微生物生长的测定
第一节 微生物生长的测定
样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标
愈明显，因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、 微量量热计等设备来测定相应的指标。
第一节 微生物生长的测定
微生物生长：
单位时间里微生物数量或生物量（Biomass）的增加。
个体计数 微生物生长的测定： 群体重量测定 群体生理指标测定 评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响； 评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制(或杀死)作用的效果； 客观地反映微生物生长的规律；
第一节 微生物生长的测定 （一）以数量变化对微生物生长情况进行测定 通常用来测定细菌、酵母菌等单细胞微生物的生长情况 或样品中所含微生物个体的数量（细菌、孢子、酵母菌） 1、培养平板计数法
以干重、湿重直接衡量微生物群体的生物量；
通过样品中蛋白质、核酸含量的测定间接推算 微生物群体的生物量；
测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法
第一节 微生物生长的测定 （二）以生物量为指标测定微生物的生长 3、 生理指标法
微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶 活性、生物热等与其群体的规模成正相关。
活菌计数：
采用特定的染色技术也可分别对活菌和死菌 进行分别计数
（二）以生物量为指标测定微生物的生长
1、比浊法
在一定波长下，测定菌悬液 的光密度，以光密度(optical density, 即O.D.) 表示菌量。 实验测量时应控制在菌浓度 与光密度成正比的线性范围 内，否则不准确。
第一节 微生物生长的测定 （二）以生物量为指标测定微生物的生长 2、重量法
采用培养平板计数法要求操作熟练 、准确，否则难以得到正确的结果： 样品充分混匀；
每支移液管及涂布棒只能接触一个 稀释度的菌液；
同一稀释度三个以上重复,取平均值； 每个平板上的菌落数目合适，便于 准确计数；
微生物生长量的测定
微生物生长量的测定咱先来说说微生物这小家伙们，别看它们个头小得咱肉眼都看不见，可它们的世界那也是丰富多彩，热闹非凡呐！就拿微生物生长量的测定来说，这可真是一门大学问。
想象一下，在一个微小的世界里，这些微生物们不断地繁殖、生长，就像一个小小的“城市”在不断扩张。
而咱们科学家和研究人员，就像是这个“城市”的“统计员”，要想办法搞清楚这里面到底发生了多少变化。
咱们测定微生物生长量，就好比要给一群看不见的“小朋友”量身高、称体重。
那怎么量呢？方法可不少。
比如说，咱可以通过测细胞的重量来算一算。
这就像是把一堆水果放在秤上称一称，只不过这“水果”咱看不见罢了。
我记得有一次在实验室里，为了测定一种微生物的生长量，我们可是费了好大的劲。
那是一种在培养皿里欢快生长的小细菌。
我们小心翼翼地把它们收集起来，经过一系列复杂的操作，就为了能准确地知道它们到底长了多少。
还有一种方法是测细胞的数量。
这就有点像数一群到处乱跑的小蚂蚁，只不过这些“小蚂蚁”太小了，咱们得用特殊的工具和方法才能数清楚。
咱再来说说比浊法。
这就像是通过看一杯水的浑浊程度来判断里面有多少杂质。
微生物多了，培养液就会变得浑浊，咱们就能通过测量这种浑浊度来推测微生物的生长量。
还有一种很有意思的方法，叫生理指标法。
这就好比通过观察一个人的饭量、运动量来判断他的生长发育情况。
微生物也有它们的“生理指标”，比如产生的二氧化碳量、消耗的氧气量等等。
总之，微生物生长量的测定是个精细又有趣的活儿。
它就像是一把神奇的钥匙，能让我们打开微生物世界的大门，了解那些看不见的小生命们的成长故事。
说不定未来的某一天，通过对微生物生长量更精确的测定，咱们能解决更多的大问题，比如研发出更厉害的药物，或者让农业生产更高效呢！所以啊，可别小看这小小的微生物生长量的测定，它背后隐藏着大大的科学奥秘和无限的可能！。
微生物实验报告：测定细菌生长曲线
测定细菌生长曲线一、实验目的1．了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2．学习液体培养基的配制以及接种方法；3．反复练习无菌操作技术；4．了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5．掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；二、实验原理将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。
