血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)使用操作说明
血清抗体(固相凝集法)检测标准操作规程
血清抗体(固相凝集法)检测标准操作规程1. 引言血清抗体(固相凝集法)检测是一种常用的免疫学检测方法,用于检测体内是否存在特定病原微生物抗体。
本文档旨在规范血清抗体(固相凝集法)检测的操作流程,确保准确性和可重复性。
2. 实验材料- 试剂:包括抗原和抗人免疫球蛋白球(用于制备抗人血清)。
- 血清样本:待检测的血清样本。
- 试验器材:包括试管、酶标板、孵育箱、离心机等。
3. 实验步骤3.1 血清样本的准备1. 将待检测的血清样本离心10分钟,取清晰的上清液进行检测。
2. 将血清样本标记好编号,并在记录表上记录相应信息。
3.2 抗原制备1. 根据需要的抗原种类和浓度,制备抗原溶液。
2. 将制备好的抗原标注好名称、浓度和保存日期,并储存在冰箱中。
3.3 反应系统的制备1. 将所需的抗原溶液和血清样本放在冰箱中保持冷藏状态。
2. 提前准备好所需的试管、酶标板等实验器材。
3.4 实验操作1. 取出冷藏的抗原溶液和血清样本,放在室温下预热10分钟。
2. 将抗原溶液、血清样本和洗涤缓冲液按照比例加入酶标板中,轻轻摇晃使其充分混合。
3. 孵育酶标板在孵育箱中,温度设定为37℃,时间为45分钟。
4. 定时结束后,将孵育完的酶标板放在离心机中,离心5分钟,倒掉上清液。
5. 加入洗涤缓冲液,轻轻拍打酶标板底部以去除未结合的物质,倒掉上清液。
6. 重复洗涤步骤3次后,倒掉上清液,轻轻用纸巾吸干酶标板底部的液体。
7. 加入显色液,孵育酶标板在孵育箱中,温度设定为37℃,时间为30分钟。
8. 定时结束后,加入终止液,停止显色反应。
9. 使用酶标仪读取吸光度,记录各孔的OD值。
4. 数据处理与结果判读1. 根据各孔的OD值计算平均OD值和标准差。
2. 利用设定的标准曲线,计算待测样本的抗体浓度。
3. 根据抗体浓度和设定的标准,判读样本的阳性与阴性结论。
4. 记录数据并生成报告。
5. 安全注意事项1. 实验操作时需戴上实验手套,严禁食用。
血小板相关抗体IgMelisa试剂盒,人ELISA试剂盒
血小板相关抗体IgMelisa试剂盒,人ELISA试剂盒血小板相关抗体IgMelisa试剂盒,人ELISA试剂盒Elisa kit规格:48孔配置/96孔配置标准品稀释液:1.5ml×1瓶酶标试剂:3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96)用途:科研实验等领域科学研究,不得用于临床诊断。
供应商:上海樊克生物有限公司血小板相关抗体IgMelisa试剂盒,人ELISA试剂盒操作步骤标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl?,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到?第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各?取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul?,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标?准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别?加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度?分别为1800ng/L,1200ng/L?,600ng/L,300ng/L,?150ng/L)。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。
在?酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)?。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍?干。
血小板试剂盒操作流程
血小板抗体筛检和交叉配型试剂盒操作流程血小板抗体筛检:将机采三人份新鲜O型血小板血浆(注意:72小时内采集,室温震荡保存,无聚集。
)混合均匀,用生理盐水调整血小板浓度为100-200*109个/L,将血小板加入反应板孔中央,每孔50µl(注意:移液器枪尖不要触碰反应板底部和周边)。
50g离心5min用洗液(蒸馏水30倍稀释)洗涤反应板3次,每次静止放置半分钟,以除去未与反应板上包被的血小板单克隆抗体结合的血小板(注意:洗液要逐滴加入并轻轻甩去沾干不能拍板)。
向每个反应孔中加入2滴(100µl)低离子介质,并向相应的孔中分别加入1滴(50µl)待检患者血清(血浆)、阴性、阳性对照。
37℃水浴孵育30min用洗液洗涤反应板5次(方法同上)立即加入1滴(50µl)抗人IgG试剂和1滴(50µl)指示细胞,振动混匀。
200g离心5min肉眼判读结果血小板交叉配型:将机采三人份新鲜O型血小板血浆混合均匀,用生理盐水调整血小板浓度为100-200*109个/L。
