微生物基本操作 - 360文档中心

微生物的基本操作方法

微生物的基本操作方法微生物是一类非常小型的生物体，只能在显微镜下看到。

它们在自然界中广泛存在，并且具有重要的生物活动和功能，如分解有机物质、循环物质、促进植物生长等。

为了研究微生物的特性和应用，人们需要进行基本的微生物操作。

下面将介绍几种常见的微生物操作方法。

一、培养微生物1.准备培养基：根据需要选择合适的培养基，如富含营养成分的琼脂培养基、专门用于细菌培养的LB培养基等。

2.无菌操作：在无菌条件下，将培养基装入培养皿中，然后进行高温高压灭菌，以杀灭培养皿中的微生物。

同时，需要采取一些措施，如佩戴无菌手套、使用无菌物品等，以防止外界细菌的污染。

3.接种微生物：常见的接种方法有划线法、转接法和点接法等。

在无菌条件下，用铲子或针头将微生物接种到培养基上，并在接种后进行标记。

4.培养微生物：将培养皿放入恒温培养箱或菌箱中，控制适当的温度、湿度和光线等条件，促使微生物的生长和繁殖。

二、分离微生物1.琼脂平板法：将微生物悬液均匀涂覆在琼脂培养基表面上，然后在恒温培养箱中孵育一段时间。

经过一段时间后，微生物会形成孤立的菌落，可以通过挑取单个菌落进行进一步培养和分离。

2.稀释平板法：将微生物悬液进行一系列的稀释，然后取稀释液不同浓度的样品分别接种到琼脂平板上，每个样品做3个平板。

经过孵育后，选取菌落数目适中的平板进行分离。

3.涂布法：将微生物悬液取适量涂布在琼脂培养基表面上，然后用铲子或棉签将微生物均匀分布。

经过一段时间后，可以通过挑选单个菌落进行分离。

三、培养微生物的纯种1.挑菌法：用细菌棒或鉗取器等工具挑取单个菌落，将其接种到新的培养基上。

挑菌时要注意不要将周围的细菌也一起转移过去。

2.瓢虫法：瓢虫法是一种传统的分离鉴定微生物菌落的方法。

先将一只瓢虫喂食一些菌落，然后观察虫子是否发生变化，若变化则证明该菌落能引起虫子的生理反应，即是一株有特定性质的微生物。

通过重复实验，可以筛选出具有特定性质的微生物。

3.连作法：将微生物连续传代培养，通过观察微生物的生长特性和表型变化，可以筛选出具有特定特性的纯种微生物。

微生物检验基本操作技能—接种技术(食品微生物检验技术课件)

：将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术。接种必须在一个无杂菌污染
的环境中进行，必须严格遵守无菌操作规范。
1.接种针；2-接种环；3-接种钩；4-涂布棒；6-接种圈；7-接种锄；8-小解剖刀
高压蒸汽灭菌锅，接种环，牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿，试管，三角瓶，酒精灯，移液管，无菌水，灭菌保藏菌种的试管（三）灼烧接种环（四）接种环接种（五）恒温培养
1、接种环（针、铲）一定要保证其冷却后方可进行转接，以免烫死微生物。
2、取试管棉塞时要轻缓，不宜用力过猛。棉塞一定要夹在手上，不能放在桌子上。
3、斜面接种时，所划直线尽可能直，不要划破培养基，也不要使接种环触碰管壁或管口。
4、牢固树立无菌操作概念，细心体会无菌操作要领。
为什么在接种前一定要将接种环冷却？如何灼烧过的接种环是否已经冷却？