单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。
本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
三、实验器材大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基；取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计；四、实验步骤1．活化菌种将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块；2．接种6人大组分为3个小组，按表1接种。
微生物生长的几种检测方法
一、生长量测定法1.1体积测量法：又称测菌丝浓度法。
通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。
方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。
菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。
1.2称干重法：可用离心或过滤法测定。
一般干重为湿重的10-20%。
在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。
干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。
如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。
称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
1.3比浊法：微生物的生长引起培养物混浊度的增高。
通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。
对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。
将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。
该法主要用于发酵工业菌体生长监测。
如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm 处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。
1.4菌丝长度测量法：对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长二、微生物计数法2.1血球计数板法:血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1 mm2面积上刻有400个小方格。
微生物生长测定方法的原理及优缺点
微生物生长测定是指通过一系列方法和技术来检测和测定微生物的生长情况，包括微生物数量、生长速率、生长条件等。
微生物生长测定方法在医药、食品、环境等领域都有着重要的应用，对于评估产品质量、卫生安全具有重要意义。
本文将从原理和优缺点两个方面对微生物生长测定方法进行分析和讨论。
一、微生物生长测定方法的原理微生物生长测定方法主要基于微生物在特定条件下的生长特性来进行测定。
常见的微生物生长测定方法包括培养计数法、营养物质利用法、生物发光法等，下面针对每种方法的原理进行详细介绍。
1.培养计数法培养计数法是通过将待测样品在适宜的营养培养基上培养一定时间后，根据所形成的微生物菌落数量来进行测定微生物数量的方法。
其原理是利用微生物在特定条件下的生长特性，以及对不同影响因素的适应能力。
通过控制培养基的成分和环境条件，可以使不同菌种在不同条件下得到生长，并最终形成可见的菌落。
根据菌落的数量和形态，可以初步判断出待测样品中微生物的种类和数量。
2.营养物质利用法营养物质利用法主要是利用微生物对不同的碳源、氮源、氢源、无机盐等物质的利用能力来进行测定微生物的数量和生长情况。
其原理是根据微生物对不同营养物质的需求和利用方式，采用不同的培养基和特定的条件，使不同微生物菌种在不同培养基上的生长情况有所差异，通过观察和测定微生物生长的情况来推断待测样品中微生物的数量和种类。
3.生物发光法生物发光法是一种利用微生物在特定条件下产生发光现象来进行测定微生物数量和生长情况的方法。
其原理是利用微生物在特定条件下产生的发光物质，例如荧光素、发光菌等，通过测定发光强度和时间来间接推断微生物的数量和生长情况。
二、微生物生长测定方法的优缺点微生物生长测定方法在实际应用中具有一定的优点和局限性，下面将针对不同的方法进行分析和讨论。
