流式细胞术样本制备ppt课件

鞘液、洗液、PMA等：洁净，无颗粒杂质
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样本制备
Leabharlann Baidu
研究生免疫学POWERPOINT讲稿
流 式 专 题
流式细胞术样本来源
血液成分的分析：如白细胞、红细 胞、血小板等
分离血液中特定细胞成分，进行分析： 操作复杂，分离、离心步骤导致细胞特 定群体丢失，并可能引入某些误差 直接使用全血：最接近生理状况，操 作简便，样本用血量小
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研究生免疫学POWERPOINT讲稿
流 式 专 题
对照样本
对照样本应与实验样本平行操作 阴性对照：评估非特异反应水平， 界定阴性范围 阳性对照：在诊断抗原表达确失性 疾病时，需确定抗原表达正常时的 抗原表达强度和百分含量 补偿调整管
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研究生免疫学POWERPOINT讲稿
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研究生免疫学POWERPOINT讲稿
流 式 专 题
BD Multi-Check Control
流式细胞术淋巴细胞免疫表型分 析与计数的全血质控物
抗体染色 溶血 固定 流式细胞仪设置及运行状况 分析数据，计算淋巴细胞各亚群含 量
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红细胞、血小板表面抗原分析
样本来源
新鲜抗凝全血 PRP
单克隆荧光抗体 染色 固定 上机检测
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流 式 专 题
细胞周期分析
准确分析细胞核中DNA含量 单细胞悬液：
细胞数0.5-1106 碎片和粘连细胞少
DNA染色的线性度：CEN 单细胞分析：CTN进行DDM 检查 CV：2m微球
使用特异的单克隆抗体 最好使用荧光直接标记的抗体 采用适当的阴性对照物 抗体最适滴度
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流 式 专 题
淋巴细胞表面抗原分析
样本来源
新鲜抗凝全血 PBMC
单克隆荧光抗体染色 溶血 洗细胞 固定 上机检测
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流 式 专 题
淋巴细胞细胞内抗原分析
样本来源
新鲜抗凝全血 PBMC
细胞表面抗体染 色 溶血、固定 细胞打孔 细胞内抗体染色 上机检测
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流 式 专 题
溶血：FACS Lysing Solution 细胞打孔：FACS Perm2 固定：1%多聚甲醛
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流 式 专 题
细胞染色
染色要求：
特异识别某一群细胞，有效区分不同细胞亚 群 非特异反应水平低 抗体校价高，用量适用于常规标本
流 式 专 题
BD Multi-Check Control
淋巴细胞免疫表型：
CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+ CD19+ CD3-CD16+56+ CD3+HLA-DR+
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靶值及质控范围：
% Total Lymph Absolute Number/L
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流式细胞术样本制备
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流 式 专 题
流式细胞术样本来源
含有生物学颗粒的悬液：单细胞悬液、微 生物颗粒悬液、人工微球悬液 标本类型：
细胞悬液：
外周血（溶血）、PBMC、骨髓 灌洗液、体腔积液 培养细胞、细胞系
实体组织：
病理组织：新鲜样本/石蜡包埋样本 针吸组织：新鲜样本
流 式 专 题
质控品
体外诊断试验的必要保证 稳定样品，提供靶值和质控范围， 供实验室监测流式细胞仪分析实验 全过程，确保结果可靠 质控品应与实验样本同时处理，采 用相同步骤，相同试剂，相同的画 门分析方法 双水平控制：Low/High 三水平控制：Low/Median/High
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Cat. No 340914 12.5ml Cat. No 340915 22.5ml Cat. No 340916 52.5ml
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流 式 专 题
BD Retic-COUNT Control
流式细胞术网织红细胞分析与计数的全血质控物 荧光染色 流式细胞仪设置及运行状况 分析数据，计数网织红细胞
Cat. No 340999
11.5ml，Low 11.5ml，Med 11.5ml，High
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流 式 专 题
BD Stem Cell Control
流式细胞术造血干细胞免疫表型分 析与计数的全血质控物
抗体染色 溶血 流式细胞仪设置及运行状况 分析数据，计数干细胞
Cat. No 340991
12.0ml，CD34Low 12.0ml，CD34High
流 式 专 题
BD Multi-Check Control
BD Multi-Check Control Cat. No 340911 12.5ml Cat. No 340912 22.5ml Cat. No 340913 52.5ml
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研究生免疫学POWERPOINT讲稿
BD Multi-Check CD4 Low Control
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流 式 专 题
细胞周期分析
DNA Cycle Plus
Buffer Solution：细胞保存液 Solution A：破膜剂 Solution B：RNase Solution C：PI
单细胞悬液1106cells/ml，固定 消化RNA DNA染色
实体组织：MediMachine
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流 式 专 题
单细胞悬液的处理
荧光标记抗体的染色：使用特异的单克隆 抗体
单色分析：直接标记、间接标记 双色分析：SimulSET IMK、HLA-B27 多色分析：TriTEST、MultiTEST、ProCOUNT