关于原料药有关物质检查方法建立的思考
如何确定原料药的有关物质的检测方法
有关物质检查，包括对产品中残留合成原料、中间体、副产物及可能的降解产物的检查。
不同的物质紫外吸收也不一样，波长的选择很最重要。
先来说说我是怎么做的，希望大家能够补充，一起进步。
首先可以通过DAD考察起始原料、中间体及剧烈破坏的降解产物等的紫外特征。
若没有DAD可通过UV扫描起始原料、中间体等的紫外特征，选择杂质与原料相近的响应值处的波长为有关物质检查波长，并在不同波长下检测破坏试验的回收率，选择主药吸收较大且回收率较高的波长作为检测波长，对于存在响应相差较大的杂质，应采用加校正因子的自身对照法或者杂质对照品法。
再通过破坏试验考察专属性，验证方法的可靠性。
通常的做法是：1．酸降解试验 一般选择0.1N的盐酸，在室温或加热条件下进行考察。
酸液的浓度、考察的温度与时间均可根据具体品种，在前期预试验的基础上灵活确定。
2．碱降解试验 一般选择0.1N的氢氧化钠溶液，在室温或加热条件下进行考察。
碱液的浓度、考察的温度与时间均可根据具体品种，在前期预试验的基础上灵活确定。
3．高温降解试验 可分别在固体和溶液状态下进行考察，具体的考察温度与时间均可根据具体品种，在前期预试验的基础上灵活确定。
例如，可分别在60、80℃考察30天，或在130℃考察8小时。
4．光降解试验 可分别在固体和溶液状态下进行考察，具体的光强度与考察时间可根据具体品种，在前期试验的基础上灵活确定。
例如，可按照ICH的Q1B指导原则进行2个循环的考察：先经一百二十万勒克斯（Lx）×小时的冷白荧光灯照射，再经200瓦小时/平方米的紫外荧光灯照射。
5．氧化降解试验 主要在溶液状态下进行考察，氧化剂可采用饱和的氧气或不同浓度的双氧水，分别在室温或加热条件下进行考察。
原料药质量检测体系建设的思考与对策
原料药质量检测体系建设的思考与对策摘要：在原料药的实际生产过程中，要想保证原料药的质量，就需要结合原料药的生产流程制定完善的质量检测体系，从而才能提高原料药的整体质量。
无菌API指的是使用无菌粉针直接进行原料药的封装，能有效提升原料药的质量，基于无菌API构建质量检测体系，能保证原料药药物成分的无菌性，可以有效避免二次污染的发生。
本文主要探讨了原料药生产过程中的质量控制因素，进一步第提出了相对应的质量检测体系建设对策，从而为原料药保质保量地生产做出贡献。
关键词：原料药；质量检测体系；思考；对策引言：在制作制剂时，原料药是其中十分重要的组成部分，原料药的质量十分关键。
如果原料药质量无法得到保证，这样就会直接影响到原料药后续药品的整体质量。
所以，在实际的原料药生产过程中，需要相关技术人员格外注重质量管理内容。
在生产原料药时，技术人员要能对质量检查点进行合理设置，这是有效提升原料药质量的关键要点。
所以，搭建完善的原料药质量检测体系，做好原料药的质量检测工作，才能提升整体原料药的质量管理水平。
一、原料药生产的质量控制（一）人为因素的控制对药品生产企业来说，在实际生产药品的这一过程中，质量检验以及对药品企业进行生产控制都会在一定程度上影响到实际的药品质量。
在影响原料药质量的因素中，对药品问题认知不足是其中十分重要的一个因素。
在药品企业中，企业内部的每个人，包括技术人员、企业的生产工人、企业的领导人等对原料药生产过程的影响，都会影响到原料药的质量。
只有制药企业能对生产原料药的质量进行严格要求，这样才能鼓舞更多的企业员工积极地投身于药品的制作中来。
这样，才能让所有的员工都认识到保证原料药质量的重要性，并能更加熟悉制药的流程，做到正规操作，这样才能避免生产出不合规的原料药[1]。
（二）加强对生产设备、设备和检验仪器的管理对制药企业来说，要想提高原料药的质量，就需要在企业内部配备好的硬件，比如生产车间要配备专业的设备，这些生产设备也要能有效满足GMP的要求，从而能保证原料药生产的高质量。
原料药杂质研究思路和方法
原料药杂质研究思路和方法咱就说这原料药杂质研究啊，那可真是个大学问呢！就好像咱过日子，家里边儿总会有些边边角角的小零碎要收拾。
这原料药里的杂质不就是那些小零碎嘛！你想想看，原料药那可是要做成药去治病救人的呀。
要是杂质没研究清楚，那不就跟做饭盐放多了或者放少了一样，那做出来的药能靠谱吗？咱可不能让病人吃了不靠谱的药呀，那不是害人嘛！研究这原料药杂质，首先咱得搞清楚都有啥杂质。
这就好比你去一个新地方，得先知道那地方都有啥人啥景儿。
咱得用各种办法，把那些隐藏起来的杂质都给揪出来。
这可不是件容易事儿啊，得细心再细心。
然后呢，还得搞清楚这些杂质是咋来的。
是生产过程中不小心混进去的呀，还是原料药自己就带着的呀。
这就像你家里的灰尘，你得知道是从窗户缝里进来的，还是你自己从外面带回来的。
只有知道了来源，才能想办法去解决呀。
再说说这杂质的量，多了少了都不行。
就跟做菜放调料一样，多一点太咸，少一点没味。
咱得精确地去测量，看看这杂质到底有多少，是不是在安全范围内。
还有啊，这些杂质对原料药的性质和药效有没有影响呢？这可太重要啦！要是有影响，那可不得了，得赶紧想办法解决掉。
不然这药做出来，效果不好，那不就白瞎了嘛。
咱研究杂质的时候，就像是个侦探，一点点去寻找线索，去解开谜团。
有时候可能会遇到很难搞的杂质，就跟遇到一个狡猾的小偷一样，得费好大的劲儿才能抓住它。
你说要是不重视这原料药杂质研究，那后果得多严重啊！咱不能拿病人的生命开玩笑呀。
所以啊，咱得好好对待这个事儿，认真研究，把杂质都搞清楚，让原料药干干净净的，做出的药才能让人放心。
总之，原料药杂质研究可不是闹着玩的，这是关乎人命的大事儿。
咱得认真对待，不能马虎。
只有这样，咱才能做出安全有效的药，让病人能快快好起来呀！这就是我对原料药杂质研究的看法，大家觉得呢？。
专属性-破坏性试验见解
杂质检查分析方法建立过程中破坏性试验的意义和存在的问题分析作者成海平部门正文内容审评三部六室成海平杂质与药品临床使用的安全性密切相关，如果药品中存在的杂质未能通过有效的方法加以检出、控制，将给临床安全造成直接或潜在的危害，因此，制订合理、有效的药品杂质检测方法控制药品中的杂质是一项非常重要的工作。
杂质检测方法的建立基于方法学研究，主要包括专属性试验、检测限试验、溶液稳定性试验等内容，如果定量检测杂质还需进行线性、回收率等试验，从不同的角度、层面验证分析方法的可行，从而保证药品中的杂质能够有效地检测。
破坏性试验是杂质检测方法建立时验证专属性、检测灵敏度重要试验内容之一。
