放射免疫测定法
抗核抗体的检测方法及原理
抗核抗体的检测方法主要包括间接免疫荧光法、放射免疫法、ELISA测定法和免疫印迹测定法。
以下是这些方法的简要介绍和原理：
1.间接免疫荧光法：此方法是检测抗核抗体的常用方法之一。
原理是将待测标本与细胞底物片（如HEp-2细胞）的相应抗原进行反应，然后加入
荧光素标记的抗人免疫球蛋白抗体（通常为抗IgG抗体），形成抗原-抗体-荧光二抗的复合物。
通过荧光显微镜观察，可以判断待测标本中是否存在针对细胞相关抗原的自身抗体。
2.放射免疫法：此方法常用于检测抗DNA抗体。
原理是用同位素标记DNA，与被检血清中的抗DNA抗体结合，然后通过沉淀和对比沉淀物与上
清液中的放射活性，得到DNA的结合活性。
结合率高于一定值（通常为20%）则判断为阳性。
3.ELISA测定法：即酶联免疫吸附法，是一种常用的固相酶免疫测定方法。
原理是将抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在
固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗去，最后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。
4.免疫印迹测定法：此方法是将混合的抗原作为凝胶电泳分离，然后转印到硝酸纤维素的薄膜上，再用标记抗体进行检测和分析。
以上各种方法都有其特点和适用范围，可以根据实验需求和条件选择合适的方法进行检测。
植物激素的测定方法
植物激素的测定方法植物激素是一类由植物自身合成并参与生长发育调控的活性物质，对植物的生长发育起着重要作用。
因此，准确测定植物激素的含量对于研究植物生长发育调控机制具有重要意义。
本文将介绍几种常用的植物激素测定方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前应用最广泛的植物激素测定方法之一。
该方法基于植物激素在高效液相色谱柱上的保留时间和峰面积，通过与已知浓度的标准品比较，可以计算出待测样品中植物激素的含量。
高效液相色谱法具有分离效果好、分析速度快、准确度高的优点，但需要专用的仪器设备，操作较为复杂。
二、气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的植物激素测定方法。
该方法通过将待测样品中的植物激素转化为易挥发的衍生物，然后在气相色谱柱上进行分离和定量分析。
气相色谱法具有测定灵敏度高、分离效果好的特点，但需要对样品进行预处理，并且对仪器的稳定性要求较高。
三、酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法是一种常用的免疫学测定方法，也可以用于测定植物激素的含量。
该方法通过将植物激素与特异性抗体结合，然后再用酶标记的二抗进行检测，最后通过比色反应或发光反应来测定植物激素的含量。
酶联免疫吸附法具有操作简便、成本较低的优点，但需要特异性较好的抗体。
四、放射免疫测定法（RIA）放射免疫测定法是一种使用放射性同位素标记的植物激素进行测定的方法。
该方法通过将放射性同位素标记的植物激素与待测样品中的植物激素结合，然后通过放射性计数来测定植物激素的含量。
放射免疫测定法具有灵敏度高、测定范围广的特点，但需要使用放射性同位素，存在辐射危险。
五、质谱法（MS）质谱法是一种高灵敏度的分析方法，可以用于测定微量的植物激素。
该方法通过将待测样品中的植物激素通过质谱仪进行分子质量分析，从而测定植物激素的含量。
质谱法具有高灵敏度、高分辨率的特点，但需要专用的仪器设备和较高的技术水平。
植物激素测定方法有高效液相色谱法、气相色谱法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法和质谱法等。
放射免疫检定法
放射免疫检定法一、引言放射免疫检定法（radioimmunoassay，简称RIA）是一种利用放射性同位素标记物质和抗原抗体相互作用进行定量分析的方法。
它具有高度的灵敏度、特异性和准确性，在生物医学研究和诊断中得到广泛应用。
本文将详细介绍放射免疫检定法的原理、操作步骤及其在临床上的应用。
二、原理放射免疫检定法基于抗原与抗体相互结合的特异性，通过测量标记物质（通常是放射性同位素标记的抗原或抗体）与未标记物质（待测物质）竞争结合的程度，来定量测定待测物质的浓度。
该方法主要包括以下步骤：1.样品准备：待测物质需要提取和纯化，以获得精确的浓度。