1.培养计数法的优缺点优点：(1) 可以直接观察和测定微生物的数量和生长情况，结果直观准确。
(2) 可以根据培养基的选择和条件的控制，选择性培养出目标微生物。
微生物生长的测定方法
微生物生长的测定方法作者：刘华来源：《神州·下旬刊》2013年第02期摘要：微生物生长情况可以通过测定单位时间里微生物数量或生物量（biomass）的变化来评价。
通过微生物生长的测定可以客观地评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响，或评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制（或杀死）作用的效果，或客观地反映微生物生长的规律。
因此微生物生长的测量在理论上和实践上有着重要的意义。
关键词：微生物测定方法计数法生理指标法微生物生长的测定有计数、重量和生理指标等方法。
1、计数法此法通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物的数量。
计数法又分为直接计数和间接计数两类。
⑴直接计数这类方法是利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点不能区分死菌与活菌。
计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积l mm2和高0.1mm的计数室，在1mm2的面积里又被刻划成25个（或16个）中格，每个中格进—步划分成16个（或25个）小格，但计数室都是由400个小格组成。
将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计算4-5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品所含的细菌数。
每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数×400×l000×稀释倍数⑵间接计数法此法又称活菌计数法，其原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。
将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2ml 故人无菌平皿，再倒人适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放人适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5此法可因操作不熟练造成污染，或因培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不稳定。
微生物生长量测定法
微生物生长量测定法1、体积测量法：又称测菌丝浓度法通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。
方法是取一定量的待测培养液(如10毫升)放在有刻度的离心管中,设定一定的离心时间(如5分钟)和转速(如5000 rpm),离心后,倒出上清夜,测出上清夜体积为v,则菌丝浓度为(10-v)/10.菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
这种方法比较粗放,简便,快速,但需要设定一致的处理条件,否则偏差很大,由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物,结果会有一定偏差。
2、称干重发法可用离心或过滤法测定。
一般干重为湿重的10-20%.在离心法中,将一定体积待测培养液倒入离心管中,设定一定的离心时间和转速,进行离心,并用清水离心洗涤1-5次,进行干燥。
干燥可用烘箱在1050C或1000C下烘干,或采用红外线烘干,也可在800℃或400℃下真空干燥,干燥后称重。
如用过滤法,丝状真菌可用滤纸过滤,细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤,过滤后用少量水洗涤,在400℃下进行真空干燥。
称干重发法较为烦琐,通常获取的微生物产品为菌体时,常采用这种方法,如活性干酵母，一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
3、比浊法微生物的生长引起培养物混浊度的增高，通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值,判断微生物的生长状况。
对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时,可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。