同时将供者和受者富含血小板血浆3000rpm 5min离心,使血浆和血小板分离,移出上层血浆至另一试管中备用,用生理盐水将血小板调整至上述浓度。
将血小板分别加入标记好的反应板孔中央,每孔50µl(注意:血小板为72小时内采集,室温震荡保存,无聚集;移液器枪尖不要触碰反应板底部和周边)。
50g离心5min用洗液(蒸馏水30倍稀释)洗涤反应板3次,每次静止放置半分钟,以除去未与反应板上包被的血小板单克隆抗体结合的血小板(注意:洗液要逐滴加入并轻轻甩去沾干不能拍板)。
向每个反应孔中加入2滴(100µl)低离子介质,并向相应的孔中分别加入1滴(50µl)供受者血浆阴性、阳性对照。
37℃水浴孵育30min用洗液洗涤反应板5次(方法同上)立即加入1滴(50µl)抗人IgG试剂和1滴(50µl)指示细胞,振动混匀。
(固相凝集法)
血小板单层
阴性
2.3 药物依赖性抗体检测
血小板筛检(谱)细胞 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
反应板 (已包被血小板单抗)
药物 (终浓度100U/ml) 血小板单层
阴性
指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
反应板 (已包被血小板单抗)
阴性
指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
阳性反应 200g,5min离心
阴性反应
2.2.2 自身游离抗体检测
患者血小板 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
反应板 (已包被血小板单抗)
反应板 (已包被血小板单抗)
血小板单层
阴性
指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
阳性反应 200g,5min离心
3 交叉配型
供血者血小板 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
受血者血清/血浆 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
反应板 (已包被血小板单抗)
阳性反应 200g,5min离心
阴性反应
指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
阳性反应 200g,5min离心
阴性反应
2.4 HLA-I类群反应性抗体(PRA)检测
O型健康人血小板 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
人血小板活化因子(PAF)分析检测ELISA试剂盒使用说明书
人血小板活化因子(PAF)分析检测ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用Purpose目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中转化生长因子(PAF)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血小板活化因子(PAF)水平。
用纯化的转化生长因子(PAF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子(PAF),再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的转化生长因子(PAF)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人血小板活化因子(PAF)浓度。
试剂盒内容及其配制:试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)塑料膜板盖1块半块标准品:100ng/ml 1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)标准品稀释缓冲液1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)生物素标记的抗OT抗体1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)亲和链酶素-HRP 1瓶(12ml)1瓶(5ml)洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)底物A 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)底物B 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品:45μmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存自备材料:1. 蒸馏水。
血小板抗体(固相凝集法)检测标准操作规程
1目的为规范血小板抗体检测操作,保证检测的有效性及临床用血的安全性,依据《输血实验室管理规程》4.19.4条款的要求制定本规程。
2适用范围适用于医疗机构输血科(血库)进行血小板抗体检测。