由于破坏性试验的实验过程复杂，分析检测技术要求高，在技术审评过程中经常发现存在研究过程中不完善、不全面，因此，在此结合化学药物创新药的审评工作体会，分析如何合理开展破坏性试验研究。
破坏性试验，也称为强制降解试验（stressing test），它是在人为设定的特殊条件下，如酸、碱、氧化、高温、光照等，引起药物的降解，通过对降解产物的测定，验证检测方法的可行性，分析药物可能的降解途径和降解机制。
每项破坏性试验通常包括以下内容：酸降解一般采用0.1mol/L－1mol/L盐酸或硫酸；碱降解采用0.1mol/L－1mol/L的氢氧化钠溶液；氧化降解采用合适的过氧化氢溶液。
以上三种试验，为了加快反应或者提高降解强度，必要时可以加热或提高浓度；高温试验通常温度高于加速试验温度的10℃，如50℃、60℃等，对于原料药有时需考虑水溶液或混悬液的降解，或者考虑在不同的pH值条件下的降解；光照试验条件可采用4500LX。
破坏性试验的具体条件，与具体药物密切相关，需结合具体药物的特点，选择合适的条件，使药物有一定量的降解，并对可能的降解途径和降解机制进行分析，保证实验的意义。
药物经强力破坏产生的降解产物通常采用色谱法测定，需结合药物和可能降解产物的理化性质，选择不同的色谱方法（HPLC、GC、TLC）或检测器，有时可采用不同分离机理的色谱系统。
有关物质检查方法建立的思路
有关物质检查方法建立的思路在新药研发过程中，有关物质检测方法的建立至关重要，它是合成研究人员的“眼睛”，甚至可助研究工作突破难关，也是产品质量的保证。
有关物质方法学的研究是根据不同样品的不同性质，不同要求进行的，没有固定的格式和固定的内容，但基本的方向是一致的，在此基础上不断的完善和改进，从而使测定药物有关物质的方法更准确，更先进，更有专属性，然而如何理清思路，快刀斩乱麻？如何将工作步骤化繁为简？本篇就此从以下方面来介绍。
1了解原料药和制剂的相关理化性质1.1 对于原料药，了解原料药的基本性质和结构特点。
了解原料药合成工艺过程中的起始原料、副产物、副产物产生的杂质、中间体或可能产生的降解产物等。
结合相关已知的杂质来确定有关物质检测的条件。
1.2 对于制剂，可能影响药物有关物质的重要因素有辅料、剂型、存储条件等，主要了解辅料对有关物质检测的干扰情况，不同剂型在不同存贮条件下可能产生的杂质等。
对于复方制剂，同时要考虑到复方中原料的相互作用可能产生的杂质等。
2 有关物质检查的方法选择2.1 对于已有EP、BP、USP等质量标准的仿制药，首选以上的色谱条件进行筛选，尤其关注离子对试剂的使用。
2.2 选用不同色谱条件进行对比研究，如果方法一是等度测定的，方法二最好选用梯度色谱条件，对所筛选的方法进行系统的方法学研究，比较不同检测方法的优劣，选择较好的色谱条件为本品有关物质检查的测定方法。
2.3 对于仿制药同时要将自制样品与市售原研样品进行全面的质量比较，分析其杂质的种类和含量，确保自制样品与市售原研样品的杂质在同一水平。
3 有关物质分析方法的验证3.1 检测波长的选择简而言之，有关物质的检测波长应结合主成分与杂质的最大吸收波长进行选择，其确定方法如下：分别称取待测供试品、对照品、空白辅料、市售对照样品适量，用流动相溶解并稀释到一定浓度，配制成对照品溶液、供试品溶液以及空白辅料溶液，分别采用DAD检测器进行全波长扫描，确定待测物质中各杂质的最大吸收波长、主峰的最大吸收波长以及空白辅料的干扰情况等，有杂质对照品的同时进行扫描，或HPLC进行测定，必要时可将供试品溶液适当破坏后测定各降解产物的最大吸收波长。
原料药检查指南
原料药检查指南在药品生产过程中，原料药是药品的基础，其质量直接关系到药品的品质。
因此，对原料药的检查和评价显得尤为重要。
为了确保药品安全有效，不仅药品检验机构要对产品进行检验，同时，药品生产企业也要对原料药进行全面的检查。
因此，制定一份科学合理的原料药检查指南显得非常有必要。
一、检查原料药的纯度药物的功效直接与纯度的高低有关，因此，对原料药进行纯度检查显得尤为重要。
首先要确定所需检查的活性成分。
在确认了具体检查的标准和要求后，采取适当的方法，如高效液相色谱、紫外分光光度计等，进行检查。
二、检查原料药的含量原料药的含量是指活性成分的有效成分含量。
通常，含量要求在生产过程中严格控制，需要选用能够满足规定含量的原料药，提高产品的稳定性和均一性，保证产品质量。
因此，在生产前、期间和后期要对原料药进行相应的检查，以摸清原料药的含量情况，特别是标准物质和检测环境下的含量情况。
三、检查原料药的稳定性原料药的稳定性是指药品在贮存和运输过程中出现的不兼容反应和分解反应程度。
药品的稳定性对于质量稳定性必须严格控制，方法和原料药、环境、贮存时间和温度等有关。
因此，在药品生产过程中对药品稳定性进行评价非常重要。
评定药品稳定性情况，如热分解、光稳性、氧稳性等，在生产事先应确定該參數下评定的标准、方法和环境。
四、检查原料药的杂质原料药其中往往会含有杂质，其对药品的质量以及生产工艺的影响显得非常重要。
因此，对原料药进行杂质检查显得比较必要。
杂质检测时需选择稳定的杂质标准和检测方法和环境，以避免误判、漏检等问题发生。
五、检查原料药的生物安全性药品是指用于诊断和治疗人或动物疾病的物质，因此，对药品生物安全性检查尤为重要。
卫生、安全、环境等方面必须考虑，选择合适的检测法，以避免出现无法达到身体健康标准的问题。
生物安全检测包括各项实验室测试，比如细胞毒性试验、临床研究等，有效预防和控制杀菌、毒性等问题发生。
综上所述，对原料药的检查是确保药品质量和药品安全的重要保障。
盐酸小檗碱有关物质检查分析方法优化及存在问题探讨
盐酸小檗碱有关物质检查分析方法优化及存在问题探讨摘要目的：建立盐酸小檗碱有关物质检查的分析方法，并对中国药典分析方法中存在的问题进行讨论。
方法：采用反向高效液相色谱法测定盐酸小檗碱有柱(4.6×250 mm，5 µm)；流动相为关物质。
色谱柱为Waters XTerra C180.05mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.8)和乙腈(78:22, V/V)；检测波长为345 nm；柱温为25 ℃；进样量为10 µl；流速为1.0 ml/min。
