HA放射免疫测定标准操作流程
[医药]放射免疫分析实验室规定和操作流程
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放射免疫分析实验室规定和操作流程工作人员被放射性同位素污染是放免实验中最大的危害之一，为了在操作过程中确保安全，有许多严格的规定和要求。
虽然在通常实验中所用同位素的量相对地讲是低的，但这些规定必须严格遵守。
遵守规定1)在放免实验室不准吃、喝和抽烟，操作时必须穿上工作服（放免实验室提供，使用者在试验结束后必须清洗干净，凉干后放回衣柜）；2)溶液的放射强度超过0.1μCi/ml，或总放射量超过10μCi时，必须带上手套操作；（所有放射性材料，其浓度大于0.01μCi/ml或总放射强度大于1μCi时，均须标上同位素标签，标明强度、日期和体积；请注意购买的试剂盒上是否有此标签，以确定试剂盒的放射性强度。
）3)操作台面需有保护层覆盖，包括塑料薄膜或纸张等；4)禁止用嘴来吸移液体；5)非消耗性设备（试管架、移液枪、海绵等），使用后必须用布或纸巾擦干，放在放实验免室指定的柜子，严禁拿到别的地方使用；6)放免实验室水浴锅使用完毕后必须把水排干，防止生锈；7)低温离心机使用前必须进行平衡，用完后必须擦干水迹，拔下插头；8)上机测量前，必须擦干试管壁水迹，以保护γ计数器探头。
9)所有放射性废弃物（放免管、枪头和废液等），均须使用袋子或瓶子收集，标上同位素标签（如，125I）、日期和使用人姓名，并存放在指定的隔间，禁止带出放免室；10)被125I 污染时，应尽早去污（可以先用5 %硫代硫酸钠或5 %亚硫酸钠洗涤，再以10 %碘化钾或碘化钠为载体帮助去污；也可以用普通肥皂或洗涤剂多次清洗去污）。
操作流程1)预先准备好覆盖操作台面的保护层（塑料薄膜和纸张等）、手套、口罩和塑料瓶等防护物品；2)进入放免实验室后，操作人员穿戴好工作服、手套和口罩等，将保护层覆盖在操作台面上；3)取出试管架和移液器，用75%酒精绵球擦拭干净；4)根据试剂盒说明书进行加样、水浴和离心（预先平衡）等；5)将上清倒入污物杯，用棉球包纸巾擦干试管壁（也可直接用移液器或负压泵吸出上清）；6)登记，启动γ计数器并预热20min，启动相连的电脑；7)取出上样架，小心放置待测试管，避免倾倒和污染；8)根据试剂盒说明书设置相关参数，按照γ计数器使用规范进行测量和分析；9)实验完毕后，操作台面上的废弃物必须清理干净，上样架、试管架和移液器（调回最大量程）擦拭后放回原位；10)排干水浴锅的水，擦除低温离心机的水迹，并都拔下插头；11)必须将固体废弃物（放免管、枪头等）装入塑料袋，废液收集到塑料瓶（自已准备），并都标上同位素标签（如，125I）、日期和使用人姓名，并存放在指定的隔间；12)实验结束后，必须将放免实验室钥匙归还管理员，经管理员和负责老师审核无误后方可离开。
放射性检测操作规程最新
放射性检测操作规程最新放射性检测操作规程最新（Radiation Testing Operation Procedures - Latest Version）第一节：引言1.1 目的该操作规程的目的是确保放射性检测过程中的安全性、准确性和质量控制，并遵守所有相关法规和标准。
1.2 适用范围该操作规程适用于所有进行放射性检测的实验室和工作人员。
1.3 定义和缩写（在本操作规程中可能存在的定义和缩写，需加以说明）第二节：安全2.1 人员培训所有参与放射性检测的工作人员应接受相应的培训，并持有合适的资格证书。
2.2 个体防护在进行放射性检测的实验室中，工作人员应佩戴适当的个体防护装备，如手套、护目镜和实验室外套。
工作人员应在工作结束后进行适当的清洁和消毒。
2.3 环境安全实验室应具备适当的安全设备，如防护墙、紧急淋浴和紧急停电按钮。
实验室应定期进行安全检查，并制定应急响应计划。
第三节：设备和仪器3.1 硬件设备所有放射性检测设备和仪器应符合相应的标准，并经过定期校准和维护。
3.2 仪器操作使用仪器之前，工作人员应确保其已经过校准和维护，并具备操作资格。
在操作过程中，工作人员应按照仪器的使用说明书进行操作，并记录相关数据。
第四节：样品处理4.1 样品接收样品接收时，应记录样品的数量、来源和重要信息，如样品采集日期等。
4.2 样品标签每个样品都应有唯一的标识符，并按照实验室的指导进行正确标记。
4.3 样品处理在进行放射性检测之前，样品应按照实验室的操作规程进行处理，如取样、分割、混合等。
4.4 样品保存已处理的样品应妥善保存，并记录存放位置和条件，以确保样品的稳定性和完整性。
第五节：放射性测量5.1 测量方法根据不同的放射性测量要求，选择合适的测量方法，并按照相关标准和规程进行操作。
5.2 测量准确性和精度为确保测量结果的准确性和精度，测量设备应定期进行校准和验证，并进行质量控制检验。
5.3 数据记录所有的放射性测量结果应准确记录，并包括样品信息、测量日期、操作人员等相关信息。
甲状腺素(T4)放射免疫测定
甲状腺素（T4）放射免疫测定【目的】1、初步了解放射免疫测定的一般过程；2、进一步了解γ-闪烁测定的一般方法。
