放射免疫分析ria

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放射免疫检定法

放射免疫检定法一、引言放射免疫检定法（radioimmunoassay，简称RIA）是一种利用放射性同位素标记物质和抗原抗体相互作用进行定量分析的方法。

它具有高度的灵敏度、特异性和准确性，在生物医学研究和诊断中得到广泛应用。

本文将详细介绍放射免疫检定法的原理、操作步骤及其在临床上的应用。

二、原理放射免疫检定法基于抗原与抗体相互结合的特异性，通过测量标记物质（通常是放射性同位素标记的抗原或抗体）与未标记物质（待测物质）竞争结合的程度，来定量测定待测物质的浓度。

该方法主要包括以下步骤：1.样品准备：待测物质需要提取和纯化，以获得精确的浓度。

2.标记物质制备：将待测物质标记上放射性同位素。

3.抗体制备：获得特异的抗体，可通过动物免疫、体外培养等方法获得。

4.标样制备：准备一系列已知浓度的标准样品。

5.标准曲线绘制：将标准样品与已知浓度相对应的竞争剂量进行测定，得到标准曲线。

6.待测样品测定：将待测样品与抗体、标记物质一起孵育，再与固相支持物接触，随后进行放射计数，得到计数值。

7.计算浓度：根据标准曲线上待测样品的计数值，计算待测物质的浓度。

三、操作步骤放射免疫检定法的操作步骤如下：1.准备所需试剂和设备：包括抗体、放射性同位素、标准样品、试剂盒、储存条件等。

2.标记放射性同位素：将待测物质标记上放射性同位素，使其具有放射性活性。

3.样品准备：通过提取和纯化方法，获得待测物质的准确浓度。

4.孵育：将待测样品与抗体和标记物质搅拌混合，使其充分反应。

5.分离：通过固相支持物将未结合的标记物质与结合物质分离开来。

6.放射计数：将分离后的结合物质放入放射计数器中，进行计数。

7.数据处理：根据标准曲线上待测样品的计数值，计算待测物质的浓度。

四、应用放射免疫检定法在临床医学中有着广泛的应用，主要应用于以下方面：1.肿瘤标志物检测：放射免疫检定法能够对血清或尿液中的肿瘤标志物进行测定，用于肿瘤的早期诊断、疗效评价和复发监测。

免疫放射分析基本原理

免疫放射分析基本原理
免疫放射分析（Radioimmunoassay，简称RIA）是一种常用的生物化学分析方法，通过使用放射性同位素标记的抗体来测量样品中特定物质的含量。

其基本原理如下：
1. 准备试样：需要测量的物质（抗原）存在于待测样品中。

样品可以是血清、尿液、分离得到的纯化物质等。

2. 标记抗体：选择能与待测物质结合的特异性抗体，并将该抗体与放射性同位素标记结合。

常用的同位素标记有^125I和
^3H。

放射性同位素标记的抗体是利用放射性同位素的射线释放特性来进行测量的关键。

3. 反应体系：将标记抗体和待测样品中的抗原加入到一个反应管中，使抗体与抗原发生特异性结合。

这一步骤通常需要一定的时间（通常为数小时）来达到最大的结合效率。

4. 分离无结合物质：通过加入剩余的非标记抗体或其他方法，分离无结合的标记抗体和未结合的物质（无结合物质）。

这一步骤可用于增加测量的灵敏度。

5. 分离被结合的标记抗体：将反应体系分离，常见的方法是利用沉淀或吸附等技术，将被结合的标记抗体与其他成分分离开来。

6. 测量放射活性：通过放射计或闪烁计数仪等设备，测量分离得到的被结合的标记抗体的放射活性。

放射活性与待测物质的
浓度呈正相关关系。

7. 构建标准曲线：使用已知浓度的标准物质重复上述步骤，测量其放射活性，并作为标准曲线的数据点。

通过与标准曲线的比较，可以确定待测样品中物质的浓度。

总之，免疫放射分析是一种利用放射性同位素标记的抗体来测量待测样品中特定物质含量的分析方法。

通过与已知浓度的标准物质进行比较，可以准确地测量待测物质的浓度。

RIA放免法

放射性免疫分析法是80年代以来被日益广泛应用的超微量分析技术，具有灵敏度高和特异性强的突出优点。

它又分为两种方法。

一、竞争性RIA，又称传统RIA基本原理是根据被测定的抗原物质和其标记物（标记抗原）同特异性抗体之间存在着竞争性的结合。

主要特点：标记的是抗原。

其原理：未知抗原Ag+标记抗原Ag +已知定量抗体Ab标记抗原与抗体复合物AgAb+未知抗原与抗体复合物Ag Ab+游离标记抗原Ag （去除）（未知抗原多，标记抗原与定量抗体结合的复合物就少，表现为负相关）。

