细菌组操作规程6

微生物检验组操作手册

标本的接种与处理标准操作程序（SOP-401）

1.目的：规范标本的接种与处理，提高细菌检出率。

2.SOP-401变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。

3.范围：各种细菌培养的标本。

4.溯源:全国临床检验操作规程(第二版)。

5.标准操作：

5.1一般细菌培养、鉴定

适用于本项检查的标本是指除血液、尿液和粪便等有特殊处理要求的标本，以及脓、痰、创面、胆汁、CSF、胸腹水、咽拭子等。

5.1.1样品采集与处理

5.1.1.1在疾病早期或症状、体征明显时，最好在抗生素使用之前采集。

5.1.1.2选择合适的解剖部位并以正确的方法和设备采集标本。

5.1.1.3避免固有菌群的污染，尽可能保证样本代表感染过程。

5.1.1.4采集足够的数量，因标本量不足可能产生假阴性结果。

5.1.1.5每个标本都要标明病人的姓名、住院号、来源、特殊部位、采集的日期

时间和最初的采集者。

5.1.1.6将标本放在无菌并且有利于可疑病原菌生长的容器或培养液中，防止渗

漏和潜在的安全隐患，本实验室指定适用于本项检查的容器是无菌试

管、无菌拭子、无菌痰杯及各种灭菌标本留取容器。

一般细菌可在合适的培养基（如血平板、巧克力平板）上，在一定的温度、气体等条件下生长繁殖而形成菌落。根据菌落特征、涂片染

色镜检、生化反应和血清学试验可做出鉴定。

5.2 检验流程

5.2.1流程图

样品→接种→挑取可疑菌落→涂片染色镜检→生化反应、鉴定

→报告。

5.2.2 操作说明

5.2.2.1样品脓、痰、创面、胆汁、CSF、胸腹水、咽拭等。

5.2.2.2接种血平板（痰、CSF需加巧克力平板），35℃过夜，初次分离需

。

5-10%CO

2

5.2.2.3镜检挑取可疑菌落涂片，革兰染色镜检。

5.2.2.4生化反应、鉴定

手工生化试验：

5.2.2.4.1葡萄球菌：凝固酶、甘露醇、尿素、新生霉素、麦芽糖、木糖、蔗糖、

硝酸盐、多粘菌素B、同时观察菌落颜色和溶血情况。

5.2.2.4.2链球菌、肠球菌：触酶、七叶苷、肉汤、

6.5%Nacl、CAMP、乳糖、山

梨醇、阿拉伯糖。

5.2.2.4.3致病性大肠埃希菌：KIA、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、麦芽糖、

IMViC、硝酸盐。

5.2.2.4.4变形杆菌：KIA、苯丙氨酸、麦芽糖、靛基质、鸟氨酸。

5.2.2.4.5灰凸菌落，典型的阴性球杆菌：KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸

橼酸盐、硝酸盐、丙二酸盐、44℃。

5.2.2.4.6革兰氏阴性杆菌，氧化酶阴性：KIA、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、

甘露醇、葡萄糖、IMViC、硝酸盐。

5.2.2.4.7革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性：KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸

橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、乙酰胺。

5.2.2.4.8可疑气单胞菌，氧化酶阳性：KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼

酸盐、硝酸盐、七叶苷、赖氨酸、蔗糖、VP（25℃）。

5.2.2.4.9 可疑弧菌，氧化酶阳性：同气单胞菌生化，另加不同浓度Nacl。5.2.2.4.10缓慢生长分枝杆菌：暗产色、光产色、耐热触酶、硝酸盐、尿素、

吐温-80。

5.2.2.4.11快速生长分枝杆菌：45℃生长、暗产色、光产色、MAC琼脂（28℃）、

硝酸盐、铁吸收试验（28℃）、5% Nacl肉汤（28℃）、阿拉伯糖、木糖、

卫茅醇、枸橼酸盐（28℃）、甘露醇（28℃）。

另见下表：

一般细菌生化反应和鉴定流程

菌落、涂片鉴定

G－球菌氧化酶、DNA酶、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖或接种API NH

G－杆菌OX（＋）ATB ID 32GN或API 20Ne或手工生化

OX（－）ATB ID 32E或API 20E或手工生化G＋杆菌视情况而定

G＋芽胞杆菌根据涂片染色、菌落特征、简单手工生化反映鉴定

李斯特菌、棒状杆菌API Coryne

G＋球菌触酶（＋）ID Staph或手工生化

触酶（－）ID Strep或手工生化

真菌科玛嘉显色平板或ATB ID 32C、API 20 C AUX

5.2.2.5菌种鉴定

按检验流程、操作说明、生化反应、鉴定步骤中所述方法操作，将可疑菌落接种于相应的培养基或板条上，按要求培养足够时间后，手工或用计算

机自动读取结果，打印报告。

5.2.2.6报告菌种名、无细菌生长或未培养出病原菌等。

5.3注意事项

5.3.1采样时必须注意无菌操作，须在使用抗生素前进行，并及时送检。

5.3.2分离培养须接种合适的培养基，鉴定须选用适当的反应或试剂条。

5.3.3结果判断时须注意区别病原菌和正常菌群。正常无菌部位培养出细菌，有

临床意义。有正常菌群存在部位培养出细菌，需区分是否为为正常菌群，并结合临床情况判断。

授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名郭新荣曹照明曹照明王朔、陈相

日期

淋病奈瑟菌培养、鉴定标准操作程序（SOP-402）

1.目的：规范淋病奈瑟菌培养与鉴定的操作，提高其检出率。

2.SOP-402变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。

3.范围：各种标本的淋病奈瑟菌培养、鉴定。

4.溯源:全国临床检验操作规程(第二版)。

5.标准操作

5.1样品采集与处理

采集原则详见SOP-401中的“样品采集与处理”。

用无菌拭子插入男性尿道或女性宫颈1-2 cm，旋转摩擦取上皮细胞和脓性分泌物。

淋病奈瑟菌需在营养条件较好的培养基（如淋球菌培养基、巧克力平板）环境下经24-48小时下生长，涂片染色、菌落特征、生化反上，35℃ 5%CO

2

应等做出鉴定。

5.2检验流程

5.2.1流程图

样品→接种→可疑菌落→涂片染色镜检→生化反应、鉴定

5.2.2操作说明

5.2.3样品泌尿生殖道分泌物或初段尿等。

5.2.4接种淋球菌培养基（或哥伦比亚血琼脂或巧克力平板）上，35℃

，24-48小时。

5-10%CO

2

5.2.5镜检挑取氧化酶（+）可疑菌落，涂片，革兰染色，镜检观察是否为G－

双球菌。

5.2.6生化反应、鉴定葡（+）、麦（－）、蔗（－）或API NH。

5.2.7菌种鉴定

按检验流程、操作说明、镜检、生化反应、鉴定步骤中所述方法操作进行，手工读取结果，核对后发送报告。

5.3报告阳性或阴性，如阳性（须提示传染病报卡）。

5.4注意事项

注意无菌操作，标本必须新鲜，采样后立即送检或床边接种，尿液取初段尿，泌尿生殖道取脓性分泌物，在用抗生素前采样。

授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名郭新荣曹照明曹照明王朔、陈相

日期