将侧臂插入光电比色计的比色座孔中,即可随时测定其生长情况,而不必取菌液。
该法主要用于发酵工业菌体生长监测。
4、菌丝长度测量法对于丝状真菌和一些放线菌,可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度,或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管,到入合适的培养基,卧放,在开口的一端接种微生物,一段时间后记录其菌丝生长长度,借此衡量丝状微生物的生长。
微生物生长的测定
特点：快速、简便；但易受干扰。
8.生理指标法
▪测含氮量
蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分， 通过测含氮量就可推知微生物的浓度。
一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%， 根据一定体积培养液中的含氮量再乘以6.25，就可测得粗蛋白的含 量。
▪其他方法
▪测定微生物的呼吸强度、耗氧量、酶活性、生物热、消耗底物量、 产二氧化碳、产酸、粘度等，都可用于生长量的测定。
2.涂片染色法
应用：可同时计数不同微生物的菌数 适于土壤、牛奶中细菌计数。
方法：用镜台测微尺计算出视野面积； 取0.1ml菌液涂于1cm2面积上，计数； 计算公式：
每ml原菌液含菌数= 视野中平均菌数×涂布面积/视野面积×100 ×稀释倍数
3.平板菌落计数法
1ml 1ml 1ml
1ml
9ml
9ml
→或烘干→称重（干重）
7.比浊法
原理：菌体细胞在悬液中数目越多，越昏浊，光的穿透 力越弱，用比色计或分光光度计测定光密度OD，OD值 与菌液浓度成正比。
例：液体培养基中每隔2h抽样测OD值，结果如下： 时间 0 2 4 6 OD值 0.1 0.12 0.2 0.5
则6小时后菌体增长=(0.5－0.1)÷0.1=4倍 或对照标准曲线求出菌液浓度。该法快速、简便，
第二十四讲 微生物生长的测定
一、微生物生长表示法
描述微生物的生长情况，通常用群体增长量表示： 群体微生物细胞数目的增长情况； 群体原生质量的增长情况； 群体某些生理指标变化情况。
1.血球计数板法直接计数法 血球计数板
血球计数板法
原理：将1cm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格，从中 均匀分布地选取80或100小格，计数其中的细胞数目，换 算成单位体积中的细胞数。 适用范围：个体较大细胞如血球、酵母菌等。不适用于细 菌等个体较小的细胞，原因：细菌细胞太小，不易沉降； 油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。 特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌 悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。
实验三微生物生长曲线的测定
实验三微生物生长曲线的测定Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】实验三微生物生长曲线的测定一、实验目的目的1、了解细菌生长曲线特点及测定原理2、学习用比浊法测定细菌的生长曲线?二、实验原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。
这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。
因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。
三、实验材料1、菌种2、培养基：肉膏蛋白胨培养基3、仪器和器具721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。
4、流程种子液→标记→接种→培养→测定四、实验步骤1、种子液制备取细菌菌种1支，以无菌操作挑取1环菌液，接入肉膏蛋白胨培养液中，培养18h作种子培养液。
2、标记编号取盛有30mL无菌肉膏蛋白胨培养液的三角瓶6个，分别编号为0、4、8、12、16、20。
3、接种培养用2mL无菌吸管分别准确吸取1mL种子液加入已编号的6个三角瓶中，于37℃下振荡培养。
然后分别按对应时间将三角瓶取出测定OD 值。
4、生长量测定将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在.～以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。
微生物的生长
室温
体温
10—20