若以Ag和Ag*分别代表待测抗原和标记抗原，Ab代表抗体，Ag·Ab和Ag*·Ab分别代表非标记的和标记的抗原抗体复合物，则当Ag与Ag*同时存在时，这一系统呈如图所示的平衡关系：在Ab恒定时，由于Ag的存在而使Ag*·Ab的产量减少。

若F代表未结合的Ag*，B代表Ag*·Ab复合物，则B/F与Ag之量存在函数关系。

若以B/F为纵坐标，Ag浓度（ng/ml）为横坐标，则可绘制出剂量反应标准曲线。

测量未知样品时，只需在同样条件下测量B和F 的放射性，即可由标准曲线求出被测样品的浓度，而不需纯化样品。

本方法要求有高纯度的标记抗原，测定标准曲线时要寻找合适的标准品，标准品的免疫活性应与待测样品相当，且不含放射性免疫干扰物。

临床上甲胎蛋白（AFP），癌胚抗原（CEA），8 一微球蛋白（pz—MG ），铁蛋白（Fer），人绒毛膜促性腺激素p亚单位（HCG-13）等的检测都是竞争性RIA法原理。

竞争性RIA法，根据加样顺序与温育次数的区别，反应方式分三种：平衡法，将非标记抗原（被测物与标准品）、抗体、标记抗原依次加入反应管，混匀后一次性温育至反应达到动态平衡，再加分离剂分离B（复合物）与F（游离物）如：AFP，8 一MG，Fer；顺序加样法，先将非标记抗原（被测物与标准品），与抗体在反应管内作第一次温育，待反应达到动态平衡后。

放射免疫分析

放射免疫分析摘要：放射免疫技术（radio immunoassay ,RIA）类型主要包括经典的放射免疫分析(radioimmunoassay, RIA)和免疫放射分析或免疫放射度量分析( immunoradiometric assay，IRMA)。

由于受接触放射性物质，损害操作人员的身体，测定完成后放射性材料的处置等问题的存在,再加上80年代初出现的非同位素标记技术得到了极大的发展和广泛应用，放射免疫技术的应用有下降的趋势。

0引言：放射性核素依衰变方式分α、β、γ三种，用于放射性标记的有β和γ两类;分别用液体闪烁计数器及γ计数器测定。

目前常用的是γ型放射性核素，如125I、131I、51Cr和60Co，以125I最常用；β型放射性核素有3H、14C和32P，以3H最常用。

关键词：结构，原理，临床应用1检测的基本结构原理、结构及其探测原理核射线探测仪器由射线探测器和后续电子学单元两大部分组成。

核射线探测器是个能量转化器，其检测原理是当射线作用于闪烁体，闪烁体吸收了射线的能量而引起闪烁体中的原子或分子激发，当受激的原子或分子退激时，则发出光子进入光电倍增管光阴极，转换为光电子，光电子在光电倍增管电场作用下到达阳极，形成电脉冲。

转换模式是放射能→光能→电能→脉冲。

液体闪烁测量是在闪烁杯内进行的，放射性样品主要被溶剂和闪烁剂分子包围，射线能量先被溶剂分子吸收，受激溶剂分子退激时释放出能量激发闪烁剂，当激发态回到基态时释放出光子到达光阴极，光阴极产生光电子，在光电倍增管的电场作用下，在阳极获得大量电子，形成脉冲信号，输入后读分析电路形成数据信号，最后由计算机数据处理，求出待测抗原含量。