【材料准备】1、试剂125I碘-T放射免疫测定药盒4①125I-T4②抗T4血清③T4标准品：6瓶（0、20、40、80、160、320 ng/ml）④分离剂（PR试剂）2、用具①试管（13×78 mm）18只②微量加样0～200μl（可调）、500 μl各1支③塑料吸头若干④水浴箱、离心机各1台⑤γ放免测量仪1套【操作程序】充分单混匀，室温放置15分钟，任取三管测量总放射性计数（T），取其平均值。
然后在3500转/分离心20分钟，立即小心吸去上清液，测定各管学淀放射性计数（B）。
【结果计算】以B/T×100%或B/B。
×%为纵座标，以T4标准浓度为横座标在座标用四参数拟合绘制标准曲线（计算机拟合）。
摇匀37℃温育60分钟室温放置15分钟，离心15分钟，3500 rpm ，弃上清，测量以待测样品的B/T ×100%或B/B 。
×100%的值在标准曲线上查出样品的T 4含量。
C NSB 为非特异管计数；NSB ：非特异性结合； NSB=)()()()(cpm cpm T cpm cpm C NSB 本底本底--B/B 0=)()()()(0cpm C cpm S cpm C cpm NSB NSB --标准或样品B 0=)()()()(0cpm cpm T cpm C cmp S NSB 本底--正常参考值：42～150 ng/ml 。
试剂盒系北京北方生物技术研究所生产。
放射免疫检定法
放射免疫检定法一、引言放射免疫检定法（radioimmunoassay，简称RIA）是一种利用放射性同位素标记物质和抗原抗体相互作用进行定量分析的方法。
它具有高度的灵敏度、特异性和准确性，在生物医学研究和诊断中得到广泛应用。
本文将详细介绍放射免疫检定法的原理、操作步骤及其在临床上的应用。
二、原理放射免疫检定法基于抗原与抗体相互结合的特异性，通过测量标记物质（通常是放射性同位素标记的抗原或抗体）与未标记物质（待测物质）竞争结合的程度，来定量测定待测物质的浓度。
该方法主要包括以下步骤：1.样品准备：待测物质需要提取和纯化，以获得精确的浓度。
2.标记物质制备：将待测物质标记上放射性同位素。
3.抗体制备：获得特异的抗体，可通过动物免疫、体外培养等方法获得。
4.标样制备：准备一系列已知浓度的标准样品。
5.标准曲线绘制：将标准样品与已知浓度相对应的竞争剂量进行测定，得到标准曲线。
6.待测样品测定：将待测样品与抗体、标记物质一起孵育，再与固相支持物接触，随后进行放射计数，得到计数值。
7.计算浓度：根据标准曲线上待测样品的计数值，计算待测物质的浓度。
三、操作步骤放射免疫检定法的操作步骤如下：1.准备所需试剂和设备：包括抗体、放射性同位素、标准样品、试剂盒、储存条件等。
2.标记放射性同位素：将待测物质标记上放射性同位素，使其具有放射性活性。
3.样品准备：通过提取和纯化方法，获得待测物质的准确浓度。
4.孵育：将待测样品与抗体和标记物质搅拌混合，使其充分反应。
5.分离：通过固相支持物将未结合的标记物质与结合物质分离开来。
6.放射计数：将分离后的结合物质放入放射计数器中，进行计数。
7.数据处理：根据标准曲线上待测样品的计数值，计算待测物质的浓度。
四、应用放射免疫检定法在临床医学中有着广泛的应用，主要应用于以下方面：1.肿瘤标志物检测：放射免疫检定法能够对血清或尿液中的肿瘤标志物进行测定，用于肿瘤的早期诊断、疗效评价和复发监测。
放射科检查流程及操作规范
放射科检查流程及操作规范随着医疗技术的发展，放射科检查在现代医学诊断中起到了重要的作用。
本文将介绍放射科检查的流程以及相关的操作规范，以帮助医务人员正确进行放射科检查工作。
一、放射科检查流程放射科检查通常包括以下几个步骤：患者准备、设备操作、影像采集、结果评估和报告编写。
下面将对每个步骤进行详细介绍。
1. 患者准备在进行任何放射科检查之前，医务人员应与患者进行充分的沟通和交流，解释检查的目的、流程和可能的风险。
患者应提供详细的病史和相关的医疗影像资料。
此外，还需要检查患者的过敏史和身体状况，确保其符合检查的安全条件。
2. 设备操作放射科检查所使用的设备包括X射线机、CT扫描仪、MRI机和核医学设备等。
医务人员需要熟悉设备的操作方法，并按照使用说明书正确设置参数。
在操作设备之前，还需进行设备的日常检查和维护工作，确保其正常运行。
3. 影像采集影像采集是放射科检查的核心环节，也是决定检查结果准确性的关键。
在进行影像采集之前，医务人员应根据患者的具体情况选择合适的检查方法，并采取必要的准备措施，如患者体位调整、麻醉等。
在采集影像时，要确保患者的舒适度和安全性，并严格按照操作规程进行。
4. 结果评估采集到的影像需要由专业的放射科医师进行评估和分析。
医师应对影像进行仔细观察，发现和解读潜在的异常情况，并结合患者的临床资料进行综合诊断。
在评估结果时，医师需要保持客观、科学的态度，并及时与其他医务人员进行协商和讨论，以确保诊断的准确性。
5. 报告编写根据影像评估的结果，医师需要撰写详细的报告，包括检查的目的、方法、结果和诊断意见等。
