厌氧菌

40多个菌属，300多个菌种。有芽胞厌 氧菌只有梭菌属，共130个种。

无芽胞厌氧菌同需氧菌与兼性厌氧菌共 同构成机体的正常菌群,其中厌氧菌占有绝对 优势，例如肠道菌群占99．9％。正常情况下 菌群之间保持着微生态平衡，厌氧菌代谢产 生的乙酸、乳酸等能抑制病原菌生长。如长 期使用广谱抗生素、激素、免疫抑制剂等， 在发生菌群失调或机体免疫力下降或细菌进 人非正常寄居部位时，这些厌氧菌即可作为 条件致病菌而导致内源性感染。
（三）厌氧菌培养基
1)强化血琼脂平板(BAP)：
即布氏琼脂或牛心、牛脑浸出液琼脂为基础 培养基，补加酵母浸膏(0．5％)、动物血(5 ％～10％)、维生素k1(0.1μg／ml)和氯化 血红素(5μg／ml)，是一种非选择性培养基， 几乎能培养出所有的厌氧菌。
2) 卡 那 — 万 古 霉 素 冻 溶 血 琼 脂 平 板 (KVLB)： 可抑制大多数兼性厌氧菌，使产黑色 素普雷沃菌早期形成黑色素。只需2—3d 出现黑色菌落。绝大多数类杆菌属、普 雷沃菌属和紫单胞菌属都生长良好，梭 杆菌和厌氧球菌不能生长。是常用的选 择性培养基。卡那霉素含量为75—100μg ／ml，万古霉素为75μg／ml。
—、消化球菌属
黑色消化球菌是消化球菌属中惟一的 菌种。通常寄居在人的体表和与外界相通的 腔道中，是人体正常菌群。在临床上可引起 人体各部组织和器官的感染，常与其他细菌 混合感染，如腹腔感染、肝脓肿等。
微生物特性
菌体圆形，排列成双、短链或成堆。生 长缓慢，厌氧培养2～4d才形成黑色不 溶血的小菌落，接触空气后颜色变浅， 传代后黑色消失，通过庖肉培养后又可 产生黑色素。不发酵糖，触酶阳性为其 特点。对青霉素、红霉素、氯霉素、洁 霉素、四环素及灭滴灵敏感。DNA的G+C 为50—51mol％。
极小的G-球菌，可能是韦荣球菌。
G+无芽胞杆菌，呈乳酸气味者，可能是乳 酸杆菌。呈丙酸气味者，并有特殊排列呈X、 Y、或栅状者可能是痤疮丙酸杆菌。
有醋酸气味的可能是双歧杆菌。 菌体分枝，呈棒状或栅状排列，且发现黄 色颗粒，有琥珀酸气味者，多是放线菌。
G+芽胞杆菌，肯定是梭状芽胞杆菌属。
G+短粗两端钝圆杆菌，无芽胞，中性粒细胞 源自文库很少且变形破碎，标本来自战伤或肢体严 重肿胀者，大多是产气荚膜梭菌。 G+杆菌，有芽胞，并有异丁酸或异戊酸等气 味，标本来自抗生素相关性肠炎者，大多是 艰难梭菌。
厌氧消化链球菌可与金黄色葡萄球菌或溶血性 链球菌协同引起严重的创伤感染，即厌氧链球 菌肌炎。该菌常可引起细菌性心内膜炎，主要 由原发病灶口腔、牙周和尿道感染而引起。致 菌血症较少见。 在临床标本分离株中，本菌属占20％—35％，
为第2位，仅次于脆弱类杆菌。
微生物特性
为G+球形或卵圆形，成双或呈短链状排列。 无鞭毛。在35℃-37℃pH7-7．5时生长佳。 在厌氧血平板上，菌落1mm，灰白色凸起、 不透明边缘整齐，不溶血。在硫乙醇酸钠 液体培养基中，呈颗粒状沉淀生长。吐温80促进生长。触酶阴性，发酵葡萄糖不发 酵乳糖，不水解胆汁七叶苷，吲哚、尿素 酶、硝酸盐还原试验均为阴性，对多聚茴 香磺酸钠敏感。