放射性活度测定方法放射免疫分析中经抗原抗体反应和B、F分离后通过检测放射性量来反映待测物的含量。

放射性量的检测需特殊的仪器，放射免疫分析仪实际上就是进行放射性量测定的仪器。

测量仪器有两类，即晶体闪烁计数仪（主要用于检测γ射线，如125I、131I、57Cr等）和液体闪烁计数仪（主要用于检测β射线，如3H、32P、14C等）。

放射免疫分析

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二、 (一)标讥抗原和抗体用量最佳化设计。 1、标记抗原用量选择。 2、抗血清的使用滴度选择及其方法。 (二) 1、 2、标准曲线工作范围 (三) (四)
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(五) 1 、反应容积缩小反应容积可相应减少抗体和标记抗原的绝对用量，使非标记抗原的竞争力相应增强，有利抗原、抗体结合反应的平衡结合常数K与温度有关必须通过实验来确定最佳工作条件。 (六)B与F (七)
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(四)掌握标准曲线的斜率对测定的影响标准曲线的斜率对放射免疫分析方法的灵敏度和精密度均有影响。
1、亲和常数K 2、 3、 ( 五 ) 掌握 Bo( 总结合 ) 、 T( 总管 ) 、 NSB 的概
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第二节放射免疫分析方法学一、掌握建立放射免疫分析方法的必备条件 (一) (1)标准抗朱与待测抗原的免疫性必须一致，即它们与抗体的亲和力和特异性应相同。标准抗原与待测抗原所处的介质条件应基本相同。 (2)抗原必须纯度度。 (3)标准抗原的量必须准确。 (4)标准抗原应有很好的稳定性。
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2、 (1) 双抗法 (Ab2 法 ) ：应用抗 IgG 的第二抗体来分离B和F的方法称为双抗体法。双抗体法具有特异、高效、非特异性结合低、重复性好等优点。在使用此法时，往往加入适量的第一抗体同种动物血清作载体。同时第二抗体必须是过量(但也不宜过大)，且以不影响反应平衡为宜. (2) 固相分离法：将特性抗体 ( 第一或第二抗体)或抗原结合在固相物质。 (3)金黄色葡萄球菌A蛋白分离法。
第四章
放射免疫分析
目的与要求：掌握放射免疫分析的基本原理，实验室配置及质量控制。内容：放射免疫分析 (RIA) 是由 Yalow 和Berson于 1960年创建的一种体外放射分析技术。这是检验专业学生必须掌握和重点。

放射免疫分析临床应用刘冬

放射免疫分析临床应用刘冬放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种以放射性示踪剂和免疫反应结合技术来测定生物标志物的一种方法。

该技术已广泛应用于临床医学中用于检测和测量患者体内的一些特定物质含量，如激素、抗体、肿瘤标志物等。

本文将重点介绍放射免疫分析在临床应用中的一些例子。

一、激素测定激素是机体内起调控作用的重要化学物质。

通过测定患者体内激素的水平，可以评估一些疾病的发生和发展，以及患者对治疗的反应。

常见的激素测定项目包括甲状腺激素、生长激素、性激素等。

放射免疫分析可以通过测定血液或尿液中激素的浓度，来帮助医生进行确诊和治疗方案的制定。

例如，对于甲状腺功能亢进患者，可以通过测定血液中的甲状腺素水平来确定是否需要进行手术或药物治疗。

二、肿瘤标志物测定肿瘤标志物是一种可以在肿瘤患者体内检测到的特殊物质。

通过测定血液中的肿瘤标志物的水平，可以帮助医生进行肿瘤的筛查、诊断和监测治疗效果。

放射免疫分析可以对常见的肿瘤标志物，如癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等进行快速、准确的检测。

例如，在临床上，对于可能患有肺癌的患者，测定血液中的CEA水平可以帮助医生进行早期诊断和有效治疗。

三、感染性疾病诊断感染性疾病的早期诊断对于患者的治疗和康复至关重要。

通过测定患者体液中的抗体水平，可以判断患者是否被特定的病原体感染。

放射免疫分析可以用来检测和诊断一些常见的感染性疾病，如乙肝、艾滋病等。

例如，对于可能患有乙型肝炎的患者，可以通过测定血液中的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和乙肝病毒表面抗体（HBsAb）来判断患者的感染状态和治疗效果。

综上所述，放射免疫分析技术在医学临床应用中发挥着重要的作用。

通过对患者体内特定物质含量的测定，可以帮助医生进行疾病的早期诊断、有效治疗和预后评估。

随着医学技术的不断发展，放射免疫分析技术在临床应用中的前景将会更加广阔。

放射免疫分析名词解释

放射免疫分析名词解释放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种用于检测和定量分析生物样品中特定抗原或抗体浓度的方法。

