方法学验证方案

***含量测定

方法学确认方案日期：2016年1月

验证方案审查与批准

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目录

1 目的 (4)

2 范围 (4)

本方案适用于*****药业股份有限公司齐墩果酸片含量测定方法的确认。 (4)

3 验证机构与职责 (4)

4 定义 (5)

5 参考文件 (5)

6 风险因素分析 (5)

7 验证准备 (6)

8 检测方法的描述 (6)

8.1 药品与试剂的准备 (6)

9 验证实施 (8)

11 确认结果评定与结论 (14)

12 附录目录 (14)

1 目的

对苦参膜中的含量测定检测方法进行确认，确保方法的可行性，以便为有效控制苦参膜的含量提供依据。

2 范围

本方案适用于*****药业股份有限公司齐墩果酸片含量测定方法的确认。

3 验证机构与职责

3.1验证小组成员

3.2 职责

3.2.1验证小组组长职责

3.2.1.1保证确认方案及各种检查表的起草。

3.2.1.2保证在执行前完成对确认方案及各种检查表的审核和批准。

3.2.1.3负责对确认小组成员进行本方案的培训。

3.2.1.4保证完全按照确认方案实施。

3.2.1.5确保能及时发现偏差，并按照已经达成一致的偏差处理方法对其进行记录、纠

正、调查和最终确认。

3.2.1.6确保确认报告的生成、审核和批准。

3.2.2QA职责

3.2.2.1执行前完成对确认方案及各种检查表的审核。

3.2.2.2负责确认过程的监控和检查，保证确认方案的实施，参与确认结果评价。

3.2.2.3参与确认偏差的调查、处理、和评估。

3.2.2.4确认过程中，如有变更，保证按《变更处理程序》执行。

3.2.3其它成员职责

3.2.3.1执行前确认确认方案已批准，并经过培训。

3.2.3.2按确认方案实施确认，收集、整理确认数据，完成确认记录和报告。

3.2.3.3参与确认偏差的调查和处理，确认通过偏差修订和解决方案。

3.2.3.4确认确认过程中的变更在实施前已经批准。

4 定义

4.1线性：指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。4.2准确度：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表

示。

4.3重复性：再规定范围内，取同一浓度的供试品，用6个测定结果进行评价。

4.4中间精密度：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员或用不同设备测定结果之间

的精密度，称为中间精密度。

5 参考文件

5.1 药品生产质量管理规范（2010年修订版）

5.2 药品生产验证指南

5.3 中国药典（2015年版）二部

5.4《国家药品监督管理局国家药品标准》

5.5 公司相关文件：

5.5.1苦参膜质量标准及检验规程（）

5.5.2验证管理（）

5.5.3变更控制操作规程（）

5.5.4偏差处理操作程序（）

5.5.5纠正措施与预防措施操作规程（）

5.5.62016年度验证总计划

6 风险因素分析

风险评估将采用失效模式及影响（FMEA）的工具来评估和衡量方法参数失效后对产品分析结果的影响。评估过程将参照公司质量风险管理的要求，风险等级为低、中、高级别的必须给出合理的建议措施，之后再次对建议的风险控制措施进行评估以确保风险的降低，分析、评估结果见附录1《风险评估表》。

7 验证准备

7.1 确保所有方法SOP是最新版本且经过批准，将检查结果记录在附录2《文件检查》内。

7.2 确认参与验证的人员都经过此方案和相关SOP的培训，和识别所有签字和草签本方案任何数据表的人员。将检查结果记录在附录3《培训检查和签名确认》内。

7.3确认验证过程中用到设备、计量仪器都是经过校验，并在有效期内，将检查结果记录在附录4《确认用仪器/仪表校准检查》内。

8 检测方法的描述

8.1 药品与试剂的准备

***对照品（中国药品生物制品检定院提供），***（为*****药业股份有限公司生产）；硅钨酸试液、碘化汞钾试液、苦味酸、氯仿、甲醇、浓氨、稀碘化铋钾试液、盐酸液

（0.2mol/L）、氢氧化钠液（1mol/L）、氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）、硫酸滴定液（0.05mol/L）、甲基红示液、磷酸、乙腈、无水乙醇。

8.2 仪器分析条件

电子天平（FA2014）、超声池（KQ-300DE）、电热恒温水浴锅（DK-98-1）、高效液相（LC-10ATVP)

8.3检测方法

显色鉴别、色谱鉴别、酸碱滴定法、高效液相色谱法

8.4检测操作

8.4.1鉴别

8.4.1.1显色鉴别：样品连续三批，A、B两位组员各取样品1号、样品2号约0.15g，分置三支试管中，加水2ml使溶解，分别加硅钨酸试液、碘化汞钾试液及苦味酸试液1～2滴，分别生成白色、淡黄色及黄色沉淀。

8.4.1.2薄层鉴别：样品连续三批，A 、B 两位组员分别取本品0.1g ，加甲醇10ml 使溶解，超声提取15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液；另取苦参碱及氧化苦参碱对照品适量，加甲醇制成每1ml 中各含5mg 的溶液作为对照品溶液，照薄层色谱法（附录Ⅵ B ）试验，取上述三种溶液各2～3μl ，分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（5:0.6:0.3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的两个斑点。 8.4.2.3酸碱滴定法：连续三批样品，两位组员分别取样品1、样品2，各10片，剪碎，取一片重两份，各精密称定，加氯仿25ml 回流3次，每次1小时，合并提取液，置水浴上挥干，残渣用0.2mol/L 盐酸液5ml 使溶解，滤过，滤液置入分液漏斗中，用水10ml 分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化钠约6g 与1mol/L 氢氧化钠液5ml,摇匀，用三氯甲烷振摇提取5次（25、20、10、10、10ml ）,每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml 振摇洗涤，再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g 的脱脂棉层滤过。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（0.05mol/L ）10ml 及新沸过的冷水20ml ，振摇提取后，分取酸层，氯仿层再用新沸过的冷水洗涤3次，每次10ml ，合并酸液与洗涤液，置水浴上加热，除去残留的三氯甲烷，放冷至室温，加甲基红指示液2滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L ）滴定。每1ml 的硫酸液（0.05mol/L ）相当于26.44mg 的C 15H 24N 2O 2。

本品每片含总生物碱以****80.0%～110.0%。相对偏差（dr%）不得超过0.6% 计算公式：

004322110

0100100

⨯⨯⨯⨯⎪⎭

⎫ ⎝⎛

⨯-⨯=M m T C C V C C V C

C1：硫酸滴定液的实际浓度（mol/L)； C2：硫酸滴定液的理论浓度（mol/L)； C3：氢氧化钠滴定液的实际浓度（mol/L)； C4：氢氧化钠滴定液的理论浓度（mol/L)；

V1：加入硫酸滴定液的体积（ml)； V2：消耗氢氧化钠滴定液的体积(ml)；

T ：标示量（26.44mg)；

m ：该批20片苦参膜的平均重量(g)；