2.标记物质制备：将待测物质标记上放射性同位素。
3.抗体制备：获得特异的抗体，可通过动物免疫、体外培养等方法获得。
4.标样制备：准备一系列已知浓度的标准样品。
5.标准曲线绘制：将标准样品与已知浓度相对应的竞争剂量进行测定，得到标准曲线。
6.待测样品测定：将待测样品与抗体、标记物质一起孵育，再与固相支持物接触，随后进行放射计数，得到计数值。
7.计算浓度：根据标准曲线上待测样品的计数值，计算待测物质的浓度。
三、操作步骤放射免疫检定法的操作步骤如下：1.准备所需试剂和设备：包括抗体、放射性同位素、标准样品、试剂盒、储存条件等。
2.标记放射性同位素：将待测物质标记上放射性同位素，使其具有放射性活性。
3.样品准备：通过提取和纯化方法，获得待测物质的准确浓度。
4.孵育：将待测样品与抗体和标记物质搅拌混合，使其充分反应。
5.分离：通过固相支持物将未结合的标记物质与结合物质分离开来。
6.放射计数：将分离后的结合物质放入放射计数器中，进行计数。
7.数据处理：根据标准曲线上待测样品的计数值，计算待测物质的浓度。
四、应用放射免疫检定法在临床医学中有着广泛的应用，主要应用于以下方面：1.肿瘤标志物检测：放射免疫检定法能够对血清或尿液中的肿瘤标志物进行测定，用于肿瘤的早期诊断、疗效评价和复发监测。
血清铁蛋白检测方法
血清铁蛋白检测方法
目前常见血清铁蛋白检测方法主要包括以下几种：
1. 放射免疫测定法：这是一种经典的检测方法，利用放射性同位素标记的抗体与血清中的铁蛋白结合，通过测定放射性计数来推算样本中铁蛋白的浓度。
2. 酶免疫测定法：例如酶联免疫吸附试验（ELISA），通过抗原-抗体反应形成复合物，再利用酶标记物显色反应来定量分析血清铁蛋白水平。
3. 免疫比浊法：主要是基于抗原抗体反应引起溶液浊度的变化，通过透射比浊仪测量反应体系吸光度的变化，从而间接得出铁蛋白的含量。
4. 化学发光免疫分析法：使用化学发光作为信号输出，通过双抗体夹心法或其他免疫反应机制，使发光物质与铁蛋白结合，通过检测发光强度来确定铁蛋白含量，这种方法灵敏度高、特异性强，是目前常用的自动化检测手段，例如应用在贝克曼公司的ACESS全自动化学发光免疫分析仪上。
5. 免疫印迹法：虽然较少用于日常血清铁蛋白的测定，但在某些情况下也可能用于科研或特定条件下确认结果。
近几年随着检测技术的进步，现在临床实验室更多地采用免疫比浊法和化学发光免疫分析法进行血清铁蛋白的常规检测，其操作简便、结果准确、速度快，且能适应大规模自动化检测的需求。
希望我的回答能帮到你。
血清胃蛋白酶原的检测方法
血清胃蛋白酶原的检测方法血清胃蛋白酶原（PG I）的检测方法通常包括以下几种：
1. 酶联免疫吸附法（ELISA），这是一种常用的检测方法，通过将样本中的胃蛋白酶原与特定的抗体结合，然后使用酶标记的二抗来检测结合情况，从而定量测定血清中的胃蛋白酶原水平。
2. 放射免疫测定法（RIA），这种方法利用放射性同位素标记的抗体与胃蛋白酶原结合，然后通过放射性测定仪器来测定结合情况，从而定量测定血清中的胃蛋白酶原水平。
3. 免疫荧光法（FIA），该方法利用荧光染料标记的抗体与胃蛋白酶原结合，然后使用荧光显微镜或荧光流式细胞仪来观察和测定结合情况，从而定量测定血清中的胃蛋白酶原水平。
4. 免疫层析法，这种方法利用免疫层析柱将血清中的胃蛋白酶原与特异性抗体结合，然后通过柱后检测来定量测定胃蛋白酶原的水平。
5. 质谱法，质谱法是一种高灵敏度的检测方法，通过质谱仪器
对血清中的胃蛋白酶原进行分析，可以准确地测定其水平。
这些方法各有优缺点，选择适合的检测方法需要根据实际情况和实验室条件进行综合考虑。
在进行血清胃蛋白酶原的检测时，需要严格按照操作规程进行，确保结果的准确性和可靠性。
检验科常见肿瘤标志物检测方法
检验科常见肿瘤标志物检测方法肿瘤标志物检测是一种通过测定人体内特定蛋白质、酶或其他相关物质的浓度或活性水平来筛查、诊断和监测肿瘤的方法。
在检验科中，肿瘤标志物检测方法被广泛应用于临床实践中，对于早期发现和诊断肿瘤具有重要意义。
本文将介绍检验科常见的肿瘤标志物检测方法，以提供相关医学专业人员和科研人员参考。
一、免疫测定法免疫测定法是目前应用最为广泛的肿瘤标志物检测方法之一。
它基于人体免疫系统产生对抗肿瘤细胞的抗体原理，通过测定血液或体液中特定抗原与抗体的结合程度来确定肿瘤标志物是否存在。
常用的免疫测定法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）、免疫荧光法等。