它是将放射性同位素标记于抗原或抗体上，在放射性同位素发出的放射线与样品中的抗原或抗体发生特异性结合后进行测定，从而得出相应物质的浓度。

放射免疫分析的基本原理是免疫反应，即抗原与抗体之间的特异性结合。

在RIA中，通常选择具有放射性的同位素标记物作为追踪试剂。

标记物可以是同位素标记的抗原或抗体，其中最常用的是放射性同位素碘-125（^125I）或碘-131（^131I）。

这些放射性同位素会发出特定能量的射线，可以通过辐射探测器测量。

RIA的步骤包括样品预处理、标记物制备、抗体反应和分离、洗涤、放射测定等。

首先，需要将待测物标记为放射性同位素，常见的方法是用碘-125标记。

然后，将标记物与样品中的抗原或抗体进行相互反应，形成抗原-抗体复合物。

接着，通过分离和洗涤步骤，去除未结合的放射性同位素。

最后，使用辐射探测器测量放射性同位素发出的射线，由此可以得到样品中特定抗原或抗体的浓度。

放射免疫分析的优势在于其高灵敏度和高特异性，可以检测到极低浓度的物质。

它广泛应用于医学、生物学、生物化学等领域，用于检测和量化各种生物分子，如荷尔蒙、抗体、蛋白质、癌标志物等。

RIA还可以用于研究免疫反应、疾病诊断、药物筛选和治疗监测等方面。

然而，放射免疫分析也存在一些问题。

首先，使用放射性同位素会造成辐射危害，对实验操作人员和环境有一定风险。

其次，放射性同位素的半衰期较短，需要定期更换，增加了实验的复杂性和成本。

此外，由于放射性同位素的使用受到严格的监管和限制，一些实验室可能无法获得所需的放射性同位素。

总体而言，放射免疫分析是一种广泛应用的生物分析技术，具有高灵敏度和高特异性。

随着科技的进步，更多无放射同位素的免疫分析方法被开发出来，如酶免疫分析、荧光免疫分析等，逐渐取代了放射免疫分析的应用。

放射免疫分析的原理

放射免疫分析的原理放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种利用放射性同位素标记抗原或抗体来检测物质浓度的技术。

该技术广泛应用于临床诊断、生物化学研究以及药物筛选等领域，具有高灵敏度和高特异性的特点。

放射免疫分析的原理是基于抗原与抗体之间的特异性结合。

抗原是一种能够诱导免疫系统产生抗体的物质，而抗体是一种能够特异性结合抗原的免疫蛋白。

在放射免疫分析中，通常选择特异性结合抗原的抗体，并利用放射性同位素标记抗原或抗体，以便测定样品中抗原或抗体的浓度。

放射免疫分析的步骤一般包括抗原标记、抗体固定、分离和计数等几个关键步骤。

首先，将抗原标记上放射性同位素，通常使用的同位素有碘-125（125I）、碘-131（131I）、氘-3（3H）等。

标记后的放射性抗原具有相对稳定的放射性，可用于测定抗原的浓度。

然后，将已标记的抗原与待测样品中的抗原进行特异性结合，并通过添加抗体来固定放射标记的抗原。

接着，利用分离技术（如沉淀法、凝胶层析法等）将游离的抗体或抗原分离出来。

最后，通过放射计数器测定标记抗原或抗体的放射性强度，从而计算出待测样品中抗原或抗体的浓度。

放射免疫分析的原理基于放射性同位素的高灵敏度和稳定性，使得其具有极高的检测灵敏度和特异性。

相对于传统的免疫分析方法，如酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等，放射免疫分析能够在极低的抗原浓度下进行检测，且能够检测复杂样品中的微量物质。

因此，放射免疫分析广泛用于检测激素、生物分子、药物和疾病标志物等各种生物样品中的微量物质。

然而，放射免疫分析也存在一些局限性，主要是由于放射性同位素的使用带来的放射性污染和辐射风险。

为了克服这一局限性，人们提出了许多新的代替技术，如免疫荧光分析（immunofluorescence assay，IFA）、化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）等。

放射免疫分析

加样： 1、Ag（系列标准品及待测样品）50ul/每管 2、Ag* 200ul/每管 3、Ab 100ul/每管混匀，37℃ 45分钟，加分离剂离心，测定结合部分放射性。
放射免疫分析的几种标准曲线图：
抗原抗体的结合反应遵循质量作用定律，即：
当反应达到平衡时， k1[Ag][Ab]=k2[AgAb]。设KA为平衡结合常数，也称亲和常数，则有：
Ag + Ab → AgAb + Ag* ↓ Ag*Ab