者；或在培养基深部长的细菌。
6.长期应用氨基糖甙类抗生素治疗无效病例。
第二节厌氧性细菌的检验
(一)采集标本
不能被正常菌群污染；应尽量避免接触空气。最 理想是能取得组织标本。 下列标本无送检价值，不宜做厌氧菌培养：①鼻 咽拭子；②齿龈拭子；③痰和气管抽取物；④胃 和肠道内容物、肛拭；⑤接近皮肤和粘膜的分泌 物；⑥褥疮溃疡及粘膜层表面；⑦排出的尿或导 尿；⑧阴道或子宫拭子；⑨前列腺分泌物。 标本运送中应尽量避免接触空气。不要冷藏 。
5．聚茴香脑磺酸钠试验
厌氧消化链球菌对50g／L的聚茴香
脑磺酸钠溶液敏感，而绝大多数其
他G+球菌耐药。
6．生化特性鉴定
主要包括多种糖类发酵试验、吲哚试验、硝 酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、 脂肪酶试验、蛋白溶解试验、明胶液化试验 及胆汁肉汤生长试验和硫化氢试验等。为简 化厌氧菌鉴定，有多种试验鉴定系统，如推 测性平皿系统等。虽然不完善，但可使厌氧 菌的鉴定标准化，自动化。
2)气袋法：原理相同，只是将厌氧罐用
无毒、透明的塑料袋代替。
3)厌氧手套箱培养法：厌氧手套箱公认
的培养厌氧菌最佳仪器。它是密闭的大型金
属箱，前面有透明面板，板上装两个手套，
可通过手套在箱内进行操作。适用于在无氧
环境中连续进行标本接种、培养和鉴定等全 部工作。
(六)鉴定试验
据厌氧菌的菌体形态、染色反应、菌落性状 以及对某些抗生素的敏感性等作出初步鉴定。 最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物 等项检查。
(二)直接涂片·染色镜检
结合标本来源，性状与气味，可提供许多有 用的信息,对估计标本中含菌量、细菌种类 和选择培养基等都有意义 。标本发臭，镜 检发现细菌染色不均，形态奇特者常是厌氧 菌的表现 。 如两端钝圆着色深，中间着色浅不均匀，且 有空泡，长短不一的革兰阴性杆菌常脆弱类 杆菌。
标本呈琥珀酸味，带血性或用紫外灯照射发 红色荧光，涂片镜检为G-球杆菌，间或有长 短不一的多形性，并有恶臭者，常为产黑色 素普雷沃菌。 菌体细长，两端尖, 为梭形的G-杆菌，有紫 色颗粒沿菌体长轴排列，成双排列尖端相对， 并有丁酸臭味者，常是具核梭杆菌。 菌体高度多形性，长短不一，菌体中部肿胀 或呈圆球者，可能是坏死梭杆菌 。
分成厌氧消化链球菌、不解糖消化链球 菌、吲哚消化链球菌、大消化链球菌、 微小消化链球菌、普氏消化链球菌、产 生消化链球菌、四联消化链球菌与天芥 菜春还原消化链球菌等9个菌种，其代表 菌种为厌氧消化链球菌。主要依据是DNA 的G+C为27-45mol％。
临床意义
以厌氧消化链球菌最常见，产生消化链球菌则 很少见。消化链球菌可引起各部组织和器官感 染，又以混合感染为多见，如腹腔感染、肝脓 肿、外阴、阴道及盆腔感染、肺部和胸膜感染、 口腔感染、颅内感染以及皮肤和软组织感染等。