二、核酸检测法核酸检测法是一种通过检测肿瘤细胞或肿瘤相关基因的异常变化来判断肿瘤存在与否的方法。
常见的核酸检测法包括聚合酶链式反应（PCR）、荧光原位杂交（FISH）、基因芯片技术等。
相比于其他方法，核酸检测法具有更高的灵敏度和特异性，可以提供更准确的肿瘤诊断结果。
三、蛋白质质谱法蛋白质质谱法是一种通过分析体液中蛋白质的质谱图谱来鉴定和定量肿瘤标志物的方法。
该方法主要通过样本前处理、质谱分析和数据分析三个步骤进行。
蛋白质质谱法具有高通量、高灵敏度和高特异性的特点，适用于多种肿瘤标志物的检测和筛查。
四、细胞生物学方法细胞生物学方法是一种通过观察和分析肿瘤细胞的形态学特征、增殖、分化以及遗传学变化来确定肿瘤的存在和发展情况的方法。
常用的细胞生物学方法包括细胞培养、细胞遗传学分析、细胞增殖和凋亡检测等。
细胞生物学方法在肿瘤的早期筛查和疾病的进展监测中具有重要作用。
五、图像学检测法图像学检测法是一种通过医学影像学技术来观察和评估肿瘤的生物学特征和形态学变化的方法。
常见的图像学检测法包括X射线、CT扫描、MRI等。
这些技术能够提供肿瘤的位置、大小、形状等信息，辅助临床医生进行肿瘤的诊断和治疗方案选择。
六、流式细胞术流式细胞术是一种通过激光和电子学技术来检测和分析肿瘤细胞的多参数数据的方法。
放射免疫分析测定方法
放射免疫分析测定方法用放射免疫分析进行测定时分三个步骤，即抗原抗体的竞争抑制反应、B和F的分离及放射性的测量。
（一）抗原抗体反应将抗原（标准品和受检标本）、标记抗原和抗血清按顺序定量加入小试管中，在一定的温度下进行反应一定时间，使竞争抑制反应达到平衡。
不同质量的抗体和不同含量的抗原对温育的温度和时间有不同的要求。
如受检标本抗原含量较高，抗血清的亲和常数较大，可选择较高的温度（15～37℃）进行较短时间的温育，反之应在低温（4℃）作较长时间的温育，形成的抗原抗体复合物较为牢固。
（二）B、F分离技术在RIA反应中，标记抗原和特异性抗体的含量极微，形成的标记抗原抗体复合物（B）不能自行沉淀，因此需用一种合适的沉淀剂使它彻底沉淀，以完成与游离标记抗原（F）的分离。
另外对小分子量的抗原也可采取吸附法使B与F分离。
1．第二抗体沉淀法这是RIA中最常用的一种沉淀方法。
将产生特异性抗体（第一抗体）的动物（例如兔）的IgG免疫另一种动物（例如羊），制得羊抗兔IgG血清（第二抗体）。
由于在本反应系统中采用第一、第二两种抗体，故称为双抗体法。
在抗原与特异性抗体反应后加入第二抗体，形成由抗原－第一抗体－第二抗体组成的双抗体复合物。
但因第一抗体浓度甚低，其复合物亦极少，无法进行离心分离，为此在分离时加入一定量的与一抗同种动物的血清或IgG，使之与第二抗体形成可见的沉淀物，与上述抗原的双抗体复合物形成共沉淀。
经离心即可使含有结合态抗原（B）的沉淀物沉淀，与上清液中的游离标记抗原（F）分离。
将第二抗体结合在颗粒状的固相载体之上即成为固相第二抗体。
利用固相第二抗体分离B、F，操作简便、快速。
2．聚乙二醇（PEG）沉淀法最近各种RIA反应系统逐渐采用了PEG 溶液代替第二抗体作沉淀剂。
PEG沉淀剂的主要优点是制备方便，沉淀完全。
缺点是非常特异性结合率比用第二抗体为高，且温度高于30℃时沉淀物容易复溶。
3．PR试剂法是一种将双抗体与PEG二法相结合的方法。
放射科技术在放射免疫测定中的应用
新型放射性同位素开发及应用前景
01 02
新型放射性同位素的研发
随着科技的进步，越来越多的新型放射性同位素被开发出来，如锕系元 素等，这些同位素具有更长的半衰期和更低的辐射危害，为放射免疫测 定提供了更多的选择。
放射性同位素标记技术的发展
放射性同位素标记技术是放射免疫测定的核心技术之一，未来将继续发 展更高效、更特异的标记方法，提高测定的准确性和灵敏度。
生物医学研究
放射免疫测定可用于研究生物活性物质的分布、代谢和排泄等过程， 揭示生命活动的本质和规律。
药物研发
放射免疫测定可用于药物研发过程中的药物筛选、药代动力学研究和 临床试验等环节，为新药研发提供有力支持。
环境科学
放射免疫测定可用于环境监测和污染治理等领域，如放射性污染物的 定量测定和环境样品中微量有害物质的检测等。
02
放射科技术基础
Chapter
放射性同位素及其衰变规律
01
02
03
放射性同位素
具有不稳定原子核并自发 地放射出射线的同位素， 如碳-14、氢-3等。
衰变规律