微生物的基本操作方法

微生物的基本操作方法
微生物的基本操作方法包括以下几个方面：
1. 无菌操作：在进行微生物实验或培养时，需要保持操作环境的无菌。

操作者应注意洗手、穿戴实验服、戴手套，并在无菌工作台或无菌室内进行操作。

可用酒精灯或紫外线灯消毒操作区域，以杀灭空气中的微生物。

2. 培养基的制备：根据所需的微生物类型选择适当的培养基，并按照配方制备。

培养基通常包括基础培养基、食物源、pH调节剂和琼脂等成分。

制备时需要称取和溶解成分，并用高压蒸汽或高温灭菌来杀灭培养基中的微生物。

3. 培养器具的消毒：使用前要对培养器具进行消毒处理，常用的方法有高压蒸汽灭菌、高温灭菌、紫外线消毒等。

确保培养器具的表面和内部都不带有致病菌。

4. 菌种的接种：将所需的菌种接种到培养基上。

通常使用接种环、接种针或接种环针进行接种。

在接种时要注意无菌操作，以避免外来细菌的污染。

5. 培养条件：对于每一种微生物，根据其生长特性和要求，设置适当的培养条件。

例如，合适的温度、湿度、pH值和氧气浓度等都会影响微生物的生长。

6. 培养观察：在培养过程中，定期观察微生物的生长情况。

可以使用显微镜观察细菌或酵母菌的形态，或者通过目测观察细菌悬浊液的浑浊度和沉淀情况来判
断微生物是否生长良好。

7. 分离纯化：将培养基上生长的微生物单克隆分离纯化，得到纯系菌株。

通常可以使用藻糖水平板或琼脂斜面触点法进行分离，将不同的菌落孤立开来。

8. 培养维持：根据微生物的生长要求，每隔一段时间更换培养基、条件，以保持微生物的生长和繁殖。

同时，也需要妥善保存纯化的菌株，以备后续实验使用。

微生物日常工作流程

微生物日常工作流程
微生物实验室的日常工作流程包括样品采集、样品准备、细菌培养、菌落计数、细菌鉴定等步骤。

1. 样品采集
根据实验目的,从不同的源头采集样品,如空气、水、食物、患者等。

采集时要注意无菌操作,避免样品被外源污染。

2. 样品准备
将采集的样品进行留取、稀释等预处理,配制成适合微生物培养的状态。

3. 细菌培养
将处理后的样品接种到培养基上,置于恒温培养箱进行培养。

控制培养条件如温度、湿度等,为微生物生长创造最佳环境。

4. 菌落计数
培养结束后,观察培养皿上菌落的数量、大小、颜色等,进行定量记录。

5. 细菌鉴定
通过菌落形态特征、生化试验等方法,鉴定培养皿上生长的细菌属种。

6. 数据记录
将实验过程和结果详细记录,以便后期分析。

以上是微生物实验室的基本日常工作流程。

根据不同实验目的,流程中可能还包括抗生素敏感性测试、致病性检测等步骤。

微生物检验的基本操作技术

微生物检验的基本操作技术一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。

2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。

包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。

包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。

3、无菌操作原则1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。

严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。

二、无菌操作的环境要求1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；（2）无菌室的消毒和防污染•每日（使用前）紫外线照射（0.5~1小时）；•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时），特殊情况下可增加熏蒸频次。

（3）无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。

微生物培养及实验基本操作技术

微生物培养及实验基本操作技术一、培养基配制培养基是指人工配制的、适合于微生物生长繁殖或累积代谢产物所需的各种营养物的混合基质。

配制培养基是进行微生物检验工作的基础,甚至是任何与微生物有关工作的基础。

注意事項–灭菌锅的使用①加水盖过底部铁板—②放入东西—③关门—④調整溫度時間—⑤关紧泄压阀灭菌結束後，等压力降回零時才可打開門進入灭菌锅之物品，蓋子不可關太緊或太鬆拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套培养基中的主要成分及其作用：营养物质：N源、C源、无机盐、生长因子、水常用的N源：蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏常用的C源：糖、醇类物质（单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖；多糖：淀粉、纤维素、菊糖；醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油）水：用蒸馏水，不能用自来水凝固剂：琼脂、明胶、血清等抑制剂：1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率2、种类：盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素指示剂1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。

