API

(iii) 好的鉴定结果
(iv) 可以接受的鉴定结果 (v) 可疑的生化谱
%Id >90.0及T>0.25
%Id >80.0及T>0
API的局限性 - 经过30年以来的更新资料库，能够查明 的菌种越来越多，未知菌种越来越少， API的这种分类缩小范围利用数据库查 明结果的方法会让发现新菌种越来越困 难。 - API鉴定前还是需要做定向实验的 - 试剂条对温度有要求。菌种的适宜温 度不一定一致
API是 Analytic Products INC的简称 API 微生物鉴定系统以微生物生化理论为基础,借 助微生物信息编码技术,为微生物检验提供了简易 、方便、快捷、科学的鉴定程序。 生理生化鉴定：根据微生物对各种生理条件（温 度、pH、氧气、渗透压）、生化指标（唯一碳氮 源、抗生素、酶、盐碱性）代谢反应进行分析， 并将结果转化成软件可以识别的数据，进行聚类 分析，与已知的参比菌株数据库进行比较，最终 对未知菌进行鉴定的一种技术
按操作说明书规定，将附加试剂 加进适当小孔内
api20E 试剂
API 试剂条
24小时出结果
阅读结果
根据说明书上，
或彩图的指示， 记录结果於报告 单上。
利用编码手册
或APILAB PLUS软件进出分析
全Windows操作界面，多种语言。
API 结果
跟据T值及%Id的组合，作出评语： (i) 极好的鉴定结果 (ii) 很好的鉴定结果 %Id >99.9及T>0.75 %Id >99.0及T>0.50
将试条放进培 养盒内

将 5ml 无菌 水放进培养 盒里
利用石腊油覆盖指定的生化孔 (有划线的孔)
ADH ODC H2S URE
把培养盖盖上
操作步骤 3 (API 20E)
把试条放进孵育箱内，利用指
定温度及时间 API20E : 35 - 37oC，18-24 小时
18-24 小时後

ATCC
ATCC成立于1925年，是世界上最大的生物资源中 心，由美国14家生化、医学类行业协会组成的理 事会负责管理，是一家全球性、非盈利生物标准 品资源中心。ATCC向全球发布其获取、鉴定、保 存及开发的生物标准品，推动科学研究的验证、 应用及进步。
不断更新的数据库：
- 分类学的进化 - 新的菌种 - 生化反应的演进 - 鉴定菌种需要的改变
完整的鉴定谱
微生物鉴定
杆菌 球菌
接触酶
革兰氏
革兰氏
氧化酶 杆菌 球菌
革兰氏染色液
- 在细菌学里最普遍的染色方法
步骤
- 染色前，所有细胞是透明的
G()
G()
- 结晶紫着色後用碘增加染料 与菌体结合
- 乙醇从G() 菌体洗脱结晶 紫
- 用番红液复染，革兰氏阴性 菌呈粉红色，革兰氏阳性菌 呈兰紫色
API的优点 标准化，简易化 在制造过程中，进行质控 FDA标准 用户可用ATCC菌种进行质控 系统化 操作简易 快速报告 30多年的经验，拥有菌种资料＞25000 ，鉴定系统的发源生化测试＞750 - ＞1500多篇使用文献
FDA
FDA是食品药品监督管理局（Food and Drug Administration）的简称。FDA有时也代表美国FDA，即 美国食品药品监督管理局，美国FDA是国际医疗审核权 威机构，由美国国会即联邦政府授权，专门从事食品与 药品管理的最高执法机关；是一个由医生、律师、微生 物学家、药理学家、化学家和统计学家等专业人士组成 的致力于保护、促进和提高国民健康的政府卫生管制的 监控机构。其它许多国家都通过寻求和接收 FDA 的帮助 来促进并监控其本国产品的安全。
革兰氏染色
原理 : 检查细菌细胞壁的渗透性
单层厚钛聚糖细胞壁 不紧密外壁层(透乙醇) + 薄内壁层钛聚糖
革兰氏阳性
革兰氏阴性
API 套件
API 试剂盒及其配套试剂

石腊油(容量: 125ml) 覆盖在指定小孔上

悬浮液 (容量: 5ml) 用於调菌液
安培架

附加试条 加进指定的生化孔内

培养盒 保持潮湿环境
API的局限性
16SrDNA鉴定
16SrDNA鉴定是指用利用细菌16SrDNA序列测序的方法对细 菌进行种属鉴定。包括细菌基因组DNA提取、16SrDNA特异 引物PCR扩增、扩增产物纯化、DNA测序、序列比对等步骤。 是一种快速获得细菌种属信息的方法。英文名称是16S ribosomal DNA identification，应用有细菌种属鉴定。 细菌rRNA（核糖体RNA）按沉降系数分为3种，分别为5S、 16S和23S rRNA。16S rDNA是细菌染色体上编码16S rRNA相对 应的DNA序列，存在于所有细菌染色体基因中。 16S rDNA是细菌的系统分类研究中最有用的和最常用的分 子钟，其种类少，含量大（约占细菌RNA含量的80%），分子 大小适中，存在于所有的生物中，其进化具有良好的时钟性质， 在结构与功能上具有高度的保守性，素有“细菌化石”之称。 在大多数原核生物中rDNA都具有多个拷贝，5S、16S、23S rDNA的拷贝数相同。16S rDNA由于大小适中，约1.5Kb左右， 既能体现不同菌属之间的差异，又能利用测序技术较容易地得 到其序列，故被细菌学家和分类学家接受。
API细菌鉴定系统和16S rDNA鉴定的区 别
API具有便利、快捷、成本低、效率高的特 点，但是总的来说，16S rDNA鉴定更符合科 学的严谨性，能将每一株菌种准确测定出 来。两个测定角度也不一样，API是用生化 反应间接鉴定出菌种的类别，而16S rDNA鉴 定是由分子水平直接准确鉴定出菌种。即 一个属于分类测定，另一个属于精准测定。 应该依据实验所需而决定使用哪一种鉴定 方法。
Байду номын сангаас

PSIpettes 接种管 挑菌落，混匀及接种

API 试条 每个小孔载有风乾的底物
操作步骤 1 (API 20E)
分离单个菌落
挑单个可疑菌落 尽量避免使用高度选择性培养基
调制菌液

悬浮液 (容量: 5ml)
操作步骤 2 (API 20E)

将菌液接种到小 管或小管及小杯 (CIT, VP和 GEL)