放射性同位素衰变遵循指 数衰变规律，其衰变速度 与剩余原子核数量成正比 。
半衰期
放射性同位素衰变至原有 数量一半所需的时间，具 有恒定的物理特性。
放射科技术在放射免疫测定中 优势与局限性
Chapter
优势分析
高灵敏度
高特异性
放射科技术能够检测到极低浓度的放射性 同位素，使得放射免疫测定具有高灵敏度 ，能够检测到极低浓度的生物标志物。
放射免疫测定利用抗原-抗体反应的特异性 ，结合放射性同位素的检测，确保测定的 准确性和特异性。
宽测量范围
自动化程度高
维生素d检测方法
维生素d检测方法
维生素D检测方法根据需要检测的维生素D形式可以分为两种：维生素D2（ergocalciferol）和维生素D3（cholecalciferol）。
1. 高效液相色谱法（HPLC）：这是目前最常用的检测维生素D的方法之一。
首先通过样品预处理，提取维生素D，并将其转化为可测量的形式。
然后使用高效液相色谱仪进行分离和测量。
这种方法可以同时测量维生素D2和维生素D3。
2. 放射免疫测定法（RIA）：这是一种常用的测量总维生素D浓度的方法。
首先将样品中的维生素D与放射性荧光标记的维生素D结合。
然后使用放射免疫法来测量标记维生素D的浓度。
这种方法不区分维生素D2和维生素D3的浓度，只测量它们的总和。
3. 液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）：这是一种高灵敏度和高选择性的测量方法。
首先通过样品准备，提取和预处理维生素D。
然后使用液相色谱技术实现维生素D的分离。
最后使用串联质谱仪来检测和定量分离的维生素D2和维生素D3。
这些方法通常需要在实验室环境中进行，并由专业人员操作。
在进行维生素D 检测前，应选择适当的方法，并确保样品的准备和保存符合要求，以获得准确的测量结果。
激素的放射免疫测定技术
试剂盒组成
T标准品：0、10、50、100、250、750、2000ng/dl。
抗体：兔抗人T和E2抗体的磷酸盐液体。
125I标记物：含有125I标记的T和E 磷酸盐液体。 2
分离剂：驴抗兔抗体血清和聚乙二醇溶液。
三、测定项目
血浆睾酮（Testosterone, T） 血浆雌二醇（17β-Estradiol, E2） 血浆孕酮（Progesterone, P）
抽吸 将离心 好的试 管中的 液体抽 吸干净 ，不要 抽到底100
15
16 17 18 19 20 21-n
2000ng/dl 50 2000ng/dl 50 100 样品
实验前进行充分的准备工作，除了检查仪器设备、物品外，根 据样品量，准备相应的测定管，编号 实验前，将血清、试剂盒等放在室温下解冻和平衡。 按照样品管编号，将血浆样品加入到试管中，加样顺序按照实 验方案进行。 制备标准曲线：按照改进的方法制备标准曲线，注意标准曲线 点的扩展。
04
但是，与非放射标记方法相比（酶免疫测定），该方法对放射防 护要求较高，必须有专门实验室和放射废物处理条件。
放射性物质的危害
放射源发射出来射线具有一定能量，它可以破坏细胞组 织，从而对人体造成伤害。当人受到大量射线照射时， 会产生诸如头昏乏力、食欲减退、恶心、呕吐等症状， 严重时会导致机体损伤；当人只受到少量射线照射，一 般不会有不适症状发生，也不会伤害身体。
DHP
采用活体或组织对 某一激素的生理学 反应检测激素的存 在和含量，精确性 比较差。
提取激素，然后利用 ELISA 激素结构中某些基团 或化学试剂的特殊反 应，根据反应的特点 3 化学测定法 1 用比色、层析、电泳 2 4 法检测激素含量。这 生物测定法 种方法的灵敏度和特 异性较低，测定步骤 RIA 繁琐
胰岛素的测定方法
胰岛素的测定方法胰岛素是由胰腺分泌的一种重要激素，对于调节血糖水平和能量代谢有着重要的作用。
胰岛素的测定方法对于糖尿病的诊断和治疗具有重要意义。
目前常见的胰岛素测定方法包括放射免疫测定法、酶联免疫吸附测定法、生物传感器测定法等。
本文将介绍这些测定方法的原理、操作步骤和应用范围，以期帮助读者深入了解胰岛素的测定原理和技术方法。
一、放射免疫测定法放射免疫测定法是一种常用的胰岛素测定方法，其原理是利用放射性同位素标记的胰岛素，通过测量放射性同位素的放射量来确定样品中胰岛素的浓度。
具体操作步骤为：首先将样品和标准品和放射性同位素标记的抗胰岛素抗体混合，形成抗原-抗体复合物；然后用固相吸附体将未结合的标记物分离出来；最后通过测量残余放射性同位素的放射量，计算出样品中胰岛素的浓度。