报告应准确、清晰地描述患者的病情和检查结果，为临床医生提供有价值的参考。
此外，报告还应符合医疗记录的规范和要求，包括相关的隐私保护和数据存储要求。
二、操作规范为确保放射科检查的质量和安全，医务人员需遵守以下操作规范：1. 密封辐射防护室在进行放射性核素检查时，应将患者置于密封辐射防护室内，并采取必要的辐射防护措施，如佩戴防护服、戴好手套等，以减少辐射对医务人员和患者的危害。
放射免疫分析实验
结果误差分析
随机误差
由于实验过程中随机因素引起的误差，如操 作不熟练、仪器不稳定等。
系统误差
由于实验过程中某些恒定因素引起的误差， 如试剂不纯、仪器校准等。
生物学变异
由于个体生物学差异引起的误差，如个体差 异、生理状态等。
减少误差的方法
通过标ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ化操作、质量控制、仪器校准等方 式减少误差。
05
实验注意事项与安全防护
废弃物的处理与环保要求
分类处理
减量、减容
将放射性废弃物与其他废弃物分开处理， 避免交叉污染。
尽量减少废弃物的产生和体积，采用适当 的处理方法进行减容。
无害化处理
环保监测
确保废弃物经过无害化处理后，不对环境 和人体健康造成影响。
对废弃物的处理过程和最终排放进行监测 ，确保符合环保要求。
THANKS
抗原与抗体反应
放射免疫分析实验基于抗原与抗 体反应的原理，利用标记的抗体 与抗原结合，形成可被检测的复
合物。
放射性同位素标记
抗体被放射性同位素标记，以便通 过放射性计数器进行检测。
信号放大
通过使用标记的抗体，可以将信号 放大，提高实验的灵敏度和特异性。
实验应用
01
02
03
激素检测
放射免疫分析实验在激素 检测中广泛应用，如甲状 腺激素、肾上腺皮质激素 等。
。
放射性同位素的管理与使用规范
审批与授权
只有经过授权的人员才能进行放射性 同位素的操作和管理。
记录与追踪
对放射性同位素的采购、储存、使用 和废弃等过程进行详细记录，确保可 追溯性。
计量与监测
定期对放射性同位素进行计量和监测， 确保其质量和安全。
放射免疫测定法
放射免疫测定法放射免疫测定法(radiation immune assay, RIA)的技术类型很多，如再结合免疫技术，可用它作标本的定性、定量及定位分析等。
另外，由于它是以最敏感的同位素作标记，所以本法的高敏感性是最重要的特点，测定结果可达ng～pg水平，这是现用一切检测微量抗原和抗体法所不可比拟的。
(一) 放射免疫超微量分析法用其检测血清抗体时，用同位素如3H、14C、32P、131I或125I标记的病毒抗原与被检血清在37℃条件下一起孵育2小时，使二者相遇结合后，再加入抗γ球蛋白时，便与上述的抗原抗体复合物联结在一起，离心后，形成大的复合物沉淀下来，此时可用闪烁探测仪分别测量上清液和沉淀物的脉冲数，并计算出沉淀物放射性占总放射性的百分率，以此为指标，判定被检血清中有无相应抗体及其含量。
另外，也可用本法测抗原，依据的原理与上述测抗体的方法大致相同。
区别是将已知抗血清和可能含有相应病毒抗原的被检标本一起孵育，如被检标本中含有相应的病毒抗原，则二者充分结合，再引入标记的已知病毒抗原时，由于已知抗体已与标本中的抗原结合，则不能再与引入的标记病毒结合，只能呈游离状态存在于上清液中，加入抗γ球蛋白时，则与已知抗体和被检病毒抗原的复合物相结合，离心后，这种大分子的结合物即被沉淀下来，应用闪烁探测仪分别测定上清液和沉淀物的放射性时，结果沉淀物的放射性明显低于上清液的放射性，如果被检标本中不含相应的病毒抗原时，则沉淀物的放射性明显高于上清液的放射性。
(二) 放射火箭电泳测定法这种方法实际上是放射自显影与单向定量免疫电泳(即火箭电泳)相结合的一种测定技术。
它的分辨力很高，有的能精确地测出细胞内分子水平的放射性物质的分布。
检测时，可先将被检抗原用3H、131I标记，滴加于含一定量的抗血清琼脂凝胶板孔中，电泳时，抗原在移动过程中，与琼脂板中的抗体在比例适当处，即形成抗原-抗体复合物，未结合的抗原继续向阳极移动，直至全部抗原与抗体结合完为止，这样就形成一个形似火箭的锥形沉淀峰。
简述放射免疫分析方法的基本流程图解
简述放射免疫分析方法的基本流程图解下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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放射免疫分析测定方法
放射免疫分析测定方法用放射免疫分析进行测定时分三个步骤，即抗原抗体的竞争抑制反应、B和F的分离及放射性的测量。
（一）抗原抗体反应将抗原（标准品和受检标本）、标记抗原和抗血清按顺序定量加入小试管中，在一定的温度下进行反应一定时间，使竞争抑制反应达到平衡。
不同质量的抗体和不同含量的抗原对温育的温度和时间有不同的要求。
如受检标本抗原含量较高，抗血清的亲和常数较大，可选择较高的温度（15～37℃）进行较短时间的温育，反之应在低温（4℃）作较长时间的温育，形成的抗原抗体复合物较为牢固。