2、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。

培养基的类型：●根据培养基的物理状态来区分：1、液体培养基：主要用于增菌培养、鉴别性培养2、固体培养基：用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定3、半固体培养基：观察微生物的动力，有时用来保藏菌种4、脱水(商品)培荞基：脱水培养基也称为商品培养基、预制干燥培养基。

●将各种营养成分按比例配制完全,制成脱水的干粉状,装瓶出售;使用时只需按比例加人定量的水溶化、灭菌便可。

●根据培养基的用途来区分：➢增殖培养基选择培养基鉴别培养基1、增殖培养基：在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基。

微生物基本操作讲义

止油流动，油浸镜所用的油要洁净。
普通显微镜的保养
(1)观察完后，移去观察的载玻片标本。 (2)用过油浸镜的，应先用擦镜纸将镜头上的
油擦去，再用擦镜纸蘸着二甲苯擦拭2—3次，最后再用擦镜纸将二甲苯擦去。 (3)转动物镜转换器，放在低倍镜的位置。 (4)将镜身下降到最低位置，调节好镜台上标本移动器的位置，罩上防尘套。镜头清洁，只能用软而没有短绒毛的擦镜纸，物镜的清洗，可选用不同的溶剂，如酒精、丙酮和二甲苯等，其中最安全的是二甲苯。
2.微生物的种类与数量：同种消毒剂对不同微生物的杀菌效果不同。如结核杆菌对酸、碱的抵抗力比其他的菌强；70%乙醇可杀死一般细菌繁殖体，但不能杀灭细菌芽胞。因此，必须根据消毒对象选择合适的消毒剂。
3.环境中有机物的影响：消毒环境中如有有机物存在，如血清、脓汁、痰、粪便等，可与消毒剂结合而影响杀菌效果。
2.电离辐射：高速电子、X 射线和γ射线等在足够剂量时，对各种细菌均有致死作用。其机制在于产生游离基，破坏细菌DNA。电离辐射常用于大量一次性医用塑料制品的消毒。
3.滤过除菌
滤过除菌是用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去，以达到无菌的目的。所用的器具是滤菌器（filter）。滤过除菌主要用于一些不耐高温灭菌的血清、细菌毒素、抗生素，以及空气等的除菌。滤菌器的种类很多，目前常用的有滤膜滤菌器、石棉滤菌器（亦称Seitz滤菌器）、玻璃滤菌器等。
§ 2 显微操作
显微镜是微生物检验中最常用的精密光学仪器。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
食品微生物检验中最常用的是普通光学显微镜。
普通显微镜的使用方法

微生物试验基本操作

常用的基本操作技术（一）消毒和灭菌技术消毒（disinfection）与灭菌（sterilization）两者的意义有所不同。

消毒一般是指利用物理或化学方法消灭病原菌或有害微生物的营养体，而灭菌则是指利用强烈的物理或化学方法杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。