10—20
25—30
37—40
40—45
40—45
专性
25—45
50—55
70—90
2、温度对微生物的作用 （1）最低生长温度对微生物的影响 最低生长温度是微生物生长的温度下限，低于此温
干热灭菌
恒温干燥法 煮沸
巴斯德消毒法 间歇灭菌
湿热灭菌
高压蒸汽灭菌
超高温灭菌
二、水分和渗透压
微生物细胞的含水量一般为70-90%，孢子或芽孢的含 水量较低，只有60-70%。水分是微生物细胞代谢活动必
不可少的条件，如果外界环境过于干燥，将影响微生物的
正常代谢，甚至会造成细胞死亡。
当环境中缺水或大气相对湿度低于70%时，微生物细
来灭菌。
3、高温灭菌的方法
焚烧 （耐热的金属和玻璃器皿、可燃烧的物品） （常用，140-160℃，2h；耐热的物品） （100℃，15min以上；不耐热的物品） （60-70℃，15-20min；食品、饮料等） （ 100 ℃，每次 2-3h ， 2-3 次；不耐高温的药 品，特殊培养基） （常用，0.2Mpa，121℃，20min；一般培养 基、水、纤维制品） （0.05MPa，110℃，20min；含糖培养基） （130—140℃，0.5—1s，液体的饮料等）
比较一致。
lgN
缓慢期 对数期 稳定期 衰亡期
0
t
3、稳定期（平衡期）
在对数期以后，由于营养物质逐渐消耗，有害代谢
产物积累，pH值变化等，使细胞生活力下降，细胞的 群体的活菌数达到最高并保持一段时间的相对稳定。 特点：处于稳定器的菌体形态大小典型，生理生化反应 脂肪粒等，大多数芽孢菌在这个生长阶段形成芽孢。抗
微生物微生物的生长讲课文档
• 在对数生长期内，细菌数目的增加是按指数级数增加的，即 20 →2 1 →22 →23 ……2n
• 这里的指数 n 为细菌分裂的次数或者增殖的代数，也就是一个细菌 繁殖n代产生2n 个细菌。
•
如果在对数期开始时间 后期t2的菌数为 x2，则
t1的菌数为
x1
，繁殖
n
代后到对数期
在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌数 越多，光密度越大。因此，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反映菌液的 浓度。
特点：快速、简便；但易受干扰。
2、重量法
细胞干重测定：单位体积的培养液中的微生物细胞的干重。
3、 生理指标法
①总氮量：用化学分析方法测出微生物细胞中蛋白质或氮元素的含量。
第十页，共84页。
二. 以数量变化对微生物生长情况进行测定
1、培养平板计数法 测定微生物的活菌数viable count 稀释平板测数法dilute plate count
以CFU(colony forming units)表示
•稀释培养测数法（又称最大概率法，MPN most probable number）（参见实验教材）
第十七页，共84页。
认识延迟期的特点及原因对实践的指导意义：
◆在发酵工业上需设法尽量缩短延迟期；
采取的缩短lag phase 的措施有： ①增加接种量； （群体优势----适应性增强） ②采用对数生长期的健壮菌种； ③调整培养基的成分，在种子基中加入发酵培养基的某些
成分。 ④选用繁殖快的菌种
◆在食品工业上，尽量在此期进行消毒或灭菌
＊利用选择培养基进行直接分离
＊富集培养
第七页，共84页。
微生物的生长量的测定方法
实验误差分析
误差来源
01
分析实验过程中可能出现的误差来源，如样品采集、培养条件
控制、测定方法等。
误差控制
02
采取有效措施，如使用标准品、进行重复实验等，减小误差对
实验结果的影响。
误差评估
03
对实验误差进行评估，了解误差对实验结果的影响程度，提高
实验的准确性和可靠性。
THANKS
感谢观看
显微镜直接计数法
总结词
显微镜直接计数法是通过显微镜观察微生物细胞并计数来测定微生物生长量的 方法。
详细描述
该方法通过显微镜观察微生物细胞，利用血球计数板或细胞计数板进行计数， 根据计数结果计算微生物生长量。该方法适用于各种生长阶段的微生物生长量 测定，但操作较为繁琐，需要一定的技术要求。
流式细胞计数法
菌落计数法
总结词
菌落计数法是一种通过培养微生物并计数菌落数量来测定微生物生长量的方法。
详细描述
该方法通过将微生物接种在固体培养基上，经过一定时间的培养，微生物繁殖形成肉眼可见的菌落，然后通过计 数菌落的数量来推算原始接种的微生物数量。该方法适用于对数生长期的微生物生长量测定，具有操作简单、直 观的优点。
通过测量与微生物生长相关的生理指 标来间接评估微生物的生长量。
详细描述
生理指标法包括测量细胞密度、细胞 形态、细胞代谢产物等，这些指标的 变化与微生物的生长状态密切相关， 可以间接反映微生物的生长量。
比浊法
总结词
利用微生物悬液的光学性质来测量其浓度，从而评估微生物的生长量。
