【微生物检验】食品中细菌总数的测定PPT幻灯片
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（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）0C恒温箱 内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目,乘以倍数， 即得每g（每mL）样品所含菌落总数。
3、菌落计算方法 （1）菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜
检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释 度的各平板平均菌落总数。 （2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择
注意英文表述
菌落总数aerobic bacterial count 大肠菌群coliform bacteria 沙门氏菌salmonella 致泻性埃希氏菌diarrheogenic escherichia coli 霉菌和酵母molds and yeasts 金黄色葡萄球菌staphyloc
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定 标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数， 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状 菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链 状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链， 可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每 条链作为一个菌落计。
n2 ——第二稀释度（高稀释倍数）平板个 数（含适宜范围菌落数）
讨论3
成片的菌落如何计数？
讨论4
对原始记录表的评价 设计原始记录表
菌落总数的测定
－－平板菌落计数法 菌落总数记录报告
产品名称 生产日期
检验依据 培养基
接种 1
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 空白 备注 检验员：
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， 选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时， 即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每 个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培 养 基 ( 可 放 置 在 46±10C 水 浴 锅 内 保 温 ) 注 入 平 皿 15ml~20mL，混合均匀.同时将营养琼脂培养基倾入加有 1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
菌落总数的测定
－－出现的实际工作问题
➢ 做菌落总数检测时,发现稀释倍数大的比稀释倍数小的平皿上生长 的菌落数还多,而且空白对照又没长菌,我找不出啥原因？
➢ 我做的菌落总数的测定，是把浓缩的复合芽孢杆菌进行10-8、10-9、 10-10稀释，在涂布法吸取0.1ml的3个浓度的时候，培养皿中长出 来的菌2个10-9长了一大片的菌连在一起，10-8也有一个这样，其 他的几乎不长，究竟怎么会事？
➢ 检测菌落总数时,有些菌落难以区别,有没有什么好的试剂,能增加菌 落的可见率？
➢ 我公司做的菌落总数和技术监督局所测的数目存在巨大差别. 是这样的:我公司跟客户采购一批的鸡粉，多次检测此批产品菌落 总数均在5000左右，超过我司的内控标准。但客户检测数目与我 司不符，于是我司把产品送到当地的技术监督局检测，所得结论是 菌落总数为：205个/克。所以我们老总怀疑我们的工作能力，但 问题是在其中一次操作中，我们同时化验两种不同品牌的鸡精，一 种不符合要求，一种可以。
2、检样处理 （1）以无菌操作将检样25g（或25ml）剪碎，放于含有 225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内 预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或 研磨制成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以
8000r/min~100000r/min 的 速 度 处 理 1min ， 做 成 1 ： 10 的 均匀稀释液。
菌落形成单位colony form unit 微生物学检验 microbiological examination
讨论1
真菌菌落算不算菌落总数？（请学生比较 新老国标中关于菌落的定义的差异）
讨论2
新国标上菌落总数计算公式上n 分别代表 什么？
（n1 ——第一稀释度（低稀释倍数）平板 个数（含适宜范围菌落数）
生产车间 抽样日期
细菌总数
班来自百度文库 检验日期
营养琼脂培养基
A
B
平均数
结果报告数（个/g或ml）
日期：
复核：
日期：
记录表
按照以下原则进行编制： ⑴可以满足检验过程的复现； ⑵可以实现培养基和试剂的溯源及复现其制备过 程； ⑶一页原始记录基本包括该样品的多个常规检验 项目，也就是一份样品的所有微生物检验项目在 一张原始记录上体现。 为了符合实验室资质认定评审的要求，可能会有 点繁，而且基本上没有办法对原始记录作假，因 为记录上体现的内容环环相扣。
（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐 注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸 管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混合均匀，制 成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序,制10倍递增 稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
3、菌落计算方法 （1）菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜
检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释 度的各平板平均菌落总数。 （2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择
注意英文表述
菌落总数aerobic bacterial count 大肠菌群coliform bacteria 沙门氏菌salmonella 致泻性埃希氏菌diarrheogenic escherichia coli 霉菌和酵母molds and yeasts 金黄色葡萄球菌staphyloc
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定 标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数， 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状 菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链 状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链， 可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每 条链作为一个菌落计。
n2 ——第二稀释度（高稀释倍数）平板个 数（含适宜范围菌落数）
讨论3
成片的菌落如何计数？
讨论4
对原始记录表的评价 设计原始记录表
菌落总数的测定
－－平板菌落计数法 菌落总数记录报告
产品名称 生产日期
检验依据 培养基
接种 1
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 空白 备注 检验员：
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， 选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时， 即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每 个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培 养 基 ( 可 放 置 在 46±10C 水 浴 锅 内 保 温 ) 注 入 平 皿 15ml~20mL，混合均匀.同时将营养琼脂培养基倾入加有 1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
菌落总数的测定
－－出现的实际工作问题
➢ 做菌落总数检测时,发现稀释倍数大的比稀释倍数小的平皿上生长 的菌落数还多,而且空白对照又没长菌,我找不出啥原因？
➢ 我做的菌落总数的测定，是把浓缩的复合芽孢杆菌进行10-8、10-9、 10-10稀释，在涂布法吸取0.1ml的3个浓度的时候，培养皿中长出 来的菌2个10-9长了一大片的菌连在一起，10-8也有一个这样，其 他的几乎不长，究竟怎么会事？
➢ 检测菌落总数时,有些菌落难以区别,有没有什么好的试剂,能增加菌 落的可见率？
➢ 我公司做的菌落总数和技术监督局所测的数目存在巨大差别. 是这样的:我公司跟客户采购一批的鸡粉，多次检测此批产品菌落 总数均在5000左右，超过我司的内控标准。但客户检测数目与我 司不符，于是我司把产品送到当地的技术监督局检测，所得结论是 菌落总数为：205个/克。所以我们老总怀疑我们的工作能力，但 问题是在其中一次操作中，我们同时化验两种不同品牌的鸡精，一 种不符合要求，一种可以。
2、检样处理 （1）以无菌操作将检样25g（或25ml）剪碎，放于含有 225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内 预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或 研磨制成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以
8000r/min~100000r/min 的 速 度 处 理 1min ， 做 成 1 ： 10 的 均匀稀释液。
菌落形成单位colony form unit 微生物学检验 microbiological examination
讨论1
真菌菌落算不算菌落总数？（请学生比较 新老国标中关于菌落的定义的差异）
讨论2
新国标上菌落总数计算公式上n 分别代表 什么？
（n1 ——第一稀释度（低稀释倍数）平板 个数（含适宜范围菌落数）
生产车间 抽样日期
细菌总数
班来自百度文库 检验日期
营养琼脂培养基
A
B
平均数
结果报告数（个/g或ml）
日期：
复核：
日期：
记录表
按照以下原则进行编制： ⑴可以满足检验过程的复现； ⑵可以实现培养基和试剂的溯源及复现其制备过 程； ⑶一页原始记录基本包括该样品的多个常规检验 项目，也就是一份样品的所有微生物检验项目在 一张原始记录上体现。 为了符合实验室资质认定评审的要求，可能会有 点繁，而且基本上没有办法对原始记录作假，因 为记录上体现的内容环环相扣。
（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐 注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸 管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混合均匀，制 成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序,制10倍递增 稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。