结果：在该色谱条件下，盐酸小檗碱主峰与7个杂质峰的分离度均大于1.5，2个已知杂质(盐酸药根碱和盐酸巴马汀)的定量限分别为2.5 ng和4.9 ng，检测限分别为0.1ng和0.2 ng；平均回收率分别为100.0%和102.7%；与盐酸小檗碱的相对校正因子分别为1.06和1.05；在0.5~20 μg/ml浓度范围内，线性关系良好(r>0.999)。
重复性、中间精密度的RSD值均小于2.0%且耐用性符合要求。
结论：该方法专属性强，准确度高，适用于盐酸小檗碱的有关物质检测。
关键词盐酸小檗碱；有关物质；杂质来源；高效液相色谱法盐酸小檗碱最早是从中药黄连中提取得到的一种生物碱，又名盐酸黄连素，在小檗科、毛莨科和防己科等植物中广泛存在[1-3]。
其对痢疾杆菌、肺炎球菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、伤寒杆菌、白喉杆菌、霍乱孤菌、脑膜炎奈瑟菌和志贺菌属等具有较强抑制作用，对阿米巴原虫也有一定作用，临床主要用于痢疾杆菌、大肠杆菌等导致的肠道感染[4-5]。
盐酸小檗碱质量标准最早收录于1963年版中国药典，其有关物质检测方法为TLC法，直到中国药典2010年版，才将有关物质检测方法由TLC法变更为HPLC法。
变更后的有关物质测定方法采用0.01mol/L磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值至2.8)-乙腈(75:25)为流动相，并规定已知杂质盐酸药根碱和盐酸巴马汀含量不超过1.0%，其它未知杂质不超过2.0%[6-7]。
有关物质测定HPLC方法的建立
有关物质测定hplc方法的建立一、开始之前必须明白：1、有关物质来源的两种途径：1）合成过程中的中间体和副产物；2）储存过程中产生的降解产物；2、分析你的样品结构，熟悉样品的基本性质；3、样品中可能含有的中间体；4、样品的基本稳定性和可能产生的降解产物；二、准备工作1、查阅文献，看看是否同行已经做过类似的工作，有的话就简单了，直接奔主题了。
2、没有文献（苦！），那就很是麻烦了。
1）分析结构，看看有无紫外吸收，有就比较简单，选用紫外检测器就行了，没有的话那就麻烦，可以选用蒸发光散射检测器等；2）分析结构，看看选用何种色谱方式进行分离（正相或者反相色谱）；3）分析结构，看看流动相该如何选择，要不要选用一些离子对试剂。
4）分析结构。
5）与同类产品进行比较；三、开工（以紫外检测为例）1、流动相的选择（采用粗品进行选择）1）、有文献，按文献进行优化。
不过我得提醒一下，文献的方法参考是可以的，要想完全按照他的条件做出来是很难的。
2）、没有文献。
a、紫外扫描一下，看看哪里有最大吸收。
将能得到的中间体、副产物、分解产物、样品配成相同浓度，在紫外扫描分光光度计上扫描一下，选择所有物质具有相同的最大吸收处的波长作为测定波长。
要是有pda检测器就不需要这一步了。
b、还是得找一些资料，看看类似的样品的流动相，以它为起始流动相进行选择，如果没有，那就找专业书吧，看看它是怎么教你选择流动相的。
2、最低检测限3、系统适应性试验重复进样5次，记录色谱图，给出系统评价报告4、考察中间体及副产物和样品的分离度。
同时定出中间体在色谱图中的出峰位置，为定质量标准提供依据。
5、考察降解产物和样品的分离情况。
这个一般是通过破坏性试验来考察。
常用的一般是高温、强光、氧化、强酸、强碱五个因素进行考察，通过考察，应该可以知道色谱图中那些峰是由于什么因素产生，这个也可为定质量标准提供依据。
6、根据上面的试验，应该可以知道样品的一些大概情况了，样品中有哪些杂质应该比较明确了。
硫酸吗啡原料药中有关物质检查方法研究
硫酸吗啡原料药中有关物质检查方法研究发布时间：2022-11-03T07:06:36.275Z 来源：《科学与技术》2022年第7月第13期作者：郭满1 耿艳丽2[导读] 目的通过对硫酸吗啡原料药的有关物质进行分析,考察现行标准的完善性,探讨存在的问题,为提高产品质量标准提供参考?方法采用HPLC,选用SymmetryC18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,以1.01g·L-1庚烷磺酸钠溶液(用50%磷酸调节pH值至2.6)和甲醇为流动相进行梯度洗脱;检测波长为230nm,流速为郭满1 耿艳丽2凯莱英生命科学技术（天津）有限公司天津市300450 天津市正方科技发展有限公司天津市 300270摘要:目的通过对硫酸吗啡原料药的有关物质进行分析,考察现行标准的完善性,探讨存在的问题,为提高产品质量标准提供参考?方法采用HPLC,选用SymmetryC18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,以1.01g·L-1庚烷磺酸钠溶液(用50%磷酸调节pH值至2.6)和甲醇为流动相进行梯度洗脱;检测波长为230nm,流速为1.5mL·min-1,柱温35℃?结果国内硫酸吗啡原料药中检出的主要杂质有可待因(杂质A)?伪吗啡(杂质B)?10-羟基吗啡(杂质D)?吗啡酮(杂质E)和吗啡氮氧化物(杂质F),溶液稳定性显示其中伪吗啡含量增加明显,表明样品需临用新配?结论建立方法的专属性?线性等均良好,能用于硫酸吗啡原料药中有关物质的检测?现行标准中缺少有关物质检查项,建议增加?关键词:硫酸吗啡;有关物质;高效液相色谱法;伪吗啡;吗啡酮硫酸吗啡是常用的阿片类药物,用于治疗急性和慢性最有效的镇痛药类别之一,是由吗啡成盐后的一种形式,为阿片类受体激动剂,是临床常用的麻醉药品,具有强效镇痛作用,适用于其他镇痛药无效的急性剧痛?除此之外,还具有镇静?呼吸抑制?镇咳?抗癌?抗抑郁等多种药理作用?1仪器与试药1.1仪器岛津LC-2030C3D型高效液相色谱仪(二极管阵列检测器;岛津公司)?Waterse2695型高效液相色谱仪(二极管阵列检测器;Waters公司),SartoriusBS224S型万分之一?CP225D型十万分之一电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司),KQ-500DE型数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司)?1.2对照品吗啡杂质A对照品(批号:170317,含量:94.2%)?吗啡杂质B对照品(批号:170720,含量:97.9%)?吗啡杂质C对照品(批号:170718,含量:95.1%)?吗啡杂质D对照品(批号:170914,含量:95.9%)?