详细描述
比浊法是通过测量微生物悬液的光密度来计算微生物的浓度。在一定波长下，光 密度与微生物浓度呈线性关系，因此可以用来评估微生物的生长量。该方法操作 简便、快速，适用于大量样本的快速检测。
微生物的生长量的测定方法
2. 间接计数法
➢液体稀释法
将待测样品作一系列稀释，一直稀释到取少量该稀释液 (如1mL)接种到新鲜培养基中没有出现生长繁殖为止。
具体做法是取单细胞菌悬液在定量培养基中做系列稀释培 养，在一定稀释度以前的培养基中接上菌，出现生长，而 在这个稀释度以后的培养液中没有接上菌，不出现 菌的生 长，这最后一级出现菌生长的稀释度称为临界级数，从 3～5次重复的临界级数求最大概率数(MPN)，就可得到较 可靠的结果。
特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出率，或 在菌悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。
计数室
盖玻片
血球计数板是一块特别的厚玻璃片，玻片上有四 条沟和两条嵴。中央有一短横沟和两个平台，两 嵴的表面比两个平台的表面高0.1mm，每个平台 上刻有不同规格的格网，中央1mm2面积上刻有 400个小方格(图A)。
1
11.0
2
14.0
0
13.0
1
17.0
2
22.0
3
28.0
0
24.0
1
35.0
2
54.0
3
92.0
2. 间接计数法
➢薄膜过滤计数法
常用该法测定含菌量较少的空气和水中的微生 物数目。
将定量的样品通过薄膜（硝化纤维素薄膜、醋 酸纤维薄膜）过滤，菌体被阻留在滤膜上，取 下滤膜进行培养，然后计算菌落数，可求出样 品中所含菌数。
原液所含菌体数（mL） =每小格平均菌体数×400×104×稀释倍数
计数区的结构
2. 间接计数法
➢平板菌落计数法
将待测样品进行适 当稀释，取一定的 菌悬液涂布平板， 让微生物的单细胞 一一分散在平板上
，经适宜条件培养
，每个活细胞就会 形成单菌落，然
微生物生长量的测定技术
• 微生物生长的测定除了可以测定细胞 的数目，还可以测定细胞的生长量以 及与生长量相平行的生理指标。
一、测体积法
• 把待测培养液放在带刻度离心管中 作自然沉降或进行一定时间的离心， 然后观察其体积。（是一种粗放的 方法）
二、重量法
以干重/湿重 直接衡量微生物群体的生物量
适用于菌体浓度较高的样品，要除尽杂质
湿重法 将微生物培养液离心，收集细胞沉淀物，然 后称重。
干重法 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分 离出来,然后烘干(干燥温度可采用105℃、100 ℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的10% — 20%，而一个细菌细胞一般重约10-12—10-13g。
该法适合菌浓较高的样品。 举例：大肠杆菌一个细胞一般重约10 –12 ~10 – 13g，液体培养物中细胞浓度达到2×109个/ml时， 100ml培养物可得10~90mg干重的细胞。
三、生理指标法
1.含氮量测定法
蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质 的主要成分，通过测含氮量就可推知微生物的浓度。 一般微生物细胞的含氮量比较稳定，可以用凯氏定氮 法等测其总量，再乘以系数6.25即为粗蛋白含量，蛋白 含量越高，说明菌体数和细胞物质量越高。
这种方法适用于菌体浓度较高的样品。操作过程繁琐， 适用于研究工作。
2.含碳量测定法
• 微生物新陈代谢的结果，必然要消 耗或产生一定量的物质，以表示微 生物的生长量。一般生长旺盛时消 耗的物质就多，或者积累的某种代 谢产物也多。
3、DNA含量测定法 微生物细胞的DNAபைடு நூலகம்量比较稳定，采用适当 的荧光指示剂与菌体DNA作用，荧光比色或分光 光度计法测DNA含量。
4、其它生理指标法
第一节 微生物生长的测定
第一节微生物生长的测定微生物是一类存在于自然界中的微小生物，它们的生长繁殖十分迅速，能够在适宜的环境条件下迅速繁殖。
微生物的快速繁殖给生物学研究带来了很多便利，同时也为工业生产中的微生物发酵、酶制剂等方面提供了技术基础。
为了能够对微生物生长情况进行有效的研究，需要了解微生物常用的测量方法和测定原理。
1. 直接计数法直接计数法是指利用显微镜直接对微生物数量进行观察和计数的方法。
在实验中，首先需要对微生物细胞进行染色，使其在显微镜下能够清晰可见。
之后通过显微镜观察微生物的数量，完成对其数量的测量。
这种方法具有测量方便、准确性高的特点，其缺点在于需要显微镜、染色剂等实验仪器和试剂，所以适用范围有限。
在实际应用中，直接计数法一般用于对微生物数量进行快速的检测，如饮用水中对细菌等微生物的检测。