3职责医疗机构输血科(血库)技术人员负责血小板抗体的检测。
4原理微孔板反应孔中包被有抗血小板单克隆抗体(针对血小板表面糖蛋白IIb/IIIa、Ib/V/IX),血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部表面形成血小板单层。
加入受检血清或血浆,在孔中经过孵育后,若该血清或血浆中含有血小板抗体,则该抗体和反应孔中的血小板单层结合,未结合的成分通过洗涤被去除。
加入抗IgG及IgG致敏红细胞(指示红细胞),经离心后指示红细胞通过抗IgG的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合,因此阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面,而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。
5设备与材料5.1材料血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)、血小板抗体筛检细胞(冻干粉)、血小板抗体检测用指示红细胞(固相凝集法)。
5.2设备平板离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱。
6检测环境室温应控制在18-25℃,湿度应控制在30%-70%。
7操作步骤7.1血标本采集及处理7.1.1检测样本准备7.1.1.1采集患者静脉血2ml,乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)或枸橼酸钠抗凝,经3000rpm离心5分钟,分离出血浆进行检测。
7.1.1.2如果患者血标本为如果患者血标本为不抗凝血,经3000rpm离心5-10分钟,取上清进行检测。
7.1.1.3如果患者血标本为血浆(血清),3000转离心5-10分钟。
7.1.2血标本处理样本4℃可保存7天。
若需长期保存,应离心后分离血清或血浆,-20摄氏度冻存。
7.2平衡室温取出血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)、血小板抗体检测用指示红细胞(固相凝集法)、血小板抗体筛检细胞(冻干粉)放在室温中平衡至室温。
7.3制备血小板悬液7.3.1商品化的冻干血小板稀释后直接使用。
医院检验中心血小板抗体测定PAIgGPAIgMPAIgA操作规程
医院检验中心血小板抗体测定(PAIgG,PAIgM,PAIgA)操作规程
(1)试剂
1)鼠抗人IgG多抗 cat NO 0279 蒸馏水复溶后分装,每支50ul,置-30℃贮存
2)鼠抗人IgM多抗 cat NO 0285 同上3)鼠抗人IgA多抗 cat NO 0278 同上4)FITC羊抗鼠荧光单抗 cat NO 0279 按说明书复溶,置-30℃贮存
(2)方法
血小板固定:取富含血小板的血浆0.4ml加1mlTEN缓冲液中。
再取上述稀释血浆0.4ml加等量2%的多聚
甲醛,室温固定15分钟。
洗涤:在已固定的血小板试管中加2mlTEN缓冲液,3000转/分,离心5分钟,洗涤2次。
弃上清液,加TEN
缓冲液0.4ml。
测定:测定管中分别加入IgG、IgM、IgA单抗50ul,将固定血小板50ul分别加入测定管和对照管。
室温
20分钟,用2mlTEN 3000转/分离心5分钟洗涤一
次后,再加0.6mlTEN。
上机:用各自的阴性对照。
阴性对照值在1.0左右,计数1万个血小板。
( 3 ) 参考范围
PAIgG 6.3-20.3%
PAIgM 2.6-14.5%。
抗体试剂盒使用方法
抗体试剂盒使用方法1. 引言抗体试剂盒是一种用于检测和定量分析特定抗体的工具,广泛应用于生命科学研究和临床诊断。
本文将详细介绍抗体试剂盒的使用方法,包括准备实验材料、样品处理、实验步骤、结果解读等内容。
2. 准备实验材料在开始实验之前,需要准备以下实验材料: - 抗体试剂盒:包括抗体、底物、缓冲液等。
- 样品:可以是血液、组织、细胞等。
- 实验仪器:如离心机、洗板机、显微镜等。
- 实验耗材:如离心管、试管、96孔板等。
- 实验液体:如去离子水、PBS缓冲液等。
3. 样品处理在进行抗体试剂盒实验之前,需要对样品进行处理。
处理步骤可以根据具体实验目的进行调整,但通常包括以下几个常见步骤: 1. 收集样品:根据实验需要,选择适当的样本收集方式。
例如,如果是血液样品,可以通过静脉采血或指尖采血收集。
2. 样品保存:根据实验要求,将样品储存于适当的条件下,如低温冷藏或冷冻保存。
3. 样品处理:根据实验需求,对样品进行处理,如离心、裂解、稀释等。
4. 实验步骤抗体试剂盒的使用方法通常包括以下几个步骤: 1. 准备工作台:清洁工作台,并准备所需实验仪器和试剂。
2. 样品加入:将待测样品加入到96孔板中。
根据实验要求,可以设置空白对照组和阴性对照组。
3. 加入抗体:向每个孔中加入适量的抗体试剂。
注意避免交叉污染。
4. 孵育反应:根据试剂盒说明书,设定适当的孵育时间和温度。
5. 洗涤步骤:用洗涤缓冲液洗涤孔板,去除未结合的物质。
6. 底物加入:加入底物溶液,在适当条件下进行反应。
7. 反应停止:停止底物反应,并记录反应时间。