吗啡杂质E对照品(批号:170520,含量:92.3%)?吗啡杂质F对照品(批号:170523,含量:94.3%)?吗啡对照品(批号:171201-201324,含量:99.1%)?硫酸吗啡对照品(批号:171238-201708,含量:87.3%)?1.3试剂庚烷磺酸钠(Merck公司);甲醇(色谱纯);磷酸?醋酸(分析纯)?1.4样品硫酸吗啡原料药(批号:20180303?20151104?20151001,A药厂)?2方法与结果2.1色谱条件参照EP9.0和BP2018拟定的有关物质检查方法进行研究:采用SymmetryC18(4.6mm×150mm,5μm);流动相A:1.01g·L-1庚烷磺酸钠溶液(用50%磷酸调节pH值至2.6);流动相B:甲醇,梯度洗脱(梯度洗脱程序见表1);检测波长为230nm,流速1.5mL·min-1,柱温35℃,进样量10μL?2.2系统适用性?供试品和对照溶液制备方法系统适用性溶液:精密称取吗啡杂质A?B?C?D?E?F对照品?吗啡对照品?硫酸吗啡对照品,分别置于10mL量瓶中,用1%乙酸溶解并稀释至刻度,制成每1mL中约含吗啡?硫酸吗啡及各吗啡杂质1mg的储备液?量取吗啡及各吗啡杂质适量,用1%乙酸溶液稀释制成每1mL中约含杂质A? B?C?D?E?F各10μg?吗啡50μg的溶液,作为系统适用性溶液?供试品溶液:取本品约125mg,精密称定,置50mL量瓶中,加入1%乙酸约30mL,超声使溶解,用溶剂稀释至刻度,摇匀?滤过,取续滤液作为供试品溶液?对照溶液精密量取供试品溶液1mL,置100mL量瓶中,用1%醋酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密量取1mL,置5mL量瓶中,用1%醋酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液?2.3方法验证2.3.1专属性试验取1%乙酸?系统适应性溶液各10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图?系统适应性溶液中各色谱峰之间的分离度最小为1.9,空白溶剂不干扰检测,色谱图见图1?图 1 硫酸吗啡有关物质检测系统适应性溶液专属性色谱图2.3.2线性与范围分别精密吸取“2.2”项下硫酸吗啡和各吗啡杂质对照品储备液,制成系列对照品溶液,分别注入液相色谱仪,测定峰面积?以峰面积为纵坐标(Y),各对照品质量浓度为横坐标(X),绘制标准曲线?通过计算硫酸吗啡的响应值与已知杂质的响应值之间的比值,得到各已知杂质的校正因子?结果表明,硫酸吗啡以及各杂质在各自的线性范围内线性关系良好?杂质D的校正因子计算约为0.9,根据《中国药典分析检测技术指南》规定,校正因子在0.9~1.1之间,则可视为1,因此杂质D的校正因子最终定为1?2.3.3系统精密度试验精密吸取系统适应性溶液10μL,连续进样6次,记录峰面积,吗啡及杂质A?B?C?D?E?F的峰面积相对标准偏差(RSD)分别为0.2%?0.3%?0.08%?0.09%?0.7%?0.3%和0.2%,均小于2.0%,说明该系统的精密度良好?表1硫酸吗啡有关物质梯度洗脱条件2.3.4中间精密度试验取硫酸吗啡原料药(批号:20180303),由两名分析人员在不同日期分别平行配置6份供试品溶液,按照“2.1”项下色谱条件,使用不同的仪器进行测定,杂质A?B?D?E?F共12次测定的含量RSD分别为3.1%?4.0%?2.8%?1.3%?3.9%,均小于8%,表明方法的中间精密度良好?2.3.5准确度试验精密称取杂质A?B?C?D?E?F和硫酸吗啡适量,用1%乙酸溶解并定量稀释,制成每1mL中约含1mg的溶液,作为各自母液?再精密量取杂质A?C?D?F母液各0.4?0.5?0.6mL和杂质B?E母液各0.8?1.0?1.2mL分别置3个100mL量瓶中,用1%乙酸定量稀释至刻度,制成3个水平的混合对照品溶液?称取硫酸吗啡原料约62.5mg,置25mL量瓶中,一式9份,加入上述3个水平的混合对照品溶液超声溶解并定量稀释,每个水平平行3份?精密量取10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积分别计算杂质A?B?C?D?E?F的含量,并计算回收率,未知杂质用硫酸吗啡替代,单独配制,方法同杂质A?参考Ch.P2020四部通则《9101分析方法验证指导原则》,各杂质回收率均在90%~108%之间,证实该方法具有良好的准确度?2.3.6强制降解试验将硫酸吗啡原料药(批号:20180303)在酸?碱?氧化?高温?高湿?光照条件下进行强制破坏,了解其降解情况?质量平衡,采用“公式1”计算单位浓度的响应值,以未破坏溶液的响应值为基数(物料回收为100%),计算破坏溶液的物料回收率,结果各破坏溶液的回收率在97.1%~100.1%之间,认为杂质检出情况良好?单位浓度的响应值=A总(校正后)/C(公式1)(A总-校正后的供试品溶液总峰面积,其中杂质E?B和F的峰面积分别乘以校正因子0.5?0.25?0.8加以校正;C-供试品溶液的浓度)硫酸吗啡原料药在高湿条件下较为稳定;在高温和光照条件下,会引起杂质B?D?E的升高;在酸性条件下,杂质B增加,杂质E降解;在碱性条件下,杂质B?D明显增大,并有2个新杂质增加;在氧化条件下,杂质A被降解了,杂质B?D?E?F明显增大,并产生许多新杂质?在本色谱条件下,吗啡峰与相邻杂质峰分离度良好?3讨论3.1检测波长的选择采用二级管阵列检测器测定硫酸吗啡与各杂质,硫酸吗啡在285nm处有最大吸收,以285nm作为检测波长时,硫酸吗啡与各杂质的响应均较小,用230nm作为检测波长时,都有较好的响应,故确定有关物质测定波长为230nm?3.2色谱柱的选择在方法摸索过程中,考察了3种不同的色谱柱:SymmetryC18(4.6mm×150mm,5μm)?X-bridgeC18(4.6mm×150mm,5μm)和SunfireC18(4.6mm×150mm,5μm),发现使用X-bridgeC18和SunfireC18两根色谱柱,杂质F与吗啡之间的分离度分别为0.5和0.8,均小于1.5,无法达到基线分离,说明吗啡与杂质F要实现很好地分离,对色谱柱有一定的选择性,故在色谱系统中推荐使用SymmetryC18色谱柱?3.3稳定性分析通过对溶液稳定性的考察,发现杂质B随时间的推移,面积逐步增大,说明其不太稳定,也提示在检测有关物质时,样品需要临用新配?本研究采用高效液相色谱法,以SymmetryC18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱为固定相,梯度洗脱,并用校正因子法对硫酸吗啡原料药中6个已知杂质进行测定,考察了多种质检方法等?结果表明,本方法专属性好,对硫酸吗啡中的杂质检出度高,为修订和提高标准中的有关物质测定方法提供参考和依据?参考文献:[1]Ch.P(2020)V olⅡ(中国药典2020年版.二部)[S].2020:1573.[2]BP2018(2018)[S].2018:328-330.[3]USP41-NF36(2018)[S].2018:2809-2810.。