式中Ag *代表标记抗原，Ag代表非标记抗原，Ab代表特异性抗体，Ag * Ab代表标记抗原抗体复合物，AgAb代表非标记抗原抗体复合物。
当反应体系中同时存在Ag、Ag *和Ab，而Ag *的量一定、Ab的量限定（分子数少于抗原）时，随着Ag的增加，Ag * Ab的量相应减少，即与Ag（包括标准抗原或待测抗原）的量呈负相关竞争性抑制。当反应达到平衡后，将反应体系中的标记抗原抗体复合物与游离的标记抗原分离，测定其放射性。以标准抗原的浓度为横坐标，以标记抗原抗体复合物的结合率（B/T、B/F、B/B0）为纵坐标，绘制剂量效应曲线（calibration curve），也称标准曲线。
3）亲和力和亲和常数测定：亲和力表示特定的抗原、抗体之间的结合能力，常用亲和常数KA来表示。KA越大，表示抗原、抗体之间结合能力越强，B/F 值大，方法的灵敏度高。随着单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）技术的发展，提高了现代体外分析技术的特异性和亲和力。
（二）、放射性标记物放射性标记物是体外放射分析的测量依据，常用的标记核素有125I和3H。对标记物的质量要求包括：（1）比活度（specific activity）：体外放射分析法的定量范围一般在10-9-1012mol水平，标记物的用量应等于或小于被测物的最小量，以得到较好的灵敏度。高比活度的标记物是确保分析方法灵敏度的前提。

ria免疫名词解释

ria免疫名词解释
RIA是放射免疫分析（Radioimmunoassay）的缩写，是一种用
放射性同位素标记的抗体来测定抗原或抗体浓度的方法。

在RIA中，被测物质（抗原或抗体）与放射性同位素标记的对应抗体结合，形
成一个不溶性复合物。

通过测定复合物的放射性活性，可以确定被
测物质的浓度。

这种技术被广泛应用于生物医学研究和临床诊断中，例如用于测定激素、药物、病原体等的浓度，具有灵敏度高、特异
性强、操作简便等优点。

从生物医学角度来看，RIA技术的原理是基于抗体与抗原结合
的特异性，通过放射性同位素标记的抗体来测定样品中抗原的浓度，常用于检测体液中的激素、肿瘤标志物等。

从技术角度来看，RIA技术的实施需要一系列严格的实验步骤
和设备，包括放射性同位素标记试剂的制备、样品的处理、放射性
计数等。

这些步骤需要严格控制，以确保测定结果的准确性和可靠性。

总的来说，RIA是一种重要的生物医学分析技术，对于研究和
诊断具有重要意义。

它的应用范围广泛，可以帮助科研人员和临床
医生更准确地了解生物样品中特定物质的浓度，为疾病诊断和治疗提供重要参考。

放射免疫分析(RIA)中影响标准曲线建立的因素

放射免疫分析(RIA)中影响标准曲线建立的因素放射免疫分析(RIA)是由美国生物学家Yalow和Berson于1959年创建的一种体外放射分析技术，该技术有其结果可靠。

简便易行，成本低廉，高灵敏度，高特异性的优点。

其超微量测定可达ng至pg水平，目前可测物质已达300余种，对临床的诊断和治疗起着积极而重要的作用。

在实际工作实践中，标准曲线的制做非常重要。

它可对整批实验结果产生重大影响。

在放免分析测定中被测物质浓度是根据标准曲线计算得来的。

标准曲线的精确度直接影响测定结果的精确度。

而根据少数的几个离散点建立起来的标准曲线如何尽量精确地反应B/B0％与样品抗原浓度之间的真实函数关系，却要尽可能地从实验中把关，因此制定标准曲线的每一步骤都要严格和精确。

现就放免分析中有关标准曲线制做的影响因素进行一番分析。

供同仁们参考。

一、试剂组份（一）标准品标准品的活性、免疫反应性以及纯度往往影响放射免疫分析的正确性，从而极大地影响结果。

要求标准品活性与免疫反应性和被测物质相一致，须是同源系统的。

且稳定性好，易保存，不含交叉反应物质和干扰免疫反应的物质，定量应准确并与国际标准品一致。

所谓标准品纯度不是指化学纯，它可以含杂质，但不应含有对放射免疫分析有干扰的物质。

（二）蛋白质标准品与专一性抗体在平衡反应过程中，蛋白质有抑制作用，如被测物质应用血浆或血清，应在标准品内加入相同量的蛋白质，这样蛋白质对被测物质及标准品的干扰反应相一致。