（二）B、F分离技术在RIA反应中，标记抗原和特异性抗体的含量极微，形成的标记抗原抗体复合物（B）不能自行沉淀，因此需用一种合适的沉淀剂使它彻底沉淀，以完成与游离标记抗原（F）的分离。
另外对小分子量的抗原也可采取吸附法使B与F分离。
1．第二抗体沉淀法这是RIA中最常用的一种沉淀方法。
将产生特异性抗体（第一抗体）的动物（例如兔）的IgG免疫另一种动物（例如羊），制得羊抗兔IgG血清（第二抗体）。
由于在本反应系统中采用第一、第二两种抗体，故称为双抗体法。
在抗原与特异性抗体反应后加入第二抗体，形成由抗原－第一抗体－第二抗体组成的双抗体复合物。
但因第一抗体浓度甚低，其复合物亦极少，无法进行离心分离，为此在分离时加入一定量的与一抗同种动物的血清或IgG，使之与第二抗体形成可见的沉淀物，与上述抗原的双抗体复合物形成共沉淀。
经离心即可使含有结合态抗原（B）的沉淀物沉淀，与上清液中的游离标记抗原（F）分离。
将第二抗体结合在颗粒状的固相载体之上即成为固相第二抗体。
利用固相第二抗体分离B、F，操作简便、快速。
2．聚乙二醇（PEG）沉淀法最近各种RIA反应系统逐渐采用了PEG 溶液代替第二抗体作沉淀剂。
PEG沉淀剂的主要优点是制备方便，沉淀完全。
缺点是非常特异性结合率比用第二抗体为高，且温度高于30℃时沉淀物容易复溶。
3．PR试剂法是一种将双抗体与PEG二法相结合的方法。
放射免疫测定法
－
125I
60天
－
0．035
131I
8.05天 0.608，0.335，0.250
0.364，0.637，0.722
125I的优点
29种同位素，125I最为常用； 半衰期适中(60天)，易于商品化和储存，也利于废物处理； 发射低能35kV γ线易于测量，井型闪烁效率高； 不发射β粒子，标记物自分解速度低； 标记过程中，标记物免疫损伤小； 化学性质活泼，标记Ag和Ab容易，可得到多种标记物而广泛应用。
放射免疫测定（RAI）：根据抗原抗体特异性结合的原理，以放射 性同位素标记抗原或抗体，根据射线的多少定性或定量测定待检 标本中抗体或抗原的量。
RIA方法学研究进展
1959年 Yalow和Berson建立放射免疫测定（RIA） 1960年 竞争性蛋白结合分析（CPBA） 1968年 Miles和Hales建立免疫放射量度分析（IRMA） 1968年 放射受体分析法(RRA) 1971年 Addison和Hales建立双位点或夹心IRMA
标准曲线的基本数学函数式
放射免疫分析从抗原抗体反应动力学分析，反应是双向性的，服 从质量作用定律。
%
/
75
结 合
未
结 50
合
的
放 30
射
活
性 （
10
）
0
待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系
1
10
100
1000
未标记抗原浓度（ng/ml)
RIA竞争抑制曲线类型
注：横坐标为标记抗原（*Ag）的浓度
反应试剂
三种 标记抗原
二种 标记抗体
分离方法
抗原只需一个 抗原决定簇
一般需单抗作分离剂，抗原需两 个或两个以上决定簇
放射性检测操作规程
放射性检测操作规程一、操作目的本文档旨在规范和指导放射性检测工作，确保操作流程安全、准确、高效。
二、操作范围本操作规程适用于所有需要进行放射性检测的实验室及相关人员。
三、操作流程3.1 实验前准备1.检查实验室内的辐射防护装置是否完好，如铅墙壁、铅玻璃窗等；2.确认实验室内的紫外灯和排气设施是否正常工作；3.校准和检查放射性测量设备和仪器，并保证其准确性；4.准备好个人防护装备，包括实验服、手套、护目镜、口罩等。
3.2 样品准备1.根据实验要求选择合适的样品，并将其制备成适当的形式，如溶液、粉末等；2.对样品进行必要的预处理，如浸泡、过滤、稀释等；3.根据实验要求，标记好样品的信息，如样品编号、浓度等。
3.3 放射性检测操作1.将待检样品放置于放射性测量设备中，确保样品与探测器接触良好，并尽量保持放射性源到探测器的距离稳定；2.打开放射性测量仪器，根据设备的操作手册选择相应的测量模式和参数；3.等待放射性测量仪器完成稳定性检测，取得可靠、稳定的背景辐射计数；4.启动样品测量程序，记录测量时间，确保足够长的测量时间以提高测量准确度；5.测量完成后，关闭测量仪器，记录测量结果并存储相关数据；6.对放射性测量仪器进行清洁和维护，保持设备的正常运行状态。
3.4 实验后处理1.根据实验需求，对测量结果进行分析和计算，并生成相应的报告和图表；2.将测量结果及相关数据归档，并按照实验室内相关规定保存一定的时间；3.对实验室内的所有废弃物进行正确的处理和处置，确保不会对环境和人员造成危害；4.定期对放射性测量设备进行校准和维护，确保其准确性和可靠性。
四、安全注意事项1.操作人员必须佩戴个人防护装备，并按照实验室内相关规定进行辐射防护；2.禁止在无辐射防护措施的情况下进行放射性检测实验；3.在操作过程中，严禁食、饮、吸烟等，以避免污染食品和人员；4.尽量减少辐射源及放射性样品的接触时间，降低辐射剂量；5.对实验室内的辐射源和放射性样品进行正确的封存和存储，避免外泄；6.实验室内应设置明显的警示标志，提醒人员辐射源的存在。