关于原料药有关物质检查方法建立的思考
关于原料药有关物质检查方法建立的思考审评四部七室赵慧玲【摘要】本文针对审评原料药有关物质检查方法中存在的问题，介绍欧洲和英国药典关于原料药已知杂质的研究现状和有关物质方法建立及质量控制，以供申请人参考。
【关键词】有关物质、方法学、分离度。
笔者审评原料药有关物质检查方法中发现，大多申请人越来越多地认识到控制原料药有关物质的重要性，自行建立方法考察原料药中存在的有关物质。
但在研究中往往片面认为样品通过了破坏性试验和1％自身对照法后的系统适用性试验就符合了要求。
因此，忽视对主成分中杂质产生原因的分析，忽视仪器的检测灵敏度的分析、忽略色谱柱（柱效）的选择、流动相及比例的选择、检测波长的选择。
忽视主成分和可能产生的杂质分离度的问题。
1、原料药有关物质方法建立应关注的问题：原料药中的杂质来源于合成的中间体、副产物、以及降解产物，建立方法初期，仅采用破坏性试验的方法考察降解产物的做法是片面的。
由于降解产物的量较小，如果选择的方法不好，比如，柱效低，波长选择不合理、流动相及流动相比例不合适，即使有降解产物，也达不到有效的灵敏度和有效的分离。
因此，一个好的分析方法的建立首要问题应是围绕主成分和杂质的分离度和检测波长进行。
对于生产原料药的企业来讲，由于可以通过工艺得到中间体、副产物，在方法建立初始，首先应该将可能的中间体和副产物作为杂质对待，进行柱效、流动相及流动相比例、波长和分离度等方法学的研究。
方法建立成熟后，可根据中间体和副产物的安全性和工艺得到的难易程度决定是否固定为已知杂质。
如果工艺中难以得到，且比较安全，可考虑采用杂质校正因子加上相对保留时间的方法。
或采用杂质相对保留时间加上自身对照方法。
上述三种方法均有好的分离度和响应值（灵敏度）作保证。
也是研发和审评中应当提倡的。
如果原料合成中确实得不到副产物，对于有紫外吸收的样品可以用二极管阵列检测器，考察未精制的粗品，并对比已精制过的样品，确定粗品中各成分的分离度和样品中可能杂质的检测波长。
关于化工原料质量检验检测方面的问题探讨
关于化工原料质量检验检测方面的问题探讨摘要：原料是产品生产的基础，原料的质量直接决定着产品的质量。
当今社会，人们对产品的质量越来越关注，化工产品与人们的生活息息相关，其质量的好坏直接影响着社会大众的生活。
化工行业的企业及从业人员要想提高化工产品的质量，必须首先从保证化工原料的质量入手。
而化工原料质量检验检测，是保证化工原材料质量的最中心的环节。
本文即围绕化工原料检验检测有关方面的问题进行探究。
关键词：化工原料质量检验检测产品质量是企业生存与发展的生命线。
良好的产品质量能给企业带来良好的声誉，进而转化成巨大的物质财富。
化工产业生产工艺的复杂性以及化工产品的多样性都对化工原料的质量提出了更高的要求。
化工原料的质量检测是企业质量检测检验的首要环节，因而在企业质量控制和管理中占据着突出的地位。
针对当前我国化工原料质量检验检测面临的有关问题，本文主要从如下几个方面进行探讨：一、关于化工原材料的检验检测的概述所谓化工原料的质量检测是对化工原材料以及成品、半成品的成分进行检验分析，获取相关的数据信息并依此判定其质量的工作流程。
对化工原料的检验检测能够为后续的生产提供相关的质量信息，从源头上保证化工产品的质量。
化工原料的检测一般可以分为以下四个步骤：1.采样；2.样品的预处理；3.测定；4数据处理。
二、影响化工原料检验检测的主要因素（一）影响化工原料检验检测的人为因素影响化工原材料检测的人为因素主要分为管理人员因素和检测人员的因素。
一方面，企业质量管理人员对化工原料检测的重视程度和管理水平的高低都对原料检测的水准和效果产生重大影响。
有些企业的质量监督人员往往注重对终端产品的质量进行检测，而忽略对原材料的检验检测，使化工原料的检测成为企业质量检验的薄弱环节，甚至盲点。
另一方面，企业质量检测人员的素质也在很大程度上影响着化工原料检测的水平。
检测人员作为质量检测活动的执行者，其专业素质的高低和职业技能的熟练程度都会直接决定原料检验检测的质量和结果。
中国药典有关物质的检查方法
中国药典有关物质的检查方法中国药典有关物质检查那可真是超级重要哇！就像给药品做一次严格的体检一样。
检查方法呢，首先得有精密的仪器设备吧，把药品样本放进去，各种检测手段就开始大显身手啦。
那步骤到底是啥样呢？嘿嘿，先得准备好合格的样品，不能有一丁点儿马虎。
然后进行一系列的操作，比如色谱分析啥的，看看有没有不该出现的物质。
这就好比在一堆苹果里找坏苹果，得仔细又仔细。
注意事项可不少呢！操作一定要规范，不然结果就不靠谱啦。
就像做饭不按菜谱来，那味道能好吗？样品的处理要得当，不能污染了，不然咋能得到准确结果呢。
安全性方面那是必须得重视呀！做实验的时候可不能瞎搞，万一出点啥事儿可不得了。
这就跟开车得系安全带一样，安全第一嘛。
稳定性也很关键，要是实验结果一会儿一个样，那还咋判断药品合不合格呢？就像天气一会儿晴一会儿雨，让人摸不着头脑。
应用场景那可多了去啦！药品生产企业得用吧，得保证自己生产的药质量过关呀。
监管部门也得用吧，得监督市场上的药品是不是安全可靠。
这就像警察抓坏人，得有个好办法才能把坏人抓住。
优势也很明显呀，能准确地检测出有关物质，让我们放心使用药品。
就像有个超级侦探，能把
隐藏的问题都找出来。
实际案例来一个哈。
有个药厂生产的一批药品，通过中国药典有关物质检查方法，发现了一些小问题，及时进行了整改，避免了更大的损失。
这就像提前发现了身体里的小毛病，赶紧治疗，不然等严重了可就麻烦啦。
中国药典有关物质检查方法超棒，是药品质量的守护神，能让我们用上放心药。
中药行业中的药物原料药质量评价与监控方法