8. 测量结果:使用合适的仪器,如酶标仪或荧光仪,测量吸光度或荧光强度。
9. 数据分析:根据试剂盒说明书提供的方法,对实验结果进行定量分析。
5. 结果解读抗体试剂盒的实验结果通常以定量的方式呈现。
根据试剂盒说明书提供的标准曲线或参考值范围,可以对样品中目标抗体的含量进行定量分析。
血小板抗体试剂盒
人抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关液体中血小板抗体IgG/M/A含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中血小板抗体水平。
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入血小板抗体、生物素化的抗人血小板抗体抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的血小板抗体呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板:一块(96孔)标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为500ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释成500ng/ml ,250ng/ml,125ng/ml,62.5ng/ml,31.2ng/ml,15.6ng/ml,7.8ng/ml样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml,临用前15分钟内配制。
如配制250ng/ml标准品:取0.5ml500ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
2.样品稀释液:1×20ml/瓶。
3.检测稀释液A:1×10ml/瓶。
4.检测稀释液B:1×10ml/瓶。
5.检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100ul),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
6.检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。
血小板实验流程
血小板抗体检测实验操作流程
【实验步骤】
1、试剂盒平衡至室温(18-25℃)
2、将25倍的浓缩洗涤液用蒸馏水稀释成工作液(浓缩洗液与蒸馏水1:24稀释)
3、制备血小板悬液(将冻干血小板复溶后直接使用);
每支加500ul生理盐水→室温静置5分钟后混匀(现用现制备);
1滴(50ul)血小板抗体筛选细胞
10秒钟
5分钟(程序1)
3次
2滴(100ul)低离子强度溶液(紫色液体)
50ul患者样本;阴性对照(绿色)、阳性对照(红色)
℃水浴箱孵育30分钟(气浴35分钟)
5次
1滴(50ul)抗人球IgG
1滴(50ul)指示红细胞
5分钟(程序2)后即可观察结果。
【结果判定】
1、阳性结果:指示红细胞平铺在反应孔底部表面;若指示红细胞只结合到部分孔底有平铺趋势,细胞外沿有不规则毛刺,并且结合的区域比阴性对照大为弱阳性。
表明患者血清或血浆中含有血小板抗体;或血小板交叉配型不合。
2、阴性结果:指示红细胞在反应孔底部中央形成红细胞聚集或红细胞聚集区出现少许中空形状但聚集区外沿光滑。
表明患者血清或血浆中不含血小板抗体;或血小板交叉配型相合。
血小板抗体检测及交叉配型反应格局
-±1+2+3+4+如果结果可疑,或阳性对照和/或阴性对照未出现正确结果,则必须重新检测。
血浆抗体(固相凝集法)检测标准操作规程
血浆抗体(固相凝集法)检测标准操作规程1. 引言血浆抗体(固相凝集法)检测是一种用于检测特定疾病的抗体的方法。
本文档旨在规范操作流程,保证检测结果的准确性和可靠性。
2. 检测设备和试剂- 血浆抗体检测仪器- 血清分离管- 血浆检测试剂盒- 一次性试剂盒3. 检测操作3.1 血浆样本准备1. 登记样本基本信息,包括样本编号、姓名、性别、年龄等。
2. 使用无菌注射器采集血浆样本,遵循无菌操作规程,避免交叉污染。
3. 将血浆样本转移到血清分离管中,并标注好样本编号。
4. 使用离心机进行离心,离心参数设置为3000rpm,离心时间为10分钟。
3.2 样本测试1. 打开血浆抗体检测仪器,进行预热,预热时间一般为30分钟。
2. 准确读取试剂盒上的操作步骤,按照相应步骤进行操作。
3. 取出一次性试剂盒,避免直接阳光照射,避免检测结果受到干扰。
4. 将样本稀释到适当浓度,根据试剂盒的要求进行相应比例的稀释。
5. 将血浆样本加入试剂盒中,并注意控制滴加速度和加样量。
6. 配置试剂盒提供的洗涤液,根据规定的比例将其稀释。
7. 连续计时,按照要求进行洗涤操作。
8. 分析结果,根据检测仪器的显示结果,记录样本的阳性或阴性。
3.3 结果解读1. 根据试剂盒提供的说明书,将样本的结果进行解读。
2. 若结果呈阳性,表示检测到特定疾病抗体,需进一步确认。
3. 若结果呈阴性,表示未检测到特定疾病抗体,但不排除假阴性结果的可能性。
4. 结果解读完成后,记录结果,包括阳性率、阴性率、假阳性率等。
