 Ag ＋ Ab AgAb ＋ *Ag *AgAb 动态平衡体系中，*Ag与Ag具有同样的免疫活性和结 合反应能力，当*Ag和Ab的量恒定，且Ag+ *Ag的分 子数〉抗体的分子数 ，*Ag与Ag相互竞争同Ab结合， 彼此抑制，待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系。
Ag
*Ag
Ab
Bound
Free
B
0.67
F
0.33
B/F
2
0.50
0.50
1
0.33
0.67
0.5
0.17
0.83
0.2
竞争放射分析原理示意图
B/F
B/B0% 100
2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 0 5 10 15 20 0 0 5 10 15 50
剂量-标准抗原浓度
剂量-标准抗原浓度
RIA基本试剂
2、标准抗原（标准品）
是已知含量并呈梯度浓度的系列 标准抗原，作标准曲线用。 要求： 保证与被测物具有相同的免疫活 性和相同介质。
RIA基本试剂
3、抗体
RIA使用：多克隆抗体 单克隆抗体
衡量抗体质量的指标是：
亲和力:抗体结合的强度
特异性:不受交叉反应物质影响的程度 滴度:抗体的效价——抗体实际应用时
基 本 定 义
半抗原---分子量小于5000的肽类，
需与载体蛋白结合才能引起免疫应 答. 抗体（Antibody,Ab）是由B细胞识 别抗原后增殖分化为浆细胞所产生 的一类能和相应抗原特异性结合的 具有免疫功能的球蛋白。
主 要 内 容
一 . 二 .
概述 放射免疫分析（RIA）
基本试剂 操作过程 质量控制 基本原理 分离技术
125I的特性：
碘元素共有 29 种同位素，其中 23 种放 射性核素，125I最为常用，优点：
半衰期适中（60天），易于商品化和储存， 也利于废物处理； 只发射28keV χ线和35keV γ射线（无β）， 容易测量，辐射自分解少，标记物足够稳定； 化学性质活泼，标记容易，可得到多种标记 物而广泛应用。
到平衡，然后分离并分别测定结合的抗原 抗体复合物放射性（B）和游离抗原放射性 （F）来计算出非标记抗原含量的一种超微 量分析技术。
♣ ♣♣ ♣♣ ♣
RIA基本试剂
1、标记抗原
125I 3H
多数 γ闪 价廉 少数 液闪 费用高
*Ag的质量要求：
标记后不改变原有抗原的生物活性； 标记的放射性核素的t1/2不能太短； 比活度和放化纯度足够高，保证分析 的灵敏度。
山西医科医科大学第一医院核医学科
基 本 定 义
定义：全称体外放射配体结合分 析---指在体外条件下，以放射性核素
标记的配体为示踪剂，以结合反应为基 础，以放射性测量为定量手段，对微量 活性物质进行定量分析的一类检测技术 的总称。
配体---能与结构上某一部位起互补结
合的分子或化合物，如抗体、抗原，受 体、蛋白激素
概
述
2.类型：（据特异性结合试剂的不同分类）
放射免疫分析（RIA） 1959 竞争性蛋白结合分析（CPBA） 1963 免疫放射分析（IRMA） 1968 放射受体分析（RRA ） 70年代 放射酶学分析 70年代 放射微生物分析
概
述
酶免疫分析（EIA）
其他非放射性标记免疫分析：
三．免疫放射分析（IRMA） 四. 非放射性标记免疫分析技术
酶免疫分析（EIA） 化学发光免疫分析（CLIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）
概
述
1.历史回顾
1959年Berson、Yalow开创了放射免疫分析。 于1977年荣获诺贝尔生物医学奖。
1960年Ekins建立了竞争蛋白结合分析法。 1968年Miles和Hales建立了免疫放射分析。 近年来化学发光、电子化学发光、荧光时间 分辨等非放射性标记免疫分析自动化技术先 后问世，检测灵敏度提高到了10–15g。
1.
2. 3.
样品或标准品 标记物 分离剂 抗血清
混匀 温浴
混匀 立即
1. 加样
2. 加分离剂
ຫໍສະໝຸດ Baidu
3. 离心
4. 去上清分离 5. 测量
RIA分离技术
目的：将游离*Ag 和*AgAb有效分离。 小分子
活性炭吸附法
大分子
沉淀法
Ab
固相法
聚乙二醇
化学发光免疫分析（CLIA）
荧光免疫分析（FIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA） 颗粒计数免疫分析（PACIA） ……
主 要 内 容
一 . 二 .