间接计数法是指利用微生物在特定条件下生长繁殖的现象，通过其产生的代谢产物或影响因子来间接测定微生物数量的方法。
间接计数法的常用方法包括：（1）湿重法：将微生物样品经过洗涤、过滤、干燥等处理后，对微生物的重量进行测定。
该方法适用于各类微生物样品，但存在样品制备难度大的问题。
（2）营养物质消耗法：通过测定微生物在特定营养物质条件下的生长变化，反推微生物数量并进行测定。
在实验中，通常需事先确定特定菌株在特定条件下的生长曲线，并根据生长曲线确定微生物数量与特定代谢产物的含量的关系。
（3）气体产生法：通过微生物在特定条件下代谢产生气体等代谢产物，测定气体产生量来间接测定微生物数量。
以上三种方法都是间接测量微生物数量的方法，通过微生物的代谢产物或影响因子等来反推微生物数量，相比于直接计数法，这些方法不需要复杂的实验仪器和试剂，且精度较高。
常见的营养物质消耗法包括氧耗法、酸碱滴定法、ATP氧化酶法等。
其中，ATP氧化酶法最为常见和简便，适用于高浓度微生物样品的测定。
3. 生长曲线法微生物在不同的环境条件下，它的生长曲线存在一定的差异。
微生物生长的测定方法
微生物生长的测定方法
微生物生长是生命过程的关键组成部分，影响着微生物的生存和繁殖。
测定微生物生长需要用到不同的分析方法，以便研究它们在各种环境条件下的生长状况。
常用的微生物生长测定方法有多种，它们可以分成流式细胞分析、免疫分析、膜泡法和荧光密度测定等。
流式细胞分析技术是一种用于定量计算微生物生长速率的分析方法，通过检测细胞的数量和浓度，从而可以估算细胞数量和浓度变化，并可以快速衡量微生物生长速率。
免疫分析是检测微生物生长的另一种方法，利用抗体来检测微生物的种类，以及检测微生物膜上结合抗体的特定抗原，通过测量抗原特异性结合物的含量来了解细胞内有效物质的含量变化，从而可以估计微生物的生长情况。
另外，膜泡法和荧光密度测定也是检测微生物生长的一种方法。
膜泡法是一种实验方法，可以检测在受到抑制作用的微生物中，存在的可移动细胞总量。
荧光密度测定则可以测量微生物的荧光信号，从而可以分析不同环境条件下生物体的生长情况。
最后，综上所述，微生物生长的测定方法可以说是很多。
从上面这几种分析方法中，可以得出结论，流式细胞分析、免疫分析、膜泡法和荧光密度测定是检测微生物生长的最常用的方法之一。
它们能够帮助研究人员快速准确地评估微生物的生存和繁殖能力，为评价人间、环境及工业微生物生长情况提供重要的数据参考。
微生物菌体量和生长速率的测定
蛋白胨培养基适当稀释后测定，其光密度值应控制
在1.00以内。
13
七、思考题
（1）针对实际微生物反应过程， 如何选择菌体量 测定方法？ （2）在菌体量测定过程中，误差的来源主要有哪
些？如何消除？
14
化后的大肠杆菌分别接入已灭菌冷却的7只三角瓶培养
瓶中，每瓶0.2ml，振荡Biblioteka 匀。5四、实验步骤
（三）培养 将已接种的三角瓶培养液置于振荡培养箱，
200r/min，37℃培养，每隔4小时取样，取得的样品0～
5℃冷藏待测。
（四）血球计数板法测定菌体量变化
①血球计数板法：样品计数时每小格5个细胞左右 ②样品菌液稀释：采用梯度稀释法将保存的样品
膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，其光密度值在
1.00以内，记录OD值。
7
样品菌液稀释
8
利用血球计
数板，在显
微镜下计算 一定容积里 样品中微生 物的数量。
9
10
五、实验结果
（1）将测得数据填入表1，表2。
（2）作图：按照两种方法测定的菌体量对
培养时间作图，得到大肠杆菌的生长曲线。
（3）将血球计数板法和比浊法测定的菌体 量的结果相关联，找出他们之间的关系。
中菌体量的变化。
3
三、实验材料
1.菌种：大肠杆菌。 2.培养基：牛肉膏蛋白胨（牛肉膏3g/L ；蛋白胨 10g/L ； 氯化钠5g/L ；pH7.0-7.2）。
4
四、实验步骤
（一）培养基灭菌 取50ml三角瓶7只，分别加入配好的液体培养基
20ml，灭菌冷却。
（二）种子活化和接种 将大肠杆菌接入培养基，37℃培养活化。取活
实验一、微生物菌体量和生长速率的测 定
微生物生长测定方法
微生物生长测定方法
常用测定微生物生长的方法有：
1)、称干重法。
可用离心法或过滤法测定。
优点：可适用于一切微生物，缺点：无法区别死菌和活菌。
2)、比浊法。
原理：由于微生物在液体培养时，原生质的增加导致混浊度的增加，可用分光光度计测定。
优点：比较准确。
3)、测含氮量，大多数微生物的含氮量占干重的比例较一致，根据含氮量再乘以6。
25即可测得其粗蛋白的含量。
4)、血球计数板法。
优点：简便、快速、直观。
缺点：结果包括死菌和活菌。
5)、液体稀释法。