这种方法的优点是灵敏度高，测定范围广，但其缺点是操作步骤复杂，需要使用放射性物质，存在一定的安全风险。
二、酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法是另一种常用的胰岛素测定方法，其原理是利用酶标记抗体来测定胰岛素的浓度。
具体操作步骤为：首先将样品和酶标记的抗胰岛素抗体结合，形成抗原-抗体复合物；然后用底物特定的底物添加到反应系统中，通过测量底物的光密度来确定样品中胰岛素的浓度。
这种方法的优点是操作简单、快速，但其缺点是灵敏度较低，测定范围相对窄。
三、生物传感器测定法生物传感器测定法是近年来发展起来的一种新型胰岛素测定方法，其原理是利用生物传感器来测定胰岛素的浓度。
生物传感器是一种利用生物分子如酶、抗体等对特定物质进行高效识别和转换的传感器，通过测量生物传感器与目标物质结合后产生的生物化学信号来确定目标物质的浓度。
这种方法的优点是灵敏度高、操作简单，并且不需要使用放射性物质，存在安全风险。
胰岛素的测定方法涉及放射免疫测定法、酶联免疫吸附测定法和生物传感器测定法等多种技术手段。
每种测定方法都有其特点和适用范围，读者可以根据实际需要选择合适的方法进行胰岛素测定。
放射免疫测定法
1971年 Addison和Hales建立双位点或夹心IRMA
二、RIA原理
基本原理：放射性标记的已知抗原（*Ag）和非标记的 待检抗原（Ag）同时与限量的特异性抗体进行竞争结 合或竞争性抑制反应，通过测定结合（ *Ag-Ab ）的或 游离（ *Ag ）的放射性标记抗原的量，根据标准曲线 即可推算出被测物含量的一种超微量分析技术。
双抗体法
固相法
入第二抗体，形成第二抗体复合物，离心
抗体或抗原固相化，免疫反应在固相载体上完成后洗涤
SPA法
金黄色葡萄球菌A蛋白促使AgAb较快速度沉淀
三、RIA法标准曲线
标记抗原与被测物质间的数量关系可以用抑制曲线来表示。
这种曲线表示了结合抑制的程度与抑制物浓度两者之间的 特定函数关系，也称为剂量反应曲线。
RAI属超微量分析技术，常用于胰岛素、生长激素、药 物等微量物质的测定。
Ag
*Ag
Ab
Bound B
Free F
0.67 0.33
B/F
2
0.50
0.50
1
0.33
0.67
0.5
0.17
0.83
0.2
竞争放射分析原理示意图
常用标记放射性同位素及其性质
放射性元素 半衰期 射线种类及能量（百万电子伏特）
/ %
50 30 10 0 1 10 100 1000
未标记抗原浓度（ng/ml)
RIA竞争抑制曲线类型
注：横坐标为标记抗原（*Ag）的浓度
四、建立放射免疫分析方法的必备条件
对标准抗原的基本要求
(1)标准抗朱与待测抗原的免疫性必须一致。
(2)抗原必须纯度高。 (3)标准抗原的量必须准确。
放射免疫法步骤
放射免疫法步骤
放射免疫法是一种常见的实验室技术，用于检测体液中的特定蛋白质或抗原，以及血
清中的特定抗体。
该方法利用放射性同位素的放射性来测量抗原-抗体复合物的形成，从
而确定样品中是否存在特定的分子。
1. 准备试验物品。
首先，需要准备样品或试剂以进行测试。
这些物品包括抗原、抗体和放射性同位素标
记剂。
标记剂可以标记抗原或抗体中的组分。
通常使用的放射性同位素有碘-125、碘-131、氚等。
2. 标记抗原或抗体。
将抗原或抗体标记为放射性同位素标记物，使它们可以轻松地在样品中被检测到。
这
个过程通常包括将标记剂与抗原或抗体混合，并通过一系列的化学反应处理来标记它们。
3. 制备样品。
样品可以是血清、尿液、唾液、细胞上清液等，必须经过净化和处理，以减少其他干
扰因素的影响。
4. 混合样品和标记物。
将样品与标记物混合，然后将其放入耐放射性容器中，以便进行进一步的处理和测量。
在此过程中，标记物将结合到抗原或抗体上，形成可测量的复合物。
5. 记录结果。
使用放射计测量复合物的放射性。
通过测量复合物的放射性强度，可以确定在样品中
的抗原或抗体的存在情况。
放射免疫法被广泛用于许多分子生物学和免疫学的研究中，例
如测定激素、癌细胞标志物和传染病病原体抗体等。
综上所述，放射免疫法是一种精确的实验室技术，可以用于检测样品中特定的抗原或
抗体。
该技术的步骤简单，但需要特殊的实验室设备和安全规范，以避免放射性同位素引
起的危险。
放射免疫测定的基本原理
放射免疫测定的基本原理嘿，咱来讲讲放射免疫测定的基本原理。
放射免疫测定就像一场特别的“追踪游戏”。
咱先说说里面关键的东西，有抗原和抗体。
抗原就像一个小坏蛋，抗体呢，就是专门抓这个小坏蛋的警察。
