【CN109628526A】一种提高N乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法【专利】
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将成熟的N-乙酰氨基葡萄糖种子液按照12～15％接种量接种到含有发酵培养基的发
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CN 109628526 A
权 利 要 求 书
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酵罐中培养，控制发酵温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速250-450rpm，通气比0 .61 .0v/v/m，溶氧25％～27％，pH＝6 .8；
葡萄糖0 .54％，硫酸铵0 .35％，磷酸二氢钾1 .0％，硫酸镁0 .26％，稳定剂0 .46％，消泡 剂0 .05％，氧化钙0 .0046％和微量元素0 .18％；
所述微量元素为七水硫酸铁5 .00g/L、硼酸0 .10g/L、一水硫酸锰0 .10g/L、七水硫酸锌 3 .80g/L、二水钼酸钠0 .10g/L和硫酸钴0 .10g/L的混合液。
权利要求书2页 说明书8页
CN 109628526 A
CN 109628526 A
权 利 要 求 书
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1 .一种提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，发酵过程中，当发酵液的 OD660nm大于或等于25时 ，按照前5h以 5mL/h的 流加速度流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合 液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为25:3。
4 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，具体包 括如下步骤：
将成熟的N-乙酰氨基葡萄糖种子液按照12～15％接种量接种到含有发酵培养基的发 酵罐中培养，控制发酵温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速250-450rpm，通气比0 .61 .0v/v/m，溶氧25％～27％，pH＝6 .8；
当0 .54％的葡萄糖耗至0 .05％～0 .06％时开始流加质量浓度为75％的葡萄糖，使培养 过程中的残糖维持在0 .01-0 .08％；
法 ( 57 )摘要
本发明涉及发酵工程技术领域，具体涉及一 种提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法。发酵 过程中 ，当发酵液的OD660nm大于或等于25时 ，按 照前5h以5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门 冬氨酸的混合液 ，之 后以 3mL/h的 流速流 加至发 酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为 25:3。本发明在发酵培养过程中 ，当OD660nm大于 或等于25时流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合 液 ，控制半乳糖和L-天门冬氨酸的 浓度和比 例 ， 通过在半乳糖中添加L-天门冬氨酸使得glmS与 gfa1过量表达增加氨基葡萄糖的积累浓度，最后 将N-乙酰氨基葡萄糖产量提高至120g/L。
(74)专利代理机构 福州市博深专利事务所(普 通合伙) 35214
代理人 林志峥
(51)Int .Cl . C12P 19/26(2006 .01) C12R 1/19(2006 .01)
(10)申请公布号 CN 109628526 A (43)申请公布日 2019.04.16
( 54 )发明 名称 一种提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方
( 19 )中华人民 共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910077505 .0
(22)申请日 2019 .01 .28
(71)申请人 丽珠集团福州福兴医药有限公司 地址 350300 福建省福州市福清市江阴工 业集中区南港大道8号
(72)发明人 曾德桦 暨火兴 刘原君 王为民
2 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，当发酵 液的OD660nm为25～28时 ，按照前5h以 5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合 液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为25:3。
3 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述混 合液的体积与发酵液的体积比为1:100。
所述发酵培养基原料包括：葡萄糖0 .54％，硫酸铵0 .35％，磷酸二氢钾1 .0％，硫酸镁 0 .26％，稳定剂0 .46％，消泡剂0 .05％，氧化钙0 .0046％和微量元素0 .18％；
所述微量元素为七水硫酸铁5 .00g/L、硼酸0 .10g/L、一水硫酸锰0 .10g/L、七水硫酸锌 3 .80g/L、二水钼酸钠0 .10g/L和硫酸钴0 .10g/L的混合液；
9 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，具体包 括如下步骤：
配制种子培养基，控制温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速300-400rpm，通气比 1 .0-1 .2v/v/m，接入产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌进行培养，培养周期为9～12h，pH下降至 6 .4～6 .5，种子液的OD660nm大于或等于Байду номын сангаас时视为种子成熟；
6 .根据权利要求4所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述成 熟的N-乙酰氨基葡萄糖种子液的制备方法为：
配制种子培养基，控制温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速300-400rpm，通气比 1 .0-1 .2v/v/m，接入产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌进行培养，培养周期为9～12h，pH下降至 6 .4～6 .5，种子液的OD660nm大于或等于1时视为种子成熟。
当发酵液的OD660nm大于或等于25时 ，按照前5h以 5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门 冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量 比为25:3。
5 .根据权利要求4所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述发 酵培养基原料包括：
7 .根据权利要求6所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述种 子培养基原料包括：
