放射免疫分析资料讲解
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放射免疫分析
Radioimmunoassay
一、原理：
竞争结合
Ag + Ab +
* Ag
AgAb + Ag
* AgAb + * Ag * Ag和 Ab量恒定
+
—6 X100=75%
8
+
—4 X100=50%
8
+
—2 X100=25%
8
+
—1 8
X100=12.5%
结论
* AgAb复合物的量取决于Ag的量 Ag量越大， * AgAb量越少 Ag量越小， * AgAb量越大 测量* AgAb量或测量多余* Ag量可推算出
双抗体法
特点： 分离完全，非特异结合小，环境影响小，效价 高，但成本高
沉淀法 聚乙二醇（w=6000）
特点： 快速，价廉，来源方便，受环境影响大
常用液相分离技术（续）
吸附法 吸附游离部分，适用于分离小分子 游离抗原。活性炭、纤维素粉末
特点 快速、简便、准确性差
盐析法 饱和硫酸胺、硫酸钠 固相分离技术，按材料不同，可分为试管
Ag量
二、测量步骤
恒量的* Ag、Ab加入反应管中 加入待测样品、或标准品（已知浓度） 37℃或4 ℃温育 加入分离剂分离结合及游离部分 测定以总放射性为分母，测定* AgAb 为分
子，计算结合%，以结合率为纵坐标，浓 度为坐标，制作标准曲线 待测样品的结合率从标准曲线上求出浓度
80 70 60 50
非放射性体外分析技术
酶免疫分析 发光Biblioteka Baidu疫分析
化学发光免疫分析 酶放大化学发光免疫分析 电化学放光免疫分析
荧光免疫分析
时间分辨荧光免疫分析或解离增强镧系荧光免疫分析 BCPDA强荧光螯合物的时间分辨荧光免疫分析 酶促放荧光免疫分析 微粒子酶荧光免疫分析 荧光偏振免疫分析
金属离子免疫分析
法、颗粒法、小盘法、纸片法
四、放免分析的优点
灵敏度高 特异性强 精确度高 用血量少 体外测量
单位换算
1 g=1000mg 1mg=1000µg 1µg=1000ng 1ng=1000pg
非放射性体外分析技术
非同位素标记的条件
灵敏度 结合特性 均一性 稳定性 环境因素的不敏感性 临床应用 安全性 应用性
%
结 合
40 30 20 10
02 4
8 16 32 64 128
浓度
三、放免分析基本条件
标准品 标记抗原 特异抗体 分离剂——分离结合与游离部分
分离剂要求
快速而完全分离 操作简便、来源容易、价格便宜 不受血清、外界条件及其它试剂的干扰 适用于任何容积的反应液 非特异结合率小
常用液相分离技术
Radioimmunoassay
一、原理：
竞争结合
Ag + Ab +
* Ag
AgAb + Ag
* AgAb + * Ag * Ag和 Ab量恒定
+
—6 X100=75%
8
+
—4 X100=50%
8
+
—2 X100=25%
8
+
—1 8
X100=12.5%
结论
* AgAb复合物的量取决于Ag的量 Ag量越大， * AgAb量越少 Ag量越小， * AgAb量越大 测量* AgAb量或测量多余* Ag量可推算出
双抗体法
特点： 分离完全，非特异结合小，环境影响小，效价 高，但成本高
沉淀法 聚乙二醇（w=6000）
特点： 快速，价廉，来源方便，受环境影响大
常用液相分离技术（续）
吸附法 吸附游离部分，适用于分离小分子 游离抗原。活性炭、纤维素粉末
特点 快速、简便、准确性差
盐析法 饱和硫酸胺、硫酸钠 固相分离技术，按材料不同，可分为试管
Ag量
二、测量步骤
恒量的* Ag、Ab加入反应管中 加入待测样品、或标准品（已知浓度） 37℃或4 ℃温育 加入分离剂分离结合及游离部分 测定以总放射性为分母，测定* AgAb 为分
子，计算结合%，以结合率为纵坐标，浓 度为坐标，制作标准曲线 待测样品的结合率从标准曲线上求出浓度
80 70 60 50
非放射性体外分析技术
酶免疫分析 发光Biblioteka Baidu疫分析
化学发光免疫分析 酶放大化学发光免疫分析 电化学放光免疫分析
荧光免疫分析
时间分辨荧光免疫分析或解离增强镧系荧光免疫分析 BCPDA强荧光螯合物的时间分辨荧光免疫分析 酶促放荧光免疫分析 微粒子酶荧光免疫分析 荧光偏振免疫分析
金属离子免疫分析
法、颗粒法、小盘法、纸片法
四、放免分析的优点
灵敏度高 特异性强 精确度高 用血量少 体外测量
单位换算
1 g=1000mg 1mg=1000µg 1µg=1000ng 1ng=1000pg
非放射性体外分析技术
非同位素标记的条件
灵敏度 结合特性 均一性 稳定性 环境因素的不敏感性 临床应用 安全性 应用性
%
结 合
40 30 20 10
02 4
8 16 32 64 128
浓度
三、放免分析基本条件
标准品 标记抗原 特异抗体 分离剂——分离结合与游离部分
分离剂要求
快速而完全分离 操作简便、来源容易、价格便宜 不受血清、外界条件及其它试剂的干扰 适用于任何容积的反应液 非特异结合率小
常用液相分离技术