想象一下，在一个大环境里，有我们要检测的抗原在晃悠。
这时候我们加入一些特定的抗体，这些抗体就像训练有素的警犬，对特定的抗原特别敏感。
然后呢，再加入一些用放射性同位素标记的抗原。
这些标记了的抗原就像穿着特殊荧光服的小坏蛋。
当它们都在一块儿的时候，抗体就有点“傻傻分不清”了，它不知道哪个是真正的坏蛋，哪个是穿着特殊衣服的坏蛋。
所以抗体就会和真正的抗原以及标记了的抗原结合在一起。
这就像警察把真正的小坏蛋和穿着特殊衣服的小坏蛋一起抓住了。
接着呢，我们可以测量一下这些结合在一起的东西的放射性。
因为标记的抗原带有放射性，所以通过测量放射性的强弱，就能知道有多少抗原被抗体抓住了。
比如说，如果放射性很强，那就说明标记的抗原和抗体结合得多，也就意味着真正的抗原比较少。
因为抗体的数量是有限的，如果真正的抗原少，那它就有更多的“精力”去和标记的抗原结合。
反之，如果放射性比较弱，那就说明真正的抗原比较多，抗体都忙着抓真正的抗原了，没多少“精力”去和标记的抗原结合。
这整个过程就像在一个大池塘里钓鱼。
鱼就是抗原，鱼钩就是抗体，而那些特殊标记的鱼就是用放射性同位素标记的抗原。
我们通过看鱼钩上特殊标记鱼的多少，来推测池塘里鱼的大概数量。
放射免疫测定在医学上特别重要。
它可以检测很多东西，比如一些激素、药物等。
它就像一个超级侦探，能在很复杂的身体环境里，找出我们想要知道的东西的蛛丝马迹。
这种方法虽然有点复杂，但是它很灵敏，能检测出非常少量的物质。
就像一个超级敏锐的鼻子，能闻到很细微的气味。
放射免疫方法应用小分子学抗原
放射免疫方法是一种用放射性同位素标记抗原或抗体来进行定量测定的生物化学方法，它广泛应用于医学、生物学和生化学领域。
在医学诊断和治疗中，放射免疫方法对于检测癌症、感染病毒、控制生殖和内分泌疾病等方面起着举足轻重的作用。
本文将探讨放射免疫方法在应用小分子学抗原方面的应用。
一、小分子学抗原的特点1. 结构简单：小分子学抗原通常由相对简单的化合物组成，其分子结构比较清晰、明确，易于进行分析和检测。
2. 生物活性强：小分子学抗原往往具有较强的生物活性，能够与生物体内的相关分子发生特异性相互作用，从而引起生物学效应。
3. 检测难度较大：虽然小分子学抗原在生物体内的作用较为重要，但其在体内的浓度往往较低，因此对于其检测方法要求较高。
二、放射免疫方法在应用小分子学抗原方面的作用1. 放射免疫方法可用于检测小分子学抗原的浓度放射免疫方法通过将小分子学抗原进行标记，利用放射性同位素进行定量检测，可以快速、准确地测定样品中小分子学抗原的浓度，能够满足对其高灵敏度、高特异性的检测要求。
2. 放射免疫方法可用于研究小分子学抗原与其受体的结合反应放射免疫方法通过标记小分子学抗原，可以用于研究其与受体的结合反应。
通过测定小分子学抗原与受体结合的反应动力学参数，可以全面了解它们之间的相互作用，为研究其生物学功能和临床应用奠定基础。
3. 放射免疫方法可用于筛选与小分子学抗原相关的功能蛋白通过放射免疫方法的使用，可以筛选出与小分子学抗原相关的功能蛋白，包括受体蛋白、结合蛋白等。
这些蛋白对于小分子学抗原的生物学功能发挥至关重要，因此对其进行研究和筛选具有重要意义。
4. 放射免疫方法可用于了解小分子学抗原的代谢动态通过对小分子学抗原代谢产物的标记和检测，可以通过放射免疫方法快速、准确地了解其在生物体内的代谢动态，包括吸收、分布、代谢和排泄等情况。
这对于优化小分子学抗原的药物代谢动力学研究、临床应用和毒性评价具有十分重要的意义。
三、放射免疫方法在应用小分子学抗原方面的局限性和进展1. 放射免疫方法的局限性放射免疫方法受到放射性同位素危害和废物处理困难的影响，同时在临床应用中也存在限制，因此在实际应用中需要做好放射防护和环境保护工作。
铁蛋白 测定
铁蛋白测定
1、放射免疫测定法：
放射免疫测定法的原理是将免抗人铁蛋白抗体交联于胶乳颗粒上，与待测样品中铁蛋白在液相中相遇，通过形成的抗原抗体复合物的浑浊度来测定铁蛋白的指标。
此方法精密度较高、准确性较强、特异性就好，被临床上广泛应用。
2、化学发光免疫分析法：
化学发光免疫分析法是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，对于检查铁蛋白指标有较好的效果，也可以用于各种抗原、半抗原、激素和药物的检测分析。
通过以上检查方式后可以查出铁蛋白指标。
铁蛋白是机体中的一种元素，也是不可缺少的，铁蛋白指标是反映人体内储存铁含量的一项指标，可以用于判断患者是否患有缺铁性贫血以及是否存在体内铁负荷过量的情况。