肝纤维化五项
4. CIV(IV型胶原)：
[正常参考值] 血清： ﹤90.5ng/ml 。
[临床意义] ：CIV是基底膜的主要组成部分，正常肝脏内CIV主要分布于血管、胆 管的基底膜中，血清中的CIV来自于基底膜的降解，血中含量低。肝纤维化发生时， CIV最早增生，合成增加和降解加快，与层粘蛋白共同在肝窦中形成细管化，由于 基底膜的破坏和改变，血清中的CIV含量增高，鞭程度与肝纤维化程度成正比。故 血清CIV主要反映肝脏病变尤其是进展期肝硬化的变化。 1.慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎，肝硬化，肝癌血清中的CIV含量依次升高。 2.是诊断早期肝纤维化的较敏感的血清指标。 3.动态检测用于监测肝硬化的预后。 4.用于判断抗纤维化药物疗效。 5.且于酒精性肝炎后肝纤维化的诊断。 6.糖尿病微血管病变血中CIV明显升高。
以上提供的正常值范围， 以上提供的正常值范围，均为我所自身实验室使用 本所药盒设定的正常人范围。 本所药盒设定的正常人范围。 因检测分析方法、检测分析体系、实验条件、 因检测分析方法、检测分析体系、实验条件、技术 水平以及受检人群、受检时间之间存在差异， 水平以及受检人群、受检时间之间存在差异，所测 的正常值会存在一定的差异， 的正常值会存在一定的差异，所以本正常值仅作参 各实验室最好能建立自己的正常值范围。 考，各实验室最好能建立自己的正常值范围。
放射免疫操作方法
放射免疫操作方法
放射免疫是一种常用的实验技术，用于检测蛋白质、核酸或其他生物分子的相互作用。
下面是放射免疫的基本操作方法：
1. 标记放射性同位素：首先选择适当的放射性同位素进行标记，常用的有^32P、^35S、^125I等。
将待标记的生物分子与放射性同位素进行反应，使其被标记上放射性同位素。
这一步一般可以通过反应物之间的共价结合实现。
2. 分离标记产物：将标记产物与其他非标记物质进行分离。
这一步可以通过凝胶电泳、层析等分离技术实现。
目的是将未反应的放射性同位素和其他污染物去除，仅保留标记产物。
3. 洗脱：将分离得到的标记产物从凝胶或其他载体中洗脱出来，以得到纯净的标记物质。
洗脱的方法可以根据实验需求选择，如用缓冲液进行洗脱或用有机溶剂提取。
4. 量化标记物：将洗脱得到的标记产物与放射性计数器（如液闪计数器或闪烁计数器）结合，用于测量标记物质的放射性强度。
根据放射性强度的大小，可以推断标记物质在实验中的相对含量或与其他分子的相互作用强度。
5. 数据分析：通过分析放射计数器的读数，可以获取标记物质的相对含量或与其他分子的相互作用的强度。
常见的数据分析方法包括计数值的比较、计算相对
活性比或半衰期等。
需要注意的是，在进行放射免疫实验时，安全操作是非常重要的，应遵循辐射安全规范，采取合适的辐射防护措施，确保实验安全。
第八章放射免疫分析
（四）双抗体法
第一抗体再作为新的抗原注射入较大的动物（羊、马等），得到第二 抗体，分子量增大而沉淀，而F则留在上清液中。
优点：分离效果好，应用广 缺点：增加了第二抗体制备的时间，产生交叉免疫干扰的可能性增大
三、放射免疫测定的一般步骤
包括：样品处理、B与F分离，绘制标准曲线，放射性测定，结果计算
RIA：非均相免疫分析，需进行B与F的分离过程。
一、荧光标记物
（一）对荧光标记物的要求
1、分子结构中具有强吸收基团，并有较高的荧光量子产率， 发射波长最好在可见区。 2、分子结构中具有与药物连接的活性基团。 3、所标记的药物与抗体结合后，最好能改变其荧光性质。 4、所标记的药物不应该改变原有的抗原性质，因此连接部位 不应掩盖抗原决定簇。 5、理化性质稳定，具有水溶性
（一）样品处理
大多数样品可直接加入免疫反应液中测定，但有些样品则需经前处理， 方法与一般生物样品处理相同。
（二）绘制标准曲线
1、将不同量非标记抗原（待测药物标准品）分别加入含有等体积空白血清 的试管中，使成一定浓度梯度（n=5-8），与样品同时前处理。 2、将定量的标记抗原（标记药物）加入上述各管中。 3、将一定量的已稀释的抗体（抗血清）加入2处理后的管中 4、混匀，温育使免疫反应达到平衡。 5、加入分离剂，使B与F分离 6、测量放射性计数率，以B%（B/T）、B/F等为纵坐标，非标记抗原浓度为 横坐标，绘制标准曲线。
（二）常用的标记酶及标记方法
1、6-磷酸葡萄糖脱氢酶
2、溶菌酶
3、过氧化氢酶
4、β-半乳糖苷酶
等
标记方法与人工抗原的制备方法相同，可利用药物分子上 的羟基、羰基、氨基、酚羟基等与标记酶分子上的氨基、羧基 等连结。如碳化二亚胺法、混合酸酐法、戊二醛法等。
放射免疫分析法原理及操作注意事项
放射免疫分析法原理及操作注意事项放射免疫分析的原理：就是利用放射性核素标记抗原或抗体，然后与被测的抗体或抗原结合，形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的。