但日常生活中两者常常通用。

灭菌的方法很多，一般可分为物理灭菌和化学灭菌两大类。

1. 物理灭菌物理灭菌是最常用的灭菌方法。

主要包括热力学灭菌、过滤除菌和紫外线灭菌等。

（1）热力学灭菌又可分为干热灭菌和湿热灭菌两大类。

①干热灭菌干热灭菌是利用高温使微生物的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

细胞内的蛋白质的凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快；含水量越小，凝固减慢。

因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度更高（160~170℃），时间更长（1~2h）。

进行干热灭菌时最高温度不能超过180℃，否则，包扎器皿的纸或棉塞就会被烤焦，甚至引起燃烧。

通常所说的干热灭菌是指利用干燥箱（或称烘箱）进行灭菌，主要用于玻璃器皿如培养皿、移液管和接种工具等的灭菌。

灭菌时将被灭菌的物体用双层报纸包好或装入特制的灭菌筒内，装入箱中，不要摆的太挤，以免妨碍热空气流通。

逐渐加温，使温度上升至160～170℃后保持2h。

灭菌结束后，切断电源，自然降温，待箱内温度降至70℃以下后，才能打开箱门，取出灭菌物品。

注意在温度降至70℃以前切勿打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。

另外，灼烧灭菌也属于干热灭菌。

在进行无菌操作时，接种工具如接种环、接种钩、接种铲、镊子等要在酒精灯火焰上充分灼烧，试管口、菌种瓶口在火焰上作短暂灼烧灭菌等。

②湿热灭菌a.高压蒸汽灭菌此法是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾产生蒸气。

待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性达到灭菌的目的。

微生物检验的基本操作技术

微生物检验的基本操作技术一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。

2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。

包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。

包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。

3、无菌操作原则1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；2）在操作前20〜30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。

严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。

二、无菌操作的环境要求1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；(2)无菌室的消毒和防污染■每日(使用前)紫外线照射(0.5~1小时)；•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸(2小时)，特殊情况下可增加熏蒸频次。