(一)厌氧菌感染的条件
1.组织缺氧或氧化还原电势(Eh)降低可造成 厌氧菌生长的适宜环境，易于遭受厌氧菌 感染。 2.机体免疫功能下降，如老年人、早产儿, 接受免疫抑制剂、抗代谢药物、放射或化 疗治疗的患者，其全身免疫功能受损或降 低，厌氧菌感染率相当高。
3.长期应用氨基糖甙类抗生素，或长期应用 头孢菌素、四环素等无效者，均可诱发厌 氧菌感染。
再根据生化反应及终末代谢产物作最终 报告：“分离鉴定出x x x菌”及“药物 敏感试验： x x x结果”。 有条件的单位可采用基因探针或PCR技术， 快速准确的检测厌氧菌。
第三节 厌氧球菌
在临床标本中检出的厌氧菌大约有25％
为厌氧性球菌。其中G+消化球菌和消化链球
菌属以及G-韦荣球菌属与临床感染相关。
(2)溶血：产气荚膜梭菌在新鲜血琼脂平板 形成双溶血圈。
(3)荧光：产黑色素普鲁沃菌在紫外线灯下， 显示砖红色荧光；梭杆菌常发生黄绿色荧光； 艰难梭菌发生绿色荧光。
3．耐氧试验
当在厌氧平板上有菌生长时，为确定是否为 厌氧菌，必须做耐氧试验。
4．药物鉴定试验
用于鉴定厌氧菌的抗生素有卡那霉素和灭滴 灵。卡那霉素的敏感性叮将梭杆菌属与类杆 菌属区分开，大多数类杆菌对卡那霉素耐药： 灭滴灵纸片在鉴别厌氧菌(敏感)与非厌氧菌 (不敏感)有重要意义 。
小韦荣球菌触酶试验阴性，而产碱韦荣球菌 为阳性。
微生物检验
取临床标本作直接涂片、革兰染色、镜检。 如发现Ｇ-小球菌、成对或短链或不规则排列， 疑为本菌属。可用厌氧血琼脂平板分离培养， 2～3d观察结果，同时可接种硫乙醇酸盐肉汤 或庖肉培养基，观察生长情况与形态，并做 生化反应进行鉴定。
第四节Ｇ-无芽胞厌氧杆菌
微生物检验
从感染部位采集标本，作直接涂片镜 检和分离培养。接种血琼脂平板，并同 时接种含血清硫乙醇酸盐培养基或庖肉 培养基(增菌培养)，经厌氧培养2～4d后， 观察菌落形态，革兰染色观察菌体形态 和排列作出初步报告。据生化反应、抗 生素纸片敏感试验以及气液相色谱分析 代谢产物作出最后报告。
二、消化链球菌属
致性为 100％。
9．基因探针
如用地高辛标记脆弱类杆菌的基因探针， 检测标本中的脆弱类杆菌其敏感性为89 ％，特异性为91．7％，检测灵敏度为 10pgDNA，故其特异性强，敏感性和灵敏 度均高，并具有快速简便的优点。
(七)检验结果分析与报告
根据革兰染色镜检，菌落性状、耐氧试 验及药敏试验若发现厌氧菌可初步报告： “检出厌氧菌，形似x x x菌”；
第十五章厌 氧 菌
第一节 概念、种类与分布
是指一大群在有氧条件下不能生长， 必须在无氧条件下才能生长的细菌。 主要可分为两大类，一类是有芽胞 的G+梭菌，另一类是无芽胞的G+及 G-杆菌与球菌。
无芽胞厌氧菌在临床厌氧菌标本检 出率中约占90％,分布广泛，多为条件 致病菌；厌氧菌的感染遍及临床各科， 且多为混合感染；对氨基糖甙类抗生素 耐药，而对甲硝唑(灭滴灵)普遍敏感,
4.需氧菌、兼性厌氧菌的混合感染。需氧菌 生长耗竭了氧气，有利于厌氧菌的生长。