（三）PH值和离子强度抗原抗体反应在酸性或碱性环境中解离，因此该反应宜在接近中性或微碱性的环境中进行。

其PH值以7.4-7.8为宜，离子强度 0.05-0.1mol /L。

既要有缓冲能力（离子强度不能太小），但离子强度过大又会阻止抗原抗体反应。

（四）反应容积、温度及时问缩小反应容积可减少抗体和标记抗原的绝对用量，使非标记抗原的竞争力相应加强，能提高灵敏度，且反映试剂消耗减少。

另一方面，由于小容积形成复合物的绝对量相应减少，放射性测量误差增大，而且由于加样容积变小，也易引起操作误差，一般宜先0.3-1.2ml的反应容积。

放射免疫分析名词解释

放射免疫分析名词解释
放射免疫分析（RIA）是一种检测技术，可以用来测定多种体内物质，包括激素、细胞因子、蛋白质和抗原。

它可以应用于动物和人体，并且具有灵敏度高、可操作性好的优点，被广泛应用于临床和科研领域。

放射免疫分析由以下几个步骤构成：首先，将样本中待测物质结合到放射抗体中。

放射抗体是一种特异性抗体，能够特异性结合待测物质，避免其他物质干扰检测结果。

放射抗体可以是膜抗原抗体、非膜抗原抗体或者多肽抗体。

其次，将样本和放射抗体制成滴定曲线，测定放射抗体结合待测物质的含量。

最后，通过计算放射抗体浓度滴定曲线的相关系数来计算样本中的待测物质的含量。

放射免疫分析为临床和科研提供了许多方便，特别是在生理学方面，其应用极为广泛。

它可以用来检测各种激素、蛋白质和细胞因子的表达水平，对疾病的研究有重要意义。

放射免疫分析也可以检测各种抗原，为临床诊断疾病提供有力的支持。

放射免疫分析由于具有高灵敏度和特异性，可以很好地检测微量物质，在临床和科研领域具有重要的应用价值。

近年来，放射免疫分析在药物研发和食品质量检测方面也越来越受到重视，为科学研究和技术创新提供重要的技术支持。

综上所述，放射免疫分析是一种重要的检测技术，它不仅在临床检测中具有重要的应用价值，而且也受到越来越多科学研究和技术创新的重视。

它也可以帮助我们更准确、更早期地诊断疾病，为患者身
体健康提供有力的支撑。

放射免疫分析

放射免疫分析放射免疫分析放射免疫分析是利用放射性核素可探测的灵敏性、精确性和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。

放射免疫技术放射免疫分析免疫放射分析放射免疫分析技术的应用放射免疫技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发展起到了极大的推动作用。

基本类型及原理1.放射免疫分析（RIA）2.免疫放射分析（IRMA）常用的放射性核素放射免疫技术常用的放射性核素有125Ⅰ、131Ⅰ、3H、14C等。

使用最广泛的是125Ⅰ，可采用探测γ射线的晶体闪烁计数器测量。

标志物制备及鉴定125Ⅰ以放射性碘原子通过置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。

（1）氯胺T（ch-T）法。

（2）乳过氧化物酶标记法。

（3）间接标记法。

放射性标志物的纯化（1）凝胶过滤法：分子筛。

（2）离子交换层析法：极性差异。

（3）聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：电荷和直径。

（4）高效液相色谱法。

放射性标志物的鉴定1.放射化学纯度：大于95%。

2.免疫活性：标志物与抗体结合的能力。

3.比放射性：标志物中所含的放射性强度。

方法学评价除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应注意以下指标：（1）可靠性。

（2）剂量-反应曲线。

（3）高剂量钩状效应。

放射免疫分析放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合有限的特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。