(3)无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。

微生物基本操作方法

微生物基本操作方法
微生物基本操作方法如下：
1. 消毒：为了保障实验的可靠性和安全性，应用高压蒸汽灭菌器或紫外灯等方法进行消毒，以杀灭潜在的微生物污染。

2. 分离：利用Koch 定律对微生物进行分离，通常采用平板法、滤膜法、胶质法等方法进行分离。

3. 鉴定：对分离出的微生物进行鉴定，采用微生物生理、生化、利用等特征进行鉴定，如形态、染色、代谢等，最后确定菌株的种属。

4. 保存：对分离鉴定出的微生物进行保存，通常采用低温冷冻法或干燥法等方法进行保存。

5. 实验操作：在细菌实验室中进行微生物实验操作时，需要保持实验室的清洁和消毒，采用洁净的操作工具进行实验操作，以防止微生物的污染。

6. 贮存：对于培养基、针筒和试管等实验用具，应当按照规定进行分类贮存，防止交叉感染。

7. 废弃物处理：对实验过程中产生的废弃物要进行正确处理，标记好种类，进
行特定的消毒处理，防止污染环境和人体。

微生物培养操作及注意事项

引言：微生物培养是微生物学研究中的基础实验技术，通过培养和繁殖微生物可以方便地获取大量的微生物细胞，为微生物学研究、工业生产以及医学诊断提供了重要的手段和依据。

本文将介绍微生物培养的操作步骤和注意事项，帮助读者掌握正确的培养技巧并避免常见的操作错误。

概述：微生物培养操作的目的是为了利用适当的营养条件提供给微生物生长所需的营养物质、温度和pH条件，并且维持适当的氧含量和无菌状态。

在进行微生物培养实验前，需要准备培养基、无菌工具和培养设备，并熟悉培养操作的基本原理和注意事项。

正文：一、选择合适的培养基1.了解微生物的营养需求：不同的微生物对营养物质的需求不同，如碳源、氮源、微量元素等。

了解微生物的营养需求是选择合适的培养基的前提。

2.选择适当的培养基类型：常见的培养基类型包括富养基、平衡盐基和选择性培养基等。

根据实验目的和微生物特性选择合适的培养基类型。

3.调整培养基的pH值：对于不同的微生物，其最适生长的pH 值有所差异。

在制备培养基时，需调整pH值到适宜范围。

4.添加适量的固化剂：常用的固化剂有琼脂、洋菜粉等，添加适量的固化剂有助于培养基的凝胶化。

5.培养基的无菌处理：制备好的培养基需要高温高压灭菌，以确保培养基的无菌状态。

二、准备培养设备和无菌工具1.烧杀法灭菌无菌器具：包括试管、烧杀针、培养皿等容器，在进行培养前，需要将这些容器进行高温高压灭菌处理，以确保其无菌。

2.使用无菌技术：在进行微生物培养操作时，需要掌握无菌技术，如洗手消毒、穿戴无菌手套、操作台面无菌处理等，以避免污染。

三、培养操作步骤1.取出无菌培养基：在无菌条件下，将培养基倒入无菌容器中，如试管、培养皿等。

2.加入适量的微生物菌液：从已经纯化和鉴定的微生物菌液中取出适量的菌液，通过吸管、针头等无菌工具加入到培养基中。

3.均匀混合微生物菌液和培养基：使用无菌技术将微生物菌液和培养基充分均匀混合，以保证微生物的均匀分布。

4.完成培养器具的封闭：将加入微生物菌液的培养器具盖好，并用无菌膜或橡皮塞封口，防止外界细菌的侵入。

微生物基本操作规范之制片、染色及显微观察

食品微生物检验
规范操作基础培训
5 制片、染色及显微观察
主要内容：
➢§ 1 清洗、消毒和灭菌操作 ➢§ 2 培养基的制备 ➢§ 3 采样和取、制样 ➢§ 4 接种、分离纯化
➢§ 5 制片、染色及显微观察
➢§ 6 实验室安全基础知识
5.1 显微操作
显微镜是微生物检验中最常用的精密光学仪器。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复பைடு நூலகம்→水洗 →干燥→观察
1．取培养物分别做涂片、干燥、固定，方法均与简单染色的相同。
2．用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。 3．加碘液媒染1min后水洗。 4．斜置载玻片，滴加95％乙醇脱色，至流出的乙醇不现
紫色为止，大约需时20~30s，随即水洗。 5．用蕃红染液复染1min，水洗。 6．用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低
细菌的大小与形态
细菌的测量单位：微米(μm)
细菌的形态
球菌
杆菌
螺形菌
染色方法
(一)简单染色法
简单染色法又叫作普通染色法，只用一种染料使细菌染上颜色，观察细菌的形态。
(二)复染色法用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性
质的细菌，所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。
油晕不再扩大为止）； 4.用微调焦螺旋调至清晰。
注意：油镜的操作需要较强的关线，故需将光线调至最强。
用10倍和/或40倍物镜为随后的高倍油镜（90倍或100倍）选择合适的视野（油镜镜筒上通常刻有 H.I.OIL或OEL等标志）

微生物培养基本操作

微生物培养基本操作
微生物培养基本操作规程
1.先根据试验的内容，配制相应的溶液，如培养基和生理盐水等。

2.对试验过程中用到的所有器材进行灭菌，液体类在压力蒸器灭菌器中进
行，一般灭菌时间为30min。

平皿、吸管、搅拌棒、镊子等器材在恒温干燥箱内进行。

3.开启超净工作台紫外线灯开关，上述灭菌器材冷却后，关闭超净工作台
紫外线灯开关，戴无菌手套取出灭菌器材，在超净工作台上进行操作。

4.每个平皿内加入1ml样液，然后用45℃左右的熔化的营养琼脂培养基
15-20ml倒入到每个平皿内混合均匀，待营养琼脂凝固后翻转平皿35℃±2℃培养48h.
5.在每次培养的时候一定要作好至少两个的培养基或者样液的对照，确保
培养结果的有效性。

6.在平板菌落计算的时候，如果发现菌落蔓延的以前一次的菌落计数为
准，菌落呈片状生长的平板不易采用。

7.具体的空气、物体表面、工人手的检测，采样方法按照GB15980-1995
附录A执行。

8.对于产品初始菌的检测要根据实际情况而定,某段时间空气、物体表面、工人手和产品初始菌的检测一直处在很稳定的低水平,在这种情况下一周作一次,相反如果一直有上升趋势,要加大初始菌的抽检频次,一周作2-3次.
9.试验结束后及时清理现场。

微生物检验的基本操作之无菌操作

生活家庭·医生Family life guide -237-李晓英（成都锦江大观医院）随着现代医学生物学、信息技术的不断进步，特别是医学分子生物学的快速发展，微生物检验技术也在长足进步。