它又分为两种方法。
一、竞争性RIA，又称传统RIA主要特点：标记的是抗原。
其原理：未知抗原Ag+标记抗原Ag +已知定量抗体Ab标记抗原与抗体复合物AgAb+未知抗原与抗体复合物Ag Ab+游离标记抗原Ag （去除）（未知抗原多，标记抗原与定量抗体结合的复合物就少，表现为负相关）。
临床上甲胎蛋白（AFP），癌胚抗原（CEA），8 一微球蛋白（pz—MG ），铁蛋白（Fer），人绒毛膜促性腺激素p亚单位（HCG-13）等的检测都是竞争性RIA法原理。
竞争性RIA法，根据加样顺序与温育次数的区别，反应方式分三种：平衡法，将非标记抗原（被测物与标准品）、抗体、标记抗原依次加入反应管，混匀后一次性温育至反应达到动态平衡，再加分离剂分离B（复合物）与F（游离物）如：AFP，8一MG，Fer；顺序加样法，先将非标记抗原（被测物与标准品），与抗体在反应管内作第一次温育，待反应达到动态平衡后。
加入标记抗原，再作第二次温育后，分离B与F如：CEA；急诊检测法：为临床急需检测结果而提出的反应方式，不等RIA 反应达到动态平衡就终止反应；分离剂的选择有，PEG（聚乙二醇），第二抗体等。
现在一般采用的是：第二抗体与PEG合用的方法，称为双抗体一PEG法。
PEG原理：PEG浓度达到7 一9 时能使抗原一抗体复合物沉淀。
优点：经济，简便，通用。
缺点：重复性差，非特异性结合率高。
第二抗体：第一抗体是可与被测抗原进行特异结合的抗体，来自家兔或豚鼠。
用第一抗体为抗原，作用到羊，马身上，产生的抗第一抗体的抗体称第二抗体。
第二抗体与第一抗体在适当条件下发生特异性结合，生成分子量很大的免疫复合物（AgAb ×Ab ），能自然沉淀。
优点：分离效果好。
非特异性结合率低。
缺点：增加经费投入。
放射免疫测定法
1971年 Addison和Hales建立双位点或夹心IRMA
二、RIA原理
基本原理：放射性标记的已知抗原（*Ag）和非标记的 待检抗原（Ag）同时与限量的特异性抗体进行竞争结 合或竞争性抑制反应，通过测定结合（ *Ag-Ab ）的或 游离（ *Ag ）的放射性标记抗原的量，根据标准曲线 即可推算出被测物含量的一种超微量分析技术。
双抗体法
固相法
入第二抗体，形成第二抗体复合物，离心
抗体或抗原固相化，免疫反应在固相载体上完成后洗涤
SPA法
金黄色葡萄球菌A蛋白促使AgAb较快速度沉淀
三、RIA法标准曲线
标记抗原与被测物质间的数量关系可以用抑制曲线来表示。
这种曲线表示了结合抑制的程度与抑制物浓度两者之间的 特定函数关系，也称为剂量反应曲线。
RAI属超微量分析技术，常用于胰岛素、生长激素、药 物等微量物质的测定。
Ag
*Ag
Ab
Bound B
Free F
0.67 0.33
B/F
2
0.50
0.50
1
0.33
0.67
0.5
0.17
0.83
0.2
竞争放射分析原理示意图
常用标记放射性同位素及其性质
放射性元素 半衰期 射线种类及能量（百万电子伏特）
/ %
50 30 10 0 1 10 100 1000
未标记抗原浓度（ng/ml)
RIA竞争抑制曲线类型
注：横坐标为标记抗原（*Ag）的浓度
四、建立放射免疫分析方法的必备条件
对标准抗原的基本要求
(1)标准抗朱与待测抗原的免疫性必须一致。
(2)抗原必须纯度高。 (3)标准抗原的量必须准确。
放射免疫法步骤
放射免疫法步骤
放射免疫法是一种常见的实验室技术，用于检测体液中的特定蛋白质或抗原，以及血
清中的特定抗体。
该方法利用放射性同位素的放射性来测量抗原-抗体复合物的形成，从
而确定样品中是否存在特定的分子。
1. 准备试验物品。
首先，需要准备样品或试剂以进行测试。
这些物品包括抗原、抗体和放射性同位素标
记剂。
标记剂可以标记抗原或抗体中的组分。
通常使用的放射性同位素有碘-125、碘-131、氚等。
2. 标记抗原或抗体。
将抗原或抗体标记为放射性同位素标记物，使它们可以轻松地在样品中被检测到。
这
个过程通常包括将标记剂与抗原或抗体混合，并通过一系列的化学反应处理来标记它们。
3. 制备样品。
样品可以是血清、尿液、唾液、细胞上清液等，必须经过净化和处理，以减少其他干
扰因素的影响。
4. 混合样品和标记物。
将样品与标记物混合，然后将其放入耐放射性容器中，以便进行进一步的处理和测量。
在此过程中，标记物将结合到抗原或抗体上，形成可测量的复合物。
5. 记录结果。
使用放射计测量复合物的放射性。
通过测量复合物的放射性强度，可以确定在样品中
的抗原或抗体的存在情况。
放射免疫法被广泛用于许多分子生物学和免疫学的研究中，例
如测定激素、癌细胞标志物和传染病病原体抗体等。
综上所述，放射免疫法是一种精确的实验室技术，可以用于检测样品中特定的抗原或
抗体。
该技术的步骤简单，但需要特殊的实验室设备和安全规范，以避免放射性同位素引
起的危险。
简述放射免疫分析方法的基本流程图
