艾滋病的实验室检测流程

艾滋病的实验室检测流程
中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心继发布《全国艾滋病检测技术规范(xx 年版)》后，近日即将发布 xx 年版《全国艾滋病检测技术规范》，此规范堪称艾滋病检测实验室的「红宝书」，适用于疾病控制中心艾滋病确认实验室和医疗机构的艾滋病初筛实
验室的 HIV 检测技术操作。

下面是为大家带来的艾滋病的实验室检测流程的知识，欢迎阅读。

检测项目的样品种类
1 HIV 抗体检测：全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液以及干血斑样品。

2 HIV 抗原检测：全血、血清、血浆、病毒培养上清液。

3 T 淋巴细胞亚群测定：EDTA 或肝素抗凝全血。

4 HIV-1 病毒载量、基因型、耐药检测：血浆、滤纸干血斑(DBS)。

5 HIV 核酸定性与定量、基因型检测和 HIV-1 分离培养：淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞(PBMC)及全血。

当然，实验室最常用的仍然是血液标本，其他只作为补充样本。

HIV 抗体检测
HIV 抗体检测是艾滋病实验室检测的优先选择项目，在国内绝大多数初筛实验室应用最广泛。

1 初筛方法
(1)酶联免疫吸附试验(ELISA)
ELISA 法检测 HIV 抗体是 HIV 初筛实验室最常用最普遍的方法，目前检测试剂已经发展到 * ，即同时检测血液中 HIV-1P24 抗
原和 HIV-1/2 抗体，秉承「宁可错杀一千，不可漏网一个」的革命
精神，其灵敏度远高于特异性，直叫 HIV 抗体无处遁形。

(2)化学发光或免疫荧光试验(CIA/IFA)
这个试验方法是近 10 年迅猛发展的一种新型检测方法，其采
用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体，用发光或荧光仪测定结果，其灵敏度较 ELISA 有了进一步的提高，同时带
来的是检测成本的增加和假阳性率的增高。

(3)快速检测(RT)方法
此类方法操作简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测，但
灵敏度和特异性远不如 ELISA 和发光法，但是经济实惠，也有一定
的市场影响力。

主要包括以下几种方法：明胶颗粒凝集试验(PA)、免疫渗滤试验、免疫层析试验。

2 确认实验
(1)免疫印迹试验(WB)
WB 采用间接法检测样品中的抗 HIV-1/HIV-2 特异性抗体。

采
用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分离开来，
经过一系列处理后，硝酸纤维素膜显示与特异抗原的结合的抗体条带，从而确诊抗体的存在。

(2)条带/线性免疫试验(RIBA/LIA)
实验原理基本同 WB 法，不再赘述。

HIV-1 抗原检测
1 筛查实验
(1)酶联免疫吸附实验(ELISA 法)：即 * 抗原抗体联合检测试剂盒。

抗体包被固相反应孔(管)的底部，待测样本中 P24 抗原与包被抗体形成抗原抗体复合物，再加入酶(HRP)标记的 HIV-1 抗体与抗原结合，加底物显色，在酶标仪上读取结果。

因同时检测抗原抗体，灵敏度大大提高，有效缩短了 HIV 感染的检测窗口期，但因试剂成本较高，在普通筛查实验室推广有一定难度。

(2)酶联荧光分析法(ELFA)：待测样品的 p24 抗原与包被在固相孔(管)内的 p24 抗体结合，并被生物素标记的 p24 抗体识别。

临床实验室应用前景不明朗，需要荧光检测设备，成本较高。

(3)电化学发光法(ECLIA)：待测样品的 p24 抗原与包被抗体的磁性微粒和发光剂标记的抗体在反应管中温育，形成磁性微珠包被抗体-抗原-发光剂标记抗体复合物。

(4)抗原抗体快速检测法：同快速方法(RT)检测抗体，不同之处是用 HIV 抗体包被载体，检测灵敏度同样较差。

2 中和试验
中和试验主要是 p24 抗原检测的补充试验，还可做 HIV-1RNA 的定性或定量检测，以排除筛查试验的假阳性。

(1)酶联免疫吸附实验(ELISA 法)：待检样品先与中和剂(p24 抗原的抗体)共同孵育，如果样品中存在 p24 抗原，中和抗体将与之结合形成复合物，而不能与固相载体上的捕获抗体结合。

(2)酶联荧光分析法(ELFA)：原理和检测步骤同上述酶联免疫吸附实验(ELISA 法)，中和率≥ 60 %，认为样品中的 p24 抗原是真
阳性。

(3)电化学发光法 (ECLIA)：原理和检测步骤同上述酶联免疫吸附实验(ELISA 法)，中和率大于 50%，认为样品中的 p24 抗原是真
阳性。

HIV 核酸检测
目前国内 HIV 核酸检测试剂主要为 Taqman 实时荧光 PCR 检
测试剂，可检测血浆、血清、组织器官或血液制品的 HIV-1RNA 和 DNA，DBS 可用于检测 RNA/DNA。

全球目前正式用于临床诊断 HIV-1 急性
期感染的核酸检测试剂比较少，主要是美国 FDA 批准的 Gen-Probe 公司生产的 Aptima HIV-1 RNA 核酸定性检测试剂和欧盟批准的Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA 定性检测试剂。

临床诊断相关的检测策略及结果报告
HIV 检测阳性结果的检测过程一般经历两个阶段，初筛和复检
程序。

以 HIV 抗体检测为例，具体流程如下：
试剂 1 进行初筛，结果无反应，报告「HIV 抗体阴性」;结果
有反应，不能出具阳性报告，必须进入复检试验。

对初筛有反应的样品，用原有试剂双份或双孔进行复检试验(或者两种试剂复检)，如均无反应，报告「HIV 抗体阴性」;如均有反应或一个有反应一个无反应，进行补充试验(抗体确证试验和 HIV-1 核酸试验)，报告 HIV 感染待确定。

目前大部分临床实验室为艾滋病初筛实验室，开展常规初筛实验，发现阳性结果初步复检后送省市 CDC 或当地其他确认实验室做确认实验。

临床诊断筛查检测流程见下图：
目前国内实验室多采用「初筛抗体+WB 法确认」等两步法进行HIV 检测及确诊，并严格进行人员、仪器、方法学质量控制，建立了遍布全国的临床医疗机构的初筛实验室及省市 CDC 的确认实验室，基本满足了日益增长的艾滋病病人的检测及病情的变化的监测。

内容仅供参考。