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电泳法
分离单碘化、多碘化及已受损伤的蛋白质
亲和层析法
利用特异抗体或受体结合分离、纯化标记蛋白质
高效液相层析法 分离效果好、快速
ConA吸附法
分离标记糖蛋白
二、RIA操作程序
配制已知浓度系列标准抗原（Ag） 加待测抗原（Ag）和抗体（Ab）--温育 加标记抗原（*Ag）和抗体（Ab）--温育 分离复合物*AgAb（B）和游离*Ag（F） 用γ计数器测量放射性计数 根据标准曲线或计算机直接算出
一、基本概念
荧光免疫分析技术：是以荧光素标记抗体或抗原，使其
与相应抗原或抗体结合后，借助荧光检测仪察看荧光现 象或测量荧光强度，从而判断抗原或抗体的存在、定位 和分布情况或检测受检标本中抗原或抗体的含量。
荧光(fluorescence)：物质在吸收光子后，在极短时间
（10-8~10-9s）内激发分子放出波长比激发光波长为长 的可见光。
－
125I
60天 －
0．035
131I
8.05天
0.608，0.335，0.250
0.364，0.637， 0.722
125I的优点
29种同位素，125I最为常用。 半衰期适中（60天），易于商品化和储存，也利于废物处理； 发射低能35kV γ线易于测量，井型闪烁效率高 不发射β粒子，标记物自分解速度低 标记过程中，标记物免疫损伤小 化学性质活泼，标记Ag和Ab容易，可得到多种标记物而广泛应用
(一)、液相法
已知放射标记抗原
待检非标记抗原
分离
+
+
抗体
抗原
抗原抗体结合
沉淀物
上清液中
抗原抗体复合物 游离抗原
（二）、固相法
1. 直接法IRMA示意图
标记抗体 抗原
固相抗原
离心
测定
2. 双位点法IRMA示意图
抗体 抗原
标记抗体
洗涤
测定
八、免疫放射分析（ IRMA ）
• 基本原理：用过量的核素标记抗体与待测抗原形成复合物， 并用固相免疫吸附剂作为B或F的分离手段除去多余的游离抗 体，测量抗原抗体复合物的放射性。
核素（nuclide）：凡原子核具有特定的质子数和中子数 并处于一定能量状态的原子。
放射性核素（radionuclide）：由于核内中子数和质子数 的比例不适而自发地发生核衰变，在衰变过程中将放射出 一种或几种射线而转变为别种核素的不稳定核素。
RIA方法学研究进展
1959年 Yalow和Berson建立放射免疫测定（RIA） 1960年 竞争性蛋白结合分析（CPBA） 1968年 Miles和Hales建立免疫放射量度分析（IRMA） 1968年 放射受体分析法(RRA) 1971年 Addison和Hales建立双位点或夹心IRMA
❖ FEIA主要用于激素、肿瘤标记物、心血管标记物、肝炎等病毒标记物、自身 抗体、维生素、药物浓度等项目的测定。
FEIA所用的酶及其相应的底物和产物
酶
底物
β半乳糖苷酶（α-G） MUG
产物
激发光波长 （nm）
发射光波长 （nm）
MU
360
450
碱性磷酸酶(AP)
MUP MU
360
450
辣根过氧化物酶(HRP) HPA 二聚体
B/F 1
斜率＝－KA
0
3
Ag-Ab浓度
亲和力测定（Scatchard作图）
C
复
合 100
物 放
A
B
射 性
50
0
12345
6
Log竞争剂浓度
特异性的测定－－交叉反应检测
交叉反应率 ＝A50/B50×100％
B%
100 80 60 40 20 0
100 1000 10000 100000
抗血清稀释度
结合抗原(B)与游离抗原(F)分离方法
沉淀法 加涂有右旋糖酐的活性碳（DCC）吸附小分子F，离心
吸附法 调pH值于γ球蛋白等电点，加入适当浓度PEG或中性盐
过滤法 小分子游离的放射性物质F被抽吸通过滤膜而分离
双抗体法 入第二抗体，形成第二抗体复合物，离心
固相法 抗体或抗原固相化，免疫反应在固相载体上完成后洗涤
❖ SLFIA主要用于检测庆大霉素、卡那霉素等半抗原性药物
4. 均相荧光免疫测定（HoFIA）
❖ 基本原理：采用二种 荧光素分别标记抗原 和抗体，当抗原抗体 结合后，通过荧光激 发传递使一种荧光被 吸收，其吸收量与样 品中待测物质成正比， 由标准曲线推算出含 量。
细胞抗原
荧光标记抗体
细胞被荧光 抗体着色
对标准抗原的基本要求 (1)标准抗朱与待测抗原的免疫性必须一致。 (2) (3) (4)标准抗原应有很好的稳定性。