简述放射免疫分析方法的基本流程图English Answer：Radioimmunoassay (RIA) is a technique used to measure the concentration of a specific antigen or antibody in a sample. The basic procedure of RIA involves the following steps:1. Preparation of radiolabeled antigen or antibody: The antigen or antibody of interest is labeled with a radioactive isotope, such as 125I or 3H. This labeled antigen or antibody is called the tracer.2. Incubation of the tracer with the sample: The tracer is incubated with the sample containing the unknown amount of antigen or antibody. During this incubation, the tracer competes with the unlabeled antigen or antibody in the sample for binding to a limited number of binding sites on a solid-phase support, such as a microplate or beads.3. Separation of bound and free tracer: After the incubation, the bound and free tracer are separated. This can be done by centrifugation, filtration, or precipitation.4. Quantification of the bound tracer: The amount of bound tracer is measured using a scintillation counter or gamma counter. The amount of bound tracer is inversely proportional to the concentration of the antigen orantibody in the sample.Based on the amount of bound tracer, a standard curve can be constructed by plotting the known concentrations of antigen or antibody against the corresponding counts per minute (CPM). The concentration of the unknown antigen or antibody in the sample can then be determined byinterpolating its CPM value on the standard curve.RIA has a high degree of sensitivity and specificity, making it a valuable tool for quantifying antigens and antibodies in various biological samples. It has beenwidely used in research, clinical diagnostics, and drug development.中文回答：放射免疫分析法（RIA）是一种用于测量样品中特定抗原或抗体浓度的技术。
放射免疫分析法的建立-2
放射免疫分析法的建立-2（３）分离B与F：每管加入2%加膜活性炭溶液300μl，摇匀，立即离心，去上清，测沉淀（F）的CPM数。
（二）顺序饱和加样程序1、基本原理先将标准物或血样品与抗血清混匀，免疫反应6～24h，使抗原与抗体充分结合，甚至达到平衡，然后再加入标记抗原，与抗体反应12～24h，最后分离B与F，这称为顺序饱和分析法。
应用顺序饱和加样，可以提高测定方法的灵敏度。
Utiger在做人促甲状腺激素（TSH）放射免疫分析时，将标记物延至第2天加入，发现其灵敏度增加两倍。
如果缩短最后的温育时间，仍可取得满意的结果。
所以一般认为，在顺序饱和加样中，第1次温育时间可以长，而第2次温育时间要短，这样可以提高灵敏度。
但也有相反的意见，认为顺序饱和加样，是使用过量抗体，会使灵敏度受到一定影响。
如果使用抗体不过量，温育时间缩短，在抗原和抗体结合未达到平衡饱和时就加入标记物，这样既不影响加灵敏度，反而比较稳定，甚至可提高灵敏度。