概述 放射免疫分析（RIA）
基本试剂 操作过程 质量控制 基本原理 分离技术
三．免疫放射分析（IRMA） 四. 非放射性标记免疫分析技术
抗原的概念
基 本 定 义
抗原（antigen,Ag)：是一类能刺激机体免
疫系统发生免疫应答，并能与相应免疫应 答产物（抗体和致敏淋巴细胞)在体内外发 生特异性结合的物质。 抗原的两种特性：免疫原性和抗原性 免疫原性（immunogenicity),能刺激机体 发生免疫应答，产生抗体和致敏淋巴细胞 的能力。 抗原性（antigenicity),能与相应抗体或 致敏淋巴细胞发生特异性结合的能力。
待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系
RIA操作过程
配制已知浓度系列标准抗原（Ag）---现
多由厂家提供已配置好的标准品
加待测抗原（Ag）和抗体（Ab）--温育 加标记抗原（*Ag）和抗体（Ab）--温育 分离复合物*AgAb（B）和游离*Ag（F） 用γ计数器测量放射性计数 根据标准曲线或计算机直接算出
酶免疫分析（EIA） 化学发光免疫分析（CLIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）
放射免疫分析（RIA)
（Radioimmunoassay RIA）
RIA主要内容
基本试剂 基本原理 操作过程 分离技术 质量控制
♣ ♣♣ ♣♣ ♣
RIA定义
是利用标记抗原和非标记抗原竞争结合
其特异抗体，给予充分的时间，使反应达
的稀释倍数，滴度越高，所需的抗血清量越 少，血清的稀释倍数越高，抗血清中杂质干 扰也少。一般滴度高到1：1000以上，血清 中干扰物质影响就很小。
RIA基本原理
最具代表性的一类检测技术，是建立在抗原抗 体结合的高度特异性和放射性测量的高度灵敏性的 基础上的。 Ag ＋ Ab AgAb ＋ *Ag *AgAb 动态平衡体系中，*Ag与Ag具有同样的免疫活性和结 合反应能力，当*Ag和Ab的量恒定，且Ag+ *Ag的分 子数〉抗体的分子数 ，*Ag与Ag相互竞争同Ab结合， 彼此抑制，待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系。
Ag
*Ag
Ab
Bound
Free
B
0.67
F
0.33
B/F
2
0.50
0.50
1
0.33
0.67
0.5
0.17
0.83
0.2
竞争放射分析原理示意图
B/F
B/B0% 100
2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 0 5 10 15 20 0 0 5 10 15 50
剂量-标准抗原浓度
剂量-标准抗原浓度
RIA基本试剂
2、标准抗原（标准品）
是已知含量并呈梯度浓度的系列 标准抗原，作标准曲线用。 要求： 保证与被测物具有相同的免疫活 性和相同介质。
RIA基本试剂
3、抗体
RIA使用：多克隆抗体 单克隆抗体
衡量抗体质量的指标是：
亲和力:抗体结合的强度
特异性:不受交叉反应物质影响的程度 滴度:抗体的效价——抗体实际应用时
基 本 定 义
半抗原---分子量小于5000的肽类，
需与载体蛋白结合才能引起免疫应 答. 抗体（Antibody,Ab）是由B细胞识 别抗原后增殖分化为浆细胞所产生 的一类能和相应抗原特异性结合的 具有免疫功能的球蛋白。
主 要 内 容
一 . 二 .
概述 放射免疫分析（RIA）
基本试剂 操作过程 质量控制 基本原理 分离技术
125I的特性：
碘元素共有 29 种同位素，其中 23 种放 射性核素，125I最为常用，优点：
半衰期适中（60天），易于商品化和储存， 也利于废物处理； 只发射28keV χ线和35keV γ射线（无β）， 容易测量，辐射自分解少，标记物足够稳定； 化学性质活泼，标记容易，可得到多种标记 物而广泛应用。
到平衡，然后分离并分别测定结合的抗原 抗体复合物放射性（B）和游离抗原放射性 （F）来计算出非标记抗原含量的一种超微 量分析技术。
♣ ♣♣ ♣♣ ♣
RIA基本试剂
1、标记抗原
125I 3H
多数 γ闪 价廉 少数 液闪 费用高
*Ag的质量要求：
标记后不改变原有抗原的生物活性； 标记的放射性核素的t1/2不能太短； 比活度和放化纯度足够高，保证分析 的灵敏度。