对抗血清的要求 抗血清中含有对其相应抗原的特异性抗体。检查抗血清质量的指标主要 有亲和常数(K)、免疫交叉反应率及滴度(或抗体效价)。
(1) (2) (3)
衡量抗体质量的指标
亲和力:抗体结合的强度是RIA的前提 特异性:不受交叉反应物质影响的程度 滴度:抗体的效价——抗体实际应用时的稀释倍数
标准曲线的基本数学函数式
放射免疫分析从抗原抗体反应动力学分析，反应是双向性的，服从
%
/
75
结 合
未
结 50
合
的
放 30
射
活
性 （
10
）0
待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系
1
10
100
未标记抗原浓度（ng/ml)
1000
RIA竞争抑制曲线类型
注：横坐标为标记抗原（*Ag）的浓度
四、建立放射免疫分析方法的必备条件
双标记
四甲基异硫氰酸罗
丹明(TRITC)
550
600-620 橙红色荧光 搅拌法 透析法 双标记
藻红蛋白(PE) 490-560 575
红色荧光
交联法
双标记
7-氨基-4-甲基香豆 素(AMC)
354
430
蓝色荧光
交联法
双、多标记
镧系元素： Eu3+、 Sm3+、Tb3+
340
613
持续时间较长 双功能螯合剂 (10-1000μs)
单、双、多 标记
四、荧光免疫测定技术
➢ 荧光酶免疫分 ➢ 底物背景荧光免疫分析 ➢ 荧光偏振免疫检测 ➢ 均相免疫测定 ➢ 时间分辨荧光免疫检测
1. 荧光酶免疫分析(FEIA)
❖ 基本原理：利用具有潜在荧光的物质作为酶标抗体或抗原的 显示手段，受酶作用分解出荧光色素后进行免疫分析。本法 兼有酶免疫测定的累积放大性和荧光免疫测定的高度敏感性 的优点。缺点：测定结果受生物样品背景荧光干扰。
六、放射免疫分析的质量控制
◆ 误差和放射免疫误差的来源 (1) (2)放射免疫分析误差来源
◆ 掌握质量控制与质控样品 (1) (2)质量控制样品
◆ 质量控制指标：灵敏度、精密度、偏倚和准确度、特异性、稳定 性、临床有效性。
◆ 实验室内部质量控制：精密度的评价、批内偏倚的评价和批间重 现性评价。
◆
七、RIA技术类型和应用
Ag
*Ag Ab
Bound Free
B
F
B/F
0.67 0.33 2
0.50 0.50 1
0.33 0.67 0.5
0.17 0.83 0.2
竞争放射分析原理示意图
常用标记放射性同位素及其性质
放射性元素 半衰期
射线种类及能量（百万电子伏特）
β
γ
14C
5720年 0.155
－
3H
12.5年 0.0189
❖ SLFIA主要用于检测庆大霉素、卡那霉素等半抗原性药物
SLFIA示意图
底物
抗原
酶
荧光基团
无反应
产生荧光
3. 荧光偏振免疫检测（FPIA）
❖ 基本原理：荧光素标记的抗原与标本中的抗原竞争结合特 异性抗体，反应后用单一平面偏振的光源照射，荧光素被 激发产生偏振荧光。偏振荧光的强度与分子转动的速度成 反比。标记抗原与抗体的复合物分子量大，旋转慢，偏振 荧光强；游离标记抗原的分子量小，偏振荧光弱。
放射性核素标记物制备的主要方法
氯胺T法
活化NaI中放射性碘离子
乳过氧化酶法 催化过氧气化氢释放新生态氧，使125I离子活化
双酶标记法
葡萄糖氧化标记法 活化NaI中放射性碘离子
放射性同位素标记化合物的纯化方法
凝胶过滤法 离子交换法 透析法
分离标记蛋白与无机碘 用于分离纯化短肽标记物 将标记蛋白与小分子化合物很好地分离
SPA法
金黄色葡萄球菌A蛋白促使AgAb较快速度沉淀
三、RIA法标准曲线
标记抗原与被测物质间的数量关系可以用抑制曲线来表示。这种曲
线表示了结合抑制的程度与抑制物浓度两者之间的特定函数关系， 也称为剂量反应曲线。
标准曲线的手工绘制形态
标准曲线的形态可因所用的反应变量表达形式的不同，或所采用坐 标系统不同而有不同的形态。
免疫分析系统(DEL FIA)
常见荧光色素及其标记方法和用途
荧光素
最大吸收 光谱(nm)
最大发射 光谱(nm)
荧光颜色
标记方法
主要用途
异硫氰酸荧光黄 （FITC）
490-495
520-530
亮黄绿色荧光 搅拌法 透析法 单、双标记
四乙基罗丹明
（RB200）
575
595~600 明亮橙色荧光 搅拌法
1.样品或标准品 2.标记物 3.抗血清 分离剂
混匀 温浴
混匀
立即
1.加样 2.加分离剂 3.离心 4.去上清分离 5.测量
动态平衡体系中: *Ag与Ag具有同样的免疫活性和结合反应能力 *Ag和Ab的量恒定 Ag+*Ag的分子数大于抗体的分子数