中药行业中的药物原料药质量评价与监控方法随着人们对健康的关注度不断提高，中药的研究和应用也越来越受到重视。
作为传统医学的重要组成部分，中药的药物原料药质量评价和监控方法成为中药行业发展的重要前提。
本文将探讨中药行业中的药物原料药质量评价与监控方法，以期为中药行业的科学发展提供一些参考。
一、药物原料药质量评价的重要性药物原料药是中药制剂的基础，其质量直接影响着中药制剂的疗效和安全性。
因此，对药物原料药的质量进行评价尤为重要。
评价药物原料药的质量需要从多个方面进行考虑，包括药材的来源、鉴别、纯度和稳定性等。
（一）药材的来源药材的来源直接关系到药物原料药的质量。
优质的药材原料应该来自合适的产地，并且在采摘、储存和运输过程中要符合规范。
同时，对于一些特定的药材来说，如何保证药材的产地纯度也是一个考验。
（二）药材鉴别药材鉴别是评价药物原料药质量的重要环节。
通过对药材的性状、外观、味道、气味等进行观察和比较，可以判断其真伪和质量。
同时，现代科技手段如红外光谱、气相色谱和液相色谱等也为药材鉴别提供了更加准确和快速的方法。
（三）药材纯度药材的纯度是衡量药物原料药质量的另一个重要指标。
药材的纯度包括其化学成分的含量、杂质的含量以及微生物的污染情况等。
因此，药材的纯度评价需要进行化学和微生物方面的分析。
（四）药材稳定性药材的稳定性是指其在采摘、储存和加工过程中的变化情况。
药材的稳定性直接影响着药物原料药的质量和有效性。
因此，在评价药物原料药的质量时，必须考虑到药材的稳定性并采取相应的措施进行监控。
二、药物原料药质量监控方法为了确保中药制剂的质量，中药行业需要建立一套科学合理的药物原料药质量监控方法。
以下是一些常用的监控方法：（一）质量控制药物原料药的质量控制是中药行业中的重要环节之一。
通过建立一系列的质量控制标准和标准化操作规程，可以对药物原料药的质量进行监控和控制。
同时，建立一个健全的质量管理体系，包括原材料采购、贮存、加工等各个环节，可以有效提高药物原料药的质量。
原料药的生产质量管理和检查
原料药的生产质量管理和检查随着人们生活水平的提高，对于药品的要求也越来越高，药品的生产质量管理和检查显得尤为重要。
而在药品生产的过程中，原料药则是不可或缺的一部分，因此原料药的生产质量管理和检查也成为了药品生产中的重要环节。
一、原料药的定义和类型原料药是指用于生产药品的化学品或物质，原料药按照其来源和用途可分为天然药源和人工合成药源，天然药源包括动物、植物、菌类等，人工合成药源包括有机合成药源、无机合成药源等。
无论是天然药源还是人工合成药源，其质量都至关重要，原料药使用不合格或者低质量的原料药会影响到药品的质量和疗效，甚至会对人体产生不可逆的伤害。
二、原料药的生产质量管理原料药的生产质量管理包括原料药的采购、质量控制、流程管控和出厂检验等。
下面分别介绍各个环节。
1、原料药的采购原料药的采购需要寻求正规的供应商，要求供应商须具备合法身份、符合药品生产和质量标准的资质、具有生产能力、经验、资金等等。
采购过程需要明确合同内容，包括采购数量、质量标准、验收要求、价格、付款方式等等，保证双方达成共识。
2、质量控制质量控制是一项十分重要的工作，质量控制需要对原料药进行严格的检测和分析。
原料药的质量控制方案需要符合药品质量检测和管理规定，必须经过药品检测机构的批准和验收方可放行。
对于原料药的标准，其包括纯度、外观、成分、微生物限度、杂质等方面，必须得到相关检测机构批准。
3、流程管控原料药在生产过程中须得到严格的流程管控，包括生产记录、中间检验记录、不良品处理记录、产品发放记录等等。
在生产过程中还要保证实验室检测的严格监控，确保产品质量符合应用要求。
4、出厂检验出厂检验是保证原料药质量及药品生产质量的一个重要环节。
出厂检验涵盖了标准测试、微生物测试、重金属痕量测试、辐射污染测试等等多方面。
检验结果批准后方可进行下一步生产或出货。
三、原料药的检查原料药检查是药品生产监管中最关键的环节之一，分为进口药品的检验和国产药品的检验。
原料药质量研究思路
原料药质量研究思路
原料药质量研究是药品生产过程中非常重要的环节，它涉及到药品的质量、安全性和有效性等方面。
以下是原料药质量研究的思路：
1. 确定研究目标：根据药品的特点和要求，明确原料药质量研究的目标和重点，例如，确定原料药的质量标准、检测方法和质量控制等。
2. 确定研究内容：根据研究目标，确定原料药质量研究的具体内容和方法，包括原料药的化学性质、物理性质、生物活性、纯度、杂质含量、稳定性等方面的研究。
3. 设计实验方案：根据研究内容和目标，设计实验方案，包括样品制备、实验方法、数据采集和处理等方面的内容。
4. 进行实验研究：根据实验方案，进行原料药质量研究的实验研究，包括样品的制备和处理、实验方法的实施、数据的采集和处理等方面的内容。
5. 分析实验结果：根据实验研究的结果，对原料药的质量进行评价和分析，包括原料药的质量标准、检测方法和质量控制等方面的内容。
6. 制定质量控制措施：根据原料药质量研究的结果，制定质量控制措施，包括原料药的生产、储存和运输等方面的内容，确保药品的质量和安全性。
7. 持续改进：在药品生产过程中，需要持续关注原料药的质量，并根据实际情况进行改进和完善，确保药品的质量和安全性。
总之，原料药质量研究是药品生产过程中非常重要的环节，需要综合考虑各种因素和标准，并结合专业医生的诊断和治疗，确保药品的质量和安全性。
浅析化工原料质量检验检测方面问题分析
浅析化工原料质量检验检测方面问题分析化工生产过程中，原料的质量检验检测是非常重要的一环，涉及到产品的质量、安全和环保等方面。
然而，在现实生产中，化工原料质量检验检测方面存在一些问题，需要加以分析和解决。
首先，化工原料的检验检测方法比较复杂。
因为化工原料的成分复杂、性质多样，检验检测时需要运用多种方法，如物理检测、化学检测、光学检测等。
不同的原料需要用不同的方法进行检测，这就要求检验检测人员具备丰富的专业知识和技能。
因此，化工企业需要加强对检验检测人员的培训和教育，提高他们的专业素质。
其次，检验检测设备和工具的不足也是问题之一。
一些小型化工企业由于资金有限，往往只有一些简单的检测设备和工具，在面对一些复杂的原料时就无法很好地进行检测。
因此，化工企业需要加强投入，提高检测设备和工具的质量和数量，以更加准确地检测原料的质量。
另外，在一些化工企业中，原材料的采购过程存在一些问题。