(二)厌氧菌感染临床细菌学指征
1.感染局部产生气体，组织肿胀和坏死。 2.粘膜附近的感染。 3.深部外伤的继发感染，流产胃肠手术后发 生的感染。
4.分泌物有恶臭，或为暗血红色，并在紫外
光下发出红色荧光。
5.分泌物涂片镜检有细菌，而常规培养阴性
气荚膜梭菌，标本接种兔血平板，见有双
溶血环，内环是与菌落一样大小的透明溶
血，外环是宽的甲型溶血，放半小时后菌
落变绿色或褐色，同时可接种卵黄平板，
以进行卵磷脂酶试验鉴定产气荚膜梭菌。
(四)厌氧菌培养常用方法
1)厌氧罐培养法：应用物理或化学方法造成 无氧环境。如冷触媒法：利用气体发生器产 生氢及二氧化碳，产生的氢在触媒作用下， 与罐内的氧结合成水，将氧消耗掉，造成无 氧环境。产生的二氧化碳约为10％，也适宜 厌氧菌生长。方法为：先将触媒(金属钯或铂) 及美蓝指示剂放入罐内，然后将已接种的平 板置于罐内，将气体发生袋的指定角剪开， 加入lOml水，立即放入罐内，封闭厌氧罐即 可。
临床标本可采自软组织脓肿和血液。大
多见于混合感染。临床分离率小于1％。
小韦荣球菌可引起上呼吸道感染，而产
碱韦荣球菌多见于肠道感染。
微生物特性
韦荣球菌形态相似，为G-球菌，排列成对或 短链，近似奈瑟球菌。无鞭毛和芽胞。 专性厌氧，在血琼脂平板上发育良好，培养 48h后，形成1～2mm圆形、凸起灰白色至黄色 混浊菌落，不溶血。生化反应不活泼，不分解 糖类，还原硝酸盐，触酶反应-／+。
1．形态与染色
不仅能反映各种厌氧菌的特殊形态，同时也 为鉴定厌氧菌提供参考依据。
2．菌落性状
不同厌氧菌其菌落形状和性质不同。梭菌的 菌落特点是形状不规则，而无芽胞厌氧菌多呈 单个的圆形小菌落。
(1)色素：产黑色素普鲁沃菌产生黑褐色或 黑色色素。龋齿放线菌产生粉红色色素。奈氏 放线菌产生黄褐色色素：
微生物检验
检查方法与检查黑色消化球菌基本相同。 本菌培养物常有恶臭气味，为其特点。可通过 形态、染色、培养特性、生化反应发酵葡萄糖 产酸，分解甘露醇等与黑色消化球菌鉴别。
三、韦荣球菌
韦荣球菌属为革兰阴性厌氧球菌，有7 个种，其中小韦荣球菌和产碱韦荣球菌是常 见的二个种 。 口腔、咽部、胃肠道和女性生殖道的正 常菌群，致病力不强，为条件致病菌。本属 菌可产生内毒素，为脂多糖，有抗原性。
7．气液相色谱技术(GLC)
应用GLC分析厌氧菌的终末代谢产物，因各
种厌氧菌的代谢产物不同，故已成为鉴定厌
氧菌及其分类的比较可靠的方法．可在数十
分钟至数小时即可作出诊断。
8．PCR
如采用PCR方法检测抗生素相关性腹泻
病人粪便中艰难梭菌的毒素基因阳性率
高达82．8％，明显高于厌氧培养法的
检出率19．2％，且与厌氧培养法的一
3)七叶苷胆汁平板(BBI)：本培养基含20％ 胆汁，1g／L七叶苷和100μg／ml的庆大霉 素。抑制需氧菌，胆汁抑制对之敏感的厌 氧菌。只有耐胆汁的脆弱类杆菌与可变梭 杆菌和死亡梭杆菌不被抑制，反被刺激菌 落较大，还能水解七叶苷，菌落周围有棕 黑色的晕。
4)卵黄平板(EYA)和兔血平板：用于选择产