4. 检测质量控制1. 定期校准和维护检测仪器,确保其稳定性和准确性。
2. 使用质控品进行质量控制,校验检测结果的准确性。
3. 定期参加相关质检活动,提高检测水平,确保操作符合规范。
5. 安全注意事项1. 严格遵守无菌操作规程,避免交叉污染。
2. 使用无菌注射器和一次性试剂盒,避免重复使用造成污染。
3. 注意检测仪器的电器安全,确保正常工作和操作。
固相凝集法检测血小板抗体原理
固相凝集法检测血小板抗体原理嘿,朋友们!今天咱来聊聊固相凝集法检测血小板抗体这档子事儿。
你说这血小板抗体啊,就像是身体里的小“捣蛋鬼”,要是没被咱及时发现,那可能就会惹出不少麻烦呢!而固相凝集法呢,就像是一个厉害的“侦探”,专门来把这些“捣蛋鬼”给揪出来。
想象一下哈,这个固相凝集法就像是一场精彩的“捉迷藏”游戏。
我们把带有血小板抗原的固相载体当成是一个“秘密基地”,然后把我们要检测的样本加进去。
这时候,如果里面有血小板抗体这个“小调皮”,它就会被“秘密基地”给吸引住,然后紧紧地黏上去,这不就被我们发现啦!这过程可神奇着呢!就好像我们在茫茫人海中一下子就找到了那个特别的人一样。
而且这个方法特别靠谱,它能很准确地告诉我们有没有血小板抗体的存在。
比如说吧,要是有人经常出现血小板减少的情况,那我们就可以用固相凝集法来检测一下,看看是不是这些“捣蛋鬼”在捣乱。
要是真的检测出来了,那我们就能赶紧想办法对付它们,让身体重新恢复健康。
这就好比我们家里进了老鼠,我们得赶紧找到它们的踪迹,然后想办法把它们赶出去或者抓住,不然家里可就不得安宁啦!固相凝集法就是我们找这些“老鼠”的好工具。
它操作起来也不难,只要按照步骤一步一步来,就像我们做一道熟悉的菜一样。
先准备好各种材料,然后按照特定的方法去处理,最后就能得到我们想要的结果。
而且啊,这个方法还很灵敏呢!哪怕只有一点点的血小板抗体,它也能察觉到。
这就像一个超级敏锐的“小雷达”,任何细微的变化都逃不过它的“法眼”。
咱可别小看了这个固相凝集法检测血小板抗体的原理,它可是在医学领域有着很重要的地位呢!它能帮助医生们更准确地诊断疾病,为患者提供更好的治疗方案。
这难道不是很了不起吗?总之啊,固相凝集法检测血小板抗体原理就像是一把开启健康之门的钥匙,让我们能更好地了解自己的身体,及时发现问题并解决问题。
所以啊,大家一定要好好了解它,说不定哪天就能派上大用场呢!这可不是开玩笑的哟!。
人血小板生成素(TPO)分析检测ELISA试剂盒使用说明书
人血小板生成素(TPO)分析检测ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用Purpose目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中转化生长因子(TPO)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血小板生成素(TPO)水平。
用纯化的转化生长因子(TPO)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子(TPO),再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的转化生长因子(TPO)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人血小板生成素(TPO)浓度。
试剂盒内容及其配制:试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)塑料膜板盖1块半块标准品:100ng/ml 1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)标准品稀释缓冲液1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)生物素标记的抗OT抗体1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)亲和链酶素-HRP 1瓶(12ml)1瓶(5ml)洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)底物A 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)底物B 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品:45μmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存自备材料:1. 蒸馏水。
血小板聚集功能检测试剂盒产品技术要求
血小板聚集功能检测试剂盒产品技术要求血小板聚集功能检测试剂盒,这玩意儿听起来是不是有点专业和神秘?但其实它在医疗检测中可有着重要的作用呢!先来说说血小板聚集功能检测的重要性吧。
咱们身体里的血小板就像是一群小小的“维修工”,一旦有血管受伤,它们就会迅速聚集在一起,形成血栓来堵住伤口,防止出血过多。
但如果血小板聚集功能出现异常,要么聚集过度,容易形成血栓导致血管堵塞;要么聚集不足,止血效果不好,那问题可就大了。
所以,血小板聚集功能检测试剂盒就派上用场啦!它就像是一个能揭开血小板聚集秘密的魔法盒子。