一方面，一些企业为了降低成本，选择了低价的原材料，导致产品的质量下降。
另一方面，一些企业为了节省时间和成本，从同一供应商采购原材料，容易形成“垄断”。
这就需要化工企业加强对原料供应商的管理和监督，保证原材料的品质，并根据需要选择多个供应商进行比较和选择。
最后，化工企业需要加强对化工原料的质量管理和追溯。
在化工生产中，如果出现产品质量问题，需要通过追溯原材料的来源和品质，找出问题的根源。
因此，化工企业需要建立起有效的质量管理和追溯机制，对原料的生产、检验检测和入库等环节进行全面监控和追溯。
综上所述，化工原料质量检验检测方面是一个非常重要的问题。
化工企业需要加强对检验检测人员的培训和教育，提高检测设备和工具的质量和数量，加强对原料供应商的管理和监督，并建立有效的质量管理和追溯机制，以提高原料的质量和保障产品的质量和安全。
药品生产监督原料药检查重点内容和检查方法指导原则
药品生产监督原料药检查重点内容和检查方法指导原则原料药是指用于生产药物制剂的活性物质，在监督检查时，应重点关注原料药生产工艺的稳定性以及杂质的可控性，当与其他原料药共用生产设施设备时，还应关注其清洁操作的有效性。
无菌原料药的无菌保证参考无菌药品分则检查。
1.设备检查方法:现场检查设备及管道，检查清洁规程及清洁操作。
检查内容：1.1设备的润滑剂、加热或冷却介质能否避免与中间产品或原料药接触。
1.2生产尽量是否使用密闭设备，敞口设备或者打开时是否有避免污染的措施。
1.3非专用设备更换品种生产时是否对设备彻底清洁。
1.4同一设备连续生产同一原料药或者阶段性连续生产数个批次时，是否规定适当的时间间隔对设备进行清洁。
1.5清洁程序验证后，是否定期按照验证中的检验方法对残留物进行监测。
2.生产工艺规程检查方法：检查工艺规程的完整性。
检查内容：生产工艺规程是否至少包括以下内容：2.1所生产的中间产品或原料药名称；2.2所使用原料、中间产品的名称、代码、投料量或投料比；投料量不固定的，应注明每种批量或产率的投料计算方法及投料量的合理变动范围;2.3生产地点、主要设备（型号及材质等）;2.4操作顺序，所用工艺参数的范围；完成单个步骤或整个工艺过程的时限（如适用）；2.5按生产阶段或时限计算的预期收率范围；2.6取样方法说明，所用原料、中间产品及成品的质量标准；2.7特殊预防措施、注意事项；2.8中间产品或原料药的贮存条件、贮存期限。
3.质量管理检查方法：检查成品、物料和相关材料的质量标准，抽查原料药杂质档案的建立情况，检查持续稳定性考察样品和有关考察报告、记录。
检查内容：3.1质量标准3.1.1原料药使用物料的质量标准是否根据原料药生产工艺要求、对产品质量的影响程度、物料的特性以及对供应商的质量评估情况合理制定。
3.1.2原料药质量标准是否包括对杂质的控制（如有机杂质、无机杂质、残留溶剂）。
3.1.3中间产品或原料药生产中使用的某些材料，如工艺助剂、垫圈或其它材料，可能对质量有重要影响时，是否也制定了相应材料的质量标准。
维格列汀原料药有关物质测定方法的研究
维格列汀原料药有关物质测定方法的研究目的建立高效液相色谱法测定维格列汀原料药的有关物质。
方法采用Waters XTerra MS C18柱（4.6mm×50mm，3.5μm），以磷酸盐缓冲液-水-乙腈-甲醇（80：120：3：3）为流动相A，以磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇（8：9：3）为流动相B，梯度洗脱，检测波长为210nm；流速1.5mL/min。
结果维格列汀与相邻杂质峰以及各杂质峰之间的分离度均大于1.3，检测限为1.2～1.6ng，定量限为2.4～3.3ng。
结论该方法适用于维格列汀关物质的测定。
[Abstract] Objective To establish an HPLC method to determine the related substance in Vildagliptin. Methods The column was Waters XTerra MS C18 （4.6mm×50mm，3.5μm），the mobile phase A was treated with phosphate buffer-water-acetonitrile-methanol（80：120：3：3），the mobile phase B was treated with phosphate buffer-water-acetonitrile-methanol（8：9：3），which was used as gradient elution.The detection wavelength was 210nm，the flow rate was 1.5mL/min. Results The resolution of vildagliptin and its related substance was above 1.3，detection limit was 1.2～1.6ng，quantification limit was 2.4～3.3ng. Conclusion The method was suitable for the determination of related substance in vildagliptin.[Key words] HPLC；Vildagliptin；Related substance；Determination維格列汀（Vildagliptin）是一种口服给药的Ⅳ型二肽基肽酶（DPP-4）抑制剂，通过与DPP-4 结合形成DPP-4复合物而抑制该酶的活性，在提高胰高血糖素样多肽（GLP）-1 浓度、促使胰岛B细胞产生胰岛素的同时，可降低胰高血糖素浓度，从而降低血糖，且对体重无明显影响[1-7]。
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发布日期20061130
栏目化药药物评价>>化药质量控制
标题关于原料药有关物质检查方法建立的思考
作者赵慧玲
部门
正文内容
审评四部七室赵慧玲
【摘要】本文针对审评原料药有关物质检查方法中存在的问题，介绍欧洲和英
国药典关于原料药已知杂质的研究现状和有关物质方法建立及质量控制，以供
申请人参考。
【关键词】有关物质、方法学、分离度。
笔者审评原料药有关物质检查方法中发现，大多申请人越来越多地认识到控制原料药有关物质的重要性，自行建立方法考察原料药中存在的有关物质。
