免疫学检验

1简述双抗体夹心法的原理。

DA连接于固相载体上的抗体和酶标抗体，与待检抗原上两个不同的抗原决定基结合，形成固相抗体一抗原一酶标抗体复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待检抗原是过量的，因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比。测定复合物中酶作用于加入的底物后生成的有色物质量，即可确定待检抗原含量。

2何谓金免疫测定技术?简述其技术类型及原理。

DA金免疫测定技术是指用胶体金颗粒作为标记物进行抗原抗体反应的一类免疫学测定技术，其主要技术类型有斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验。1)斑点金免疫渗滤试验：在以硝酸纤维素膜为载体并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依次滴加标本、免疫金及洗涤液，因微孔滤膜贴置于吸水材料上，故溶液流经渗滤装置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用，达到快速检测目的，阳性反应在膜上呈现红色斑点。2)斑点金免疫层析试验：是将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相合的以硝酸纤维素膜为载体的固相膜免疫分析技术，滴加在膜一端的标本溶液受载体膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与固定于载体膜上某一区域的抗体或抗原结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。

3简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。

单克隆抗体是应用B细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。

4简述抗原抗体反应的原理。

答：抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的，它们之间的结合是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合

5简述抗原抗体反应的类型。

答：抗原抗体反应分为五种类型：①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应；②可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应；③抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应；④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应；⑤免疫标记的抗原抗体反应等。

6什么是带现象?

答：在抗原抗体反应等价带前后，由

于抗体或抗原过量(形成前带或后

带)，上清液中可测出游离的抗体或

抗原，形成的沉淀物少，不出现可见

反应，这种现象在做血清学试验时称

为带现象。

7影响抗原抗体反应的环境条件有哪

些?在实验中如何控制这些条件因

素?

答：环境条件包括：电解质，酸碱度

和温度。稳定条件：①电解质：常用

O．85％氯化钠或各种缓冲液作抗原

及抗体的稀释液及反应液；②酸碱

度：pH过高或过低都将影响抗原与抗

体的理化性质，抗原抗体反应一般在

pH为6～8时进行；③温度：一般以15，

40℃为宜，最佳反应温度为37℃。

8试述免疫血清应如何进行纯化。

免疫血清的纯化主要是指提纯免疫

血清中的IgG并去除无关的杂抗体。

提纯IgG类抗体的方法有：硫酸胺盐

析法粗提、离子交换层析法和亲和层

析法，采用亲和层析法提取IgG时，

可使用纯化抗原或葡萄球菌蛋白A交

联sephamse 4B制成层析柱。另外，

还可通过吸附法获得单价特异性抗

血清。方法是将不含特异性抗原的杂

抗原与戊二醛等双功能试剂混合制

成固相吸附剂，以吸附免疫血清中的

杂抗体，或将杂抗原交联于sephamse

4B上，通过亲和层析去除杂抗体。

9叙述杂交瘤技术的基本原理。

杂交瘤技术是在细胞融合技术的基

础上，将具有分泌特异性抗体能力的

致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨

髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。这种

杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特

性，即既能够分泌抗体又能在体外长

期繁殖，经过克隆化后成为单个细胞

克隆，分泌的抗体即为单克隆抗体。

10简述间接血凝试验的基本原理。

间接血凝试验是将可溶性抗原(或抗

体)吸附于人的0型红细胞或绵羊、家

兔的红细胞制成抗原致敏的红细胞，

与相应抗体(或抗原)作用，在有电解

质存在的条件下，经过一定时间可出

现肉眼可见的红细胞凝集现象，又称

被动血凝试验

11何谓间接凝集反应？

将可溶性抗原（或抗体）先吸附或偶

联于与免疫无关大小适当的颗粒表

面，使之成为致敏载体颗粒，然后与

相应抗体（或抗原）作用，在适宜电

解质存在条件下，出现特异性的凝

集现象，称为间接凝集反应

12间接凝集反应如何进行分类？各

试验的原理是什么

根据致敏载体用的是抗原或抗体分

为正向间接凝集试验和反向间接凝

集试验；根据载体种类，分为间接血

凝试验和胶乳间接凝集试验；根据反

应方式分为间接凝集试验、间接抑制

凝集试验和协同凝集试验,间接凝集

试验是用抗原致敏载体检测标本中

的相应抗体。将可溶性抗原与载体颗

粒结合，再与标本中的抗体反应，通

过抗体桥联，形成肉眼可见的凝集颗

粒或凝集块，为阳性反应。反向间接

凝集试验选用已知特异性抗体致敏

载体检测标本中的相应抗原。用特异

性抗体致敏颗粒，与样品中的待检抗

原反应，通过抗原桥联，形成肉眼可

见的凝集为阳性。临床上用于检测

HbsAg、AFP 等。间接凝集抑制试验

诊断试剂为已知抗原致敏的颗粒载

体及相应的抗体，用于检测标本中与

致敏抗原相同的抗原。将标本与抗体

试剂相反应，然后加入致敏抗原，若

出现凝集现象，说明标本中不存在相

应抗原;如未出现凝集现象，则说明

待检标本中含有相应抗原，凝集反应

被抑制。同理，用抗体致敏载体颗粒

及相应抗原作为诊断试剂，检测标本

中的抗体，称为反向间接凝集试验。

协同凝集试验与间接凝集反应的原

理相似，但所用载体为金黄色葡萄球

菌，该菌细胞壁上的SPA 能与特异性

抗体的IgG 的Fc 段结合（IgG3除

外），抗体的F(abˊ)2 段暴露在葡

萄球菌的表面，仍能与相应抗原特异

性结合。当这种葡萄球菌与IgG 抗体

连接时，就成为抗体致敏的载体颗

粒，若与相应抗原接触，即出现反向

间接凝集反应。间接血凝试验是以红

细胞作为载体的间接凝集试验，用已

知的抗原或抗体致敏红细胞，然后与

样品中的抗体或抗原在适宜条件下

反应，出现红细胞凝集者为阳性。根

据红细胞凝集的程度判断阳性反应

的强弱。胶乳凝集试验是以聚苯乙烯

胶乳微粒作为载体的间接凝集试验。

13 HAT培养基筛选杂交瘤细胞的机

制是什么？

答：1.淋巴细胞：不能生长，5到7

天死亡；DNA的主要合成途径被A阻断

2.骨髓瘤细胞：不能生长，5到7天死

亡；HGPRT缺乏，DNA合成的旁路途经

受阻3.骨髓瘤细胞和脾细胞融合形

成杂交瘤细胞，可长期生长繁殖。利

用淋巴细胞的HGRT将Ｈ合成为嘌呤

碱并最终与Ｔ一起合成ＤＮＡ从淋

巴细胞获得产生某种抗体的遗传信

息，从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能

力

14 简述免疫系统的三个生理功能。

答：免疫系统的三个生理功能为免疫