2.1微生物的基本培养技术

⑴基本成分： 碳源、氮源、水、无机盐 碳 无机：CO2、CO32-、HCO3- 自养微生物
源 有机： 糖类，牛肉膏、蛋白胨 异养微生物 等
氮 无机： N2（固氮菌）、NH3（硝化细菌）
源
、NH4＋、NO3-等
有机：
牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等
注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的 碳源、氮源、能源
(B )
A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前
解析：B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但 实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。
三、纯化培养
四、酵母菌的纯化培养
分散成单个细胞,形成单个菌落
1.定义： 单个 固体培养基上 或少数菌体 大量繁殖
应用: 链霉素、土霉素、四环素、 氯霉素、红霉素、庆大霉素
真菌
是一种真核生物 ，通常又分为三类，即酵母菌、 霉菌和蕈菌（大型真菌）
原生动物
是动物界中最低等的一类真核单细胞动物， 个体由单个细胞组成。
草履虫
变形虫
培养基是由人工方法配制而成的，供微生物生长繁殖的营养基质。
一、培养基的配置
不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源、无 机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、 特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而 自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌 呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基
防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化酵母菌：
1.接种： ⑴平板划线法： 接种环
菌种
防止划破培养基
（重复实验） 划3个平板 1个不划线
（空白对照）
平板划线时不能划破培养基，为什么？
–一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到 分离单菌落的目的；
涂
各梯度分别涂布3个平板
1个不涂布作空白对照
培养基
培养基的类型
微
培养基的营养物质
生
避免杂菌污染的方法
物
的
无菌技术 实验室常用的消毒方法
实
实验室常用的灭菌方法
验 制备牛肉蛋白胨固
室 培
体培养基（步骤）
养
平板划线法
纯化大肠杆菌
稀释涂布法
结果分析与评价
二、无菌技术
1.消毒与灭菌：
消毒
灭菌
较为温和理化方法， 强烈的理化方法， 定义 杀死部分有害菌体 杀死所有微生物
（不包括芽孢、孢子） （包括芽孢、孢子）
煮沸消毒法 方法 巴氏消毒法
化学药剂 紫外线
灼烧灭菌 干热灭菌
高压蒸汽灭菌
⑴.消毒的方法：
①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。 ②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或 80℃下煮15min。 ③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁 尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。 ④紫外线消毒。
⑵.灭菌的方法：
①灼烧灭菌
②干热灭菌： 160-170 ℃下加 热1-2h。
③高压蒸气灭菌： 100kPa、121 ℃ 下维持15-30min.
无菌技术：
防止外来杂菌的污染
1.消毒与灭菌：
2.无菌范围：
实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程
酒精灯旁操作
超净工作台
例2：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是
微生物的类群
病毒:
无细胞结构
原核生物ຫໍສະໝຸດ Baidu 细菌、蓝藻 原核细胞
原生生物：单细胞的动植物
如草履虫、单细胞藻类等 真核细胞
真菌: 如酵母菌
SARS病毒 禽流感病毒
细菌典型形态
细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色后
显微镜观察
大肠杆菌
葡萄球菌
霍乱弧菌
放线菌
结构： ➢原核细胞 ➢分支状的菌丝（营养（基内）菌丝、气生菌丝）
2.特征：大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。
3.功能：鉴定菌种的重要依据
子细胞群体
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1.计算：
2.称量：
3.溶化：牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl→琼脂 →补水定容
4.调pH、分装、封口： 5.灭菌：培养基、培养皿 6.倒平板：
约50℃
倒平板
–二是存留在划破处的单个细胞无法形成规 矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形 成一个条状的菌落。
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼 烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环 吗？为什么？
操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上 可能存在的微生物污染培养物
杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时， 菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划 线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐 减少，以便得到菌落。
【典例解析】 例1:关于微生物营养物质的叙述中，正确的是(D )
A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量
解析：对于A、B选项，有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时 是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮 源，也是能源，如蛋白胨。 对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作 为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而 NaCl则只能提供无机盐。 对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供 能量和氮源。
及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染 环境和感染操作者。
⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液：
微量 移 液器
1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
101
102
103
104
105
106
菌液
6支试管，分别加入9ml无菌水
⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： b.涂布平板：
滴
灼 试
不超过0.1ml