石斛组织培养与繁殖

石斛组织培养与繁殖

0. 引言

石斛( Dendrobium) 为多年生附生性草本植物，常附生于密林树干或岩石上，并常与苔藓植物伴生，是我国最常用传统药材与中成药的原料药。本实验选取铁皮石斛茎段进行组织培养，提出了一套快速繁殖程序。利用组织培养技术，对药用铁皮石斛进行快速繁殖，是目前解决生产种苗问题的有效方法。

1.材料及方法

1.1实验材料

铁皮石斛为采自山区野生原种。2009 年移栽至室内。

1.2试验方法

1.2.1外植体的选取及预处理

取2009 年的新生枝条作为外植体。剪取新生枝条长约3 cm，修剪枝叶，清洗附带泥土，然后用洗洁精沾海绵轻轻擦洗枝条外表，再用自来水冲洗干净。在无菌条件下用70%酒精浸泡数秒，

之后浸泡在0. 1% Hgcl 溶液消毒处理10 min ，取出后用无菌水冲洗干净备用。

1.2.2接种在培养基中

保持无菌条件，去掉处理好的枝条顶芽，茎段保留 1 cm长。并且每一小段必须保存有一茎节(芽) ，处理完后接种在不同激素浓度的培养基中。其中诱导分化培养基包括以下几种(1)MS + 6BA

0. 5 〜1. 0 mg/L +NAA 0. 25 mg/L; (2)MS + 6BA 0. 5 〜1. 0 mg/L +2, 4 - D 0. 2 mg/L; ( 3)MS + 6BA 2 mg/L +NAA0.

4mg/L。诱导生根培养基: 1 /2MS +NAA 0. 2 〜0. 5 mg/L 。

1.2.3组织培养室的条件

接种后在全光照条件下培养，每天光照时间保持在10 h ，光照强度为1200 LX温度20 ± 2 Co

1.2.4诱导生根

枝条经过继代培养，小苗长到约2 cm 高时，基部会生出不定根，这时可把生根切割移栽，没有生根诱导生根，具体做法是枝条经修剪后接种到1/2MS+NAA 0. 2〜0. 5mg/L 培养基中，生根苗28 d 左右即可移栽到混合基质( 珍珠岩、树皮、泥碳等) 中炼苗。

2.结果与分析

2.1不同基础培养基对铁皮石斛生长的影响对于试管移栽苗来说，苗长势的好坏、强壮与否，直接关系到移苗的存活率。因此，设计了MS 1/2MS, KC 1 /2KC四种基

础培养基考查铁皮石斛壮苗生长的影响。

2.2不同添加物对铁皮石斛壮苗生根的影响

设置不同处理诱导生根培养基，用MS加NAA2 mg/L，pH为5. 6。将大小达3〜4 cm的无根苗切割成单苗，接种于5种不同处理生根培养基上，每种培养基接种20 株，培养28 do

后统计结果。

2.3不同激素浓度对外植体的诱导

外植体分别放在(1)(2) 两个激素浓度不同的培养基里面，培

养大约一个月，茎段切口地方仅稍微胀大，没有出现愈伤组织，当腋芽生长到1cm的时候，其茎杆柔嫩，叶子呈椭圆状，多生长在顶部。当嫩芽长到1cm多时，将其切下，并依次在(1)、(2)、(3) 三个培养基里进行培养。约一个月后，幼苗长至约3 cm 高，并在基部有约4 条长约1 cm 地不定根出现。将基部产生的原球茎切下，在(2) 、(3) 培养基里继代培养至其长出10多个不定芽。等到新芽可以区分株型以后，将其按4 个一丛移至(1) 培养基里壮苗培养。

2.4试管苗的生根诱导

铁皮石斛繁殖苗在培养过程中通常会生出不定根，约75%的

苗基部都有生长。在转继生根时可把生根的完整植株直接移出瓶栽培，没有生根的修剪之后转继在生根培养基中进行诱导生根，约20 d 生根率就可完全，不定根约3cm 3〜5条，根尖为三角白色。若延长培养生根的时间，小苗的基部以上的茎节也会生出不定根，一般根会向上生长，增加移栽的困难，试管苗基部仍会生发出一些小不定芽。

2.5试管苗移栽

当试管苗在生根培养基中生长到约3 cm高，有3〜5条不定根时，此时要移出培养室，在自然条件下开瓶炼苗4d，然后取出小苗洗净琼脂，阴干上面的水份，然后移栽到的基质盆内。定植后要浇足水，避免阳光直射，早晚进行喷水，空气湿度保持在80%。小苗在约10 d 后根尖开始露白伸长，叶片变成深绿色。此时茎不会增粗只是质地变硬，茎尖伸长一些。

3.讨论

3.1幼苗用MS培养基比用KC培养基培养生长好，其结果见表

1 。香蕉提取液能促进根系生长, 从而使苗的生长加快。为促进幼苗生长，培养基中需添加较高浓度的香蕉提取液。而以MS 的培养基为最好，A级比率占84%

表1 不同培养基对试管苗生长的影响

3.2不同添加物对铁皮石斛壮苗生根的影响结果见表2，由表2 中可以看出：在壮苗生根培养基中，相对于对照(5) 中，既添加

2mg/L的NAA可以使25%无根苗长出根来；当添加了香蕉汁之后(1) 效果较为显著，生根率升高到95% ，并且每株苗平均生出4. 5 条根，苗比较健壮，根系旺盛，由此表明香蕉汁对铁皮石斛生根壮苗有明显的促进作用。

表2 不同添加物对铁皮石斛壮苗生根的影响

3.3铁皮石斛组织培养繁殖苗在较高浓度的激素中可以直接

诱导分化产生出丛生芽，增殖系数可以达到4倍左右，最佳条件为MS + 6BA 1. 0 mg/L +NAA 0. 25 mg/L ，但是试管苗在生长

过程很容易生出不定根，继代时可以直接分株移栽试管苗来解决。原球茎在相同的MS +6BA 1. 0 mg/L +NAA 0. 25 mg/L 条件下，其

诱导的增殖系数约为15倍，此时需要壮苗培养后进行生

根诱导，最佳条件是1/2MS +NAA 0. 5 mg/L

3.4当前，很多人倾向于芽的诱导、繁殖及生根的研究，再生后苗体所含的的药物成分极其数量等方面则基本无人问津，培养出的幼

苗移栽后的生长习性变化及适应能力等方面的认识也几乎是一片空白。所以，研究人员有必要进行更加全面、深入的探索。・【