Ag*+Ag+Ab Ag*-Ab+Ag-Ab+Ag*+Ag分离结合与游离标志物1.第二抗体沉淀法。

2.聚乙二醇（PEG）沉淀法。

3.PR试剂法：先将二抗与PEG按一定比例混合成悬液后进行试验。

4.活性炭吸附法。

放射性测量及数据处理可对标记抗原抗体复合物（B）或游离标记抗原（F）进行放射性测量，绘制标准曲线，查出相应的待检抗原浓度。

体外分析技术放射免疫分析

体外分析技术放射免疫分析体外分析技术是指在试管内进行反应从而测定某生物活性物质的超微量分析技术。

该类技术的特点是高灵敏度和高特异性，广泛用于临床和科学研究的很多领域。

应用最多的是：放射免疫分析、免疫放射分析、受体的放射配基结合分析及非放射性免疫分析。

一、原理放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)的基本原理是，限量标记抗原［*Ag］和可变量的非标记待测抗原［Ag］与定量的特异抗体［Ab］发生竞争结合反应，通过测定复合物的放射性来计算出待测非标记抗原的量。

这一过程可用下式表示：*Λg+Λg+Ab< »［ΛgΛb］*+［ΛgΛb］上述式中，Ab的分子数少于*Ag,因此即使系统中没有Ag,仅有*Ag,当反应达到平衡时，绝大部分(因为是可逆反应，不会是100%)Ab将形成*AgAb复合物。

如果系统中加入Ag,则Ag与*Ag竞争结合Ab,形成AgAb,*AgAb将减少。

Ag越多则*AgAb越少。

实践和理论推导都证明，*AgAb和Ag呈二次方程的函数关系，如以Ag为横坐标，*AgAb(B)或*AgAb占加入总*Ag的％(B%)为纵坐标，是一条斜率逐步由大变小的下降曲线。

如以游离的*Ag(F)或游离*Ag占加入总*Ag的％(F%)为纵坐标，则是一条斜率逐步由大变小的上升曲线。

也可以*AgAb∕*Ag的比值(R)为纵坐标，也是一条斜率逐步由大变小的上升曲线。

分析中，首先以不同量的已知标准品Ag和定量*Ag及限量Ab进行竞争结合反应，得到以B或B%、F或F%、或R为纵坐标的剂量效应曲线(也称标准曲线)，然后以未知样品测得的B或B%、F或F%、或R从曲线上查出相应的剂量。

二、试剂盒基本试剂试剂盒由国家批准的生产单位提供，提供R1A的主要试剂、操作方法、保存条件及保存期限。

使用者应按说明书的要求合理使用。

如果临床工作需要，使用者可以对试剂稀释度、操作步.骤等进行适当修改，但应当对改变了的方案进行精密度、准确度、灵敏度等考核，并作详细记录。

放射免疫分析RIA

基 ➢ 抗原（antigen,Ag)：是一类能刺激机体
本
免疫系统发生免疫应答，并能与相应免疫应答产物（抗体和致敏淋巴细胞)在体内外
定
发生特异性结合的物质。 ➢ 抗原的两种特性：免疫原性和抗原性
义
➢ 免疫原性（immunogenicity),能刺激机体发生免疫应答，产生抗体和致敏淋巴细
胞的能力。
➢ 抗原性（antigenicity),能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合的能力。
RIA基本原
理
最具代表性的一类检测技术，是建立在抗原抗体结合的高度特异性和放射性测量的高度灵敏性的基础上的。
Ag ＋ Ab AgAb ＋ *Ag *AgAb
动态平衡体系中，*Ag与Ag具有同样的免疫活性和结合反应能力，当*Ag和Ab的量恒定，且Ag+ *Ag的分子数〉抗体的分子数，*Ag与Ag相互竞争同Ab 结合，彼此抑制，待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系。
IRMA基本原理
Ag ＋*Ab
Ag*Ab
与RIA的不同：放射性标记的是抗体而不是抗原,且抗原与过量的标记抗体结合反应,故反应是非竞争性的全量反应。
IRMA与RIA的工作原理的主要区别
项目反应机制
RIA 竞争性反应
主要反应试剂三种标记抗原
分离方法
抗原只需一个抗原决定簇
待测抗原复合与待测抗原呈负
分辨等非放射性标记免疫分析自动化技术先后问世，检测灵敏度提高到了10–15g。
概述
2.类型：（据特异性结合试剂的不同分类）
放射免疫分析（RIA） 1959 竞争性蛋白结合分析（CPBA） 1963 免疫放射分析（IRMA） 1968 放射受体分析（RRA ） 70年代放射酶学分析 70年代放射微生物分析