人外周血中性粒细胞分离液试剂盒使用说明

人外周血中性粒细胞分离液试剂盒使用说明

货号：P9040

规格：2×200mL/kit

保存：18℃-25℃保存，有效期两年。人外周血中性粒细胞分离液试剂盒易感染细菌，需无菌条件下操作。无菌条件下操作，启封后常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

试剂盒内容：

试剂A200mL

试剂C200mL

清洗液（赠品）200mL

红细胞裂解液（赠品）100mL

说明书1份

操作步骤：

情况A:血液样本小于5mL时，实验方法如下：

1.取一支15mL离心管，先加入3mL试剂A后加入2mL试剂C，制成梯度界面。

2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面之上，400-500g，离心20-30min（注：如改变血液样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。）

3.离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层为单个核细胞，下层细胞为中性粒细胞。

4.用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层，如有红细胞混杂则加入适量的红细胞裂解液，将红细胞裂解，即得目的细胞。

5.将获得的细胞层移至另一15mL离心管中，向所得离心管中加入10mL清洗液，混匀细胞。

6.250g，离心10min。

7.弃上清。

8.用5mL清洗液重悬所得细胞。

9.250g，离心10min。

10.重复7、8、9，弃上清后以0.5mL后续实验所需相应液体重悬细胞。

情况B:血液样本大于等于5mL时，实验方法如下：

1.取一支适当的离心管，依次小心加入试剂A、试剂C（试剂A与试剂C体积比为3:2，试剂总量与稀释后的样本量相等），制成梯度界面。

2.将血液样本小心加于分离液之液面上，450-650g（最大离心力可至1000g），离心20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需要客户自己摸索，以达到最佳分离效果。加入血液样本后，样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。

3.剩余步骤同“情况A”中步骤3至步骤10.

注意事项：

1.全程过程样本、试剂及实验环境均需要在20℃±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取血后2h内进行实验，血液存放时间越久，分离效果越差。血液放置超过6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

2.本实验最好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理后的玻璃制品，因为静电作用会导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

3.分离液用量大于血液样本时，分离效果更佳。

当血液样本粘度过高需要稀释时，最优稀释方法：将血液与样本稀释液1:1稀释混匀备用。注：不当的稀释方法会降低细胞的得率及活性。如血液样本经过稀释则分离过程中需要适当降低离心力和离心时间。