2、加样程序以人血浆精氨酸加压素RIA测定程序为例（直接测定）。
（１）加样（单位μl；总反应体积600μl）标准曲线血浆TNSBBo1Pg5Pg10Pg50Pg 100Pg 500Pg管号12345678910AVP标准液///100100100100100100/样品/////////300无肽血浆/300300300300300300300300/AVP抗血清//100100100100100100100100缓冲液/200100//////100在4。
C下孵育12～24h125I-AVP100100100100100100100100100100（２）孵育：4℃，24h。
（３）分离B与F。
无肽血浆，用于血浆的直接测定。
其制备方法为：在电磁搅拌下，抽取2%加膜活性炭溶液5ml，共两管，离心、去上清。
血浆5ml，倒入上述活性炭管中，加盖，充分振荡10min，离心，上清倒入上述另一活性炭管中，振荡10min，再离心，取上清，即无肽血浆。
放射性免疫测定
放射性免疫测定法RIA是由Y alow和Berson于1959年创建的一种体外放射分析技术。
它是综合应用放射性核素的灵敏性和免疫反应的特异性的一种超微量测定方法。
它具有灵敏度高、特异性强、操作简便、反应范围广等优点。
目前已知可用本方法测定激素、多肽、蛋白质、维生素、药物和其他生物活性物质300余种。
其基本原理是：RIA是在体外条件下，由非标记抗原（待测物质）与定量的标记抗原对限量的特异性抗体（一抗）的竞争性抑制结合反应。
其反应可用下图表示：在上述反应中，参加反应的有标记抗原、非标记抗原（标准抗原或待测抗原）和特异性抗体。
标记抗原与非标记抗原和特异性抗体结合的能力被认为是相同的。
标记抗原与特异性抗体结合形成标记抗原抗体复合物，非标记抗原与特异性抗体结合形成非标记抗原抗体复合物。
标记抗原与非标记抗原之和多于特异性抗体的结合位点。
因此，在反应系统中，标记抗原与非标记抗原彼此竞争着与限量的抗体起结合反应，分别形成相应的复合物。
当反应达到动态平衡时，标记抗原抗体复合物的生成量受非标记抗原数量的制约。
非标记抗原数量增加时，就会抑制标记抗原与抗体的结合，标记抗原抗体复合物的生成量就减少，未与抗体结合的标记抗原（即游离部分）的数量就增加。
这种特异性的竞争性抑制的数量关系就是放射免疫分析的定量基础。
因此放射免疫分析不是直接测定反映系统中被测物质的量，而是测定标记抗原抗体复合物或游离的标记抗原的放射性来间接求得的。
补充几点我的实验体会：1、放免法主要是用来检测激素的，如促甲状腺素，促性腺激素等等。
2、当今做放免法已经变得非常简单，购买试剂盒可以短时间快速解决所有问题。
使用新型的碘125标记，辐射，对人体的伤害也变得微乎其微。
唯一一个限制其大规模使用的因素是需要有一台检测放射性的机器，大概要十几万人民币。
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4．1联机处理：由电脑自动处理结果。
4．2结合百分率计算：B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×100%。
4．3标准范围：95-420;灵敏度0.42ng/ml：批内变异系数<10%；批间变异系数<15%。
4．4最高结合率：一般为30-50，非特异性结合率NSB：通常5-10
3．4除总管T管和NSB管外其余各管内加入HA抗体100µl。
3．5在所有管内加入125I HA100µl
3．6充分混匀，置37℃水浴60分钟。
3．7除T管外，所有管内加入结合蛋白抗体100µl，充分混匀，置37℃水浴30分钟。然后加第二抗体100µl，充分混匀，置37℃水浴30分钟。
3．8在4000rpm下离心15分钟，吸弃上清液，在r计数仪器上测定各管沉淀的放射性的计数。
2．测定试剂及批号：上海海研医学生物技术有限公司。
3．操作步骤：
3．1按说明书配制试剂，标本离心出血清。
3．2取圆底塑料管，标号包括T管、NSB管、S0管、质控管、S1-S6管和样品管。
3．3在NSB管内加入零标准液150µl、质控管内加质控液50µl、标准管内加标准液50µl、样品管内加入待测样品50µl。
4．5标准曲线回归参数：值要稳定R>0.99
4．6正常参考范围：57±27ng/ml
5．5注意事项：（仅供体外诊断用，切勿口服）
5. 1应避免各种试剂反复冻融，否则活性下降。
5. 2试剂手到后应避光贮存于2-8℃
5. 3使用前所有试剂平衡至室温
5. 4测定药盒4℃保存，有效期30天。
5. 5吸弃上清液时，注意不得损失沉淀物，否则将明显影响测定结果。
单位名称：贵港市人民医院免疫实验室
文件名称：HA放射免疫测定标准操作流程
文件编号：
制订日期：年月日
第1版，第1页，共1页
关键词：HA放射免疫测定
编写人
审核人
批准人
生效日期
年月日
Ⅰ.目的：严格按RIA操作规程，为检测人员发出准确报告提供依据。
Ⅱ.范围：适用于放射免疫手工操作。
Ⅲ.规程：
1．责任人：放免室技术人员。