对未知菌样作连续的10倍系列稀释，经培养后，记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查MPN表，再根据样品的稀释倍数就可计算其中的活菌含量。
优点：可计算活菌数，较准确。
缺点：比较繁琐。
6)、平板菌落计数法。
取一定体积的稀释菌液涂布在合适的固体培养基，经培养后计算原菌液的含菌数。
优点，可以获得活菌的信息。
缺点：操作繁琐，需要培养一定时间才能获得，测定结果受多种因素的影响。
微生物生长量的测定
微生物学研究中常常要进行微生物生长量的测定。
有多种方法可用于微生物生长量的测定，概括起来常用的有以下几种：(一)自接计教法(又称全数法)1．计数器直接测数法取定量稀释的单细胞培养物悬液放置在血球计数板(细胞个体形态较大的单细胞微生物，如酵母菌等)或细菌计数板(适用于细胞个体形态较小的细菌)上，在显微镜下计数一定体积中的平均细胞数。
换算出供测样品的细胞数。
(1)血球计数板及细胞计数血球计数板是一种在特定平面上划有格子的特殊载片。
在划有格子的区域中，有分别用双线和单线分隔而成的方格。
其中有以双线为界划成的方格25(或16)格，这种以双线为界的格子称为中格(见图5-10)。
其内有以单线为界的16(或25)小格。
因此，用于细胞计数的区域的总小格数为：25×16=400。
该400个小格排成一正方形的大方格，此大方格的每条边的边长为1mm，故400个小格的总面积为1mm2。
在进行细胞计数前，先取盖玻片盖于计数方格之上．盖玻片的下平面与刻有方格的血球计数板平面之间留有0．1mm高度的空隙。
含有细胞的供测样品液被加注在此空隙中。
加注在400个小格(1mm2)之上与盖玻片之间的空隙中的液体总体积应为：1．0mm×1．0mm×0．1mm=0．1mm3一般表示样品细胞浓度的单位为亿个/mL。
因此，在计数后。
获得在400个小格中的细胞总数，再乘以104，以换算成每mL所含细胞数。
其计算公式如下：菌液的含菌数／mL=每小格平均菌数×400×10 000×稀释倍数在进行具体操作时，一般取；个中格进行计数，取格的方法一般有两种：①取计数板斜角线相连的5个中格；②取计数板4个角上的4个中格和计数板正中央的1个中格。
对横跨位于方格边线上的细胞，在计数时，只计一个方格4条边中的2条边线上的细胞，而另两条边线上的细胞则不计。
取边的原则是每个方格均取上边线与右边线或下边线与左边线。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第二十四讲微生物生长的测定
教学目的：掌握常见的微生物生长测定方法
教学重点：平板活菌计数法、显微镜直接计数法
教学难点：生理指标法
课时分布：1学时
教学过程：
微生物细胞个体小，细胞的大小很难把握和测定，加上繁殖快，且生长与繁殖是交替进行的，故单个微生物的生长很难测定，实际应用意义也不大，常以菌体细胞数目的增加为标志，即通过测定群体的增长量来测定生长。
如直接或间接测定群体细胞数目的增加；测定原生质量；测定细胞中某些生理活性的变化等来判断微生物的生长情况。
1、计数法适于单细胞微生物
（1）活菌计数法（平板菌落计数法）
将检样作系列稀释，取适当稀释度的稀释液一定量涂布于固体培养基上，培养一定时间后计数菌落。
则菌数/ml=（平均菌落数×稀释倍数）÷取样量
（2）显微镜直接计数法（全菌计数法）
检样稀释后，加入到特制的计数板（血球计数板或细菌计数板中）的计数室内在显微镜下直接计数，换算即得。
优：快速、简便。
缺：死、活不分
（3）比浊法
原理：菌体细胞在悬液中数目越多，越昏浊，光的穿透力越弱，用比色计或分光光度计测定光密度OD，OD值与菌液浓度成正比。
例：液体培养基中每隔2h抽样测OD值，结果如下：
时间 0 2 4 6
OD值 0.1 0.12 0.2 0.5
则6小时后菌体增长=(0.5－0.1)÷0.1=4倍
或对照标准曲线求出菌液浓度。
该法快速、简便，适于颜色较浅的样品，浓度107/ml以上。
（4）薄膜过滤计数法
适于测定量大，含菌量低的流体样品如水、空气等。
方法：将定量样品通过微孔簿膜，菌体被阻留在膜上，取下薄膜放在培养基上培养，计数菌落数。
2、称重法适于单细胞、多细胞及丝状真菌（无法对单个细胞进行计数）
液体中培养→过滤→洗涤→称重（湿重）
→或烘干→称重（干重）
也可通过测细胞中蛋白质或DNA含量来反应细胞物质的量。
3、生理指标法测定微生物的呼吸强度、耗氧量、酶活性、生物热。
§4微生物生长繁殖的控制
微生物对人类即有益又有害，如何控制微生物的生长速度，消灭有害的微生物呢？
灭菌——指用物理或化学因子杀灭物品上所有微生物的方法。
消毒——指消除病原微生物的方法。
具消毒作用的物质称消毒剂。
防腐——防止或抑制微生物生长繁殖的方法或称抑菌。
防腐剂（抑菌剂）：用于防腐的物质。
抑菌和杀菌是从抗菌效果上划分的，当防腐剂浓度提高或作用时间延长，则抑菌作用可转变为杀菌作用，二者总称抗菌作用。