这种试剂盒的技术要求那可不少。
首先,它得保证检测结果的准确性。
这就好比你做数学题,答案必须得准,不然整个解题过程就没意义了。
比如说,试剂盒里的试剂质量得过关,不能有杂质干扰检测结果。
我记得有一次,我们实验室在做一项血小板聚集功能检测实验,用的试剂盒里有一种试剂可能因为保存不当有点变质,结果那次的检测数据乱七八糟,把大家都搞得焦头烂额。
其次,试剂盒的稳定性也很重要。
它不能今天检测一个样,明天检测又一个样,得始终保持稳定的性能。
就像一个靠谱的朋友,不管什么时候找他帮忙,他都能给出差不多的可靠支持。
还有操作的简便性。
毕竟医护人员每天要处理那么多工作,如果使用试剂盒的过程太复杂繁琐,那可太耽误事儿了。
有个医生朋友就跟我吐槽过,之前用过一种试剂盒,操作步骤多得要命,还得小心翼翼,生怕弄错一步,感觉整个人都紧张兮兮的。
试剂盒的灵敏度也不能忽视。
要能敏锐地检测到血小板聚集功能的微小变化,就像侦探能发现案件中的细微线索一样。
另外,试剂盒的有效期得明确标识,而且在有效期内要保证质量。
谁也不想用到过期的试剂盒,得到不靠谱的检测结果吧。
总之,血小板聚集功能检测试剂盒的技术要求可多着呢,每一项都关系到检测结果的准确性和可靠性,进而影响医生对患者病情的判断和治疗方案的制定。
这小小的试剂盒,可是医疗检测领域里的重要一员,肩负着不小的责任呢!。
血小板聚集功能(ADP途径)检测试剂盒(凝固法)产品技术要求森美希克玛
血小板聚集功能(ADP途径)检测试剂盒(凝固法)产品技术
要求森美希克玛
血小板聚集功能(ADP途径)检测试剂盒(凝固法)
适用范围:本试剂盒与血栓弹力图仪配套使用,体外检测人全血的血块强度(MA)指标,通过MA计算抑制率,用于评价患者服用噻吩并吡啶类药物后的血小板聚集功能。
1人份、 5人份、20人份、30人份、60人份
2.1外观
试剂盒外观整洁,标识清晰。
试剂盒内的各液体组分应澄清透明,无沉淀或絮状物,无漏液。
样品测定杯无破损,无变形。
2.2准确
性
参照CLSI EP9-A2的方法,用本公司试剂盒同Haemonetics公司己上市的血小板聚集功能检测试剂盒对40例临床样本进行对照检测,对各自测得的血小板(ADP)抑制率进行相关性分析,应满足r≥0.975。
2.3重复性
用同批试剂盒中的活化凝血试剂检测同一份枸橼酸钠抗凝全血5次,计算血块强度(MA)的变异系数(CV),应不大于15%。
用同批试剂盒中的激活剂F和ADP试剂检测同一份肝素钠抗凝全血5次,计算各自的血块强度(MA)的变异系数(CV),均应不大于15%。
2.4批间差
用三批不同批号试剂盒中活化凝血试剂重复检测同一份枸橼酸钠抗凝全血3次,计算血块强度(MA)的相对极差(R),应不大于15%。
用三批不同批号试剂盒中的激活剂F和ADP试剂重复检测同一份肝素钠抗凝全血3次,计算各自的血块强度(MA)的相对极差(R),均应不大于15%。
2.5稳定性
将试剂盒置于2~8℃保存18个月,到期后对试剂盒进行检测,其结果应符合2.1、2.2、2.3的要求。
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血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)使用操作方法
1、平衡室温
取出血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)、血小板抗体检测用指示红细胞(固相凝集法)、血小板抗体筛检细胞(冻干粉)放在室温中平衡至室温。
2、检测样本准备
将血浆(血清)3000转离心5-10分钟。
3、配制浓缩洗涤液
将浓缩洗涤液以1:24比例与蒸馏水混合(满瓶20ML浓缩洗涤液兑480ML蒸馏水)。
4、配制血小板抗体筛检细胞(冻干粉)
将冻干粉依比例与生理盐水混合(冻干粉0.5ML与0.5ML生理盐水混合),混合后放置5分钟,使用前轻轻摇匀。
5、标识
由包装内取出一条反应板,平衡至室温。
标记阳性对照、阴性对照、检测样本序号。
6、加血小板
向反应板孔中各加入1滴(约50µl)混匀的血小板悬液,轻摇反应板约10秒钟。
7、固着
将反应板用平板离心机以50g离心5分钟(专用血小板离心机用程序1)。
8、洗涤
将反应板用洗涤液洗3至4次,洗涤过程中轻摇微孔板,然后再轻轻甩掉洗涤液。
最后一次洗涤后将残余液体蘸干。
9、加样
先向各孔中加入2滴(100µl)低离子强度溶液,再分别滴加1滴(50µl)阳性对照、阴性对照、检测样本。
10、孵育
将反应孔用封口胶纸封好,轻摇混匀后置湿盒中37℃孵育30分钟(或气浴孵育35至40分钟)。
11、洗涤(同步骤8)反复洗涤5至6次。
12、加指示物
立即向上述各孔加入1滴抗人IgG(50µl)和1滴(50µl)混匀的血小板抗体检测用指示红细胞悬液,轻轻振荡混匀。
13、离心
将反应板以200g离心5分钟(专用血小板离心机用程序2)。
14、结果判定
观察并记录实验结果。
阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面,而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央,弱阳性反应格局介于两者之间。