API含量测定验证方案1
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
API含量测定方法验证方案
CCC制药有限公司
验证方案起草、审核、批准表
计划验证时间
2008年9月
验证小组人员名单
目录
1、概述 (5)
2、试验所需仪器 (5)
3、试剂和样品 (5)
4、色谱条件 (5)
5、溶液配制 (5)
6、专属性试验 (6)
7、溶液稳定性试验 (6)
8、线性试验 (7)
9、回收试验 (7)
10、精密度试验 (8)
11、检出限和定量限 (9)
12、含量测定方法评价 (10)
1、概述
通过对API含量测定方法的验证,得到可信赖的和准确的数据,用于药品的含量测定,从而验证该方法的可行性。
2、试验所需仪器
分析天平(灵敏度为 0.01mg )型号编号有效期
液相色谱仪型号编号有效期
3、试剂和样品
乙腈HPLC级
API标准品USP标准品
API有关物质A USP标准品
有关物质B USP标准品
有关物质C USP标准品
4、色谱条件
色谱柱:4.6mm×10cm C8 柱,其填料粒径为3.5微米
检测波长:254nm
流速:1.0 ml/min
进样量:20μl
柱温:40℃
流动相:A溶液和B溶液不同比例的混合溶液。(见下表)
其中,稀释液——水:乙腈(60:40)
A溶液——水:乙腈(70:30)
5、溶液配制
系统适应性溶液:取API标准品和API相关物质A和相关物质B标准品,精密称定,用稀释液配制成0.05mg/ml的溶液。
标准溶液:取适量API标准品,用乙腈溶解,超声处理,得到1.0mg/ml的溶液。取4ml该溶液置于10ml容量瓶中,用水稀释至刻度。用稀释液进一步稀释,即得浓度为0.04mg/ml的溶液。
供试溶液:取本品约20mg,置于50ml容量瓶中,精密称定,用20ml乙腈溶解(可以超声处理),然后用水稀释至刻度。吸取1ml此种溶液置于10ml容量瓶中,用稀释液稀释至刻度,混匀即得。
6、专属性试验
取系统适应性溶液注入色谱系统,记谱色谱图,API相关物质B(离API峰最近的杂质峰)与API峰的分离度应不小于1.5,各杂质峰分离良好,同时取稀释液作空白溶液,注入色谱系统,记谱色谱图,在API出峰处无干扰峰出现。同时与API降解试验结果对比,各
降解产物峰在API峰处无干扰,不影响API测定。
7、溶液稳定性试验
取本品约20mg,置于50ml容量瓶中,精密称定,用20ml乙腈溶解(可以超声处理),然后用水稀释至刻度。吸取1ml此种溶液置于10ml容量瓶中,用稀释液稀释至刻度,混匀即得制成供试品溶液。取供试品溶液分别于0小时,2小时,4小时,6小时,8小时注入色谱系统,记谱色谱图,记录API峰面积,8小时内API峰面积的相对标准偏差(RSD%)不大于2.0%。
8、线性试验
200%标准贮备溶液:取API标准品20mg,精密称定,置50ml容量瓶中,用20ml乙腈溶解(可以超声处理),然后用水稀释至刻度。精密吸取10ml此种溶液置于50ml容量瓶中,用稀释液稀释至刻度,混匀即得浓度为0.08mg/ml的200%的标准贮备溶液。
160%标准溶液:精密移取8.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中,加稀释液稀释至刻度,混匀即得。
120%标准溶液:精密移取6.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中,加稀释液稀释至刻度,混匀即得。
100%标准溶液:精密移取5.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中,加稀释液稀释至刻度,混匀即得。
80%标准溶液:精密移取4.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中,加稀释液稀释至刻度,混匀即得。
40%标准溶液:精密移取2.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中,加稀释液稀释至刻度,混匀即得。
20%标准溶液:精密移取1.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中,加稀释液稀释至刻度,混匀即得。
分别取上述线性供试品溶液注入液相色谱仪,记录API峰面积,以API的峰面积对其浓度进行一元线性回归,其相关系数(R)不小于0.999。
9、回收试验(标准加入法) 标准溶液:按方法要求制备
供试品溶液:按方法要求制备 120%加标供试品溶液:以线性试验中120%的标准溶液替代稀释液配制供试品溶液,平行制备三份。
100%加标供试品溶液:以线性试验中100%的标准溶液替代稀释液配制供试品溶液,平行制备三份。
80%加标供试品溶液:以线性试验中80%的标准溶液替代稀释液配制供试品溶液,平行制备三份。
测试法:分别吸取上述配制好的溶液,按前述色谱条件进样,记录API 峰面积,按下式计算回收率,要求回收率在98%~102%范围内,9个回收率的RSD%应不大于2.0%。
%100%
⨯⨯-=加标标准溶液浓度标准溶液平均主峰面积供试液平均主峰面积)
(加标供试液主峰面积回收率
10、精密度试验(系统精密度,重复性和方法中间精密度试验)
方法重复性-1:第一天(不同人或不同仪器),按5中供试品配制方法,平行配制六份样品,按含量测试法进行测定,六份样品检测结果的相对标准偏差(RSD )不大于2.0%。
方法重复性-2:第二天(不同人或不同仪器),按5中供试品配制方法,平行配制六份样品,按含量测试法进行测定,六份样品检测结果的相对标准偏差(RSD )不大于2.0%。
每次新鲜配制标准溶液和供试品溶液。
方法中间精密度:两次方法重复性的12个结果的RSD%应不大于3.0%。 系统精密度:两次方法重复性试验的标准溶液的6次重复进样峰面积的RSD%应不大于
11、检出限和定量限
对线性溶液中20%的标准溶液的S/N 进行评价,定量限S/N 应不小于10,检出限S/N 应不小于3。
N S C C DL /3⨯=
N
S C
C QL /10⨯= 式中:C DL ——检出限(g/ml ) C QL ——定量限(g/ml )
C ——样品浓度(g/ml ) S/N ——信噪比
12、含量测定方法评价
附:我们的相关提问:
1、上面5中标准溶液的配制是直接从USP31中翻译过来的,但我们觉得那种说法很繁