但
在研究中往往片面认为样品通过了破坏性试验和1％自身对照法后的系统适用
性试验就符合了要求。
因此，忽视对主成分中杂质产生原因的分析，忽视仪器
的检测灵敏度的分析、忽略色谱柱（柱效）的选择、流动相及比例的选择、检
测波长的选择。
忽视主成分和可能产生的杂质分离度的问题。
1、原料药有关物质方法建立应关注的问题：
原料药中的杂质来源于合成的中间体、副产物、以及降解产物，建立方法初期，仅采用破坏性试验的方法考察降解产物的做法是片面的。
由于降解产物的量较小，如果选择的方法不好，比如，柱效低，波长选择不合理、流动相及流动相比例不合适，即使有降解产物，也达不到有效的灵敏度和有效的分离。
因此，一个好的分析方法的建立首要问题应是围绕主成分和杂质的分离度和检测波长进行。
对于生产原料药的企业来讲，由于可以通过工艺得到中间体、副产物，在方法建立初始，首先应该将可能的中间体和副产物作为杂质对待，进行柱效、流动相及流动相比例、波长和分离度等方法学的研究。
方法建立成熟后，可根据中间体和副产物的安全性和工艺得到的难易程度决定是否固定为已知杂质。
如果工艺中难以得到，且比较安全，可考虑采用杂质校正因子加上相对保留时间的方法。
或采用杂质相对保留时间加上自身对照方法。
上述三种方法均有好的分离度和响应值（灵敏度）作保证。
也是研发和审评中应当提倡的。
如果原料合成中确实得不到副产物，对于有紫外吸收的样品可以用二极管阵列检测器，考察未精制的粗品，并对比已精制过的样品，确定粗品中各成分的分离度和样品中可能杂质的检测波长。
方法确立后，可采用自身对照方法或面积归一化法控制杂质。
对于后一方法，在研发和审评中应当慎重选用。
如果证明上述四个方法是比较成熟的方法后，如果再加上破坏性试验考察降解产物，其方法就更加完整和适用。
2、介绍欧洲和英国药典控制有关物质关注的问题
欧洲和英国药典的原料药标准后面，大部分都附有可能产生的中间体和副产
物的结构，在有关物质质量控制中有些采用已知杂质的方法；有些采用杂质校正因子加上相对保留时间的方法；杂质相对保留时间加上自身对照方法和自身对照方法或面积归一化法。
例如：核黄素磷酸钠的有关物质检查就是采用HPLC的已知杂质－核黄素、其他杂质相对保留时间加上自身对照的方法。
取本品0.1g，用水50ml溶解，并用流动相稀释至100ml，取该溶液8ml，用流动相稀释至50ml，作为供试品溶液。
另取核黄素对照品60mg，加盐酸试液1ml 溶解，用水稀释至250ml, 取该溶液4ml，用流动相稀释至100ml，作为对照品溶液(a)。
再另取核黄素磷酸钠对照品0.1g，用水50ml溶解，并用流动相稀释至100ml，取该溶液8ml，用流动相稀释至50ml，作为对照品溶液(b)。
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（填充剂粒度：5μm；柱长：0.25m；内径：4.6mm）；以甲醇－7.35g/L磷酸二氢钾溶液（150：850）为流动相；检测波长266nm；流速2ml/分。
5－单磷酸核黄素的保留时间为20分钟；其他相对保留时间：3，4－二磷酸核黄素大约0.2；3，5－二磷酸核黄素大约0.3；4，5
－二磷酸核黄素大约0.5；3－单磷酸核黄素大约0.7；4－单磷酸核黄素大约0.9；核黄素大约2。
取对照溶液（a）100μl注入液相色谱仪，调节主峰高度为满量程的50％；再注入对照溶液（b）100μl，记录色谱峰直到核黄素的峰面积能被准确计算，且4－单磷酸核黄素峰与5－单磷酸核黄素峰的分离度应不小于1.5。
精密量取供试品溶液、对照溶液（a）和对照溶液（b）各100μl，分别注入液相色谱仪，供试品溶液的色谱图中，如有与核黄素峰保留时间相应的色谱峰，
其峰面积不得大于对照溶液（a）主峰面积（6.0％），二磷酸核黄素面积的和不得大于对照溶液（a）主峰面积（6.0％），且均应以干燥品计。
3、结合国内研发核黄素磷酸钠的状况提几点建议
在审评核黄素磷酸钠原料和注射剂有关物质的过程中发现，申请人常参照中国药典收载的核黄素磷酸钠及注射液标准项目进行。
忽视了国内外标准和国内同品种质量的调研，盲目申报。
一些资料中单磷酸核黄素的分离度并不好，从图谱看起来，表面上其质量比国外标准的质量好，但实际上是单磷酸核黄素等多个组分并未得到有效分离。
虽然国外将各单磷酸盐均看成有效成分，而未作为杂质控制，但在方法学研究中，的确关注了各单磷酸盐的分离度，这应是方法学研究的重点。
如果建立的方法不能使每一个成分分离，这个方法就不是一个好的方法。
从这个例子分析，审评中不能简单认为杂质个数少了，质量就好，杂质个数多了，质量就差，一定要结合分析方法的好坏，经过综合分析判断后下结论。
否则，容易犯主观主义和片面主义的错误，将由于因分析方法的分离度较差而导致的杂质个数少的药品误认为质量好。
其实，药品中包含着没有分开的成分，这个成分很可能是最不安全的成分。
因此，一个药品的有关物质方法的评价更应重视分离度方法的评价，在分离度合适的情况下，比较检出杂质的个数才有意义，不能简单的以检出杂质的个数多少论质量。
对核黄素磷酸钠，引起重视的应是分离度方法的问题，在有了好的分离度方法基础上，再根据每一个成分的安全性和生产工艺的成本，考虑对每一个成分的合理控制，这是有关物质研究的重点。
在可能的情况下，推荐使用国外药典
标准的有关物质检查方法和限度。
建议在仿制原料药时，首先应查阅国外药典同品种质量标准，借鉴国外的有关物质检查方法和限度，减少建立方法学和质量研究工作的盲目性。
在未有文献可借鉴时，根据我国实际的研究水平，建立有关物质的检查方法。
其二，由于国内仿制的原料药是可以豁免临床研究的，不同的合成工艺对主药的影响不同，而可能的中间体、副产物、降解产物会不同。
有关物质方法的确定一定要以工艺中的理论上的各成分的分离度为依据，并与已上市药品进行质量对比，确定可能的已知杂质或杂质相对保留时间保证方法的分离度。
其三，关注工艺杂质并兼顾原料药的降解产物的安全剂量，其限度可以以已上市药品的对照数据为依据。
原料药有关物质的控制方法对质量控制来说至关重要，它是衡量质量和稳定性一致性的尺子。
因此，不能忽视有关物质检查方法的验证或方法建立。
上面是以审评核黄素磷酸钠原料和注射剂有关物质方法为例，说明方法建立应关注的重点问题是分离度，没有分离度作保证，方法的根基就不牢固。
希望能对申请人的研发起到帮助，并减少申报资料的发补率。