葡萄糖1 .0％、硫酸铵0 .18％、磷酸二氢钾0 .9％、硫酸镁0 .25％、稳定剂0 .36％和消泡 剂0 .1％。
8 .根据权利要求5或7所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所 述稳定剂为一水柠檬酸，所述消泡剂为有机硅。
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酵罐中培养，控制发酵温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速250-450rpm，通气比0 .61 .0v/v/m，溶氧25％～27％，pH＝6 .8；
葡萄糖0 .54％，硫酸铵0 .35％，磷酸二氢钾1 .0％，硫酸镁0 .26％，稳定剂0 .46％，消泡 剂0 .05％，氧化钙0 .0046％和微量元素0 .18％；
所述微量元素为七水硫酸铁5 .00g/L、硼酸0 .10g/L、一水硫酸锰0 .10g/L、七水硫酸锌 3 .80g/L、二水钼酸钠0 .10g/L和硫酸钴0 .10g/L的混合液。
权利要求书2页 说明书8页
CN 109628526 A
CN 109628526 A
权 利 要 求 书
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1 .一种提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，发酵过程中，当发酵液的 OD660nm大于或等于25时 ，按照前5h以 5mL/h的 流加速度流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合 液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为25:3。
4 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，具体包 括如下步骤：
将成熟的N-乙酰氨基葡萄糖种子液按照12～15％接种量接种到含有发酵培养基的发 酵罐中培养，控制发酵温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速250-450rpm，通气比0 .61 .0v/v/m，溶氧25％～27％，pH＝6 .8；
当0 .54％的葡萄糖耗至0 .05％～0 .06％时开始流加质量浓度为75％的葡萄糖，使培养 过程中的残糖维持在0 .01-0 .08％；
法 ( 57 )摘要
本发明涉及发酵工程技术领域，具体涉及一 种提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法。发酵 过程中 ，当发酵液的OD660nm大于或等于25时 ，按 照前5h以5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门 冬氨酸的混合液 ，之 后以 3mL/h的 流速流 加至发 酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为 25:3。本发明在发酵培养过程中 ，当OD660nm大于 或等于25时流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合 液 ，控制半乳糖和L-天门冬氨酸的 浓度和比 例 ， 通过在半乳糖中添加L-天门冬氨酸使得glmS与 gfa1过量表达增加氨基葡萄糖的积累浓度，最后 将N-乙酰氨基葡萄糖产量提高至120g/L。
(74)专利代理机构 福州市博深专利事务所(普 通合伙) 35214
代理人 林志峥
(51)Int .Cl . C12P 19/26(2006 .01) C12R 1/19(2006 .01)
(10)申请公布号 CN 109628526 A (43)申请公布日 2019.04.16
( 54 )发明 名称 一种提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方
( 19 )中华人民 共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910077505 .0
(22)申请日 2019 .01 .28
(71)申请人 丽珠集团福州福兴医药有限公司 地址 350300 福建省福州市福清市江阴工 业集中区南港大道8号
(72)发明人 曾德桦 暨火兴 刘原君 王为民
2 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，当发酵 液的OD660nm为25～28时 ，按照前5h以 5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合 液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为25:3。
3 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述混 合液的体积与发酵液的体积比为1:100。
所述发酵培养基原料包括：葡萄糖0 .54％，硫酸铵0 .35％，磷酸二氢钾1 .0％，硫酸镁 0 .26％，稳定剂0 .46％，消泡剂0 .05％，氧化钙0 .0046％和微量元素0 .18％；
所述微量元素为七水硫酸铁5 .00g/L、硼酸0 .10g/L、一水硫酸锰0 .10g/L、七水硫酸锌 3 .80g/L、二水钼酸钠0 .10g/L和硫酸钴0 .10g/L的混合液；
9 .根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，具体包 括如下步骤：
配制种子培养基，控制温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速300-400rpm，通气比 1 .0-1 .2v/v/m，接入产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌进行培养，培养周期为9～12h，pH下降至 6 .4～6 .5，种子液的OD660nm大于或等于Байду номын сангаас时视为种子成熟；
6 .根据权利要求4所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述成 熟的N-乙酰氨基葡萄糖种子液的制备方法为：
配制种子培养基，控制温度36-38℃，罐压0 .03-0 .05Mpa，搅拌转速300-400rpm，通气比 1 .0-1 .2v/v/m，接入产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌进行培养，培养周期为9～12h，pH下降至 6 .4～6 .5，种子液的OD660nm大于或等于1时视为种子成熟。
当发酵液的OD660nm大于或等于25时 ，按照前5h以 5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门 冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量 比为25:3。
5 .根据权利要求4所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述发 酵培养基原料包括：
7 .根据权利要求6所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述种 子培养基原料包括：
葡萄糖1 .0％、硫酸铵0 .18％、磷酸二氢钾0 .9％、硫酸镁0 .25％、稳定剂0 .36％和消泡 剂0 .1％。
8 .根据权利要求5或7所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所 述稳定剂为一水柠檬酸，所述消泡剂为有机硅。