但要想保证检验结果的准确性，还需做好检验的基本操作，即无菌操作，就是指在无菌环境下进行各项操作，例如细菌接种、植物组织培养、细胞传代培养等，避免微生物污染检测设备、培养基、样本等，进而才能得到可靠、准确的微生物检测结果。

基于此，本文讲讲微生物检验基本操作之无菌操作，以供各位借鉴。

保护标本（1）标本采集前，用75%的酒精对血培养瓶的橡皮塞进行消毒，并进行干燥处理。

除此之外，对穿刺位置的皮肤进行常规消毒，先用酒精初步消毒，再用含碘消毒剂进行再次消毒，然后再用酒精进行处理，且消毒时间要控制好，以免标本污染。

注意，严格执行无菌操作，消毒处理过的皮肤，不可再直接用手触摸静脉，需戴好无菌手套再操作。

（2）采集血液标本时，尽量选择外周静脉血，不建议采集动脉血，也不建议在静脉留置导管内采集血液样本，以免增加污染率。

若必须采集留置导管里面的血液，也需同时采集外周静脉血作为对照样本，以提升检验准确性。

（3）采集尿液标本时，需留取清洁的中段尿，具有易行、简单等优势，也是最常使用的一种尿液标本采集方式。

一般情况下，女性采集尿液样本时，需使用浓度0.1%的高锰酸钾溶液或者肥皂水清洁尿道口、阴部、外阴部等部位。

而男性需详细情节包皮，用浓度0.1%的新洁尔消毒液清洁尿道口，并用无菌纱布擦拭干净，然后在采集尿液标本。

（4）采集痰液标本时，需先刷牙，然后用清水漱口，再用力将呼吸道深部的痰液咳到无菌盒内，盖好盖子送检。

但注意，不可使用药瓶、卫生纸、无盖容器等留取，以免标本污染。

（5）采集粪便标本时，用专用容器收集粪便，然后挑取2至3克带有黏液、脓血部分的粪便作为标本。

除此之外，对于不宜留取粪便标本的婴幼儿等人群，可采集肛拭采集粪便样本，即先用无菌甘油水湿润拭子前端，然后将其置入患者肛门内4至5厘米部位，轻轻旋转，以采集直肠表面黏液，然后收集好，再送检。

微生物检验的基本操作技术

1、形态结构和培养特性观察
1）、在固体培养基上，观察：菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶
性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等； 2）、在液体培养中：表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等； 3）、半固体培养基穿刺接种：
观察运动、扩散情况。
1.点状 2.圆形 3.丝状 4. 不规则形 5.假根状 6.纺锤状
d.表面：有无生长、性状（膜状、环状）、菌膜厚薄及表面特征（光滑、颗粒、皱状）；
e.其他：有无特殊气味，色素。如果是糖发酵培养基则主要观察是否产酸和有无气体。
5）、穿刺接种法（半固体接种）
多用于保存菌种、观察动力及厌氧培养等也可以用于观察细菌的某些生化反应。（1）如斜面接种法持好菌种管及培养基管；（2）以灭菌接种针从菌种管取菌，垂直刺入培养基的中心（半固体或一般琼脂高层）直达近管底部（但不能完全刺到管底），接种针应沿原路退出；（3）经培养后半固体培养基可观察到：沿穿刺线生长，线外的培养基清亮表示细菌无动力；穿刺线模糊不清，或沿穿刺线向外扩散生长，或整个培养基混浊表示细菌有动力。
③ 处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。在无菌室内如需要安装空调时，则应有过滤装置。
2、超净工作台
超净台的使用与保养: （1）风速保持在0.32-0.48米/秒; （2）使用前开启紫外灯照射30分钟以上; （3）让超净台预工作10－15分钟; （4）使用完毕后，用70%酒精将台面和台内四周擦拭干
（1）取菌技巧 D
1. 调整 Pipetman 刻度 (P1000 吸取范围 200 ~ 1000μl)
2. 插上灭过菌之 Tip
(用力插紧)